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抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊总皂苷体外抗CVB3及对细胞活性的观察
目的:观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(KCoxBJN)总皂苷(TS)体外抗柯萨奇B3病毒(CVB3)及对细胞活性的影响.方法:分离培养大鼠原代心肌细胞,以KCoxBJ总皂苷(KCoxBJN-TS)为干预因素,用MTT法测定其对正常心肌细胞的TC50和TC0;观察其对心肌细胞感染CVB372h的搏动频率、细胞病变程度和存活率；测定各组间TCID50及心肌细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的变化,判定其细胞活性.结果:KCoxBJN-TS对正常心肌细胞的TCo为6.25mg/mL,TC50为8.89mg/mL,浓度在12.5、25mg/mL时利巴韦林组(R组)心肌细胞存活率高于各中药组,浓度在100mg/mL时两组细胞存活率大致相同,且此两种药物对抑制心肌细胞的活性作用呈剂量依赖性；感染CVB3后心肌细胞的搏动频率明显减慢,细胞病变(CPE)明显,中药组与R组比较均有显著性差异(P＜0.01),CPE程度较轻,其中中药高剂量组(KCoxBJN-TS-H组)效果佳；心肌细胞病毒滴度测定显示,KCoxBJN-TS-H、中药中剂量组(KCoxBJN-TS-M组)与R组有效,而中药低剂量组(KCoxBJN-TS-L组)无明显效果；KCoxBJN-TS-H组能使LDH、CK的释放较CVB3组显著降低(P＜0.01)；KCoxBJN-TS还可抑制被病毒感染的心肌细胞TNF-α的分泌,KCoxBJN-TS-H组和R组效果较好.结论:KCoxBJN-TS在一定的浓度范围内可抑制CVB3在细胞内的复制,对心肌细胞起到一定的保护作用.
关键词： 抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊 中药提取物 总皂苷 柯萨奇B3病毒 -
柴胡提取物对CVB3m感染小鼠心肌细胞凋亡相关基因表达的影响
目的探讨柴胡提取物调节心肌细胞凋亡的作用机制.方法以柯萨奇病毒嗜心肌株(CVB3m)腹腔注射诱导BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型,将实验小鼠分为正常对照组、模型组、柴胡提取物组,柴胡提取物组每天予0.2ml/10g的浓度为2mg/ml的柴胡提取物灌胃,正常对照组、模型组予以等量生理盐水灌胃,于造模后第10天处死,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,采用免疫组化、RT-PCR法检测各组小鼠心肌中Fas、Bcl-2、Caspase3表达.结果正常组小鼠心肌未检测到凋亡的心肌细胞,Fas、Bcl-2、Caspase3均有不同程度表达,模型组可见大量心肌细胞凋亡,且Fas、Bcl-2、Caspase3表达均强于对照组(P＜0.01),柴胡提取物组心肌细胞凋亡明显减少,与模型组比较差异显著(P＜0.01),Fas、Caspase3表达明显降低,Bcl-2表达轻度升高.结论柴胡提取物可以抑制病毒性心肌炎时心肌细胞凋亡,明显下调Fas及Caspase3表达,轻微上调Bcl-2表达.
