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白藜芦醇对血管紧张素Ⅱ诱导的成纤维细胞增殖的作用及其机制
目的 研究白藜芦醇(Resv)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导成纤维细胞增殖的作用和机制.方法 体外培养小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3),建立AngⅡ诱导的成纤维细胞增殖模型.采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,Western blot技术检测Ⅰ型胶原蛋白(COL Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(COLⅢ)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的表达.结果 与Control组相比,AngⅡ组NIH/3T3增殖明显,COLⅠ、COLⅢ、MMP-1和TIMP-1蛋白表达均显著增加,且TIMP-1/MMP-1增大;与AngⅡ组相比,加入10、20、30、100μmol/L白藜芦醇(Resv)对AngⅡ引起的NIH/3T3增殖有抑制作用(后期实验选用Resv的浓度为20 μmol/L),COLⅠ、COLⅢ、MMP-1和TIMP-1蛋白表达明显减少,且TIMP-1/MMP-1降低;与AngⅡ组相比,AngⅡ预处理组引起的变化趋势同Resv组,强度不如Resv,且两者具有协同作用.结论 白藜芦醇和AngⅡ预处理均可抑制AngⅡ引起的成纤维细胞增殖和活化,前者效果优于后者,两者合用效果更佳,其保护作用的机制与减少胶原蛋白的分泌和下调MMP-1与TIMP-1的比值有关.
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神经调节素β1对P3大鼠缺氧性脑白质损伤的保护作用
目的:探讨神经调节素β1 (NRG β1)对新生鼠脑白质损伤的保护作用.方法:P3大鼠被随机分成假手术组,缺氧缺血组和NRGβ1治疗组.观察各组大鼠生长发育和神经学行为变化包括体质量变化,睁眼时间,悬崖回避反应时间,双前肢悬挂时间.取各组P7、P14和P21大鼠脑室周围白质,应用免疫印迹法比较分析各组大鼠脑室周围白质髓鞘碱性蛋白(MBP)合成情况.结果:而NRGβ1组相应日龄MBP的表达与假手术组相比均有恢复.NRG β1组大鼠生长发育得以改善(体质量增加,睁眼时间提早),悬崖回避反应时间也缩短,但双前肢悬挂能力无明显改善.结论:NRG β1可以促进缺氧损伤的P3大鼠脑白质髓鞘合成,并使大鼠部分神经行为功能得以不同程度恢复.
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生后6～12h开始亚低温治疗对新生儿缺氧缺血性脑病预后的影响
目的 探讨生后6～12h开始选择性头部亚低温治疗对新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)预后的影响,为亚低温治疗新生儿HIE适宜的治疗时间窗提供更多的理论及临床依据.方法 选择2008年6月至2011年6月入住南方医科大学附属花都人民医院新生几重症监护病房的中度缺氧缺血性脑病新生儿40例,随机分为亚低温治疗组(观察组)和常规治疗组(对照组),分别检测治疗开始后0、24、48、72 h和7d时外周血清中的神经元特异性烯醇化酶(NSE)浓度,比较两组患儿生后7、14及28 d的NBNA评分.患儿在出院后3、6个月时回院用中国标准化的贝来量表(CDCC)测智力发育指数(MDI)和运动发育指数(PDI).结果 两组患儿治疗开始时NSE浓度比较差异均无统计学意义(P＞0.05).观察组(22例)在治疗后24、48、72 h血浆NSE浓度分别为(34.5 ±4.7)、(25.5±3.5)、(19.6±4.0) μg/L,明显低于对照组(18例)的(42.7±4.5)、(42.6±4.0)、(37.0±4.5)μg/L,治疗7d两组NSE浓度比较差异无统计学意义(P＞0.05).生后7d两组惠儿NBNA评分比较差异有统计学意义(P＜0.05),生后14、28 d观察组NBNA评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).两组患儿的MDI分别为73.2±11.2、80.7±10.3,PDI分别为77.2±9.3、84.5 ±10.2,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 中度缺氧缺血性脑病新生儿生后6～12h开始选择性头部亚低温治疗仍可有不同程度的神经保护作用.
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葡萄糖转运蛋白-1和-3在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内表达的变化及意义
目的探讨缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑内负责葡萄糖转运的两个重要蛋白质葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)与葡萄糖转运蛋白-3(GLUT-3)表达的变化,揭示HIBD后脑内能量衰竭的发病机制.方法将30只7日龄Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=5)、假手术对照组(n=5)和HIBD组(n=20).HIBD组大鼠模型的制备参照Rice.方法结扎右侧颈总动脉后8%低氧暴露1 h.假手术对照组只分离右侧颈动脉,不予结扎和缺氧.缺氧缺血后1,3,5,10 d各处死5只HIBD大鼠,免疫组化方法检测大鼠脑内GLUT1及GLUT3表达,并与对照组和假手术组比较.结果正常新生大鼠脑内微血管即可见GLUT1表达.HIBD后1 d,缺血侧半球GLUT1表达略有增加,3 d达高峰,至5 d时仍高于正常,10 d基本恢复正常水平.HIBD后1 d,GLUT3表达无明显变化,3 d时GLUT3表达已明显减少,5d时进一步减少,10 d时仍显著低于对照组.GLUT3表达减少显著的部位为海马CA1区.结论HIBD后脑内GLUT1和GLUT3的表达异常可导致脑能量代谢途径改变,加重缺氧缺血后神经元的损伤及影响损伤神经元的修复.
