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软骨细胞在类风湿性关节炎中的作用研究
近几年,类风湿性关节炎的发生率逐年上升.当患者发病之后,若未能及时治疗,将会引发残疾.软骨细胞生存状态以及外部基质代谢情况,在一定程度上对患者的软骨功能造成影响.本文分3个方面,详细阐述了软骨细胞在类风湿性关节炎中的作用情况,现将具体结果报告如下.
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电针内关穴对心肌缺血大鼠HIF-1α及酸敏感离子通道基因表达的影响
目的:观察电针内关穴对心肌缺血大鼠缺氧诱导因子(HIF-1 α)及酸敏感离子通道(ASIC2、ASIC3)基因表达的影响.方法:SD大鼠45只随机对照方法分为正常组、模型组、内关组、列缺组、非经非穴组,每组10只.异丙肾上腺素造模成功后,分别进行电针治疗.1周后,Realiime RT-PCR法检测各组左心室心肌ASIC2、ASIC3的基因表达,ELISA法检测各组血清HIF-1 α含量.结果:电针内关穴可降低心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3基因表达,降低血清中HIF-1 α含量,与模型组比较有显著性差异(P＜0.01),且优于列缺组与非经非穴组(P＜0.01).结论:电针内关穴可降低血清中HIF-1 α含量,下调心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3基因表达,从而抑制酸敏感离子通道开放,有效改善心肌缺血大鼠心肌细胞的损伤.
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酸环境对过敏性紫癜患儿血清IgA1诱导血管内皮细胞ASIC1a表达的影响及机制
目的 初步探讨酸性环境对过敏性紫癜(HSP)患儿血清IgA1诱导血管内皮细胞酸敏感离子通道1a(ASIC1a)表达的影响及ASIC1a的调控作用.方法 体外培养的人皮肤微血管内皮细胞经过处理后,荧光定量PCR检测血管内皮细胞ASIC1a、destrin及α-SM mRNA表达;ELISA测定血管内皮细胞细胞因子;同时采用荧光定量PCR和Western blot检测细胞骨架destrin及α-SM蛋白表达.结果 酸化环境中HSP患儿血清IgA1作用血管内皮细胞后,ASIC1a mRNA表达明显上调(P<0.01);细胞因子IL-8、NO和TM分泌明显增加(P<0.01);ASICs阻滞剂可以显著降低酸化诱导的细胞因子的分泌(P<0.01).细胞外酸化下,HSP患儿血清IgA1导致细胞骨架蛋白destrin及α-SM mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.01);而ASICs阻断剂组destrin及α-SM mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.01).结论ASIC1a在HSP患儿血管炎的发生中起着重要作用,阻断细胞外ASIC1a能显著改善HSP患儿血管内皮细胞损伤.
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酸敏感离子通道对海马神经元树突发育的影响
目的 探讨酸敏感离子通道(ASICs)在海马神经元树突发育中的作用. 方法 在体外培养第5天的原代海马神经元中转染定位于膜上的绿色荧光蛋白( F-GFP),随后在神经元培养液中加入ASICs拮抗剂Amiloride和ASIC1a选择性拮抗剂Psalmotoxin 1(PcTX1)抑制ASICs的功能,观察体外培养8d和14d这两个时间点海马神经元的树突生长、分支复杂程度. 结果 Amiloride(10 -5 mol/L)和PcTX1(1∶20 000稀释)处理3d对海马神经元树突分支总长度、树突分支总数均无显著影响,表明在海马神经元发育早期短时间抑制ASICs功能不影响树突发育.A miloride(10 -5 mol/L)处理9d可以显著降低树突分支总长度和树突分支总数；PcTX1(1∶20 000稀释)处理9d也可以显著降低树突分支总长度,但对树突分支总数无显著影响.实验结果表明,长时间抑制ASICs功能会影响树突发育. 结论 ASICs参与调节树突的发育.
