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EGFR抑制剂细胞磷酸化筛选模型的建立与应用
表皮生长因子受体(EGFR)是一种具有酪氨酸激酶(PTK)活性的跨膜糖蛋白受体,由 N 端胞外区、跨膜区、胞内区 3 部分组成,胞内区共 542 个氨基酸残基,由近膜区、酪氨酸激酶区、C 末端等 3 个亚区构成,近膜区的前13 个氨基酸(645 ~ 657)介导胞内二聚化[1].自身磷酸化位点位于 C 末端,其中 Tyr1068 为主要的 3 个磷酸化位点(Tyr1068、Tyr1148 和 Tyr1173)之一,与细胞信号传递密切相关[2].表皮生长因子(EGF)与 EGFR 胞外区 N 端结合,受体之间二聚化形成同源或异源二聚体,二聚体促使EGFR 胞内区氨基酸残基自磷酸化,进而启动胞内信号通路,调控癌细胞的增殖、存活及凋亡[3].
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表皮生长因子受体家族与靶向性抗癌治疗
表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor,EGFR)家族,亦称erbB受体,含4个成员即EGFR(erbB-1、HER1)、erbB-2(HER2/neu)、erbB-3(HER3)和erbB-4(HER4),均属于Ⅰ型酪氨酸激酶受体(type1-receptor tyrosine kinase,TITK).这些受体是单个氨基酸链蛋白.每一受体含3个区域(domain)即细胞外区、疏水跨膜区和细胞内区.细胞外区为受体及其相应的配体或配体样物质结合处.受体与配体或配体样物质结合后形成同种或异种二聚体.
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人粘膜血管地址素在大肠杆菌中的表达及其抗血清制备
粘膜血管地址素 (mucosal vascular addressin cell adhesion molecule-1, MAdCAM-1)是主要表达于肠道及其相关淋巴组织血管内皮细胞表面的一种粘附分子,系单链跨膜糖蛋白,由N端的配体结合域、近膜的粘蛋白样区及跨膜区和胞浆区组成。通过与淋巴细胞膜上的受体分子α4β7整合素相结合,介导淋巴细胞向肠道粘膜组织定向迁移,因此,它在肠道粘膜免疫中具有重要的作用。
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小鼠趋化因子受体CXCR3胞外N末端的原核表达、抗体制备及初步应用
趋化因子受体为与G蛋白偶联、含有7个跨膜区的跨膜蛋白,依其结构特点又可分为多个亚类,其中CXCR3主要表达于激活的T细胞、B细胞和NK细胞表面,其高表达是淋巴细胞发生定向迁移和募集的重要条件,在炎症浸润、细胞迁移、血管形成、移植排斥反应和某些肿瘤的发生中都起着重要的作用.1
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Klotho在CKD-MBD及急性肾损伤中的新认识
Klotho基因是Kuro[1]等于1997年发现的与衰老有关的新基因,并用古希腊神话中纺织生命之线女神的名字命名.Klotho基因被敲除的小鼠(kl-/-小鼠)可出现类似人类衰老的各种表型,如寿命缩短、听力下降、不育症、动脉硬化、软组织钙化、皮肤萎缩、骨质疏松、肺气肿等.1 klotho基因及蛋白Klotho基因长50kb,由5个外显子和4个内含子组成.其表达的蛋白在人和小鼠中均有膜结合型和分泌型两种形式,分泌型的量明显高于膜结合型,但在大鼠中尚未发现有分泌型klotho蛋白的基因结构.klotho基因5个外显子全部表达则产生由1,012个氨基酸(小鼠)或1,014个氨基酸(人和大鼠)组成的膜结合型klotho蛋白[2].膜结合型klotho蛋白的特点是:胞外段较长、胞内段和跨膜区较短.klotho蛋白胞外区可被解聚素-金属蛋白酶(a disintegrin and metal]oproteinase,ADAM)水解.分泌型蛋白含有549个氨基酸,不含kl 2胞外区、跨膜区和胞内区.循环中的klotho蛋白可以来源于klotho基因选择性转录、mRNA选择性剪切而生成的可溶性型klotho,也可来源于被ADAM水解脱落的膜型klotho蛋白的胞外部分[3].
