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Calpain对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中自噬过程的作用
目的 探讨calpain是否通过改变细胞自噬水平而参与心肌缺血再灌注(I/R)损伤.方法 原代乳鼠心肌细胞分离培养,建立原代心肌细胞缺氧/复氧模型(H/R)模拟心肌I/R损伤,分为对照组,H组(缺氧12小时),HR组(缺氧12小时后复氧3小时),HR+ALLN组(calpain抑制剂ALLN预处理30min后缺氧12小时复氧3小时),HR+CQ组(自噬流抑制剂氯喹预处理30min后缺氧12小时复氧3小时),HR+ALLN+CQ组(氯喹和ALLN预处理30min后缺氧12小时复氧3小时).检测各组calpain活性,心肌细胞损伤指标乳酸脱氢酶(LDH),心肌细胞活力(MTT法),Western Blot检测自噬相关蛋白LC3的表达,以LC3II/LC3I比值作为自噬程度指标,以氯喹干预检验自噬流.结果 缺氧使calpain激活(p＜0.001),心肌细胞LDH释放增加(p＜0.001),心肌活力下降(p＜0.001),同时自噬上调(p＜0.05),复氧时calpain活性更高(p＜0.005),LDH量更高(p＜0.001),心肌活力更低(p＜0.001),自噬更增强(p＜0.01),而自噬流未受阻.ALLN抑制calpain激活(p＜0.001),使H/R心肌细胞LDH释放减少(p＜0.001),改善细胞活力(p＜0.001),这种改善伴随着自噬上调(p＜0.01),自噬流未受影响,提示calpain有抑制H/R心肌细胞的自噬的作用.结论 calpain通过抑制心肌细胞的自噬反应而参与I/R损伤.
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高血糖对缺氧及非缺氧条件下培养的大鼠心肌细胞缺氧诱导因子1α表达的影响及机制
目的 探讨血糖对缺氧状态及非缺氧状态下大鼠心肌细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的作用及机制. 方法 体外培养新生大鼠的心肌细胞,给予不同的处理因素培养6h,具体分组为:(1)正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖);(2)氯化钴(Cocl_2)模拟缺氧组(5.5mmol/L葡萄糖+400μmol/L Cocl_2);(3)高葡萄糖组(11.1、22.2、33.3 mmol/L葡萄糖);(4)Cocl_2(模拟缺氧)+高葡萄糖组(11.1mmol/L葡萄糖+400μmol/L Cocl_2,22.2mmol/L葡萄糖+400mmol/L Cocl_2>,33.3mmol/L葡萄糖+400μmol/Lcocl_2);(5)高葡萄糖+抗氧化剂α-tocopherol组(33.3mmol/L葡萄糖+100μmol/L α-tocopherol);(6) Cocl_2(模拟缺氧)+高葡萄糖+α-tocopherol组(33.3mmol/L葡萄糖+400μmol/L Cocl_2+100μmol/L α-tocopherol).观察高葡萄糖、Cocl_2、高葡萄糖合并氯化钴对HIF-1α mRNA及蛋白表达的影响,以及给予α-tocopherol阻断氧化作用后,高葡萄糖、高葡萄糖合并Cocl_2对HIF-1α mRNA及蛋白表达影响的变化.结果 (1)与正常对照组相比,Cocl_2模拟缺氧后,大鼠心肌细胞HIF-1α的表达增加;(2)在非缺氧状态下,随着葡萄糖浓度(5.5、11.1、22.2、33.3mmol/L)的增加HIF-1α的表达逐渐增加;(3)Cocl_2合并高葡萄糖培养条件下,随着葡萄糖浓度(5.5、11.1、22.2、33.3mmol/L)的增加,大鼠心肌细胞HIF-1α的表达逐渐减弱;(4)高葡萄糖合并α-tocopherol(33.3mmol/L Glu+100 μmol/L α-tocopherol)培养条件下,大鼠心肌细胞HIF-1α的表达较单纯高葡萄糖(33.3mmol/L)时减弱;(5)Cocl_2合并高葡萄糖及α-tocopherol(33.3mmol/L Glu+400 μmol/L Cocl_2+100μmol/L α-tocopherol)的培养条件下,HIF-1α的表达较同样氯化钴合并高葡萄糖(33.3mmol/L Glu+400μmol/L Cocl_2)时增加. 结论 葡萄糖对非缺氧状态下培养的大鼠心肌细胞HIF-1α的作用是增强其表达,而对缺氧状态下培养的大鼠心肌细胞HIF-1α的作用是减弱其表达,其机制可能涉及活性氧(ROS)信号转导系统及氧化应激反应.
