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雌激素缺乏上调大鼠肾脏肾素和血管紧张素转化酶的表达
肾素-血管紧张素系统（ renin-angiotensin system ， RAS）在慢性肾病（ chronic kidney disease ， CKD）发病进程中发挥重要作用，血管紧张素Ⅱ（ angiotensin ， AngⅡ）作为RAS的主要生物活性物质通过升高肾小体血管血压，造成肾小体血管上皮细胞、内皮细胞和系膜细胞的损伤，诱导CKD的发生。肾素在RAS中扮演蛋白水解酶作用，此外，肾素（原）还能与其受体结合直接诱导炎性反应和增生肥厚效应。
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发育期小鼠肾小体细胞凋亡的研究
目的研究小鼠肾小体发育过程中的细胞凋亡规律及形态学特点. 方法应用光镜、电镜技术和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)分别对不同胚龄和生后日龄小鼠肾小体内细胞凋亡进行观察. 结果胚龄14d肾小体发生时就出现细胞凋亡,胚龄18d左右达到高峰,随后缓慢下降.肾小体内凋亡细胞以内皮细胞和足细胞多见.凋亡细胞的两种结局:1. 被邻近的细胞所吞噬;2. 落入肾小体的毛细血管腔或肾小囊中. 结论小鼠肾小体的整个发育过程均存在细胞凋亡现象,肾小体内细胞凋亡与肾小体发育的完善有关.
关键词： 肾小体 细胞凋亡 发育 DNA末端原位标记技术 小鼠 -
发育期小鼠肾小体细细胞增殖与凋亡的研究
目的研究小鼠肾小体发育过程中细胞增殖与凋亡的变化规律.方法采用PCNA免疫组织化学方法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL染色法)和光、电镜技术,对发育不同阶段肾小体的细胞增殖和凋亡进行观察.结果 PCNA免疫组织化学染色显示:在Ⅰ和Ⅱ期肾小体内几乎所有细胞PCNA呈强阳性反应,Ⅲ、Ⅳ期肾小体PCNA阳性细胞数逐渐减少,Ⅴ期肾小体PCNA阳性细胞少见.TUNEL阳性细胞多出现在出生前,主要在Ⅲ、Ⅳ期肾小体表达.电镜观察:早期肾小体所有细胞核分裂象机率均高,Ⅲ期肾小体中的内皮细胞、足细胞核分裂象机率高,Ⅳ期肾小体中只见到内皮细胞核分裂象,Ⅴ期细胞核分裂象少见.电镜下所见的细胞凋亡多在Ⅲ、Ⅳ期肾小体,其中以内皮细胞、肾小囊壁层细胞凋亡居多.结论细胞增殖与凋亡行为在小鼠肾小体发育的整个过程中普遍存在,协同参与了调控肾小体正常发育过程.
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小鼠肾小体的形态发生
目的探讨小鼠肾小体形态的发生规律. 方法应用光镜、电镜技术并结合体视学方法和图像分析技术对生前和生后小鼠肾脏中各发育阶段的肾小体进行形态学观察和立体计量学的测量. 结果可见肾小体发育的4个阶段,胚龄14d时,Ⅰ、Ⅱ期肾小体出现,生后7d消失.胚龄16d时,Ⅲ、Ⅳ期肾小体出现,其体积从胚龄16d到生后40d增大约70倍,数目从胚龄16d到生后7d增加约20倍,生后7d后基本恒定. 结论小鼠肾小体于胚龄14d发生,生后7d前增殖明显,生后7d后不再增殖,肾小体的发育以单个体积迅速增大为特点.
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血管紧张素Ⅱ对发育期小鼠肾小体细胞增殖的影响
目的 观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体外培养孕12d小鼠肾组织中各期肾小体细胞增殖的影响.方法 孕12d母鼠随机分为体外培养对照组和施加不同浓度AngⅡ(10-9mol/L～10-5mol/L)组.应用体外培养、免疫组织化学及免疫荧光技术,观察各组肾组织培养2、4、6d后各期肾小体增殖细胞核抗原(PCNA)的表达. 结果 AngⅡ能促进小鼠肾小体细胞的增殖,在一定范围内,AngⅡ浓度越大肾小体细胞增殖越明显,且与作用时间呈正相关;培养4d的肾组织比培养2d的肾组织增殖明显. 结论 AngⅡ对发育期小鼠肾小体细胞有促增殖作用,且此作用有浓度时间依赖性.