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抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂体外抗柯萨奇B3病毒作用
目的 研究抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂对柯萨奇B3病毒(CVB2)感染的心肌细胞的保护作用及其作用机制.方法 根据抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂和利巴韦林大无毒浓度(TC0)筛选4个实验浓度.将生长良好的H9C2细胞种在96孔板中,分为复方新制剂组、利巴韦林组、正常对照组和病毒对照组.通过4种不同的加药和加病毒方式,用MTT法观察不同浓度药物对细胞增殖的影响和对细胞保护、直接抗病毒、抗病毒吸附作用,结果用OD值表示.结果 不同浓度复方新制剂组和利巴韦林组OD值均高于病毒对照组(P＜0.05或P＜0.01).复方新制剂组中浓度为0.390625 mg/ml的细胞增殖OD值高于浓度为0.1953125、0.09765625mg/ml及利巴韦林组各浓度(P＜0.05或P＜0.01)；复方新制剂组中浓度为0.78125 mg/ml的细胞保护OD值高于其他浓度,并且明显高于利巴韦林组各浓度(P＜0.05或P＜0.01).复方新制剂组和利巴韦林组各浓度直接抗病毒和抗病毒吸附作用OD值比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂通过抑制病毒的增殖、保护细胞、直接抗病毒、抗病毒吸附等途径达到保护心肌细胞作用.其中浓度为0.390625 mg/ml时抑制病毒增殖作用明显,浓度为0.78125 mg/ml时,对细胞保护作用明显,并优于利巴韦林.
关键词： 抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊 病毒性心肌炎 心肌细胞 柯萨奇B3病毒 细胞增殖 -
RNA干扰在柯萨奇病毒致心肌炎小鼠模型中的抗病毒研究
为了研究慢病毒介导的shRNA(Short hairpin RNA,shRNA)在柯萨奇B组3型病毒(Coxsackievirus B3,CVB3)导致的心肌炎小鼠模型中的抗病毒作用,合成针对CVB3基因组3753～3771区域的慢病毒Lenti-sh3753,感染HeLa细胞后感染CVB3病毒,通过荧光显微镜观测shRNA的表达和病毒致细胞病变效应,并测定培养上清中的病毒滴度,将慢病毒Lenti-sh3753感染BALB/c小鼠后感染CVB3病毒,观察小鼠的存活率,心脏组织中的病毒滴度和病理变化.结果发现Lenti-sh3753能在HeLa细胞中表达shRNA,并能有效抑制细胞中病毒RNA的复制.在小鼠模型上,Lenti-sh3753能提高小鼠的存活率,降低心脏中的病毒含量,从而减轻病理反应.这些结果提示,Lenti-sh3753在细胞和动物模型中能针对性地降解CVB3病毒RNA,明显降低病毒滴度,有效控制病毒感染.
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针对2B区域的短双链RNA抑制柯萨奇B3病毒感染HeLa细胞的特性研究
为了研究短双链RNA(Small interfering RNA,siRNA)对柯萨奇B组3型病毒(CVB3)复制的影响及其作用特性,合成针对CVB3基因组2B区的siRNA-2B,脂质体法转染HeLa细胞后感染CVB3病毒,观测转染效率及存留时间、毒性作用、病毒致细胞病变效应、病毒滴度、病毒RNA含量、siRNA-2B对重组基因的特异性降解及培养上清有限稀释后再感染情况.结果发现siRNA-2B能高效转染入HeLa细胞并存留长达48h,高剂量的siRNA-2B对培养细胞无明显毒性,siRNA-2B能特异性针对2B区有效地降解病毒RNA,能明显抑制病毒RNA的复制.随着转染浓度的增加,siRNA-2B的抗病毒作用逐渐增强.siRNA-2B还能明显降低CVB3的再感染能力.这些结果提示,针对基因组2B区的siRNA-2B可以明显抑制CVB3基因复制,有效控制病毒再感染,并具有高效性、特异性和量效关系等特点.为siRNA可能成为预防和治疗CVB3感染的新途径奠定基础.
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RT-PCR方法检测柯萨奇B3病毒的应用体会
柯萨奇病毒(Coxsachievirus)属于肠道病毒,是一种小RNA病毒,常见于呼吸道和消化道感染.其中,CVB3是一类嗜心肌细胞病毒,对新生儿危害很大,可导致病毒性心肌炎.