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酸敏感离子通道1a在大鼠椎体终板软骨细胞的表达及其意义
目的 探讨大鼠椎体终板软骨细胞酸敏感离子通道1a (ASIC1a)的表达及其意义.方法 选用成年SD大鼠10只.分离、培养椎体终板软骨细胞以及传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态,甲苯胺蓝染色对终板软骨细胞进行鉴定.利用PT-PCR和Western blotting检测ASIC1a在大鼠椎体终板软骨细胞mRNA及其蛋白的表达,免疫荧光双标观察ASIC1a在终板软骨细胞的细胞定位.结果 形态学及甲苯胺蓝染色阳性显示,培养的细胞为软骨细胞,PT-PCR和Western blotting显示,大鼠椎体终板软骨细胞存在ASIC1a mRNA及其蛋白的表达,免疫荧光显示,ASIC1a在终板软骨细胞膜有阳性表达.结论 ASIC1a在大鼠椎体终板软骨细胞的表达,对认识ASIC1a功能及寻找新抗椎间盘退变靶点有重要意义.
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大鼠脊髓背角神经元中酸敏感离子通道的特性和功能研究
酸敏感离子通道(ASICs)是一类能被细胞外酸所激活的配体门控离子通道.本文综合报道大鼠脊髓背角神经元中ASICs的亚基组成及其功能性调节:(1)脊髓背角主要表达ASIC1a、ASIC2a和ASIC2b,但不表达ASIC1b和ASIC3;(2)在脊髓背角神经元中酸诱导电流可能由ASIC1a同聚体通道所介导;(3)胞外痛觉信号如实验性缺血和神经肽FMRF可以通过不同的机制增强脊髓背角神经元酸诱导电流;(4)炎症痛可以上调脊髓背角ASICs在转录和蛋白水平的表达.上述各点提示,在生理或病理情况下脊髓背角ASICs对脊髓水平的感觉信息传递特别是痛觉的传导可能发挥着重要作用.
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组织激肽释放酶对酸敏感离子通道1a介导的大鼠酸中毒神经元氧化应激的影响
目的 探讨组织激肽释放酶(TK)对酸中毒损伤神经元的保护作用及对酸敏感离子通道1a(ASICIa)介导的氧化应激反应的影响.方法 取原代培养8～10d的新生SD大鼠皮质神经元,随机分为正常对照组,酸中毒组(pH =6.0的细胞外液处理4h),TK( 100 nmol/L)、缓激肽B2受体(B2R)激动剂(缓激肽,100 nmol/L)、ASIC1a阻断剂(狼蛛毒素,100 ng/ml)及B2R拮抗剂( HOE140)预处理组.TK、B2R激动剂、ASICla阻断剂预处理组在给予酸性液处理前,先给予相应药物预处理30 min；B2R拮抗剂预处理组,在TK干预前30 min,给予HOE140(500 nmol/L),30 min后给予酸性液处理.采用活细胞计数试剂盒( CCK-8)测定各组神经元的存活率.应用不同的荧光探针标记细胞内活性氧(ROS),一氧化氮(NO),线粒体膜电位(MMP)以及细胞内游离Ca2+,采用荧光酶标仪测定上述各组细胞内各荧光物质的相对强度,计算各物质的相对含量. 结果 ①正常对照组,TK、ASIC1a阻断剂及B2R激动剂预处理组的神经元存活率分别为(96.6±2.6)％、(79.7±5.9)％、(74.2±4.6)％、(77.7±5.0)％,与酸中毒组的(59.0±6.0)％比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).B2R拮抗剂预处理组为(64.6±3.8)％,与TK预处理组比较差异有统计学意义(P＜0.01).②与正常对照组比较,酸中毒组细胞内ROS、NO及游离Ca2+水平显著增高(P＜0.01),MMP水平显著下降(P＜0.01)；与酸中毒组比较,TK、ASIC1a阻断剂及B2R拮抗剂预处理组细胞内ROS、NO及Ca2+水平显著下降,MMP水平显著增高(P＜0.01或P＜0.05)；而与TK预处理组比较,B2R拮抗剂预处理组细胞内ROS、NO含量,游离Ca2+水平明显增高,MMP水平明显下降,P＜0.01.结论 在酸性环境下,ASIC1a激活介导了神经元内氧化应激反应,诱导神经元损伤；TK通过B2R能够减轻ASIC1a介导的氧化应激性损伤.