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新生大鼠缺氧缺血晚期Caspase-3表达及bFGF对其的影响
目的观察凋亡相关基因Caspase-3在新生大鼠HIBD晚期的蛋白表达情况以及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其影响.方法采用新生大鼠HIBD模型,新生7 d龄Wistar大鼠,随机分成4组:HIBD组、假手术组、对照组(生理盐水治疗)及bFGF治疗组.分别于缺氧缺血(HI)后2周、3周或4周处死大鼠,用免疫组织化学染色方法观察脑组织Caspase-3的表达情况,用TUNEL法观察神经细胞DNA断裂情况.结果①HI后2周和3周时左脑凋亡细胞数高于假手术组(P<0.05);②HI后2周和3周时脑组织Caspase-3平均光密度值(0.39±0.04,0.38±0.04)明显高于相应假手术组(0.36±0.01,0.36±0.02),差异有显著性(P<0.05);③bFGF组于治疗3周后Caspase-3平均光密度值(0.36±0.09)低于对照组(0.37±0.04)和HIBD组(0.38±0.04),差异有显著性(P<0.05);④bFGF治疗3周后TUNEL阳性细胞数(4.20±1.30)亦明显少于对照组(9.80±1.92)和HIBD组(8.00±1.00),差异有显著性(P<0.05).结论 Caspase-3参与了新生大鼠HIBD过程,并持续活化;bFGF可能通过下调HIBD模型鼠脑组织中Caspase-3的表达及阻止其随后的DNA断裂,从而发挥其神经保护作用.
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缺氧缺血性脑损伤发病中神经干细胞变化规律初探
目的探讨缺氧缺血性脑损伤后神经干细胞(NSCs)的变化规律.方法取新生7日SD大鼠随机分为正常对照组、缺氧组和缺氧缺血组.每组再根据处死时间点随机分成3 h,6 h,1 d,3 d,7 d,14 d,21 d 7个亚组(n=10).缺氧缺血组大鼠分离并结扎左颈总动脉,置于密闭缺氧箱2.5 h,缺氧组不结扎血管,仅缺氧2.5 h.免疫组织化学检测海马、皮层及纹状体区阳性NSCs数.结果正常7日龄大鼠脑组织存在NSCs,且呈明显的区域性分布,在10日龄后数目逐渐减少.缺氧组及缺氧缺血组大鼠NSCs较正常组增多,差异有显著性,在缺氧后3d(10日龄)时达高峰,后逐渐减少,缺氧组在缺氧后21 d(28日龄)时仍高于正常组.结论HIBD发病中早期NSCs增殖;NSCs随着病情的演变开始减少;早期采用NSCs干预治疗可能为临床治疗HIBD提供重要途径.
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Calpain抑制剂-3对新生大鼠脑缺氧缺血后海马CA1区Caspase-3表达和神经元凋亡的影响
目的钙依赖中性蛋白酶Calpain的活化可引起神经元凋亡,其抑制剂-3(MDL28170)对成年动物脑缺血有治疗作用,但尚不清楚MDL28170对新生动物缺氧缺血性脑损伤(HIBD)是否也有治疗作用.本研究观察了MDL28170对新生大鼠HIBD后海马CA1区Caspase-3表达及细胞凋亡的影响,探讨其神经保护作用机制.方法将7日龄新生SD大鼠随机分为HIBD模型组(n=40)、干预组(n=40)及对照组(n=8),干预组在HI后0 h、2h、4 h予腹腔注射MDL28170 50 mg/kg,模型组和对照组同时予腹腔注射生理盐水.干预组和模型组大鼠在HI后6h、12 h、24 h、48 h、72 h各处死8只,用免疫组化染色和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分别检测海马CA1区Caspase-3的表达和神经凋亡.结果HIBD组大鼠损伤侧海马CA1区Caspase-3阳性细胞在HI后6 h时较对照组增多(13.4±3.5/HP vs 2.6±0.6/HP,P=0.028),于48 h(27.1±4.1/HP)达到高峰,72 h仍高于对照组(22.6±4.8/HP,P＜0.001);TUNEL阳性细胞于HI后6 h开始增多,12 h时与对照组比较差别有显著性(25.0±1.7/HP vs 2.3±1.5/HP,P＜0.001),48 h(67.8±2.6/HP)到达高峰,72 h仍处于较高水平(44.3±6.8/HP).MDL28170干预可明显减少Caspase-3及TUNEL阳性细胞数量,与模型组比较48 h内差异有显著性,72 h以后作用不明显.结论MDL28170可通过抑制海马CA1区Caspase-3的表达,减少脑细胞凋亡,起到脑保护作用.