关键词： 高血糖 氯化钴 缺氧诱导因子1α 乳鼠心肌细胞 抗氧化剂α-tocopherol -
内向整流钾离子通道在心肌细胞缺血后处理保护中的电生理变化
目的：通过第一部分的实验提示在心肌缺血后处理时调节内向整流钾离子通道可能影响其心肌保护效果，但尚不清楚心肌缺血后处理对其电流密度的影响程度。本实验通过观察乳鼠心肌细胞在缺血后处理中内向整流钾离子通道电流密度的变化情况，进一步揭示其在缺血后处理中的作用。
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旁分泌机制在脂肪间充质干细胞移植治疗心肌梗死中的作用
目的：探讨旁分泌机制在脂肪间充质干细胞（ADSC）移植治疗心肌梗死中的作用。
方法：原代分离和培养人ADSC，将经鉴定的第3~5代的ADSC用于实验。①用8~10周龄（20~24 g）的雄性C57B/L小鼠，结扎左前降支建立心肌梗死（MI）损伤模型，实验分假手术组，MI+DMEM/F12组和MI+ADSC-CM（条件培养液）组（n=12）。在MI处理的小鼠心肌梗死边缘区分别注射DMEM/F12和ADSC-CM，观察动物生存率、TTC染色测量心肌梗死面积、超声评价心功能变化、TUNEL染色检测心肌细胞凋亡等方法评价心肌梗死的治疗效果。②用H2O2建立乳鼠心肌细胞（NRVM）体外损伤模型，观察ADSC-CM对心肌细胞的保护作用。实验分对照组，H2O2+DMEM/F12组和H2O2+ADSC-CM组（n=5）。分别用caspase-3蛋白定量和TUNEL染色检测心肌细胞凋亡。 -
Rad对心肌营养素1诱导心肌细胞肥大负性调控作用的基础研究
目的：探讨小G蛋白Rad对心肌营养素1（CT-1）诱导心肌细胞肥大的影响。
方法：通过构建携带Rad基因的腺病毒载体，转染原代培养的乳鼠心肌细胞，用CT-1作为心肌肥大刺激因子，检测心肌细胞内肥大标志基因心房钠尿肽（ANF）和β-肌球蛋白重链（β-MHC）基因mRNA表达水平。 -
氯沙坦对U II诱导的乳鼠心肌细胞肥大的抑制作用
目的：观察尾加压素II（UII）对心肌细胞肥大的影响及血管紧张素II受体拮抗剂氯沙坦的抑制效应。
方法：以体外培养的SD乳鼠心肌细胞为实验模型，分为正常对照组，单纯UII作用组，氯沙坦干预组。用real-time PCR方法分析β-MHC、CaN（钙调神经磷酸酶） mRNA表达的变化，以Western blot测定培养心肌细胞内β-MHC、CaN蛋白表达，采用SPSS12.0软件进行数据处理，以探讨UII对心肌细胞肥大的影响。 -
非去极化心脏停跳液对缺血再灌注心肌的保护作用及其电生理机制
目的：探讨非去极化心脏停跳液对缺血再灌注心肌的保护作用及其电生理机制。
方法：①急性剪取SD大鼠心脏，建立Langendorff离体心脏灌注模型，随机分为8组，每组8只：A：短时间常温心脏保存实验分组处理：Con组、ST组、HTK组和NDP组平衡15 min后以室温的无钙KH液、ST液、HTK液和NDP液灌注5 min，并在相应的液体中保存1 hr，再复灌1 hr；B：长时间低温心脏保存实验分组处理：使用4℃的相应停跳液灌停并在4℃液体中保存8 hr后，再复灌1 hr。比较各组再灌注后血流动力学、冠脉流出液中心脏肌钙蛋白I水平、心肌梗死面积、组织ATP和乳酸含量、心肌组织形态和超微结构。②原代培养出生1~2天的SD乳鼠心肌细胞。分为Con组、缺血再灌注组、ST组、HTK组和NDP组。使用全细胞膜片钳技术记录并比较各组心肌细胞AP、INa、ICa-L和Ito通道的特性；用激光共聚焦显微镜下持续观察各组细胞和线粒体钙及膜电位水平的变化。 -
Rad基因重组腺病毒在培养乳鼠心肌细胞中的表达
目的：研究外源性Rad基因重组腺病毒在体外转染乳鼠心肌细胞后的转染效率及Rad基因的表达情况。
方法：构建Rad腺病毒载体，以不同的MOI值转染体外培养的原代乳鼠心肌细胞，通过荧光显微镜观察转染后荧光强度及转染效果，流式细胞仪检测转染率，采用RT-PCR、Western blot检测Rad基因表达情况。 -