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阿米洛利对硝普钠诱导的骨性关节炎大鼠的关节软骨细胞凋亡的实验研究
目的 研究酸敏感离子通道(ASICs)阻断剂阿米洛利对骨性关节炎(OA)大鼠关节软骨凋亡的作用.方法 将大鼠软骨细胞随机分成6组:正常组、模型组、3个剂量(50,100,200 μmol·L-1)阿米洛利组及狼蛛毒素1 (100 ng·mL-1)对照组.用硝普钠诱导建立OA大鼠关节软骨细胞凋亡体外模型,PI单染色法及TUNEL染色观察OA大鼠关节软骨细胞的凋亡情况.结果 与模型组相比,3个剂量阿米洛利组及对照组的细胞凋亡率明显降低;同时,凋亡阳性细胞数也明显减少(P<0.01).结论 阿米洛利对骨性关节炎关节软骨细胞的凋亡有抑制作用.
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酸敏感离子通道与炎性痛中枢敏化机制的研究
目的：研究探讨酸敏感离子通道与炎性痛中枢敏化机制。方法对急性分离的脊髓背角神经元，经电生理研究初步判定酸敏感离子通道在炎性痛中的作用及作用机制，进行行为学实验、福尔马林实验等一系列实验，进一步确定酸敏感离子通道及炎性痛中枢敏化机制。结果钙离子通透性的ASICIa同聚体通道是脊髓背角主要存在的酸敏感离子通道；脊髓背角神经元中ASICIa的表达数目会在外周炎的条件下增多，使得脊髓背角神经元兴奋性及可塑性增强，且ASICIa通道参与炎性痛觉敏化的过程中。结论酸敏感离子通道与炎性痛中枢敏化机制是一种生物体内痛觉引发并维持的一种机制， ASICIa通道可以作为止痛类药物的靶点。
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布洛芬对大鼠皮质缺血半暗带酸敏感离子通道的作用
目的 研究布洛芬对大鼠皮质缺血半暗带酸敏感离子通道的影响,探讨其对脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制.方法 健康雄性成年SD大鼠随机分为4组:假手术+溶媒(S+R)组、假手术+布洛芬(S+B)组、模型+溶媒(C+R)组、模型+布洛芬(C+B)组,每组12只.假手术组只分离血管,不进行栓塞;模型组常规建立大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型;布洛芬组于大脑中动脉阻塞前1h及之后每隔8h腹腔注射布洛芬(80 mg/kg),共240 mg/(kg·24h);溶媒组于相同时间点腹腔注射相应体质量的精氨酸溶液.术后24h进行神经行为学评分、TIC染色观察脑梗死容积和Western blot检测皮质缺血半暗带酸敏感离子通道1a(acid-sensing ion channel 1a,ASIC1a)和酸敏感离子通道2a(acid-sensing ion channel 2a,ASIC2a)的总蛋白表达和膜蛋白含量.结果大鼠神经行为学评分C+R组(6.06±0.35)与S+R组(17.56±0.15)大鼠相比明显降低(P＜0.05);C+B组神经行为学评分(11.94±0.33)与C+R组相比有所提高(P＜0.05),且脑梗死容积百分比前者(11.24％±0.93％)较后者(20.03％±1.74％)明显减小(P＜0.01);C+R组大鼠皮质缺血半暗带ASIC1a总蛋白的相对表达水平(0.99±0.07)与S+R组(1.00±0.04)相比没有明显差异(P=0.12),但ASIC1a膜蛋白的含量明显升高(1.40±0.11 vs 0.96±0.04,P＜0.05)、ASIC2a总蛋白的表达明显增加(1.87±0.14 vs 0.98±0.07,P＜0.01),C+B组ASIC1a的总蛋白表达水平(0.79±0.08)与C+R组(0.99±0.07)相比有所下调,但差异无统计学意义(P=0.07),C+R组较C+B组ASIC1a膜蛋白的含量(1.40±0.11 vs 0.98±0.12)以及ASIC2a总蛋白的表达(1.87±0.14 vs 1.18±0.12)明显增加(P＜0.05).结论布洛芬能明显改善大鼠MCAO术后的神经行为学障碍、缩小脑梗死容积,这种作用可能通过抑制ASIC2a的表达上调,减少ASIC1a的膜蛋白含量.
