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低氧培养促进大鼠髓核间质干细胞增殖
目的 研究低氧培养对大鼠髓核间质干细胞(NPMSCs)增殖的影响.方法 分离大鼠尾椎髓核获得NPMSCs并进行体外扩增培养,观察细胞形态,流式细胞仪鉴定细胞免疫表型.取第3代NPMSCs分为常氧组和2%低氧组,分别培养7 d及14 d,观察细胞形态;MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞活力和RT-qPCR检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、沉默信息调节蛋白1(SIRT1)及SIRT6的mRNA表达情况.结果 原代NPMSCs细胞早期可形成葵花样细胞集落,传代后细胞增殖明显加快,细胞形态以纺锤形为主.第3代细胞高表达干细胞相关阳性表面抗原分子,低表达干细胞相关阴性表面抗原分子.低氧组细胞形态以多角形为主,细胞更容易聚集成团块,且细胞增殖速度明显加快(P<0.05),细胞凋亡率明显下降(P<0.05).低氧组HIF-1α、VEGF、GLUT-1、SIRT1及SIRT6表达量明显高于常氧组(P<0.05).结论 2%O2的低氧环境促进髓核间质干细胞增殖,其机制可能与SIRT1及SIRT6介导的HIF-1α信号通路有关.
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白细胞介素1β对大鼠髓核间质干细胞生物学特性的影响
背景：内源性干细胞并未在椎间盘退变的进程发挥修复作用，作者推测可能与相关致病因素的异常作用有关，导致对髓核间质干细胞功能产生一定的抑制效应。目的：观察炎症因子白细胞介素1β对大鼠髓核间质干细胞生物学特性的影响。方法：取3月龄雄性SD大鼠脊柱腰段椎间盘髓核组织，用胶原酶，胰酶序贯消化法分离并培养髓核间质干细胞。采用流式细胞术检测细胞免疫表型CD24，CD34，CD45，CD90，CD105表达；利用RT-PCR检测干细胞基因SOX2，Nanog的表达。观察髓核间质干细胞成脂、成骨、成软骨分化能力。利用流式细胞术检测白细胞介素1β作用于髓核间质干细胞后的凋亡率，荧光定量PCR检测白细胞介素1β作用于髓核间质干细胞后SOX9，蛋白多糖，Ⅱ型胶原酶，caspase-3基因的表达变化。结果与结论：体外分离培养出的细胞表现为纺锤样长梭形；CD90、CD105表达阳性，CD45、CD34、CD24表达阴性，表达干细胞基因SOX2，Nanog，具有成骨和成软骨分化能力，无成脂分化能力。CCK-8检测白细胞介素1β可以抑制髓核间质干细胞的增殖活性，与作用时间、作用浓度存在一定的依赖关系，佳作用时间为48 h，佳作用浓度为50μg/L。流式细胞仪检测白细胞介素1β可以使髓核间质干细胞轻度凋亡；荧光定量PCR结果显示：SOX9，蛋白多糖，Ⅱ型胶原的mRNA表达下调，caspase-3表达上调。结果可见白细胞介素1β具有抑制髓核间质干细胞增殖活性并诱导其凋亡的作用，是导致椎间盘自身干细胞无法发挥修复作用的原因之一。
