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外源精脒和精胺可诱导大鼠早期再生肝抗酶的表达
目的 探讨精脒和精胺对大鼠早期再生肝抗酶(AZ)表达的影响,及在肝再生中的作用. 方法 外源多胺(溶于0.9% NaCl)皮下注射雄性SD大鼠(180～200g),进行部分肝切除(PH)诱导.采用RT-PCR和Western blotting方法进行PH后大鼠再生肝中AZ基因转录量和蛋白表达量的分析.结果 对照组完整肝脏(PH后0h)中,AZ基因转录量、蛋白表达量较低,PH后均快速升高,3h达到峰值,5h出现明显下降,7h再次升高并达到峰值,之后缓慢下降.外源多胺处理后,两种剂量精脒(0.03mg/kg和 0.15mg/kg)和精胺(0.06mg/kg 和6mg/kg)处理组AZ mRNA及蛋白表达水平变化趋势与对照组相似,但低剂量处理组远远低于相应时间点高剂量处理组.精胺的作用效果更明显,作用时间更持久. 结论外源多胺对大鼠早期再生肝AZ mRNA及蛋白表达具有剂量依赖性促进作用,而精胺的作用较强,精脒较弱.
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中分子的研究进展及总量测定
中分子物质是指存在于体液中分子质量在300～5000Daltons之间的一类具有毒性作用的中等分子质量的物质(middle molecular substance MMS),简称中分子,主要以寡肽类化合物为主,包括寡糖、核苷酸、维生素、精胺以及其它一些未被鉴定的化合物.1971年,Babb等提出了中分子物质假说,提出尿毒症中毒本源性物质是中分子,而不是传统中认为的血中尿素、肌酐、尿酸等小分子物质的含量.
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精胺对心肌梗死的保护作用及机制的实验研究
目的:探讨精胺spermine(SP)对急性心肌梗死小鼠模型梗死纤维瘢痕和心功能的影响.方法:45只,雄性,C57BL/6J小鼠,随机分为假手术组、模型组、SP组,各15只;精胺SP组给予30nM精胺喂水.心肌梗死术后7d心脏超声检测各组心功能改变,术后28d狼星红染色检测各组梗死纤维瘢痕,WGA染色检测心肌细胞肥大.术后1d使用TTC染色法检测心肌细胞活性,使用realtime-PCR法检测与细胞凋亡相关基因(Bcl2,Bcl-xL)的表达及心脏组织中炎症因子的mRNA水平;ELISA法检测血清中炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β的水平.结果:与假手术组相比,模型组心功能显著下降(P＜0.05),存在大面积的梗死纤维瘢痕,非梗死区心肌细胞代偿性肥大(P＜0.05).与模型组相比,精胺SP组心功能显著改善,心肌梗死纤维瘢痕明显减少(P＜0.05),心肌细胞代偿性肥大情况明显降低(P＜0.05).TTC染色显示梗死区心肌细胞的活力增高,抗凋亡相关基因(Bcl2,Bcl-xL)的表达增加.心肌梗死后1d心脏组织中TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平显著低于模型组,同时血清中IL-6、TNF-α和IL-1β的水平也显著下降(P＜0.05).结论:精胺可能通过减少心肌细胞死亡,减轻炎症反应对SP对急性心肌梗死小鼠起到保护作用.
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葡聚糖-寡胺纳米粒基因载体的制备及表征
目的制备聚阳离子纳米粒非病毒基因载体:葡聚糖-寡胺化合物.方法以葡聚糖、过碘酸钠、精胺等为反应物,经多步化学合成制备了该载体;并以红外光谱测定仪、激光纳米粒度测定仪、透射电子显微镜对其进行了理化表征;以绿色荧光蛋白基因为报告基因考察所制备载体的基因转染效能.结果葡聚糖与寡胺间以共价键连接成稳定的纳米粒基因载体,载体平均粒径为9.0 nm,Zeta电位为+31.1 mV、形状为类圆形;载体具有较高的基因转染率.结论实验结果表明,文中方法可以合成出优良的聚阳离子纳米粒非病毒基因载体.