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CXCL16与动脉粥样硬化
趋化因子是一组具有趋化作用的细胞因子,能吸引免疫细胞到免疫应答局部,参与免疫调节和免疫病理反应.目前,已知的趋化因子可分为CC、CXC、C及CX3C 4个家族和诱导性及组成性两类.CXCL16是近年在人动脉粥样硬化损伤部位的巨噬细胞中发现的一种趋化因子,同时也是一种膜结合蛋白,起到清道夫受体的作用.它属于CXC家族,同时具有CC家族和CX3C家族(如:不规则趋化因子Fractalkine)趋化因子的特征,它包含跨膜区和黏蛋白样结构.我们从CXCL16的基本特征、病理生理功能尤其与动脉粥样硬化关系的研究现状和新进展作一简要综述.
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FMS样酪氨酸激酶3及其突变与白血病
FMS样酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase-3,FLT3),也称为胎肝激酶2(fetal liver kinase-2, FLK-2)和人干细胞激酶1(human stem cell kinase-1, STK-1),是Ⅲ型受体酪氨酸激酶(class Ⅲ receptor tyrosine kinase, RTKⅢ)家族成员之一,于1991年由两个研究小组分别克隆.FLT3与其他RTKⅢ家族成员包括集落刺激因子1受体(CSF1R或FMS)、血小板衍化生长因子(PDGFR)、干细胞因子受体(KIT)等基因序列非常相似,其蛋白结构均包括5个Ig样结构域组成的胞外区,一个跨膜区,一个近膜区(juxtamembrane, JM),以及胞内由激酶插入区分隔而成的两个酪氨酸激酶(tyrosine kinase,TK)区.
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作者答复
王仁顺教授: 谢谢你对《中华泌尿外科杂志》的关心,收到自编辑部转来你的信件,有关α-受体的认 识不断深入,近来认为α1-AR受体可进一步分为α1a-1、α1a-2、α 1a-3、α1a-4[1]。α受体属G蛋白耦联、跨膜受体,体内类似 受体多达100余种[2]。新近发现的Toll受体、HIV在CD4表面的受体都属跨膜受 体。跨膜受体的分子结构有细胞外区、跨膜区与细胞内区。典 型的受体跨膜区有7段,通常谓之7段跨膜受体(7 segments transmembrane receptor),受 体与G蛋白形成复合物,接收信号和传送。而G蛋白至少有15种亚单位,α、β、γ、跨膜区 及 细胞内区的氨基酸顺序可能与受体功能有关。林氏曾将LHRH受体的细胞内区予以改变,受体 的功能亦受到影响。所以有关α受体结构与生化功能非常复杂,很难作深入的了解。Pric e (1999)在AUA年会上报告,认为大家对脊髓中的α1D受体还缺乏了解,各种α 1-ΑR亚型的mRNA在脊髓中均有表达,但α1D mRNA比其它亚型高出2倍,特别是 在骶部腹侧神经元及副交感神经更为明显,逼尿肌中的α1D受体亦高出α1a 受体2倍,α1D受体可能与下尿路症状有关,值得进一步作深入研究。 90年代初Steers发现膀胱出口部梗阻时,尿中神经生长因子比正常高出50倍,它可使支配膀 胱输入及输出的神经元增大,甚至L6~S1的神经背根细胞亦显著增大。为什么增生的 前列腺切除后,梗阻症状减轻,而刺激症状常不能缓解,严重者甚至发生紧迫性尿失禁?当 时的解释为增大的神经元一时难以恢复,并认为采用神经生长因子抗体治疗,可能有帮助。 α1D受体与神经生长因子关系如何,尚不了解。理论上具有阻断α1A 与α1D受体药物如哈乐比单纯阻断α1A受体好(对改善BPH症状),各种α 1A受体阻断剂在改善BPH梗阻症状方面无差别,但对改善平滑肌的应激性则效果欠佳 [1]。现尚缺乏更多的临床报告证实,尤其是国内的报告证实。