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柯萨奇B3病毒引起心肌细胞凋亡的初步探索
目的 以病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)细胞感染模型为基础,研究柯萨奇B3病毒(Coxsackie B3 virus,CVB3)感染与心肌细胞凋亡的关系.方法 在嗜鼠心肌柯萨奇B3病毒(CVB3m)感染心肌细胞后24h电镜观察细胞超微结构的改变,同时取细胞悬液以流式细胞仪检测"凋亡峰",了解细胞凋亡率,并采用酶联免疫分析法(ELISA)定量测定CVB3m病毒感染后1、2、4、7、24h心肌细胞胞浆内组蛋白伴随DNA片段(单核小体和寡核小体)的多少,进一步了解凋亡程度.结果 电镜观察CVB3m感染的心肌细胞的超微结构符合凋亡改变,流式细胞仪DNA倍体分析检出凋亡峰,ELISA法检测提示病毒感染后出现心肌细胞凋亡,且在一定时段内凋亡程度随时间延长而增高.结论 CVB3m病毒感染可诱发心肌细胞凋亡,且随时间延长,凋亡量增多,凋亡程度加重,凋亡可能参与VMC的病理过程.
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microRNA 在柯萨奇 B3病毒诱导的心肌微血管内皮细胞凋亡中的差异表达
目的：本研究通过体外培养心脏微血管内皮细胞（CMVECs），经柯萨奇 B3病毒（CVB3）感染后，利用miRNA寡核苷酸基因芯片技术筛选差异表达的miRNAs，进一步探讨miRNA在 CVB3诱导 CMVECs 凋亡中的潜在作用机制。方法原代分离培养大鼠 CMVECs 细胞，以100TCID50CVB3病毒感染48 h 后检测Caspase-3活性和细胞凋亡；提取CMVECs细胞RNA，用Agilent大鼠miRNA寡核苷酸基因芯片进行检测，并通过TargetScan、miranda、mirbase和mirdb数据库选取出差异表达明显并与心血管疾病相关的miRNA，经qPCR对其进行验证，通过生物信息学分析预测其调控靶基因；合成miRNA21 mimics转染CMVECs细胞，同时合成miRNA21 inhibitor，与 CVB3共转染 CMVECs 细胞，检测各组细胞 Caspase-3活性变化和细胞凋亡。结果 CVB3感染CMVECs细胞48 h后与正常对照组比较Caspase-3活性显著上调（P＜0.01），细胞凋亡明显增加；通过基因芯片检测及生物信息学分析后发现，与心血管系统疾病密切相关的miRNA为miRNA21，经qPCR验证结果一致，预测其靶基因为PDCD4；miRNA21mimics转染CMVECs细胞后与正常对照组相比Caspase-3活性显著上调，细胞凋亡增加（P＜0.05）；而miRNA21 inhibitor与CVB3共转染 CMVECs 细胞后与 CVB3感染组相比 Caspase-3活性显著下调，细胞凋亡明显减少（P＜0.05）。结论 miRNA21在CVB3感染的CMVECs细胞中的表达有显著变化，并与CMVECs细胞凋亡密切相关，提示miRNA21在CVB3诱导的病毒性心肌炎发病过程中可能起着重要作用。
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miR21对心脏微血管内皮细胞PDCD4/AP1通路的调节作用
目的 探讨柯萨奇B3病毒(CVB3)感染离体培养的大鼠心脏微血管内皮细胞(CMVECs)后,miR-21对PDCD4和转录因子AP1构成的调节通路的影响.方法 (1)CVB3感染CMVECs 48h,实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-21表达;(2) CVB3病毒感染CMVECs48h后,Western Blot法检测各组细胞中PDCD4蛋白表达;(3) CMVECs瞬时转染miR-21模拟物48h后,WesternBlot法检测各组细胞中PDCD4蛋白表达;(4)双荧光素酶报告基因法研究miR-21与PDCD4基因靶向结合位点;(5) CMVECs细胞共转染PDCD4和AP1-Luc质粒,检测AP1-Luc荧光素酶活性以观察PDCD4基因对AP1活性的影响;(6)提取各组细胞核蛋白,电泳迁移率改变实验(EMSA实验)检测AP1和DNA的结合活性.结果 (1) CMVECs感染CVB3病毒48小时后,与对照组比较,病毒感染组miR-21表达上调4.12倍;(2)CMVECs感染CVB3病毒48小时后,与对照组比较,病毒感染组PDCD4蛋白表达明显下调;(3)CMVECs过表达miR-21后PDCD4蛋白表达下调;(4) CMVECs过表达miR-21后显著抑制野生型PDCD4基因3'UTR活性,而对突变型3' UTR活性无影响;(5) CMVECs过表达PDCD4基因48h后AP1-Luc荧光素酶活性与对照组相比明显下调;CMVECs过表达miR-21 48h后AP1-Luc荧光素酶活性与对照组相比显著上调;(6) EMSA实验结果显示CMVECs过表达PDCD4 48h后AP1与DNA结合活性明显下调,过表达miR-21后AP1与DNA结合活性明显上调.结论 CVB3感染CMVECs后上调miRNA-21表达.miR-21通过与靶基因PDCD4的3'非翻译区(3' UTR)靶向结合抑制PDCD4表达、上调AP1活性及AP1与DNA结合活性.