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多胺生物合成抑制与肿瘤恶性表型逆转
多胺是一类生理性脂肪族有机胺,包括腐胺、精脒及精胺,是细胞增殖与分化平衡的重要调节因子.已有资料表明细胞癌变、肿瘤浸润、转移与多胺生物合成的增强有关.为了研究多胺在维持肿瘤细胞恶性表型的作用,探索抑制多胺生物合成作为肿瘤治疗靶标的可能性,本项目对抑制多胺生物合成逆转肿瘤恶性表型的作用进行了全面系统的研究,其研究结果包括以下五方面:
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外源性精胺对缺氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制
目的:观察外源性精胺对缺氧所致的乳鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法:复制原代培养乳鼠心肌细胞缺氧损伤模型(使用pH=6.8的Hank's平衡盐溶液作为细胞培养基,排出氧气,然后在缺氧箱中培养24 h),细胞随机分为正常对照(Control)组、缺氧(Hypoxia)组和精胺干预(Hypoxia+ Sp)组.Western blot检测心肌细胞多胺代谢关键酶(ODC、SSAT)蛋白质表达;CCK-8,Hoechst 33342染色观察细胞凋亡情况;光吸收法检测细胞(或培养液)内T-SOD和Caspase-3/-9活性,MDA、GSH含量;DCFH-DA染色观察细胞内活性氧(ROS)生成.结果:与正常组相比,Hypoxia组SSAT蛋白质表达、细胞凋亡率、MDA含量以及细胞内ROS生成增加,而ODC蛋白质表达、SOD活性、GSH含量降低;与Hypoxia组比较,Sp处理可减轻上述指标的变化.结论:外源性精胺可减轻缺氧引起的乳鼠心肌细胞损伤和凋亡,其机制与恢复多胺稳态和清除活性氧有关.
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红细胞多胺测定在原发性肝癌中的临床价值
目的探讨红细胞多胺(RBCPA)对诊断原发性肝癌(PHC)的临床价值.方法采用高效液相色谱法定量测定56例消化系疾病患者血液中RBCPA的精胺Spd和Spm水平.结果消化系恶性肿瘤的Spd和Spm均极显著高于良性消化系疾病组(P<0.01).PHC组Spd非常显著高于良性消化系疾病组(P<0.01)和非肝癌消化系恶性肿瘤组(P<0.05).PHC组Spm与非肝癌消化系恶性肿瘤组间无差异(P>0.05).PHC组敏感度:Spd 90%,Spm 85%;特异度:Spd 83.3%,Spm 77.8%.结论红细胞多胺可作为肝癌的肿瘤标志物.联合检测AFP,可提高诊断肝癌的敏感性和准确性,有互补作用.
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多胺浓度对pGEM体外转录影响的研究
目的:研究3种多胺在体外转录中对RNA合成的调节,对3种多胺影响转录的能力进行比较.方法:用Run-off体外转录法,以EcoRI 酶切pGEM质粒线性DNA为模板,由T7RNA聚合酶催化反应.结果:3种多胺对转录的影响,在低浓度时随着多胺浓度的升高促进作用增强.在高浓度时随着3种多胺浓度增加,促进作用逐渐减弱.结论:多胺影响体外转录中RNA的合成,存在促进其合成的适浓度.3种多胺对转录的促进作用各不相同,其促进转录的能力大小依次为精胺,精脒,腐胺.
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精胺通过抑制内质网应激减缓柯萨奇B3病毒诱导的心肌细胞损伤
目的:探讨外源精胺在柯萨奇B3病毒(Coxsackie virus B3,CVB3)诱导的乳鼠心肌细胞损伤中的保护作用及其调控机制.方法:CVB3感染原代培养的乳鼠心肌细胞,将细胞随机分为3组:对照(control)组;病毒感染(CVB3)组;精胺干预(CVB3+Sp)组.MTT试剂检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9、GRP78、CHOP、Caspase-12、p-PERK、PERK、p-eIF2α和eIF2α的蛋白表达.结果:与control组相比,CVB3组的细胞增殖率显著降低(P＜0.05);凋亡率显著增加(P＜0.05);Bcl-2的表达下调,Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达增加(P＜0.05);GRP78、CHOP和Caspase-12的表达显著上调(P＜0.05);p-PERK和p-eIF2α的表达显著上调(P＜0.05).与CVB3组相比,CVB3+Sp组的细胞增殖率显著上升(P＜0.05);凋亡率显著下降(P＜0.05);Bcl-2的表达上调,Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达下调(P＜0.05);GRP78、CHOP和Caspase-12的表达显著下调(P＜0.05);p-PERK和p-elF2α的表达显著下调(P＜0.05).结论:外源精胺可以缓解CVB3诱导的乳鼠心肌细胞增殖降低和细胞凋亡增多等损伤,这可能与精胺抑制PERK-elF2α信号通路介导的内质网应激有关.
