血管紧张素Ⅱ及卡托普利对豚鼠心肌细胞L-型钙电流及钠电流的作用

采用膜片钳全细胞记录方式研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及卡托普利对L-型钙电流及钠电流大峰电流的作用.AngⅡ组L-型钙大峰电流较对照状态明显增加,电压-电流关系曲线形状无明显变化.卡托普利组灌注3,5min, L-型钙大峰电流较对照状态明显降低;卡托普利+AngⅡ组灌注3,5min, L-型钙大峰电流较对照状态也明显降低;卡托普利灌注1min及3min, 钠电流与对照状态比较均显著性地降低.血管紧张素Ⅱ具有电压依赖性地增加L-型钙电流的作用,卡托普利具有电压依赖性地降低L-型钙电流,降低钠电流的峰电流,抑制血管紧张素Ⅱ介导的细胞内钙超载及抑制钙依赖的瞬时内向电流是其发挥抗心律失常的主要机制.

兔左室跨壁心肌细胞快钠电流和瞬间外向钾电流的异质性

目的进一步了解心室跨壁电生理异质性的细胞学机制.方法以酶解法分离兔左心室心外膜(Epi)、中层(M)和心内膜层(Endo)心肌细胞,应用膜片钳技术研究左心室钠电流(INa)和瞬间外向钾电流(Ito)的跨壁异质性.结果①三层细胞的INa均呈电压依赖性,当电压相同时M细胞的电流密度较大;M细胞的INa失活快,与Epi、Endo相比P＜0.05;三层细胞的INa灭活后再恢复曲线无明显差异.②三层细胞的Ito均呈电压依赖性激活过程,当电压相同时Epi细胞的电流密度较大;Epi的失活较快,M细胞的Ito灭活后再恢复未见明显变化.结论兔左室游离壁三层心肌细胞INa和Ito的分布及动力学特性存在异质性,这可能是动作电位形态差异及折返性心律失常发生的离子基础.

抗Nav1.5抗体对豚鼠心室肌细胞钠电流的影响

目的 了解钠通道亚型特异性抗体--抗Nav1.5抗体对豚鼠心室肌细胞钠电流的影响.方法 用急性酶解法获得成年豚鼠单个心室肌细胞,并行随机分组,各组分别给予不同稀释浓度的抗体(15 μg/ml)(室温下)处理10 min:(1)1:100抗体稀释组给予0.15 μg/ml抗体处理;(2)1:50抗体稀释组给予0.30 μg/ml抗体处理;(3)1:25抗体稀释组给予0.60 μg/ml抗体处理;(4)对照组(未给予抗体处理).而后分别进行全细胞膜片钳实验测定钠电流并计算电流密度.数据采用one-way方差分析及SNK检验、Dunnett检验.结果 与对照组相比,三个抗体处理组(抗体浓度分别为0.15、0.30和0.60 μg/ml)的INa峰值从对照组的(0.026 296±0.004 436)nA/pF分别降至(0.018 41±0.007 161)nA/pF(P＜0.01,n=10)、(0.013 484±0.002 933)nA/pF(P＜0.01,n=9)和(0.012 738±0.004 554)nA/pF(P＜0.01,n=8),并使INa的I-V曲线上移,激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变.三个不同浓度抗体处理组之间的电流密度虽有差异,但差异并无统计学意义(P＞0.05).结论 抗Nav1.5抗体可抑制心室肌细胞钠电流,但无浓度依赖性.

氟比洛芬酯对表达心脏SCN5A基因HEK293细胞钠电流的影响

目的:利用人胚肾293(HEK293)细胞表达心脏钠通道SCN5A基因并观察氟比洛芬酯(flurbiprofen axetil,FA)对钠通道的影响.方法:野生型SCN5A基因和SCN1B基因共表达于HEK293细胞,应用全细胞膜片钳记录使用FA(0.15 μM)前后的钠电流.结果:转染效率约为70％,和使用FA前相比,用药后在每一指令电压上钠电流都减小;在测试电压为-40mV的条件下,钠电流峰值电流密度从(-159.74±63.80)pA/pF降至(-94.48±62.63)pA/pF(n=7,P=0.012);通道稳态激活半激活电压(V1/2)分别为(-51.66±7.69)mV和(-58.19±2.45)mV(n =7,P=0.048);稳态失活半激活电压(V1/2)分别为(-83.55±3.21)mV和(-85.25±4.78)mV(n =7,P=0.041);通道失活后恢复τ分别为(33.86±23.18) ms和(67.71±58.58)ms(n=7,P=0.048).结论:FA可以减小各测试电压下的钠电流峰值(电压电流曲线向上漂移);加速通道的电压依赖性激活,促进通道的电压依赖性失活,失活后恢复变慢.