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血管紧张素Ⅱ对发育期小鼠肾小体细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体外培养E12d小鼠肾组织各期肾小体细胞增殖和凋亡的影响.方法 孕12d的母鼠40只随机分为6组,体外培养对照组(0mol/L AngⅡ)和施加不同浓度AngⅡ(10-9～10-5mol/L)组.应用免疫组织化学、原位缺口末端标记(TUNEL)法、免疫荧光双标技术及激光扫描共焦显微镜,观察体外培养2、4、6d后小鼠肾组织中各期肾小体增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡阳性细胞的表达. 结果 随培养浓度增高和培养时间延长,各期肾小体细胞增殖和凋亡指数均有增加,且增殖指数在AngⅡ低浓度(10-9、10-8、10-7mol/L)、短时间(培养2、4d)时变化明显;凋亡指数在高浓度(10-6、10-5mol/L)、长时间(培养6d)时变化明显. 结论 AngⅡ对发育期小鼠肾小体细胞有促增殖和凋亡作用,且此作用有浓度、时间依赖性.
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小鼠肾小体发育过程中的细胞凋亡及Bcl-2和Bax基因表达
目的探讨细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2和bax在小鼠不同发育阶段肾小体中表达的变化特征及其可能的生物学意义.方法采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL染色法)及bcl-2和bax蛋白免疫组织化学方法,对发育不同阶段小鼠肾小体的细胞凋亡及Bcl-2和Bax基因蛋白表达进行观察.结果在小鼠肾小体发育的不同阶段均有TUNEL阳性细胞的表达,凋亡阳性细胞多出现在Ⅲ、Ⅳ期肾小体内,而此时bcl-2/bax比值明显降低.结论细胞凋亡高峰主要出现在Ⅲ、Ⅳ期肾小体,bcl-2/bax比值的降低可能是这一现象发生的重要机制之一.
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纤维连接蛋白与TGF-βⅡ型受体在小鼠肾小体发育中的表达
目的 观察纤维连接蛋白(Fn)及转化生长因子βⅡ型受体(TGF-βⅡ)在小鼠肾小体发育中的时空性表达.方法 采用免疫组织化学技术结合体视学方法测定不同胚龄(E,12、14、16和18d)及生后日龄(P,1、3、7、14、21、28和42d)小鼠肾小体Fn和僻TBF-βⅡ的表达及其含量变化.结果 Fn在除逗号小体以外的各期肾小体基底膜处均有表达,TGF-βRⅡ在各期肾小体内均有表达,且两者的表达量均随着肾小体的发育逐渐增加.结论 Fh和TGF-βRⅡ在小鼠肾小体发育中的表达具有一定的时空性,推测两者在小鼠肾小体发育中起一定作用.
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认识肾脏
肾的形态肾脏为成对的扁豆状器官,位于腹膜后脊柱两旁浅窝中.长10～12厘米、宽5～6厘米、厚3～4厘米、重120～150克;左肾较右肾稍大.每个肾脏由100多万个肾单位组成.每个肾单位包括肾小球、肾小囊和肾小管3个部分,肾小球和肾小囊组成肾小体.肾脏内部的结构,又可分为肾实质和肾盂两部分.
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Caspase-3 mRNA在发育中小鼠肾小体的表达
目的 探讨Caspase-3 mRNA在小鼠肾小体发育中表达的变化特征及其可能的生物学意义.方法 选取胚龄14d、16d、18d胎鼠和出生后1d、3d、7d的仔鼠肾组织,采用原位杂交技术及体视学分析方法对Caspase-3 mRNA在不同发育阶段肾小体中的表达进行定性及定量观察.结果 Caspase-3 mRNA在小鼠肾小体发育的不同阶段都有阳性表达.在Ⅰ期和Ⅱ期肾小体的表达较低,进入Ⅲ期肾小体时,其表达达高峰,Ⅳ期肾小体中的表达稍有下降,Ⅴ期肾小体中的表达显著降低,其体积密度分别为12.35±3.78(%)、15.63±4.05(%)、43.28±6.09(%)、33.45±5.32(%)和10.28±2.56(%).结论 Caspase-3 mRNA在小鼠不同发育阶段肾小体内的表达不同,它对肾小体的正常发育可能有重要意义.