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PEG修饰的聚阳离子基因载体PEG-Polycarbam-SP在COS-7细胞中转染和毒性的研究
目的:寻找一种转染效率高,细胞毒性低的非病毒基因载体,研究以人体内源性精胺为单体,以乙二醇二氯甲酸酯作为连接剂,以聚乙二醇(PEG)作为亲水基团连接剂合成亲水修饰聚阳离子载体PEG-Polycarbam-SP的基因担载效率,以及对非洲绿猴肾癌细胞COS-7的转染活性和细胞毒性的影响.方法:琼脂糖凝胶电泳方法考察复合物的基因担载效率,检测基因复合物的粒径和电位,以荧光素酶质粒为报告基因,研究PEG-Polycarbam-SP/DNA的复合物在COS-7细胞的转染活性,用MTT方法研究PEG-Polycarbam-SP对COS-7细胞的毒性.结果:聚合物与质粒在质量比5以后形成的复合物粒径稳定在50nm左右,Zate电位在20mV左右.COS-7细胞实验显示PEG-Polycarbam-SP具有低于PEI 25kDa的细胞毒性,同时也具有高效输送DNA的能力.结论:PEG-Polycarbam-SP是一种新型的高效、低毒,在基因治疗领域有潜在应用价值的非病毒基因输送载体.
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疏水修饰聚阳离子高分子SP-Chol在COS-7细胞中转染和毒性的研究
目的:研究以精胺为单体,以乙二醇二氯甲酸酯作为连接剂,以胆固醇氯甲酸酯作为疏水基团连接剂合成的疏水修饰聚阳离子高分子 SP-Chol 对非洲绿猴肾癌细胞COS-7 的转染活性和细胞毒性的影响.方法:以荧光素酶质粒为报告基因,研究SP-Chol 与 DNA 的复合物在COS-7 细胞的转染活性,用MTT方法研究SP-Chol 对 COS-7 细胞的毒性.结果:COS-7 细胞实验显示.sP-Chol 具有低于PEI 25kDa的细胞毒性,同时也具有高效输送DNA的能力.结论:SP-Chol是一种新型的高效、低毒,在基因治疗领域有潜在应用价值的非病毒基因输送载体.
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白藜芦醇对血管紧张素Ⅱ诱导的成纤维细胞增殖的作用及其机制
目的 研究白藜芦醇(Resv)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导成纤维细胞增殖的作用和机制.方法 体外培养小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3),建立AngⅡ诱导的成纤维细胞增殖模型.采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,Western blot技术检测Ⅰ型胶原蛋白(COL Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(COLⅢ)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的表达.结果 与Control组相比,AngⅡ组NIH/3T3增殖明显,COLⅠ、COLⅢ、MMP-1和TIMP-1蛋白表达均显著增加,且TIMP-1/MMP-1增大;与AngⅡ组相比,加入10、20、30、100μmol/L白藜芦醇(Resv)对AngⅡ引起的NIH/3T3增殖有抑制作用(后期实验选用Resv的浓度为20 μmol/L),COLⅠ、COLⅢ、MMP-1和TIMP-1蛋白表达明显减少,且TIMP-1/MMP-1降低;与AngⅡ组相比,AngⅡ预处理组引起的变化趋势同Resv组,强度不如Resv,且两者具有协同作用.结论 白藜芦醇和AngⅡ预处理均可抑制AngⅡ引起的成纤维细胞增殖和活化,前者效果优于后者,两者合用效果更佳,其保护作用的机制与减少胶原蛋白的分泌和下调MMP-1与TIMP-1的比值有关.
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外源性精胺致大鼠乳鼠心肌细胞损伤机制的初步探讨
目的初步探讨外源性精胺损伤心肌细胞的可能机制.方法培养乳鼠原代心肌细胞,随机分为正常对照组,精胺(Sp)损伤组和异搏定(VP)、超氧化物歧化酶(SOD)、三磷酸腺苷(ATP)、地塞米松(DEX)保护组;倒置显微镜观察心肌细胞形态学变化;生化法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;噻唑兰(MTT)法检测心肌细胞活力;电镜观察心肌细胞超微结构.结果 100μmol/L Sp可造成培养大鼠乳鼠心肌细胞损伤,表现为LDH漏出增多,心肌细胞活力明显降低,心肌超微结构损伤严重.预先在培养液中加入一定浓度VP、SOD、ATP、DEX后,与Sp损伤组相比,培养液中LDH水平下降,心肌细胞存活率升高,心肌超微结构损伤减轻.结论外源性精胺可造成培养乳鼠原代心肌细胞损伤,其机制可能与细胞内钙超载、自由基增加、能量障碍、炎症介质释放有关.