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Fas/FasL与心肌细胞凋亡
1 Fas/FasL生物化学1.1 Fas及sFas人的Fas包含325个氨基酸,氨基端有信息顺序(signal sequence,分子中都有跨膜区,属Ⅰ类膜蛋白,分子量为45KD.结构分析证实Fas属于TNF和NGF受体家族[1].
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肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)在心脏发育中的作用
肝素结合性表皮生长因子(heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor,HB-EGF),是表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)家族的成员.在体内,首先合成为Ⅰ型的跨膜蛋白前体 (proHB-EGF),其结构包括信号肽,肝素结合区,表皮生长因子样结构域,近膜区,跨膜区和细胞质区,然后通过特定的金属蛋白酶水解近膜区,释放出可溶性的HB-EGF,与表皮生长因子受体结合.蛋白酶水解 proHB-EGF产生的N-末端和C-末端的产物分别为可溶性的HB-EGF和HB-EGF-C.
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酸敏感离子通道对大电导钙激活钾通道的抑制及其相互作用
酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)是神经细胞的非电压门控阳离子通道,广泛分布于中枢及外周神经系统,参与痛觉、触觉、酸味觉的形成.在突触可塑性、学习记忆功能、炎症及脑缺血等生理病理过程中发挥重要作用.ASICs分别由5个亚基:ASICla、ASICIb、ASIC2a、ASIC2b和ASIC3通过形成同聚体或异聚体构成.每个亚基都有2个跨膜区,1个大的富含半胱氨酸的胞外域和均位于胞内的N端与C端构成.
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B细胞活化因子/增殖诱导配体在类风湿关节炎发病机制及治疗中的研究进展
B细胞活化因子(B cell activating factor of the TNF family,BAFF)是Schneider等于1999年发现的肿瘤坏死因子(TNF)家族的新成员,又叫做B细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)~([1-2]).BAFF是由283个氨基酸残基组成的相对分子质量为313 000的Ⅱ型跨膜蛋白,可分为胞内区、跨膜区、胞外区3个部分.其N端的1~46位氨基酸为胞内区片段.47~73位氨基酸为跨膜区片段,其余为胞外区片段~([1]).
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紧密连接蛋白Claudin与肾脏
Claudin属于紧密连接蛋白家族,哺乳动物细胞的claudin有24个蛋白亚型,具有四个跨膜区,分别为细胞内的-NH2末端和-COOH末端,以及细胞外的初级大环和次级小环.Claudin广泛分布于肾脏的多种组织结构,如肾小管、血管、肾小体等.不同亚型在不同的肾单位节段表达,同一肾单位节段表达不同亚型.此外,claudin-16和-19基因突变与高尿钙和低血镁性肾钙质沉着病(FHHNC)的发生有密切联系,而多囊肾的发生可能与claudin-7基因突变有关.
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整合素与1型糖尿病自身免疫反应的关系研究进展
合素(integrins)家族是一组细胞表面跨膜异源双体(Heterodimer)的糖蛋白受体,是由α和β两个亚单位通过非共价键连接构成的异二聚体结构.α、β两条链均为跨膜糖蛋白,都具有胞膜外区、跨膜区和胞浆区,90%以上的成分以膜蛋白形式存在于细胞外,胞外区域的组成类似于免疫球蛋白结构,分别由16种α链和9种β链组合构成,通过非共价键连接构成了24组整合素家族成员.
