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粗叶悬钩子总生物碱抑制肝细胞凋亡的超微结构与TUNEL染色观察
目的:研究粗叶悬钩子总生物碱对肝细胞凋亡及肝细胞超微结构的影响.方法:60只大鼠随机分为正常组、模型组、粗叶悬钩子总生物碱处理组和阳性药对照组.采用CCl4腹腔内注射建立肝损伤大鼠模型.应用TUNEL检测各组肝组织的凋亡指数,电镜观察肝细胞超微结构.结果:粗叶悬钩子总生物碱处理组与阳性药对照组的大鼠肝细胞超微结构损伤程度、肝组织中凋亡指数,均分别较模型组显著减轻与下降.结论:粗叶恳钩子总生物碱能明显减轻肝细胞超微结构损伤,抑制肝组织中细胞凋亡.
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急性暴露尼古丁对未成年大鼠脑内神经元Caspase-3表达及凋亡的影响
目的 研究急性暴露尼古丁(nicotine)对未成年大鼠脑内神经细胞凋亡的影响.方法 用免疫组织化学法和Western blotting法检测急性暴露尼古丁的未成年模型大鼠脑内Caspase-3的表达;用原位末端标记法(TUNEL法)检测凋亡细胞.结果 免疫组织化学法检测到大脑皮层、海马齿状回、CA2区和CA3区的Caspase-3表达在实验组明显增高.蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测到大脑皮层和海马Caspase-3原型及活性片段的表达在实验组明显增高.TUNEL法检测到大脑皮层和海马齿状回的阳性细胞在实验组明显增多.结论 急性暴露尼古丁激活未成年大鼠脑内大脑皮层和海马内神经细胞Caspase-3,促进大脑皮层和海马齿状回的神经元凋亡.
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发育期小鼠肾小体细细胞增殖与凋亡的研究
目的研究小鼠肾小体发育过程中细胞增殖与凋亡的变化规律.方法采用PCNA免疫组织化学方法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL染色法)和光、电镜技术,对发育不同阶段肾小体的细胞增殖和凋亡进行观察.结果 PCNA免疫组织化学染色显示:在Ⅰ和Ⅱ期肾小体内几乎所有细胞PCNA呈强阳性反应,Ⅲ、Ⅳ期肾小体PCNA阳性细胞数逐渐减少,Ⅴ期肾小体PCNA阳性细胞少见.TUNEL阳性细胞多出现在出生前,主要在Ⅲ、Ⅳ期肾小体表达.电镜观察:早期肾小体所有细胞核分裂象机率均高,Ⅲ期肾小体中的内皮细胞、足细胞核分裂象机率高,Ⅳ期肾小体中只见到内皮细胞核分裂象,Ⅴ期细胞核分裂象少见.电镜下所见的细胞凋亡多在Ⅲ、Ⅳ期肾小体,其中以内皮细胞、肾小囊壁层细胞凋亡居多.结论细胞增殖与凋亡行为在小鼠肾小体发育的整个过程中普遍存在,协同参与了调控肾小体正常发育过程.
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四氯化碳诱导大鼠肾细胞凋亡的研究
目的 观察四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肾形态结构和肾细胞凋亡的变化.方法将健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组、2周CCl4组和6周CCl4组,每组5只.对照组背部皮下注射橄榄油(0.12 ml/100 g鼠重),CCl4组以0.3 ml/100 g鼠重背部皮下注射60%CCl4橄榄油.2周CCl4组和6周CCl4组大鼠分别于实验的第3周和7周的第1 d处死.肾石蜡切片苏木精-伊红染色,光镜观察肾组织形态学,免疫组织化学显示Caspase-3、Bax、TUNEL观察肾细胞凋亡.结果 对照组肾小球和肾小管结构均正常.2周和6周CCl4组的肾小球结构正常,2周CCl4组病变较轻、6周CCl4组肾皮质近端小管管腔狭小,上皮细胞浊肿,空泡变性,微绒毛脱失.对照组和2周CCl4组Caspase-3、Bax免疫组织化学显色未见阳性细胞表达;而6周CCl4组则在近髓质处的皮质内,近端小管上皮细胞的胞质呈现棕黄色阳性反应.TUNEL显色2周CCl4组可见肾皮质内近端小管上皮细胞核和少量的肾小球细胞核呈阳性表达,而6周CCl4组在大量的远曲小管及少量近端小管的上皮细胞核呈阳性表达.结论 CCl4诱导性肾损伤大鼠,2周时肾组织的近端小管上皮及少量肾小球毛细血管内皮细胞发生凋亡,而损伤6周时,肾皮质近端小管受损,上皮细胞变性;远曲小管上皮细胞发生凋亡.