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酸敏感性离子通道及相关疾病
酸敏感离子通道(ASICs)是一类由胞外H+激活的阳离子通道,对Ca2+或Na+具有通透性,分布亦具有特异性.目前已发现的7个ASICs亚基在视觉、学习记忆、树突发育等过程中有重要的生理作用.同时,它们还参与某些病理反应,与缺血性脑损伤、腰椎间盘突出症、肿瘤、类风湿性关节炎、心绞痛、癫痫等疾病密切相关,并为这些疾病的治疗提供了新的潜在靶标.现就ASICs的结构、生理功能,以及相关的一些疾病进行综述.
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酸敏感离子通道的研究进展
酸敏感离子通道ASICs是一类由细胞外Ph降低所激活的阳离子通道，其可在胞外酸化时激活并产生相应电位。目前研究发现，酸敏感离子通道ASICs在心血管，骨组织和膀胱内均有一定的生理或病理作用。现就ASICs对人体各组织的研究进展做一简要综述，以增进对ASICs的生理学功能和病理作用的了解。
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浅低温对大鼠全脑缺血再灌注酸敏感离子通道1a和2a表达的影响
目的 探讨浅低温对大鼠全脑缺血再灌注后酸敏感离子通道1a(ASIC1a)和2a(ASIC2a)的影响及在脑复苏作用中的潜在机制.方法 95只雄性SD大鼠随机数字表分为以下5组(n=19):假手术组(Ⅰ)、模型组(Ⅱ)、浅低温组(Ⅲ)、PcTX1组(Ⅳ)、浅低温+PcTX1组(Ⅴ).四血管阻塞法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,缺血15 min,再灌注即刻Ⅳ组和Ⅴ组侧脑室注射500 ng/ml PcTX1 6μl,其余组侧脑室注射等容量生理盐水.同时Ⅲ组和Ⅴ组于再灌注15 min内将直肠温度降至32～ 33℃,并维持6h,其余组维持直肠温度36～37℃.测定再灌注6h及24 h海马ASIC1a和ASIC2a蛋白水平、再灌注24 h海马ASIC1a和ASIC2a mRNA表达水平；观察再灌注24h海马CA1区病理改变；以及测定再灌注72 h大鼠脑含水量.结果 与Ⅰ组比,其余各组ASIC1a mRNA和蛋白的表达差异无统计学意义(P＞0.05)；与Ⅰ组比,其余各组ASIC2a mRNA和蛋白的表达均增高(P＜0.05)；与Ⅱ组和Ⅳ组比,Ⅲ组和Ⅴ组ASIC2a mRNA和蛋白的表达增高(P＜0.05)；与再灌注6h相比,再灌注24hⅡ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组ASIC2a蛋白表达均增高(P＜0.05)；与Ⅰ组比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组CA1区锥体细胞数均减少(P＜0.01)；与Ⅱ组比,Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组CA1区锥体细胞数均增加(P＜0.01),尤以Ⅴ组效果明显(P＜0.01)；与Ⅰ组比,Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组脑水含量均增加(P＜0.01)；与Ⅱ组比,Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组脑水含量均降低(P＜0.01),Ⅴ组降低明显(P＜0.01).结论 浅低温减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤可能与ASIC2a mRNA和蛋白表达上调有关,且浅低温联合PcTX1对缺血脑组织的复苏具有协同作用.
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酸敏感离子通道对大电导钙激活钾通道的抑制及其相互作用
酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)是神经细胞的非电压门控阳离子通道,广泛分布于中枢及外周神经系统,参与痛觉、触觉、酸味觉的形成.在突触可塑性、学习记忆功能、炎症及脑缺血等生理病理过程中发挥重要作用.ASICs分别由5个亚基:ASICla、ASICIb、ASIC2a、ASIC2b和ASIC3通过形成同聚体或异聚体构成.每个亚基都有2个跨膜区,1个大的富含半胱氨酸的胞外域和均位于胞内的N端与C端构成.
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酸敏感离子通道抑制剂的研究进展
酸敏感离子通道(ASICs)是一类由胞外H+激活的阳离子通道.已发现的6个ASICs亚基在触觉、痛觉、酸味觉以及学习记忆中有重要的生理作用,同时,它们参与某些病理反应,可以被神经肽、温度、金属离子以及缺血诱导产生的一些活性物质所调控.基于其病理作用,ASICs抑制剂的研发成为药物化学研究的热点之一.本文综述了近年来对ASICs的结构、生理和病理作用及几类ASICs抑制剂的新研究进展,并进行了展望.