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TIM基因家族在疾病中作用的研究进展
1 TIM基因家族概述
TIM基因家族在免疫调节和免疫相关性疾病中的作用机制越来越受到研究者的关注。鼠类Tim家族由8个成员组成( Tim1~8),位于鼠类染色体11 B1.1上;而人类TIM 基因家族由3个成员组成( TIM-1、TIM-3和TIM-4),位于人类染色体5 q33.2上,这一染色体区域已经多次表明与哮喘、过敏和自身免疫性疾病等连锁[1-3]。 TIM蛋白是一类具有共同基序的跨膜糖蛋白,其结构包括信号肽区、免疫球蛋白区、黏蛋白区、跨膜区和胞内尾区五部分[3]。除了TIM-4蛋白外, TIM-1、TIM-2和 TIM-3的胞内部分含有酪氨酸磷酸化的基序( motif ),参与跨膜信号转导[4]。 -
CCR5 mRNA的实时RT-PCR定量检测
CCR5是位于人细胞表面与β-趋化因子MIP-1α、MIP-1β、RANTES结合的受体,属于七跨膜区受体超家族的G蛋白偶联受体[1].它不仅在HIV的感染过程中作为HIV的辅助受体,介导HIV进入宿主细胞,而且趋化因子作为功能性的小蛋白分子,与淋巴细胞的体内迁移和归巢、造血细胞的生成、胚胎的正常发育、炎症性疾病、肿瘤的生长等功能密切相关[2].因此精确检测CCR5的表达,不仅对临床医学而且对基础医学研究都具有重要意义.
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103在流感病毒MA蛋白中引入HA跨膜区能促进蛋白与ISCOM结合并激活特异性CD8+CTL
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组织因子在食管鳞癌中的表达及其临床意义
食管鳞癌是常见的上消化道恶性肿瘤,其死亡率高居恶性肿瘤死亡率第2位.食管鳞癌的治疗目前主要有外科、放射,药物及免疫治疗等.对于Ⅱ期以上的病例,单一的治疗方案往往效果不佳,故多采用综合治疗.组织因子又称凝血因子Ⅲ.是一相对分子质量为47×103的单链跨膜糖蛋白.由263个氨基酸残基组成,包括胞外区、跨膜区、胞内区三个结构域[1].
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凝集素样受体KLRE1抑制NK细胞的细胞毒性
NK细胞识别、杀伤靶细胞有赖于活化或抑制性受体与多种配体间的相互作用.这些受体可分为两类不同的蛋白家族:KLRs和带有免疫球蛋白样结构域的受体,均有抑制性和活化性成员.抑制性受体胞浆尾部含有ITIMs;活化性受体缺乏ITIMs,但在跨膜区有一个正电氨基酸并与含有ITAM的接头分子相关联.SHP-1与磷酸化的ITIMs关联介导抑制NK细胞的细胞毒性.本研究报道了克隆的一个新的NK细胞受体KLRE1.初步的实验结果提示KLRE1能抑制NK细胞的细胞毒性.
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1株九江分离的柯萨奇A6病毒VP1基因分析及B细胞表位预测
目的 对1株在九江地区分离的柯萨奇A6病毒(CoxA6) VP1区域进行克隆,并对其编码蛋白的结构、功能及B细胞表位进行分析和预测,为CoxA6疫苗制备和诊断方法的研究提供理论基础.方法 采用RT-PCR法对CoxA6分离株VP1区进行扩增和克隆、序列分析,应用SigaIP、TMPRED、TMHMM、Big-PI Predictor、Cell-Ploc、PSORT、NetNES、Netphos、SOPMA、NetNGlyc、MotifScan、InterProscan、SMART、PROSITE、GOR4、Bepipred Linear Epitope Prediction等生物信息学方法预测其VP1基因编码蛋白特性和潜在的B细胞表位.结果 该CoxA6分离株VP1基因编码305 aa的多肽,分子量为33.5 kDa.该蛋白无信号肽、跨膜区,是亲水性蛋白;二级结构主要以无规则卷曲为主,其次为α-螺旋及β-片层.该蛋白共有7个可能的B细胞抗原表位,位于151~ 173 aa区域内的表位分值高为2.774.结论 成功克隆了1株CoxA6的VP1基因,并对其进行序列分析、蛋白质结构和B细胞表位预测,为制备CoxA6疫苗和开发诊断方法提供了分子生物学基础.