黄芪总黄酮对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流及钠电流的作用

目的 探讨黄芪总黄酮(TFA)对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)及钠电流(INa)的作用.方法 实验用胶原酶酶解法急性分离豚鼠心室肌细胞, 利用全细胞膜片钳的方法记录心室肌细胞的ICa-L及INa.结果 (1)应用TFA(20 mg*kg–1) 后ICa-L从(-0.313±0.14)nA 下降到(-0.402±0.27)nA ,差异有统计学意义( P< 0.01).(2)应用TFA(20 mg*kg -1)后与对照组比较, INa峰值从(-8.43±2.03)nA升高到(-6.37±1.58) nA,差异有统计学意义(P<0.01) .结论 TFA可以增加豚鼠心室肌细胞ICa-L的幅值, TFA可显著降低豚鼠心室肌细胞INa的幅值.

心肌细胞内钙异常介导的心律失常中晚钠电流的可能作用

正常心肌细胞内的钙离子浓度比细胞外低约1000倍，钙内流是影响心脏兴奋-收缩耦联的关键因素，而心力衰竭、心肌缺血／再灌注、心肌肥大、儿茶酚胺敏感性增高等病理情况及某些钙相关的遗传性离子通道病常造成细胞内钙浓度增高，引起早后除极或迟后除极，触发心律失常。这些与细胞内钙异常相关的室性心律失常通常病情重、危及患者生命，但目前临床对这类心律失常的治疗仍存在极大困难。近年来的研究发现，细胞内钙超载介导的心律失常常伴随晚钠电流的增强，应用晚钠电流抑制剂能够减轻这些病理情况下的心律失常。因此，本文就细胞内钙调节异常及其与晚钠电流的相互影响做一综述，以期对钙相关心律失常的治疗提供新的思路。

选择性晚钠电流抑制剂在治疗房性心律失常中的应用前景

晚钠电流抑制剂具有抗室性心律失常作用，特别在心室肌细胞复极时间延长，相关的心律失常疗效明确，而且与传统钠通道阻滞剂（Ⅰ类抗心律失常药）相比，仅有较低的致心律失常作用。近年来的基础与临床研究表明选择性晚钠电流抑制剂在房性心律失常的治疗中也有疗效，单纯抑制晚钠电流的药物在治疗房性心律失常的同时，心室的安全性高，不增加心律失常性病死率，有可能成为未来房性心律失常治疗的新方向。

花生四烯酸对冠心病患者心房肌细胞钠电流的抑制作用

目的探讨花生四烯酸对冠心病患者心房肌细胞钠电流的作用.方法膜片钳全细胞记录技术记录应用花生四烯酸前后人心房肌细胞钠电流.结果花生四烯酸对人心房肌钠电流的抑制作用表现为电压依赖性和浓度依赖性,IC50为10.3 μM.用药前后,钠电流的激活曲线几乎重叠,50%的通道激活点分别为(-40.8±2.7)mV和(-42.5±3.2)mV(n=10,P＞0.05);钠电流失活曲线左移,50%的通道失活点分别为(-94.5±3.4)mV和(-116.6±4.1)mV,即左移(21.2±3.2)mV(n=11,P＜0.01);钠通道失活后恢复时间显著延长,50%钠通道复活时间分别为(5.9±0.4)ms和(27.3±1.7)ms(n=8,P＜0.01).结论花生四烯酸对冠心病患者心房肌细胞钠电流具有抑制和延长复活时间作用.

缺血对兔左右心房肌钠电流影响的相关研究

氢化可的松琥珀酸钠对人和豚鼠心肌细胞钠电流的影响

目的研究氢化可的松琥珀酸钠对人心房肌细胞和豚鼠心室肌细胞钠电流的影响.方法应用酶解法分离单个心肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录氢化可的松琥珀酸钠对钠电流的作用.结果氢化可的松琥珀酸钠(1,3,10 μmol·L-1)浓度依赖性地抑制人心房肌细胞和豚鼠心室肌细胞钠电流,IC50分别为6.97和8.74 μmol·L-1.氢化可的松琥珀酸钠不改变INa的大激活电压.氢化可的松琥珀酸钠对钠电流的抑制作用起效快,见于用药后1～3 min.结论氢化可的松琥珀酸钠浓度依赖性地抑制钠电流,此作用出现快,提示可能与非基因组效应有关.