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精胺对内皮细胞损伤的作用机制初探
目的 观察高浓度外源性精胺(Sp)对传代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的损伤作用,并初步探讨其可能机制.方法 采用传代培养的方法,观察较高浓度精胺(5.0 mmol/L)作用2 h时引起HUVEC的损伤,分别给予一定的保护剂维拉帕米(VP)、超氧化物岐化酶(SOD)、维生素E(VE)进行预保护.观察指标:①倒置显微镜下观察HUVEC形态学变化;②透射电镜观察HUVEC超微结构改变;③细胞活力(MTT)测定;④MDA含量测定;⑤SOD活性测定;⑥过氧化氢酶活性(CAT)测定.结果 通过检测各组细胞MTT活性,检测细胞培养液中SOD、MDA及CAT活性,以及借助倒置显微镜观察内皮细胞形态和透射电镜下对内皮细胞超微结构的观察,均证实3种保护剂可以明显减轻精胺引起的内皮细胞损伤.加入保护剂的3组细胞,其MTT、SOD、MDA及CAT活性值,与精胺组比较,差异显著(P＜0.05),细胞损伤有所减轻.结论 高浓度的外源性精胺引起HUVEC损伤,其作用机制可能与细胞内钙超载、氧自由基大量产生导致的细胞膜脂质过氧化有关.
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线粒体钙单向转运体在二氮嗪预处理脑保护中的作用
目的 探讨线粒体钙单向转运体是否参与了二氮嗪预处理所发挥的脑保护作用 方法 将52只健康雄性Wistar大鼠按照完全随机方法分为4组(每组13只):A组,假手术组；B组,脑缺血/再灌注组；C组,脑缺血/再灌注+二氮嗪组；D组,脑缺血/再灌注+二氮嗪+精胺组.采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,缺血2h再灌注24 h后观测各组神经行为变化,缺血侧脑组织线粒体钙含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、一氧化氮(nitric oxide,NO)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性.结果 与B组比较,C组二氮嗪预处理可以改善大鼠脑缺血/再灌注引起的神经行为障碍(13.1-±0.8,P＜0.01),降低缺血侧脑线粒体钙含量(293±7)nmol/mgprot,(P＜0.05),提高SOD(143±18)U/mgprot及GSH-Px(84±8)U/mgprot活性、降低MDA(0.799±0.092)nmol/mgprot,及NO(0.216±0.138)nmol/mgprot,含量(P＜0.05).与C组比较,D组精胺可减弱二氮嗪预处理改善神经行为障碍(8.0±-0.7,P＜0.01)、降低脑线粒体钙含量(322±10)nmol/mgprot,提高SOD(128±7)U/mgprot和GSH-Px(73±6)U/mgprot活性以及降低MDA(0.955±0.141)nmol/mgprot,和NO(0.575±0.292)nmol/mgprot,含量的效应(P＜0.05). 结论 二氮嗪预处理对抗大鼠脑缺血/再灌注损伤所发挥的脑保护效应,可能与其再灌注时减少线粒体钙单向转运体的活动以减少线粒体内钙含量及过氧化损伤有关.
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酸敏感离子通道在神经系统疾病的研究进展
酸敏感离子通道(ASICs)属于上皮钠通道/退行素超家族[1],由细胞外氢离子(H+)激活,并受神经肽类、阳离子、精胺、氧化还原剂、氨基糖苷类(AGs)以及胰岛素等调控,与神经系统疾病关系密切.现就ASICs的特性、调控机制以及在神经系统疾病方面的研究进展综述如下.