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紧密连接蛋白Claudin与肾脏
Claudin属于紧密连接蛋白家族,哺乳动物细胞的claudin有24个蛋白亚型,具有四个跨膜区,分别为细胞内的-NH2末端和-COOH末端,以及细胞外的初级大环和次级小环.Claudin广泛分布于肾脏的多种组织结构,如肾小管、血管、肾小体等.不同亚型在不同的肾单位节段表达,同一肾单位节段表达不同亚型.此外,claudin-16和-19基因突变与高尿钙和低血镁性肾钙质沉着病(FHHNC)的发生有密切联系,而多囊肾的发生可能与claudin-7基因突变有关.
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大鼠和小鼠胚胎后肾移植的形态学研究
目的 观察不同胚龄的大鼠和小鼠的后肾植入同种异体远交系成年宿主体内后的生长变化,探讨胚胎后肾移植的佳胚龄及血管起源.方法 应用光、电镜及免疫组织化学技术观察不同胚龄的后肾移植后,肾脏各部的发育情况及后肾内CD31+ 阳性细胞的分布.结果 离体后肾移植10天后成熟的肾小体形成,胚龄16天的大鼠和胚龄13天的小鼠后肾移植10天后,排斥反应轻微;胚龄20天的大鼠后肾和胚龄14、16天的小鼠后肾移植10天后,出现明显排斥反应,且随着胚龄的增长排斥反应逐渐加重.CD31+ 阳性细胞分布在肾小体毛细血管内皮及部分皮质中的间质细胞.结论 胚龄16天的大鼠和胚龄13天的小鼠后肾中均无成熟肾小体出现,是移植的佳时间;后肾移植物内的毛细血管袢是由移植物的间质细胞分化而来的.
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小鼠不同发育阶段肾小体细胞增殖的实验研究
目的 研究小鼠不同发育阶段肾小体细胞增殖的规律并探讨其作用.方法 选择不同胚龄和生后日龄小鼠肾脏做常规光、电镜标本,并采用免疫组织化学方法测定不同发育阶段肾小体内PCNA阳性细胞表达率.结果 PCNA免疫组织化学染色显示在Ⅰ和Ⅱ期肾小体内几乎所有细胞呈PCNA强阳性反应,Ⅲ、Ⅳ期肾小体内PCNA阳性细胞数逐渐减少,在Ⅴ期肾小体内PCNA阳性细胞少见.电镜观察所见:早期肾小体(Ⅰ、Ⅱ)所有细胞核分裂相机率均高,Ⅲ期肾小体中的内皮细胞、足细胞核分裂相机率高,Ⅳ期肾小体中只见到内皮细胞核分裂相.结论 研究结果说明细胞增殖在小鼠肾小体发育、形成中有着重要的作用.
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小鼠不同发育阶段肾小体细胞凋亡的实验研究
目的研究小鼠不同发育阶段肾小体细胞凋亡的规律并探讨其作用.方法选择不同胚龄和出生后小鼠肾脏做常规光镜标本,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记法进行末端标记.结果 TUNEL阳性细胞主要在Ⅲ、Ⅳ期肾小体内表达,而Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ期肾小体TUNEL阳性细胞少见.结论细胞凋亡在小鼠不同发育阶段肾小体内均有不同程度的表达.细胞凋亡在肾小体发育、形成中有着重要的作用.
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大鼠胚胎后肾移植的形态学研究
目的 观察不同胚龄的大鼠后肾植入同种异体远交系成年宿主体内后的生长变化,探讨大鼠胚胎后肾移植的胚龄选择及血管起源.方法 采用光、电镜技术观察胚龄16、20天的大鼠后肾植入同种异体远交系成年宿主体内后肾脏各部的发育情况;应用免疫组织化学的方法观察胚龄20天大鼠后肾内CD31+细胞的分布.结果 离体后肾移植后可以生长和分化,产生成熟的肾小体;后肾移植后排斥反应强弱与胚龄有关;胚龄20天大鼠后肾内CD31+细胞分布在肾小球毛细血管内皮及部分皮质中的间质细胞.结论 供体后肾肾小体出现之前是移植的佳时间;后肾移植物内的毛细血管袢是由其自身的间质细胞分化而来的.