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金黄色葡萄球菌及其L型诱导血管内皮细胞凋亡的研究
金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)是临床上常见的主要致病菌之一,金葡菌感染可以诱发宿主细胞凋亡.我们用原位末端标记法(TUNEL)、流式细胞术检测金葡菌及其L型诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡情况.
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人微小病毒B19感染引致骨髓造血细胞凋亡的研究
近年来,在血液系统疾病中检出人微小病毒B19(HPVB19)的报道日益增多,已有报道,血小板减少性紫癜、再生障碍性贫血(再障)、病毒相关性噬血细胞综合征和免疫损害或缺陷者的慢性贫血等多种血液系统疾病的发生可能与HPVB19感染有关.这至少提示骨髓中三系前体细胞均可成为HPVB19感染的靶细胞,而且HPVB19感染导致骨髓造血细胞破坏的机理尚不完全清楚.本研究采用原位末端标记法对13例再障患儿骨髓细胞学涂片进行了凋亡细胞观察,并用免疫组化方法检测了骨髓细胞涂片中Bcl-2、Bax及Fas的表达情况,以探讨凋亡在HPVB19感染致病机理中的作用.
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大鼠酒精性肝病细胞凋亡与细胞色素P4502E1和氧化应激的关系
目的:观察大鼠酒精性肝病组织病理形态学改变,探讨细胞凋亡与细胞色素P4502E1的表达以及和氧化应激的关系.方法:用酒精灌胃法制备酒精性肝病大鼠模型,模型组给予酒精8 g/kg,每天分2次灌胃连续8 wk,对照组给予等量的生理盐水灌胃.实验8 wk末,观察肝组织的病理形态学改变,用原位末端标记法(TUNEL)检测肝细胞凋亡,用免疫组化法检测肝组织中Caspase-3蛋白表达,用全自动生化仪检测ALT和AST的含量,用PCR法测定肝细胞色素P4502E1的基因表达,分别用硫代巴比妥酸法(TBA法)和黄嘌呤氧化酶法测定肝组织丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力.结果:模型组凋亡的肝细胞明显增多,主要分布在中央静脉周围、点状和灶状坏死区;Caspase-3主要分布于中央静脉及肝细胞坏死灶周围细胞的胞质中.模型组肝细胞凋亡指数(AI)和Caspase-3蛋白表达强度明显高于对照组(AI:6.2%±1.7% vs 1.7%±0.8%;Caspase-3:66.7% vs 9.5%,P<0.05,P<0.01).CYP2E1表达:对照组c1基因频率为91.6%,c2基因频率为8.4%;模型组c1基因频率为53.4%,c2基因频率为46.6%,均有显著性差异(P<0.05).长期酒精摄入大鼠血清MDA含量增加(41.53±7.43 μmol/L vs 15.72±2.06 μmol/L,P<0.05),SOD活力下降(353.12±61.02 kU/L vs 636.82±138.60 kU/L,P<0.05),与酒精性肝病肝细胞凋亡程度有相关性(r=0.644,r=-0.511).结论:长期酒精摄入可引起大鼠酒精性肝病及及肝功能损伤,肝细胞凋亡明显增加.CYP2E1基因PstⅠ及RsaⅠ RFLPs与酒精性肝病有关,其中c2基因可能与大鼠酒精性肝病的发生有关.MDA含量和SOD活力在酒精性肝病的肝细胞凋亡过程及脂质过氧化反应中发挥重要作用.
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三氧化二砷对鸡胚移植胆管癌生长的抑制作用
目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对鸡胚移植胆管癌生长的抑制作用及其机制.方法:建立胆管癌QBC939细胞株鸡胚移植模型,接种癌细胞后9d切取标本,比较As2O3作用组和对照组中瘤生长、血管生成情况,原位末端标记法检测肿瘤组织细胞凋亡,免疫组化检测核增生抗原(PCNA)与血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果:AS2O3作用组肿瘤生长和血管生成受到抑制,细胞凋亡增多、PCNA和VEGF表达减弱.结论:As2O3有抗胆管癌的作用.其机制与诱导细胞凋亡,抑制癌细胞增生、癌组织VEGF表达以及肿瘤血管生成有关.
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三氧化二砷抑制肝癌细胞端粒酶表达及诱导细胞凋亡作用
目的:观察三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株细胞端粒酶表达和细胞生长抑制的影响及诱导细胞凋亡的作用,探讨三氧化二砷的抗肿瘤作用及机制.方法:采用噻唑蓝比色分析法(MTT法),流式细胞分析,原位杂交方法以及TUNEL原位末端标记法观察和检测了不同浓度的三氧化二砷对人肝癌细胞株(SMMC-7721)细胞的增生,细胞DNA含量的分布,细胞端粒酶表达的影响及细胞凋亡的诱导作用.结果:20,5,5 μmol/L三氧化二砷在24,48,72 h时抑制率分别为22.0%,25.7%,32.0%,均能明显抑制人肝癌细胞株细胞的增生(单侧置信区间为10.1,23.7,18.0,P<0.05).流式细胞分析显示加药组G0/G1期细胞比例减少,S期细胞所占比例增高.随着药物浓度的增加细胞端粒酶的表达下降,而凋亡细胞数增加.结论:三氧化二砷能抑制人肝癌细胞增生,其抑制作用具有时间-计量效应关系,并能抑制肝癌细胞端粒酶的表达及诱导肝癌细胞凋亡.