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柱前衍生化高效液相色谱法测定人唾液中腐胺和精胺的含量
目的 建立柱前衍生化高效液相色谱法同时测定人唾液中腐胺和精胺含量的方法. 方法 唾液经纯化、丹酰氯衍生化后用苯提取,以Hypersil BDS CN为正相色谱柱,丙酮-氯仿(2:98)为流动相,流速1 mL/min进行测定,检测波长为425 nm. 结果 腐胺和精胺均在50～1 000 nmol/mL范围内线性关系良好,r分别为0.999 1和0.999 2,此法回收率分别为94.65%和90.48%,RSD分别为1.6%和2.1%. 结论 此法灵敏、稳定,重现性好,可检测人唾液中多胺含量.
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多胺对Raji细胞中Epstein-Barr病毒早期抗原的诱导
[目的]探讨精胺和亚精胺对EB病毒抗原的诱导作用.[方法]分别利用细胞计数法和免疫酶法对Raii细胞进行活细胞计数和500个细胞中有Epstein-Barr病毒早期抗原的表达细胞数.[结果]精胺和亚精胺的半数致死量分别为970.4094ng/ml和87.71987ng/ml;精胺和亚精胺单独诱导EB早期抗原表达率分别为4.6%和4.2%;而精胺、亚精胺与正丁酸协同作用时,其早期抗原表达率分别达到20.6%、21.6%.[结论]精胺和亚精胺可诱导Raji细胞内Epstein-Barr病毒早期抗原的表达,当它们分别与正丁酸协同作用时,其表达率增高.
关键词： 精胺 亚精胺 Epstein-Barr病毒 抗原 -
精胺预处理对离体灌流大鼠心肌缺血/再灌注损伤及细胞凋亡的影响
目的 探讨精胺预处理对离体灌流大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响及其可能的抗凋亡作用.方法 应用Langehdorff离体灌流大鼠心脏复制模拟心肌缺血/再灌注损伤模型.24只大鼠随机分为3组,每组8只:对照组(Control)、缺血/再灌注组(IR)、精胺干预组(Spermine).比色法测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)活力,心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及心肌丙二醛(MDA)含量;多导生理记录系统记录心脏功能;HE染色光镜下观察心肌形态学变化;三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死面积;透射电镜和TUNEL方法检测细胞凋亡;免疫组化检测心肌Fas与Bcl-2蛋白的表达.结果 (1)与对照组比,IR组冠脉LDH漏出明显增多、心肌组织中MDA水平增加、SOD活性降低(P＜0.01);心功能明显下降(LVDP,HR,CF均低于对照组,P＜0.05);光镜下可见心肌细胞呈凝固性或带状坏死.与Control组比,IR组心肌梗死面积及心肌细胞凋亡率明显增加(P＜0.01);心肌Fas蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调.透射电镜下心肌细胞核染色质浓缩、凝聚且边集,染色质在核膜周边聚集形成新月形,线粒体嵴排列紊乱.(2)与IR组比,Spermine组冠脉LDH漏出减少,心肌组织中MDA减少,SOD增加(P＜0.01);心功能有明显改善(LVDP,HR,CF均明显高于IR组,P＜0.05);光镜下心肌细胞结构清晰.Spermine组与IR组比心肌梗死面积及心肌细胞凋亡率均明显降低(P＜0.01);心肌Fas蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调;电镜下可见心肌肌节结构清晰,线粒体嵴完整、基质致密,未见核染色质凝聚.结论 外源性精胺能明显减轻离体灌流大鼠心肌缺血/再灌注损伤,其机制可能与精胺抑制细胞凋亡有关.
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右旋糖苷衍生物纳米粒对人乳腺癌细胞的转染作用研究
目的 以右旋糖苷为起始反应物制备对人乳腺癌细胞具有高转染活性的右旋糖苷衍生物纳米粒非病毒基因载体.方法 先将右旋糖苷40与高碘酸钠以不同的配比进行反应,生成醛基含量不同的氧化右旋糖苷;氧化右旋糖苷与精胺以不同的配比反应,共生成9种右旋糖苷衍生物纳米粒;以绿色荧光蛋白基因为报告基因、mda-mb-435人乳腺癌细胞为转染细胞,考察9种合成物的基因转染活性,从中选出转染活性高的生成物.结果 高碘酸钠与右旋糖苷40按摩尔比为0.8:1反应生成氧化右旋糖苷;该氧化右旋糖苷再与精胺按1:1的摩尔比继续反应,生成的终产物的转染效率高.结论 制备出了对mda-mb-435人乳腺癌细胞具有高转染活性的右旋糖苷衍生物纳米粒非病毒基因载体.