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新生儿缺氧缺血性脑病血清及脑脊液中促红细胞生成素的变化
目的探讨缺氧缺血性脑病(HIE)患儿血清和脑脊液(CSF)中促红细胞生成素(Epo)的变化,观察Epo与脑损伤的关系.方法对26例HIE患儿(轻度8例,中度10例,重度8例)和8例正常对照组进行研究,在生后0～24 h、48～72h及7～10 d抽取静脉血,HIE组在生后48～72 h腰穿取CSF,放射免疫法测定血清和CSFEpo含量,HIE组生后7～10d做头部MRI检查.结果对照组血清Epo随日龄增加呈下降趋势,有统计学差异(P<0.05);HIE各组血清Epo水平呈先上升而后下降趋势,其中仅轻度组血清Epo变化显著(P<0.05);各时间段重度组较轻度组、对照组血清Epo明显升高,有统计学差异.重度HIE组较轻、中度组CSF Epo明显升高(F=6.86,P<0.01).重度HIE组48～72 h血清与CSF Epo水平有较强直线相关关系(r=0.76,P<0.05);而轻、中度HIE组血清与CSF Epo无直线相关关系(r=0.12,r=0.09,P＞0.05).头部MRI为重度改变的HIE患儿CSF中Epo水平均较头部MRI为轻、中度改变的HIE患儿显著升高(F=8.56,P<0.01).结论HIE患儿血清Epo显著升高,持续不降是病情危重的标志.CSF中Epo显著升高提示HIE患儿脑损伤严重,预后不良.重度HIE患儿可能存在着血脑屏障的破坏,Epo可能透过血脑屏障.
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新生儿缺氧缺血性脑病血浆及脑脊液乳酸的临床研究
目的围产期窒息是引起新生儿脑损伤的重要原因之一,目前仍无确切的方法早期预测其预后.本实验研究缺氧缺血性脑病(HIE)患儿血浆和脑脊液(CSF)乳酸(Lac)的变化,观察Lac与HIE及窒息的关系.方法对26例HIE患儿(轻度8例,中度10例,重度8例)和8例正常对照组,在生后0～24 h、48～72 h及7～10 d抽取动脉血测Lac含量,HIE患儿生后48～72 h腰穿取CSF测Lac含量,并于生后7～10 d做头部MRI检查.结果对照组和病例组血浆Lac均随日龄增加呈下降趋势,有统计学差异.生后0～24 h,48～72 h HIE组血浆Lac较对照组显著升高(均P＜0.01).重度HIE组血浆Lac(9.11±3.29 mmol/L)与轻、中度HIE组(6.03±2.66 mmol/L,6.56±1.42 mmol/L)相比较仅在0～24 h明显升高(均P＜0.05).重度组CSF Lac(2.53±0.27 mmol/L)与轻、中度HIE(1.80±0.20 mmol/L,1.91±0.28 mmol/L)相比有显著增高(均P＜0.01).5 minApgar评分≤5分组CSF Lac含量(2.43±0.34 mmol/L)较＞5分组(1.83±0.25 mmol/L)明显升高(t=5.22,P＜0.01).重度MRI改变的HIE患儿CSF Lac较轻、中度MRI改变的HIE患儿CSF Lac明显升高(2.36±0.44 mmol/L vs 1.72±0.24 mmol/L,2.14±0.26 mmol/L)(F=7.15,P＜0.01).结论血浆Lac仅在生后24 h内反映机体出生时缺氧的程度;CSF Lac在一定程度上反映了脑损伤的情况.
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葛根素对缺氧缺血脑损伤后学习记忆能力及NMDA受体的影响
目的:观察葛根素(Puerarin,Pue)对新生鼠缺氧缺血后学习记忆的远期影响及其可能机制.方法:7d龄SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组);对照组(Con组);葛根素组(Pue组).各组分别于8周龄时Morris水迷宫检测其学习记忆能力,于3、4周和8周龄时采用免疫组化方法检测各组NR2A和NR2B在海马CA1区的表达.结果:①8周时Con组比Sham组平均潜伏期明显延长(P＜0.05),穿越平台次数显著减少(P＜0.01);与Con组相比,Pue组的平均潜伏期和穿越平台次数均得到明显改善(P＜0.05).②Con组3、4周和8周时海马CA1区NR2A和NR2B的表达均明显低于Sham组(P＜0.01);Pue组NR2A蛋白在3周和8周时的表达比同一时间点Con组明显增多(P＜0.05),NR2B蛋白在3周和4周时的表达明显比Con组增多(P＜0.05).结论:Pue能提高缺氧缺血新生大鼠年长后的学习记忆能力,其保护作用可能和Pue增加海马CA1区NR2A和NR2B的表达有关.
关键词： 葛根素 缺氧-缺血 N-甲基-D-天冬氨酸受体 学习记忆