探讨白藜三醇抑制快速电刺激乳鼠心肌细胞氧化应激损伤及其机制
目的：探讨白藜三醇（Resveratrol，RSV）对快速刺激乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护机制。方法：本实验采用胰酶和胶原酶双酶法及差速贴壁法分离新生大鼠心肌细胞和成纤维细胞。心肌细胞随机分为5组：空白对照组、快速电刺激组（RES组）、快速电刺激+烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶抑制剂夹竹桃麻素组（RES+APO组）、快速电刺激+白藜三醇组（RES+RSV组）、快速电刺激+钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂组（RES+AIP组）。为了证实白藜三醇是否还通过蛋氨酸亚砜还原酶—氧化型钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶（MsrA-OX-CaMKⅡ）途径对心肌细胞产生保护作用。除了上述5组，另设了MsrA竞争性阻断剂0.5%二甲基亚砜（DMSO）对照组（DMSO对照组）和RSV+DMSO组，RES+RSV+DMSO组。细胞计数Kit-8（CCK-8）法检测心肌细胞活性以确定白藜三醇的佳浓度，采用酶联免疫吸附检测法（ELISA）检测细胞培养液中AngⅡ水平以选择佳心肌细胞电刺激时间。流式细胞仪检测心肌细胞内活性氧水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌细胞MsrA、NADPH氧化酶4（Nox4）、NADPH氧化酶2（Nox2）、NADPH氧化酶p22phox亚基（P22phox）、OX-CaMKⅡ、凋亡相关激酶半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、Caspase-3剪切蛋白表达。结果（：1）与空白对照组比，RES组心肌细胞AngⅡ分泌显著增加，同时Nox4、Nox2及P22phox、OX-CaMKⅡ、Caspase-3剪切蛋白的表达水平显著增加。（2）与RES组比，RES+APO组、RES+RSV组和RES+AIP组的活性氧水平降低， RES+RSV组降低更明显。（3）与RES组比较，RES+APO组、RES+RSV组的Nox4、Nox2及P22phox、OX-CaMKⅡ、Caspase-3剪切蛋白的表达水平降低，RES+AIP组仅Nox2、OX-CaMKⅡ及Caspase-3剪切蛋白表达水平降低。（4）加入MsrA抑制剂二甲基亚枫（DMSO）后，白藜三醇抑制快速电刺激导致的Caspase-3剪切蛋白表达作用减弱。结论：白藜三醇对快速电刺激乳鼠心肌细胞具有保护作用，其机制可能是抑制NADPH氧化酶及增加MsrA表达，从而减少乳鼠心肌细胞氧化应激损伤。
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比较不同方法介导Gαi2羧基末端肽基因拮抗心肌细胞迷走神经效应的研究
目的 通过质粒电穿孔法、腺病毒转染法(rAd)和9型腺相关病毒转染法(rAVV9)转染Gαi2羧基末端肽(Gαi2lp)基因至乳鼠心肌细胞,比较不同方法的转染效率、心肌毒性以及对胆碱类药物迷走神经效应的拮抗作用,探寻Gi3ctp基因功能表达的佳转导途径.方法 构建重组质粒pDC316-Gαi2ctp-mCMV-EGFP(质粒电穿孔组)、重组腺病毒rAd-Gαi2ctp-mCMV-EGFP(rAd组)和重组9型腺相关病毒rAAV9-Gαi2ctp-IRES-EGFP(rAAV9组)以及未携带Gαi2ctp基因的空白对照组(n=10).3种方法转染携带免疫荧光蛋白(EGFP)的Gαi2tp目的基因至乳鼠心肌细胞,探寻佳电转导参数和病毒佳感染复数(MOI);比较佳参数下不同方法转染情况和大效率;AlamarBlue法测定各时间点还原比率评估心肌毒性;Western-blot法检测Cαi2ctp蛋白表达情况.