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异源二聚体硫酸化糖蛋白在白血病细胞中的表达及作用机制的研究
异源二聚体硫酸化糖蛋白(clusterin)广泛存在于人体组织细胞胞浆中,在很多器官组织中都有表达.研究表明它是一种具有细胞保护作用的蛋白质,并在前列腺癌中发现它有抗细胞凋亡作用[1,2].本研究首先应用地塞米松稳定诱导白血病CEM细胞凋亡,采用末端脱氧核苷酸转移酶(TDT)介导的脱氧核苷酸原位末端标记法(TUNEL)和流式细胞技术检测clusteri n在白血病中的抗凋亡作用.
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垂直振动对大鼠腰椎小关节退变及骨密度影响的实验研究
目的 观察大鼠腰椎小关节突在不同振动频率下关节软骨退变程度及腰痛相关因子的表达情况,同时探究振动对骨密度的影响.方法 收集对照组和振动组(振动组接受15 min/d,频率5~60 Hz、振幅3 mm的垂直振动12 w)大鼠腰椎小关节软骨,采用HE染色和AB-PAS染色,进行Mankin评分评价软骨退变程度;免疫组化染色观察凋亡软骨细胞、COX-2、PGE2、CⅡ在小关节突软骨表达;双能X线吸收法测量振动前后股骨颈骨密度.结果 对照组、5 Hz振动组、20 Hz振动组、60 Hz振动组小关节Mankin评分依次增加,有显著性差异(P<0.05);组间凋亡软骨细胞、COX-2、PGE2表达随着振动频率增加而显著性增强(P<0.05);对照组与5Hz振动组CⅡ表达差异不明显(P>0.05),其余各组间CⅡ表达差异明显(P<0.05);组间骨密度增加值无显著性差异.结论 长时间垂直振动可导致软骨退变,振动频率越大,小关节退变越重;振动与致痛因子表达具有相关性;5~60 Hz、3 mm振幅振动不能促进幼龄大鼠BMD增加.
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丹参对窒息脑损伤的神经元保护作用
大量研究已证明,在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)中凋亡是迟发性神经元死亡的主要机制,通过一些措施(如药物)可使神经细胞凋亡过程减弱或停止,从而减少神经元的损伤和丢失,降低后遗症的发生率.本实验使用流式细胞仪和原位末端标记法测定正常7日龄大鼠在细胞凋亡高峰期,即缺氧缺血后48 h[1]以及给予丹参干预后的脑细胞凋亡率,以观察丹参的治疗效果.
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NGF对AChRAb脑内注射所致中枢神经损害的保护作用
目的探讨神经生长因子(NGF)对乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)脑内注射所致重症肌无力(MG)大鼠中枢神经系统(CNS)损害神经细胞凋亡的影响.方法分别从MG患者和健康者血中提取IgG,注入大鼠脑室系统.以原位末端标记法(TUNEL)检测脑细胞凋亡情况及动态变化.另一组在注入AChRAb后予以NGF并观察结果.结果 MG组脑阳性细胞于注AChRAb后第2周出现,脑内多部位均有凋亡细胞且逐渐增多,以皮层和海马区较明显.NGF组凋亡细胞数少于MG组(P<0.05).结论脑室注入MG患者AChRAb可引起大鼠CNS功能障碍,神经细胞发生凋亡,细胞凋亡在MG 脑损害中可能起重要作用.NGF能减轻凋亡程度,补充NGF可能有助于防治MG CNS损害.
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VM方案术前诱导化疗对口腔鳞癌细胞凋亡和增殖的影响
本研究采用原位末端标记法(in suit end-labeling,ISEL)和免疫组织化学技术,检测24例口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)经VM(长春新碱、甲氨蝶呤二药)方案化疗前后的细胞凋亡(apoptosis,APO)和细胞核增殖抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的变化,并结合疗效分析化疗抗癌机制.
