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miRNA378*表达对柯萨奇B3病毒感染乳鼠心肌细胞凋亡、网腔钙结合蛋白、内质网应激伴侣蛋白表达的影响
目的:研究沉默miRNA378*表达对柯萨奇B3病毒-(CVB3)感染心肌细胞凋亡、内质网应激、网腔钙结合蛋白(calumenin)影响.方法:原代培养乳鼠心肌细胞分为:对照组(正常细胞)、柯萨奇病毒感染组(正常细胞+柯萨奇B3病毒)、miRNA378*沉默对照组(正常细胞+柯萨奇B3病毒+转染miRNA378*空质粒)、miRNA378*沉默组(正常细胞+柯萨奇B3病毒+转染miRNA378*沉默质粒),各组细胞分别转染和感染处理后置37℃、CO2培养箱中培养3d.检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-sMA)、细胞凋亡率、网腔钙结合蛋白、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及内质网应激信号通路因子激活转录因子6(ATF6)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达.结果:通过检测α-SMA蛋白,证实分离乳鼠细胞为心室肌细胞.TUNEL法检测不同组心室细胞凋亡情况发现,柯萨奇病毒感染组心室肌细胞凋亡明显,与柯萨奇病毒感染组心肌细胞相比较,miRNA378*沉默组心肌细胞凋亡细胞量明显减少.与柯萨奇病毒感染组比较,Calumenin表达减少(P＜0.01),而GRP78、ATF6、CHOP表达增加(P＜0.01).结论:CVB3病毒感染心肌细胞作用与miRNA378*,引发内质网应激并激活信号通路因子,心肌细胞凋亡增加.
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黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染乳鼠心肌细胞miRNA378和miRNA378*表达的影响
目的:研究柯萨奇B3病毒(CVB3)感染乳鼠心肌细胞miRNA378和miRNA378*表达的作用.方法:原代培养乳鼠心肌细胞分3组(n=6):对照组(正常细胞)、CVB感染组(正常细胞+CVB3)、黄芪总黄酮组(正常细胞+CVB3+黄芪总黄酮).CVB感染组感染CVB3,黄芪总黄酮组感染CVB3同时给予黄芪总黄酮20 mg/L.采用免疫组化方法检测乳鼠心室肌细胞α-SMA蛋白,实时荧光定量PCR技术检测各组心肌细胞miRNA378及miRNA378*表达.结果:①与对照组相比较,CVB感染组心肌细胞miRNA378及miRNA378*表达明显减少(P＜0.01);②与CVB感染组比较,黄芪总黄酮心肌细胞miRNA378及miRNA378*表达明显增加(P＜0.0l).结论:黄芪总黄酮可以减少CVB3感染心肌细胞miRNA378及miRNA378*表达.
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miRNA378*对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞凋亡、网腔钙结合蛋白、内质网应激及信号通路因子的作用
目的:探讨上调miRNA378*表达对柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞凋亡、网腔钙结合蛋白、内质网应激及信号通路因子的作用.方法:实验分4组:对照组(正常细胞)、CVB3感染组(正常细胞+CVB3)、miRNA378*过表达对照组(正常细胞+CVB3+转染miRNA378*空表达质粒)、miRNA378*过表达组(正常细胞+ CVB3+转染miRNA378*过表达质粒).原代培养乳鼠心肌细胞,采用免疫组织化学方法检测培养乳鼠心室肌细胞α-SMA蛋白,慢病毒质粒转染心室肌细胞,除对照组外,其他各组心肌细胞感染CVB3,采用TUNEL技术检测各组心肌细胞凋亡率;用Western blotting技术检测各组心肌细胞网腔钙结合蛋白、内质网应激伴侣蛋白GRP78及内质网应激信号通路因子PERK、P-PERK、eIF2α、ATF4、CHOP表达.结果:与CVB3感染组比较,miRNA378*过表达组心肌细胞凋亡率明显减少,网腔钙结合蛋白表达增加,而GRP78、P-PERK、eIF2α、ATF4、CHOP表达均减少(均P＜0.01),PERK表达差异无统计学意义.结论:上调CVB3感染心肌细胞miRNA378*表达可引起心肌细胞凋亡减少,网腔钙结合蛋白表达增多,进而缓解内质网应激,并抑制内质网应激凋亡信号通路因子表达.
