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九江地区手足口病病原柯萨奇A6病毒的分离、鉴定及分子流行病学特征
目的 探讨九江地区流行手足口病病( HFMD)原体柯萨奇A6( CVA6)的分离、鉴定及分子流行特征.方法取手足口病患儿的咽拭子,将咽拭子病毒悬液接种于人横纹肌肉瘤细胞( RD细胞).通过CVA6病毒致细胞病变效应(CPE)分析、MTT法检测病毒增殖效果、CVA6病毒特异性核酸聚合酶链反应(PCR)及同源和遗传进化分析等方法检测CVA6的致病效果和分子流行特征.结果 咽拭子病毒悬液接种RD细胞盲传5代后出现CPE,收集其病毒培养基上清,再接种RD细胞2次,均出现CPE视为CPE阳性;CVA6病毒VP1区域通过序列比对,以此确认2株病毒为CVA6,分别命名JJ2012037和JJ2012039;CVA6呈时间依赖性抑制宿主细胞增殖;利用CVA6毒株的VP1序列和国内外流行的CVA6序列进行核苷酸同源性分析;该毒株与上海分离到CVA6( JX495144)序列发生的同源性高(99. 2%~99. 6%).结论 成功分离出2株九江地区流行的手足口病病原CVA6病毒株,这2株CVA6分离株的分子流行特征接近上海地区的CVA6的流行病原,可能为同一个基因亚型.
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1株九江分离的柯萨奇A6病毒VP1基因分析及B细胞表位预测
目的 对1株在九江地区分离的柯萨奇A6病毒(CoxA6) VP1区域进行克隆,并对其编码蛋白的结构、功能及B细胞表位进行分析和预测,为CoxA6疫苗制备和诊断方法的研究提供理论基础.方法 采用RT-PCR法对CoxA6分离株VP1区进行扩增和克隆、序列分析,应用SigaIP、TMPRED、TMHMM、Big-PI Predictor、Cell-Ploc、PSORT、NetNES、Netphos、SOPMA、NetNGlyc、MotifScan、InterProscan、SMART、PROSITE、GOR4、Bepipred Linear Epitope Prediction等生物信息学方法预测其VP1基因编码蛋白特性和潜在的B细胞表位.结果 该CoxA6分离株VP1基因编码305 aa的多肽,分子量为33.5 kDa.该蛋白无信号肽、跨膜区,是亲水性蛋白;二级结构主要以无规则卷曲为主,其次为α-螺旋及β-片层.该蛋白共有7个可能的B细胞抗原表位,位于151～ 173 aa区域内的表位分值高为2.774.结论 成功克隆了1株CoxA6的VP1基因,并对其进行序列分析、蛋白质结构和B细胞表位预测,为制备CoxA6疫苗和开发诊断方法提供了分子生物学基础.
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2012-2013年福州市手足口病原学调查研究
目的 对2012-2013年福州市手足口病进行病原学调查研究并对其流行病学特征进行分析,旨在全面了解福州地区手足口病的肠道病毒.方法 收集2012-2013年福州市区临床表现为手足口病的样本1 031份,通过荧光定量RT-PCR、巢式RT-PCR以及NCBI提供的BLAST序列比对确定肠道病毒型别.利用CVA6特异性引物鉴定2012-2013年福州市其他肠道病毒.对2012年CVA6手足口病例进行流行病学特征分析.结果 1 031份标本中878份显示EV阳性,检出率为85.16％ (878/1 031),其中EV71 426例,阳性率为45.52％ (426/878);CVA1693例,阳性率为10.60％ (93/878);其他肠道病毒359例,阳性率为40.88％ (359/878),其中CVA6为218例,阳性率为24.83％ (218/878).另还发现CVA10和Echo3肠道病毒.流行病学特征分析发现0～5岁年龄组儿童为CVA6主要发病人群(构成比为94.04％),男女性别比为1.66∶1;CVA6构成比情况在各月有较大差异,总体起伏明显,9月的CVA6病例构成比占62.50％,达到2012年高峰.结论 EV71、CVA16和CVA6是福州市手足口的主要肠道病原体,CVA6病毒已经超过CVA16成为第二大病原体,2012年CVA6主要发病人群为0～5岁儿童,9月份为发病高峰期.