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不同发育阶段小鼠肾小体细胞增殖与凋亡的关系研究
目的研究小鼠肾小体发育过程中细胞增殖与凋亡的变化关系,探讨两者之间的关系及在肾小体发育中的作用.方法采用免疫组织化学方法检测和末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL染色法)对发育不同阶段肾小体的细胞增殖和凋亡进行观察.结果肾小体发育早期(Ⅰ、Ⅱ),细胞增殖阳性率明显高于细胞凋亡.肾小体发育中期(Ⅲ、Ⅳ),细胞增殖和细胞凋亡两种行态相伴行.肾小体发育晚期(Ⅴ),细胞增殖和凋亡活动均较弱.结论细胞增殖与凋亡行态在小鼠肾小体发育的整个过程中普遍存在,细胞增殖和细胞凋亡的这种动态平衡关系保证了小鼠肾小体的正常发育成熟.
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小鼠肾脏肾小体发育中的细胞凋亡
目的研究小鼠肾脏肾小体发育中的细胞凋亡.方法不同胚龄和出生后小鼠肾脏做常规光镜标本,然后进行TUNE染色.结果在胚龄14天肾小体发生时就出现细胞凋亡,以后细胞凋亡指数迅速增高,在胚龄18天左右达到高峰,随后缓慢下降.结论小鼠肾脏肾小体发育的整个发育过程均存在细胞凋亡现象,细胞凋亡高峰在胚龄18天左右.
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α-平滑肌肌动蛋白在小鼠肾小体胚胎发育中的表达
目的了解α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在小鼠肾小体胚胎发育过程中的表达规律及α-SMA与肾小体发育成熟的关系.方法采用免疫组织化学方法测定不同胚龄小鼠肾小体的α-SMA的表达.结果α-SMA在小鼠肾小体胚胎发育过程中经历了早期肾小体无表达,近成熟肾小体系膜区强阳性表达,成熟肾小体的阴性表达.结论α-SMA在小鼠肾小体胚胎发育中的表达具有一定的时空顺序,肾小体内α-SMA的表达是短暂的发育现象,与肾小体系膜的发育成熟密切相关.
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层粘连蛋白在小鼠肾小体胚胎发育中的表达
目的了解层粘连蛋白(LN)在小鼠肾小体胚胎发育过程中的表达规律及层粘连蛋白与肾小体成熟的关系.方法用免疫组化链霉菌素亲和生物素--过氧化物酶连接法(SP)测定不同胚龄的胚胎肾小体层粘连蛋白的表达.结果在肾小体发育过程中层粘连蛋白表达于输尿管芽细胞周围和肾小体基膜,其表达随着胚龄增加和肾小体成熟而增加.结论层粘连蛋白在肾小体的表达存在着时空顺序,遵循一个离心方式,推测它可能对肾小体的发生、成熟起重要作用.
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肾小体的发生和发育
肾小体(renal corpuscle)似球形,故又称肾小球,由血管球和肾小囊组成.肾小体有两个极,微动脉出入的一端称血管极(vascular pole),与近端小管相连接的一端称尿极(urinary pole).血管球是入球微动脉与出球微动脉之间蟠曲成球的毛细血管袢.血管极处有少量结缔组织细胞,随血管进入血管球,分布于毛细血管袢之间,构成血管系膜(mesangium),血管系膜又叫球内系膜,由系膜细胞和系膜基质组成.肾小囊(Bowman capsule)有壁、脏两层,脏层上皮细胞又称足细胞,足细胞与毛细血管内皮细胞之间或足细胞突起与血管系膜之间存有较厚而完整的基膜.肾小体的功能是超微滤过.滤过屏障由毛细血管内皮、血管球基膜以及足细胞的裂孔膜构成.