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黄芪多糖对CVB3感染的心肌细胞和心肌的保护作用研究
目的 本文旨在研究黄芪多糖(Astragalus Polysaccharide,AP)对CVB3病毒感染的乳鼠心肌细胞和小鼠的保护作用,为进一步作用机制研究提供理论依据.方法 使用AP对CVB3病毒介导的病毒性心肌炎病理模型进行治疗,通过对MTT染色和小鼠病毒性心肌炎模型治疗前、后心肌病理切片的观察,检测小鼠外周血液中乳酸脱氢酶和磷酸肌酸激酶的含量,判断AP对CVB3病毒感染后小鼠心肌的保护作用.结果 MTT染色结果表明,给药组的OD值均明显高于病毒对照组(P＜0.05),与病毒对照组比较,AP能够减轻由CVB3介导的心肌细胞炎症和病理改变的程度;AP能够显著的降低小鼠外周血中的心肌酶含量(P＜0.05);心肌病理切片表明,给药组心肌早期钙化面积减少,与阳性对照组比较仅有少量的炎性细胞浸润,说明其能防止感染的心肌细胞溶解,对心肌具有保护作用;给药组细胞上清液中病毒的TCID50比病毒对照组小一个数量级,说明AP对病毒繁殖有抑制作用.结论 AP对CVB3病毒感染后的心肌细胞和心肌有一定的保护作用,该结果为AP的更深入研究提供了理论依据.
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黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞内向整流钾电流的作用
目的 探讨黄芪总黄酮(TFA)对嗜心性柯萨奇B3病毒(CVB3m)感染心肌细胞内向整流钾电流的作用,以明确TFA降低病毒性心肌炎小鼠心律失常发生率作用机制.方法 采用体外培养小鼠新生心肌细胞方法,建立柯萨奇B3病毒感染心肌细胞模型,采用全细胞膜片钳记录技术记录心室肌细胞内向整流钾电流(IK1).结果 应用黄芪总黄酮(TFA))组与柯萨奇B3病毒感染模型组相比较,IK1峰值从(-10.11±1.57) nA增加到(-12.25±1.64)nA,差异有统计学意义(P＜0.05,n=6).结论 黄芪总黄酮可增加柯萨奇B3病毒感染心肌细胞内向整流钾电流(IK1)的幅值,这可能是黄芪总黄酮降低病毒性心肌炎小鼠心律失常发生率作用机制之一.