后以适浓度的卡巴胆碱干预各组细胞,通过计数细胞整体搏动频率比较3种方法下Cαi2ctp基因的抗迷走神经效应差异.结果 3种方法佳参数设置下Gαi2ctp-EGFP蛋白均成功表达且差异无统计学意义,转染效率分别于2、1.5、4 d达高(54.2％±4.8％、100％和59.2％±4.4％),于第11 d转染效率分别为(30.1％±6.6％、12.0％±-3.4％和36.0％±6.1％);rAAV9组在全观察期l1d内细胞活性接近空白对照组(P＞0.05),质粒电穿孔组和rAd组细胞活性于3d后开始明显下降且后者较显著(P＜0.05).卡巴胆碱以佳药效浓度200 μg/ml干预培养3d后心肌细胞,发现Gαi2ctp基因组较无基因组具有明显的抗卡巴胆碱迷走神经效应(P＜0.05),但各方法之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 质粒电穿孔法转染方式迅速、转染效率尚可,但对细胞破坏力大;rAd法转染效率高可达100％,但表达持续时间较短,心肌毒性较大;rAAV9法转染起效较慢但能够稳定地长时间表达且生物安全性好.3种方法皆可有效表达Gαi2ctp并发挥拮抗卡巴胆碱迷走神经变时效应.该实验为Gαi2ctp转染治疗心房颤动提供了理论支持和方法学依据.
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蛋白激酶C参与乳鼠心肌细胞缺氧预处理的保护作用
近年来发现,心脏自身具有强大的内源性保护机制--缺血预处理(IPC)[1],其保护作用的机制迄今不明了.我们的实验,通过建立乳鼠心肌细胞模拟缺血/再灌注损伤细胞模型,研究缺氧预处理对心肌细胞的保护作用,并从蛋白激酶C的角度探讨其在预处理中的保护机制.
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STAT3在附子多糖后处理保护缺氧/复氧乳鼠心肌细胞机制中的作用
目的 以信号转导子与转录激活子3( STAT3)为切入点,探讨附子多糖后处理对乳鼠缺氧/复氧后心肌细胞的保护机制.方法 建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、附子多糖组、STAT3特异性的阻断剂Stattic加附子多糖组、Stattic组.流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,Western blot法分析磷酸化-STAT3 (P-STAT3)、细胞色素C(CytC)和Caspase-3的表达,荧光定量PCR检测Bcl-xl mRNA及Bcl-xs mRNA的表达量.结果 与缺氧/复氧组相比较,附子多糖后处理可以促进P-STAT3的表达,上调Bcl-xl基因表达而下调Bcl-xs基因表达,阻碍CytC自线粒体的释放及Caspase-3的表达,抑制心肌细胞凋亡发生.而Stattic可以逆转附子多糖后处理对心肌细胞的保护效应及P-STAT3的表达增加.结论 附子多糖后处理对缺氧/复氧心肌细胞的保护效应与其激活STAT3、促进抑凋亡蛋白Bcl-xl表达、保护线粒体、阻断细胞凋亡的线粒体通路有关.
关键词： 附子多糖 信号转导子与转录激活子3 缺氧/复氧损伤 后处理 乳鼠心肌细胞 -
黄芪对体外培养心肌细胞保护作用的实验研究
目的:观察黄芪对体外培养的缺糖缺氧损伤心肌细胞的保护作用.方法:心肌细胞原代单层培养,观察心肌细胞形态学变化、细胞生化数据的改变以及超微结构形态学的变化.结果:药物组与药物对照组的心肌细胞内上述细胞损伤变化均得到明显恢复.结论:黄芪对体外培养的缺糖缺氧心肌细胞具有明显的保护作用.