4-氨基吡啶对豚鼠心室肌钙和钠电流的影响

目的研究4-氨基吡啶(4-AP)对心肌细胞L型钙通道和钠通道的影响。方法用全细胞膜片钳技术考察4-AP对豚鼠心室肌细胞L型钙电流和钠电流的作用。结果 4-AP 0.1, 0.5, 1.0 mmol*L-1浓度依赖性地抑制L型钙电流(ICa，L)和钠电流(INa),抑制率分别为(11.6±1.7)%，(37.5±8.3)%和(54.5±6.9)%以及(22.1±14.3)%，(39.4±8.8)%和(62.3±6.8)%。0.5 mmol*L-1 4-AP使ICa，L和INa I-V曲线均上移。结论 4-AP可浓度依赖性地阻滞豚鼠心室肌细胞L型钙通道和钠通道。

长期应用咪达普利对陈旧性心肌梗死代偿区不应期和钠电流的影响

目的探讨咪达普利(IMI)对家兔陈旧性心梗(HMI)后心脏有效不应期(ERP)及钠电流(INa)的影响.方法选家兔制HMI模型,口服IMI 0.625 mg·kg-1·d-1(8周).记录整体心脏ERP和单细胞INa.结果HMI组ERP显著延长,用IMI后则缩短.HMI组代偿区细胞INa降低,INa稳态失活曲线负移,恢复时间常数延长;应用IMI,INa明显恢复.结论咪达普利可抑制HMI心脏ERP延长,并使降INa得以恢复.这可能是该药减少陈旧性心梗后心律失常发生的机制之一.

双苯氟嗪对豚鼠心室肌细胞膜钠电流的影响

目的 观察双苯氟嗪对豚鼠心室肌细胞膜钠电流的影响.方法 用酶解方法分离豚鼠心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录钠电流.结果 将细胞钳制在-80 mV,给(-80～+50) mV,50 ms和步阶10 mV的去极化脉冲,记录到的电流被河豚毒素10 μmol·L-1完全抑制.在该刺激条件下,该电流大激活电压在-20 mV左右,翻转电压在+30 mV左右,提示该电流为钠电流.双苯氟嗪可以浓度依赖性地抑制钠电流.双苯氟嗪对钠电流的抑制作用在冲洗后可部分恢复,表明其对钠通道的抑制作用具有可逆性. 双苯氟嗪可使钠电流I-V曲线上移,但对钠电流的电压依赖性特征、大激活电压和翻转电压无明显影响.在双苯氟嗪40 μmol·L-1存在下,大激活电压下的峰值电流下降约46%;双苯氟嗪可明显使钠电流稳态失活曲线左移,但不影响曲线的斜率因子.双苯氟嗪40 μmol·L-1可使钠电流半数失活电压从(-73.0±4.6) mV减少到(-82.8±7.2) mV.但双苯氟嗪对钠电流稳态激活无明显影响,在双苯氟嗪40 μmol·L-1存在下,半数激活电压(-33.7±3.6 )mV和斜率因子(5.6±2.4) mV与对照组激活电压(-34.9±5.1) mV和斜率因子(6.0±4.8)mV相比无显著性差异.双苯氟嗪可以使钠电流从失活状态下恢复明显减慢,双苯氟嗪40 μmol·L-1可使恢复时间常数延长[(79±28) vs (36±11) ms].结论 双苯氟嗪可以浓度依赖性、使用依赖性和频率依赖性地抑制心肌钠电流,并且主要作用于钠电流的失活状态.

PTD-BDNF对海马神经元钠、钾、钙离子通道的影响

目的 研究PTD-BDNF对大鼠海马神经元细胞钠、钾、钙离子通道的影响.方法 全细胞膜片钳技术记录海马神经元细胞电压依赖性钠、钾、钙通道电流,观察并分析PTD-BDNF对离子通道电流的影响.结果 与对照组比较,PTD-BDNF、BDNF使海马神经元钠通道电流强度峰值分别增加39.35%和41.99%(n=4,P<0.01);使钠通道电流-电压关系曲线下移(n=4,P<0.01);使海马神经元钙通道电流强度峰值分别增加39.20%和38.72%(n=4,P<0.01);使钙通道电流-电压关系曲线下移(n=4,P<0.01);使海马神经元钾通道电流IA、IK在20mv刺激处分别比对照组降低29.03%、28.06%和29.76%、33.38%;使钾电流-电压关系曲线下移(n=4,P<0.01).PTD-BDNF与BDNF两者之间比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 PTD-BDNF显示了与脑源性神经营养因子相似的电压依赖性离子通道的调节作用,说明PTD-BDNF与脑源性神经营养因子在调节神经元静息膜电位、神经兴奋性方面有相同的分子基础.