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病毒感染心肌细胞的心肌肌凝蛋白重链基因表达和细胞力学
目的探讨病毒直接损伤心肌细胞的机制.方法采用柯萨奇B3病毒感染体外培养心肌细胞,检测心肌细胞收缩力以及心肌细胞的α-MHC和β-MHC的基因表达,并与正常心肌细胞相对比.结果柯萨奇B3病毒感染后的心肌细胞收缩力比正常心肌细胞的心肌收缩力明显降低(P<0.01), 并且感染后24 h比12 h下降更为显著(P<0.05);心肌细胞收缩蛋白α-MHC和β-MHC的基因表达也发生了改变, 柯萨奇B3病毒感染后心肌细胞的α-MHC基因表达明显降低,而β-MHC基因表达升高.结论柯萨奇B3病毒感染后的心肌细胞收缩力下降,使心肌细胞以α-MHC基因表达为主转向以β-MHC基因表达为主.
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鸡血藤水提物抗柯萨奇病毒B3作用及机制
目的:探讨鸡血藤抗柯萨奇B3病毒(CVB3)的作用和机制.方法:不同浓度的鸡血藤水提物与适量CVB3感染的Vero E6细胞共同培养,采用甲基噻唑基四唑塞唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,计算鸡血藤水提物对CVB3,CVB5,埃可病毒9(Echo virus 9,EV9),EV29和脊髓灰质炎病毒(Polio virus1,PV Ⅰ)这5种肠道病毒的半数抑制浓度(IC50)和治疗指数(TI),并用RT-PCR检测鸡血藤水提物对CVB3侵染Vero E6细胞的RNA复制的影响.结果:鸡血藤水提物能有效抑制CVB3,CVB5,EV9,EV29和PV I这5种肠道病毒引发的细胞病变,IC50分别为60.8,47.1,17.1,65.5和29.1μg·mL-1,TI分别为4.1,5.3,14.6,3.8和8.6,对肠道病毒的抑制作用存在量效关系;鸡血藤不能阻止CVB3对Vero E6细胞的吸附作用,但可干扰CVB3侵染细胞后病毒核酸的复制.结论:鸡血藤能抑制CVB3引发的细胞病变,其机制可能是抑制侵染后病毒复制的初级阶段.
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黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞钠电流的作用
目的 探讨黄芪总黄酮(TFA)对嗜心性柯萨奇B3病毒(CVB3m)感染心肌细胞钠电流的作用.方法 采用体外培养小鼠新生心肌细胞方法,建立柯萨奇B3病毒感染心肌细胞模型,采用全细胞膜片钳记录技术记录心室肌细胞钠电流(ⅠNa).结果 应用黄芪总黄酮(TFA)组与柯萨奇B3病毒感染模型组相比较,ⅠNa峰值从(-7.79±1.53)nA下降到(-5.64±1.67)nA,差异有统计学意义(P＜0.01,n＝6).结论 黄芪总黄酮可显著降低柯萨奇B3病毒感染心肌细胞钠电流的幅值.
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黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞动作电位的作用
目的 探讨黄芪总黄酮(TFA)对嗜心性柯萨奇B3病毒(CVB3m)感染心肌细胞动作电位的作用.方法 采用体外培养小鼠新生心肌细胞方法,建立柯萨奇B3病毒感染心肌细胞模型,应用膜片钳技术中电流钳记录柯萨奇B3病毒感染心肌细胞动作电位.结果 应用TFA组与柯萨奇B3病毒感染模型组相比较,动作电位幅值(APA)下降,差异有统计学意义(P=0.0065,n=8),动作电位时程(APD)明显延长(P=0.00724,n=8).结论 黄芪总黄酮可显著降低柯萨奇B3病毒感染心肌细胞动作电位幅值(APA),延长动作电位时程(APD).