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低剂量辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应
目的研究低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应.方法应用原位末端标记(TUNEL)和常规HE染色法分别结合光镜定量地观察75 mGy X射线照射诱导小鼠睾丸生精细胞在生精周期中凋亡的适应性反应.结果当1.0、2.0或3.0 Gy(攻击剂量,D2)X射线照射前6 h给予75 mGy(诱导剂量,D1)预照射时明显减轻D2对睾丸精原细胞和精母细胞的凋亡损伤作用,而对精子细胞影响不明显.当1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 Gy(D2)X射线照射前3、6、12、24 h给予75 mGy (D1)预照射时,发现当D2剂量较小(1.0、1.5、2.0 Gy)时,精原细胞和精母细胞的凋亡百分率减少出现较早、较明显,而且持续时间较长;反之,当D2剂量较大(2.5和3.0 Gy)时,精原细胞和精母细胞的凋亡百分率减少只在照后6 h出现,而且不显著.结论低剂量电离辐射可以诱导精原细胞和精母细胞凋亡的适应性反应,并与D1和D2间隔时间及D2剂量有关.
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胸腺瘤良恶性鉴别和预后指标研究
本项目采用免疫组化、原位末端标记法和组织病理学方法,结合大量的随访资料,对胸腺瘤EMA表达、细胞增生和凋亡及其相关基因Fas、bcl-2和p53的表达进行了深入的研究,探索胸腺瘤良恶性鉴别诊断的标志和预后指标.
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卵巢浆液性肿瘤细胞凋亡的观察
细胞凋亡(apoptosis)与肿瘤等多种疾病的发生与发展有关,为了探讨卵巢浆液性肿瘤细胞的凋亡,我们采用原位末端标记法(TUNEL),对其进行原位标记观察,探讨卵巢浆液性肿瘤细胞凋亡的状况.
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上颌窦癌术前放疗bcl-2、Bax基因表达与细胞凋亡及其临床意义
上颌窦癌是一种恶性度比较高的头颈部肿瘤,单纯手术或放疗患者的5年生存率均很低,仅达16%.近年来临床采用术前放疗联合手术的治疗方法,提高患者5年生存率至45%左右.对肿瘤发生机制的认识不仅涉及肿瘤细胞的失控性增殖,而且与细胞凋亡的调节失衡有关.有资料表明:细胞分裂和细胞死亡的相对比率可以决定癌生长的速度[1].bcl-2是参与细胞凋亡的主要抑制基因,Bax是bcl-2蛋白的拮抗因子,我们用免疫组织化学方法观察bcl-2、Bax表达的情况,并用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况,旨在从细胞凋亡的角度对上颌窦癌的术前放疗机制进行探讨.
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吸烟对牙龈上皮棘层细胞凋亡影响研究
目的 探讨吸烟对牙龈上皮棘层细胞凋亡的影响及可能的机制.方法 本研究于2004年12月至2010年12月在济南市口腔医院和山东大学口腔医院进行.选取52例具有不同吸烟史、无严重系统疾病且行牙冠延长术或智齿拔除术的患者,根据吸烟史、日平均吸烟支数和总吸烟支数将患者分为轻度吸烟组(吸烟史<5年或日平均吸烟≥2~10支,且总吸烟支数约1.5万支以下)21例、重度吸烟组(吸烟史≥5年或日平均吸烟≥10支,且总吸烟支数约1.5万支以上)31例.另取无吸烟史的10例患者作为对照组.采用原位末端标记(TdT-mediateddUTP nick end labeling,TUNEL)法检测各组患者牙龈上皮棘层细胞的凋亡情况;Student-Newman-Keuls(SNK)法计算各吸烟组与对照组及各吸烟组之间的差异,取α =0.05水准;PV免疫组化法对凋亡抑制基因Bcl-2的表达进行组织定位.结果 各吸烟组患者牙龈上皮棘层细胞凋亡阳性的表达与对照组患者间差异均有统计学意义(P< 0.01);轻度吸烟组和重度吸烟组患者间差异也有统计学意义(P<0.01).Bcl-2在吸烟者牙龈上皮的基底层和棘层表达较对照组减弱.结论 吸烟可能通过降低促Bcl-2的表达,促进牙龈上皮棘层细胞凋亡的发生,干扰牙龈上皮的正常代谢.
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小鼠肾发育中乳头区细胞凋亡的形态学研究
目的 观察小鼠肾发育中乳头区细胞凋亡的变化规律.方法 采用原位末端标记法(TUNEL染色法),并结合透射电子显微镜技术,对小鼠不同发育阶段中肾乳头区细胞凋亡的形态学变化进行系统观察.结果 在肾发育的早期,乳头区发生了大量的细胞凋亡;P 7 d时近肾门侧的凋亡细胞减少;P 14 d时,肾乳头区凋亡细胞少见.电镜下凋亡细胞核染色质固缩边聚呈粗块状,有时呈月牙型,细胞质固缩而电子密度增加.细胞凋亡所形成的凋亡小体,为一整个的细胞核和少量固缩细胞质,核的染色质固缩边聚.结论 发育早期肾乳头区主要通过细胞凋亡来完成形态的转变,随后凋亡活动减弱,到P 14 d时肾乳头发育成熟.