大蒜素对 H9c2细胞钠电流的作用

目的：观察大蒜素(Gar)对 H9c2细胞钠电流的影响。方法取培养大鼠心肌细胞系 H9c2细胞,采用全细胞膜片钳记录钠电流。观察 Gar 对钠电流和门控机制的影响。结果Gar 对 INa 的抑制效应呈电压依赖性。-30 mV 时,200μmol/L Gar 可使 INa 由(-98.4±5.6)pA/pF 降低为(-66.5±5.3)pA/pF (P<0.01)。药物使 INa 半激活电压 V1/2向去极化方向移动,减少通道开放,从而减少 INa 电流峰值密度。200μmol/L 的 Gar 可以使钠通道的稳态激活曲线向去极化方向移动,半激活电压(V1/2, act)从(-50.6±5.4)mV移至(-27.8±3.2)mV(P<0.01),激活曲线斜率(kact)差异无统计学意义(P>0.05)。结论大蒜素可能通过减少钠通道激活,降低钠电流。

黄芪总黄酮对急性心肌梗死大鼠心室肌细胞L-型钙电流及钠电流的作用

目的 研究黄芪总黄酮(TFA)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心室肌细胞L-型钙电流(L-ICa)及钠电流(I Na)的作用.方法 设正常对照组、AMI组及TFA实验组.大鼠开胸左前降支结扎造成AMI,开胸前5 min实验组大鼠舌静脉注射剂量为20 mg/kg的TFA溶液50 μl.用胶原酶酶解法急性分离AMI模型大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术记录左前降支供血区心外膜细胞的L-ICa及I Na的作用.结果 ①应用TFA(20 mg/kg)后,L-ICa从(0.313±0.14)nA增加到(0.402±0.27)nA,差异有统计学意义(P＜0.01,n=6).②应用TFA(20 mg/kg)后与对照组比较,峰值从(-8.43±2.03)nA下降到(-6.37±1.58)nA,差异有统计学意义(P＜0.01,n=6).结论 TFA可以增加AMI大鼠心室肌细胞L-ICa的幅值,TFA可显著降低AMI大鼠心室肌细胞I Na的幅值.

黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞钠电流的作用

目的 探讨黄芪总黄酮(TFA)对嗜心性柯萨奇B3病毒(CVB3m)感染心肌细胞钠电流的作用.方法 采用体外培养小鼠新生心肌细胞方法,建立柯萨奇B3病毒感染心肌细胞模型,采用全细胞膜片钳记录技术记录心室肌细胞钠电流(ⅠNa).结果 应用黄芪总黄酮(TFA)组与柯萨奇B3病毒感染模型组相比较,ⅠNa峰值从(-7.79±1.53)nA下降到(-5.64±1.67)nA,差异有统计学意义(P＜0.01,n＝6).结论 黄芪总黄酮可显著降低柯萨奇B3病毒感染心肌细胞钠电流的幅值.

氧化苦参碱对豚鼠心室肌细胞动作电位和单通道钠电流的影响

氧化苦参碱(oxymatrine)是从豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.中提取的一种生物碱.氧化苦参碱对心血管系统的作用较为显著,具有强心、抗心律失常、抑制细胞凋亡、清除自由基及抑制豚鼠心室肌全细胞钠电流等多方面的药理作用[1,2].但关于氧化苦参碱对豚鼠心室肌单细胞动作电位及单通道钠电流的影响尚未见报道,因此本实验拟在细胞和单通道水平观察氧化苦参碱的作用,为探讨氧化苦参碱抗心律失常作用机制提供理论依据.

氧化苦参碱的镇痛作用及其机制研究

氧化苦参碱(oxymatrine)是苦参总碱的主要成分,属双稠哌啶类生物碱.近年研究证明氧化苦参碱具有抗炎、免疫调节、镇痛、解热、降温、抗肿瘤及抑制心肌细胞钠电流等药理作用,能明显抑制小鼠自主活动,与水合氯醛合用具有协同作用,并能加强氯丙嗪对中枢神经系统的抑制作用.苦参总碱对化学性刺激和热刺激所致小鼠痛反应均有明显的抑制作用,其中苦参碱的镇痛作用部位可能在中枢,其镇痛作用可能与影响Ca2+内流和减少NO生成有关[1～4].

莲心碱对豚鼠心室肌细胞动作电位及钠与钙电流的影响

为探讨莲心碱(liensinine,Lien)对心肌离子流的影响及抗心律失常作用机制.采用全细胞膜片钳技术,记录了Lien对单个豚鼠心肌细胞动作电位(AP)及纳电流(I Na)与L-型钙电流(ICa-L)的影响.Lien 3～30 μmol/L可剂量依赖性地降低AP幅度(APA)、静息电位(RP),延长AP时程.Lien 10,30 μmol/L分别使I Na及ICa-L从给药前的(8.6±2.3) nA和(758±177) pA降至(5.4±1.7)、 (2.2±1.6) nA和(335±122)、(137±100) pA.Line 10 μmol/L抑制INa和IC a-L的I-V曲线并使后者的峰值电流电位略右移.结果表明Lien有钠、L-型钙通道阻滞作用,这些可部分解释其抗心律失常作用机制.