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黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染乳鼠心肌细胞内质网应激及Calumenin蛋白和缝隙连接蛋白CX43的作用
目的:研究黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞内质网应激、网腔钙结合蛋白(calumenin)及缝隙连接蛋白43(CX43)作用.方法:原代培养的乳鼠心肌细胞分3组:对照组(正常细胞)、柯萨奇病毒感染组(正常细胞)、黄芪总黄酮组(正常细胞+黄芪总黄酮).柯萨奇病毒感染组感染,黄芪总黄酮组感染同时给予黄芪总黄酮20 mg/L.采用免疫组化方法检测培养乳鼠心肌细胞α-SMA蛋白,Westem blot技术检测各组心肌细胞Calu-menin蛋白及内质网应激伴侣蛋白GRP78,CX43表达.结果:①与对照组相比,柯萨奇病毒感染组心肌细胞GRP78表达增多(P＜0.01),calumenin蛋白及CX43表达减少(P＜0.01);与柯萨奇病毒感染组比较,黄芪总黄酮组心肌细胞GRP78表达减少(P＜0.01),Calumenin蛋白及CX43表达增多(P＜0.0l).结论:CVB3可引发心肌细胞内质网伴侣蛋白GRP78表达增加进而发生内质网应激,并使Calumenin蛋白及CX43表达减少;黄芪总黄酮抑制CVB3感染心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78表达从而减轻内质网应激,同时使Calumenin蛋白及CX43表达增多,该实验结果可能与其抗病毒性心肌炎并发心律失常作用密切相关.
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miRNA378*表达对柯萨奇B3病毒感染乳鼠心肌细胞凋亡、网腔钙结合蛋白、内质网应激伴侣蛋白表达的影响
目的:研究沉默miRNA378*表达对柯萨奇B3病毒-(CVB3)感染心肌细胞凋亡、内质网应激、网腔钙结合蛋白(calumenin)影响.方法:原代培养乳鼠心肌细胞分为:对照组(正常细胞)、柯萨奇病毒感染组(正常细胞+柯萨奇B3病毒)、miRNA378*沉默对照组(正常细胞+柯萨奇B3病毒+转染miRNA378*空质粒)、miRNA378*沉默组(正常细胞+柯萨奇B3病毒+转染miRNA378*沉默质粒),各组细胞分别转染和感染处理后置37℃、CO2培养箱中培养3d.检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-sMA)、细胞凋亡率、网腔钙结合蛋白、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及内质网应激信号通路因子激活转录因子6(ATF6)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达.结果:通过检测α-SMA蛋白,证实分离乳鼠细胞为心室肌细胞.TUNEL法检测不同组心室细胞凋亡情况发现,柯萨奇病毒感染组心室肌细胞凋亡明显,与柯萨奇病毒感染组心肌细胞相比较,miRNA378*沉默组心肌细胞凋亡细胞量明显减少.与柯萨奇病毒感染组比较,Calumenin表达减少(P＜0.01),而GRP78、ATF6、CHOP表达增加(P＜0.01).结论:CVB3病毒感染心肌细胞作用与miRNA378*,引发内质网应激并激活信号通路因子,心肌细胞凋亡增加.
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黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染乳鼠心肌细胞miRNA378和miRNA378*表达的影响
目的:研究柯萨奇B3病毒(CVB3)感染乳鼠心肌细胞miRNA378和miRNA378*表达的作用.方法:原代培养乳鼠心肌细胞分3组(n=6):对照组(正常细胞)、CVB感染组(正常细胞+CVB3)、黄芪总黄酮组(正常细胞+CVB3+黄芪总黄酮).CVB感染组感染CVB3,黄芪总黄酮组感染CVB3同时给予黄芪总黄酮20 mg/L.采用免疫组化方法检测乳鼠心室肌细胞α-SMA蛋白,实时荧光定量PCR技术检测各组心肌细胞miRNA378及miRNA378*表达.结果:①与对照组相比较,CVB感染组心肌细胞miRNA378及miRNA378*表达明显减少(P＜0.01);②与CVB感染组比较,黄芪总黄酮心肌细胞miRNA378及miRNA378*表达明显增加(P＜0.0l).结论:黄芪总黄酮可以减少CVB3感染心肌细胞miRNA378及miRNA378*表达.