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酸敏感离子通道在颅脑损伤中对H+-Ca2+双离子偶联的调控作用
创伤性颅脑损伤(traumatic brain injury,TBI)是神经外科中的常见病,致残率和病死率较高,除与原发损伤过重有关之外,还与伤后启动内源性因子释放加剧脑继发性损害有关.从分子水平研究脑外伤后继发损害的机制,早期给予相应保护措施,对降低脑损伤的致残率和病死率具有重要的临床意义.酸中毒是脑缺血的共有特征.脑缺血损害后首先是氧代谢障碍,酸碱失衡,H+和pH值的变化是首当其冲的,继而引起一系列反应.钙离子毒性是缺血脑损害的关键,胞内Ca2超载对于神经损害有重要作用,一些有害因素可引起钙平衡系统功能失调,钙分布紊乱,导致细胞内钙浓度异常性升高,即钙超载,钙超载可引起线粒体内氧化磷酸化过程障碍,线粒体膜电位降低,组织ATP含量下降,以及胞浆内磷脂酶、蛋白酶等激活,可导致并促进细胞的不可逆性损伤.本文就酸敏感离子通道在重度颅脑损伤中对H+ -Ca2+双离子偶联的调控作用机制予以综述.
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ASICs在心血管疾病中的研究进展
心血管疾病(CVD)是一类临床常见疾病,其病种丰富、发病率逐年增高,严重影响人们的生活.酸敏感离子通道(ASICs)有调控水盐重吸收、传导心脏感觉等作用而引起了人们的关注.目前针对CVD发病机制进行了大量研究,并且发现ASICs除了在中枢和外周神经系统中广泛分布外,在心血管系统中也大量存在并起到了重要作用.本文总结归纳ASICs在CVD中的新研究进展,并对ASICs相关性药物在CVD中的治疗作用进行简要介绍.
关键词： 酸敏感离子通道 心血管疾病(CVD) 发病机制 -
酸敏感离子通道1α介导缺氧皮质神经元损伤及相关机制的探讨
目的 探讨缺氧条件下阻断酸敏感离子通道1α(acid sensing ion channels 1α,ASIC1α)对大鼠皮质神经元存活及细胞内钙离子水平的影响,以及缺氧对皮质神经元ASIC1表达的影响.方法 通过使用ASIC1α阻断剂、N甲基D门冬氨酸(NMDA)受体阻断剂、电压门控通道阻断剂,利用fura-3/AM荧光显像,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验等技术,比较观察对缺氧皮质神经元存活以及钙离子平的影响,进一步利用Western印迹法检测ASIC1的表达变化.结果 酸性环境中,缺氧皮质神经元形态明显改变,细胞内钙离子浓度升高;与加入NMDA受体阻断剂、电压门控通道阻断剂相比较,加入ASIC1α阻断剂明显抑制细胞内钙离子水平升高(P<0.05),对神经元起到保护作用.随缺氧时间的延长,神经元ASIC1蛋白表达增加.结论 酸性环境中,缺氧皮质神经元的损伤与ASIC1α开放以及表达增加有关;阻断SIC1α具有神经保护作用.
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酸敏感离子通道在缺血性脑卒中作用的研究进展
酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)属于上皮钠通道/退变素超家族中的一员,是一类质子(H+)激活对阳离子选择性通透的非电压依赖的配体门控性离子通道.ASICs广泛分布于哺乳动物的神经系统,参与体内包括疼痛、学习、记忆、突触传递和可塑性调节等在内的多种生理和病理过程.近年来研究显示ASICs参与脑缺血神经元损伤过程,可能作为治疗缺血性脑卒中的新靶标.本文就目前ASICs在脑缺血神经元损伤过程的中作用的研究进展进行了综述.
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酸敏感离子通道调控机制的研究进展
酸敏感离子通道(Acid-sensing ion channels,ASICs)是一类由细胞外酸直接激活的阳离子通道,广泛分布于中枢及外周系统,参与痛觉、触觉、酸味觉形成,在突触可塑性、学习记忆功能、炎症及脑缺血等病理生理过程中发挥重要作用.因此时ASICs的功能性调控的研究有着重要的意义.研究表明ASICs的功能可受如金属离子、神经肽、蛋白酶等多种因素所调控,通过对这些调控机制的研究有利于为临床治疗寻找新的药理学靶点.