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紫檀芪通过PI3K-AKT信号途径抑制缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡
目的：探讨紫檀芪对缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响，以及对磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路的影响。方法乳鼠心肌细胞经过缺氧/复氧（H/R）处理，再模拟心肌缺血再灌注损伤。实验分为正常组，模型组（H/R），紫檀芪组（H/R+0.5，5，50μmol/L紫檀芪）。MTT法检测各组心肌细胞活力；倒置显微镜拍照检测各组心肌细胞形态；Annexin V-FITC/PI流式双染法检测各组心肌细胞凋亡；Western blot分析PI3K/AKT激活状况。结果与正常组比较，模型组中心肌细胞皱缩，变圆变亮，细胞活力降低，细胞早期凋亡和晚期凋亡率显著提高，PI3K表达量及AKT磷酸化程度降低，差异均具有显著性（P＜0.05）；与模型组比较，5，50μmol/L紫檀芪组中心肌形态恢复，细胞活力上升，PI3K表达量提高，差异均具有统计学意义（P＜0.05）；0.5，5，50μmol/L紫檀芪组心肌细胞凋亡程度下降，AKT磷酸化水平上升，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论紫檀芪可抵抗缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡，PI3K/AKT信号被激活是其作用表达的主要方式。
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SD乳鼠原代心肌细胞培养方法的改进
目的:探讨SD乳鼠原代心肌细胞佳分离、纯化及培养方法,以提供可靠的心肌细胞模型.方法:用含0.1％的胰蛋白酶及0.1％Ⅱ型胶原酶的酶混合液分离乳鼠心脏组织,并用差速贴壁分离法和5-溴脱氧尿核苷抑制法进行纯化,用台盼蓝染色法检测细胞的存活率,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化,免疫组织化学染色方法检测心肌细胞的纯度.结果:台盼蓝染色观察细胞存活率达(96.9±8.9)％以上.显微镜下心肌细胞由圆形渐变为梭形、多边形,逐渐形成细胞簇,搏动频率约120～150次/min.用抗横纹肌肌动蛋白单克隆抗体鉴定心肌细胞,阳性率为(90.5±1.6)％.结论:本方法所获SD乳鼠的心肌原代细胞纯度高、活力强.
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Apelin-APJ系统介导人参皂苷Rbl改善乳鼠心肌细胞耐缺氧能力研究
心肌缺血、缺氧是心血管疾病中常见的病理状态之一,其所致的心肌细胞凋亡、冬眠等成为慢性心力衰竭(CHF)发生发展的主导因素,因此如何提高心肌耐缺氧能力始终是心血管领域研究的热点.人参皂苷Rbl (Ginsenosides-Rbl, Gs-Rbl)是人参拮抗心肌缺血再灌注损伤等的主要生物活性成分[1-4],体内研究显示其抗心肌缺血再灌注损伤效应与抑制中性粒细胞浸润、髓过氧化物酶活性、促凋亡基因(如Bax、Bad、Fas)表达和上调Bcl-2等凋亡抑制基因等有关[2],体外研究显示其减轻缺氧性心肌细胞凋亡与促进葡萄糖转运载体-4移位、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、survivin表达和抑制线粒体通透转换孔开放、Caspase-3、PARP表达等有关[3-6].不过,所有这些并不能完全解释Gs-Rbl提高乳鼠心肌细胞耐缺氧能力的生物学效应.
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Apelin-APJ系统介导人参皂苷Rbl改善乳鼠心肌细胞耐缺氧能力研究
心肌缺血、缺氧是心血管疾病中常见的病理状态之一,其所致的心肌细胞凋亡、冬眠等成为慢性心力衰竭(CHF)发生发展的主导因素,因此如何提高心肌耐缺氧能力始终是心血管领域研究的热点.人参皂苷Rbl (Ginsenosides-Rbl, Gs-Rbl)是人参拮抗心肌缺血再灌注损伤等的主要生物活性成分[1-4],体内研究显示其抗心肌缺血再灌注损伤效应与抑制中性粒细胞浸润、髓过氧化物酶活性、促凋亡基因(如Bax、Bad、Fas)表达和上调Bcl-2等凋亡抑制基因等有关[2],体外研究显示其减轻缺氧性心肌细胞凋亡与促进葡萄糖转运载体-4移位、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、survivin表达和抑制线粒体通透转换孔开放、Caspase-3、PARP表达等有关[3-6].不过,所有这些并不能完全解释Gs-Rbl提高乳鼠心肌细胞耐缺氧能力的生物学效应.