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病毒性心肌炎慢性期Th细胞凋亡蛋白的表达以及清心Ⅱ号对它的干预作用
目的:初步探讨病毒性心肌炎(Viral Myocarditis VMC)慢性期Th细胞凋亡的部分调控机制,并观察清心Ⅱ号对这一环节的干预作用.课题的完成为进一步阐明病毒性心肌炎慢性期发病机制及清心Ⅱ号治疗本病的作用机理提供重要的实验依据.方法:按照文献方法建立病毒性心肌炎慢性期小鼠模型后,随机分为模型组和清心Ⅱ号治疗组,正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,治疗组给予清心Ⅱ号水溶液灌胃.疗程结束后分别采集T细胞和Th细胞,透射电镜观T细胞凋亡;运用流式细胞术检测Th细胞凋亡;并用western-blot技术检测NF-κB,caspase-3-9蛋白在Th细胞上的表达.结果:①在VMC慢性期,各组均可见凋亡的T淋巴细胞,相对而言,模型组凋亡细胞数量较多.②与正常组比较,慢性期小鼠Th细胞凋亡有显著差异(P＜0.01);与模型组比较,治疗组小鼠Th细胞凋亡也有显著差异(P＜0.01);治疗组与正常组相比较,两者之间无明显差异(P＞0.05).③NF-κb,caspase-3-9蛋白在Th细胞上的表达:与正常组相比较,模型组小鼠caspase-3 caspase-9和NF-κB蛋白在Th细胞上的表达有极显著差异;与模型组相比较:治疗组caspase-3和NF-κB蛋白表达受到明显抑制;而caspase-9的表达则未受到抑制.结论:病毒性心肌炎小鼠慢性期存在Th细胞过度凋亡的现象;清心Ⅱ号干预后Th细胞过度凋亡的现象受到抑制,这一作用的途径可能是清心Ⅱ号抑制了NF-κB,caspase-3在Th细胞上的表达,但未显示出对caspase-9蛋白表达的抑制.
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病毒性心肌炎慢性期Th细胞凋亡蛋白的表达以及清心Ⅱ号的干预作用
目的:初步探讨病毒性心肌炎(Viral Myocarditis VMC)慢性期Th细胞凋亡的部分调控机制,并观察清心Ⅱ号对这一环节的干预作用.课题的完成将为进一步阐明病毒性心肌炎的发病机制及清心Ⅱ号治疗本病的作用机理提供重要的实验依据.方法:按照文献方法建立病毒性心肌炎慢性期小鼠模型后,随机分为模型组和清心Ⅱ号治疗组,正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,治疗组给予清心Ⅱ号水溶液灌胃.疗程结束后分别采集T细胞和Th细胞,透射电镜观察T细胞凋亡;运用流式细胞术检测Th细胞凋亡;并用western-blot技术检测NF-κB,caspasc-3,caspase-9蛋白在Th细胞上的表达.结果:(1)在VMC慢性期,各组均可见凋亡的T淋巴细胞,相对而言,模型组凋亡细胞数量较多.(2)与正常组比较,慢性期小鼠Th细胞凋亡显著升高(P＜0.01);与模型组比较,治疗组小鼠Th细胞凋亡显著下降(P＜0.01):治疗组与正常组相比较,两者之间无明显差异(P＜0.01).(3)NF-κB,caspase-3,caspase-9蛋白在Th细胞上的表达:与正常组相比较,模型组小鼠caspase-3,caspase-9和NF-κB蛋白在Th细胞上的表达有极显著差异;与模型组相比较:治疗组caspase-3和NF-κB蛋白表达受到明显抑制;而caspase-9的表达则未受到抑制.结论:病毒性心肌炎小鼠慢性期存在Th细胞过度凋亡的现象;清心Ⅱ号干预后Th细胞过度凋亡的现象受到抑制,这一作用的途径可能是清心Ⅱ号抑制了NF-κB,caspase-3在Th细胞上的表达,但未显示出对cspasc-9蛋白表达的抑制.