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X射线对体外培养乳鼠心肌细胞损伤的初步实验研究
目的:初步探讨一定剂量的X射线对体外培养乳鼠心肌细胞的损伤.方法:全自动生化分析仪定量测定不同剂量X射线照射后第24小时心肌细胞培养基乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量;激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞经40Gy X射线照射后第24h的形态学改变.结果:心肌细胞有较高的辐射抗性,在0Gy～30Gy的放射剂量下心肌细胞培养基乳酸脱氢酶的含量变化不是很明显(P＞0.05);当放射剂量≥40Gy时培养基乳酸脱氢酶的含量显著升高(P＜0.05);激光扫描共聚焦显微镜观察到经40Gy X射线照射后第24h的典型的心肌细胞形态学改变.结论:一定剂量的X射线对心肌细胞有直接损伤作用.
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黄芪甲苷后处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的作用研究
目的:观察黄芪甲苷(Astragaloside IV,AsIV)后处理对缺氧复氧损伤(simulated ischemia reperfusion injury,SI/RI)的SD乳鼠心肌细胞是否具有保护作用.方法:将乳鼠原代心肌细胞平均分为五组,即空白对照组(Control)、缺氧复氧处理组(SI/RJ)、黄芪甲苷预处理(5,10、20μM)+SI/RI组(AsIV +SI/RI).各组细胞经处理后,四氮唑溴盐比色法(MTT)检测各组细胞存活率;TUNEL染色法测定各组细胞凋亡率;SOD测试盒检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)含量,总嘌呤氧化酶(XOD)测试盒检测丙二醛(MDA)含量.Western blot法检测各组细胞抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Caspase-3的表达.结果:与空白组相比,缺氧复氧损伤组细胞活力显著下降(P＜0.05),凋亡率显著上升(P＜0.05),其培养液中SOD水平显著降低(P＜0.05),MDA水平显著升高.而不同浓度AsⅣ后处理组的心肌细胞存活率显著上升,凋亡率显著下降,培养液中SOD水平显著上升,MDA水平显著下降(P＜0.05),且呈浓度呈依赖性.Western blot结果显示AsⅣ后处理组细胞中的Bcl-2表达明显上升,Caspase-3明显下降.结论:黄芪甲苷后处理对缺氧复氧诱导的乳鼠心肌细胞损伤具有显著的保护作用,能够显著上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,下调促凋亡蛋白Caspase-3的表达.
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白藜芦醇对血管紧张素Ⅱ诱导的成纤维细胞增殖的作用及其机制
目的 研究白藜芦醇(Resv)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导成纤维细胞增殖的作用和机制.方法 体外培养小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3),建立AngⅡ诱导的成纤维细胞增殖模型.采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,Western blot技术检测Ⅰ型胶原蛋白(COL Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(COLⅢ)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的表达.结果 与Control组相比,AngⅡ组NIH/3T3增殖明显,COLⅠ、COLⅢ、MMP-1和TIMP-1蛋白表达均显著增加,且TIMP-1/MMP-1增大;与AngⅡ组相比,加入10、20、30、100μmol/L白藜芦醇(Resv)对AngⅡ引起的NIH/3T3增殖有抑制作用(后期实验选用Resv的浓度为20 μmol/L),COLⅠ、COLⅢ、MMP-1和TIMP-1蛋白表达明显减少,且TIMP-1/MMP-1降低;与AngⅡ组相比,AngⅡ预处理组引起的变化趋势同Resv组,强度不如Resv,且两者具有协同作用.结论 白藜芦醇和AngⅡ预处理均可抑制AngⅡ引起的成纤维细胞增殖和活化,前者效果优于后者,两者合用效果更佳,其保护作用的机制与减少胶原蛋白的分泌和下调MMP-1与TIMP-1的比值有关.
