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姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠海马CA1区AKT及p-AKT表达的影响
目的:观察姜黄素对AD模型APP/PS1双转基因小鼠丝/苏氨酸激酶(serine-threonine kinase,AKT,又称PKB)和磷酸化的丝/苏氨酸激酶(phosphorylated serine-threonine kinase,即p-AKT)表达的影响.方法:将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为5组,分别为模型组、罗格列酮组(10 mg·kg-1·d-1)、姜黄素高、中、低剂量组(400,200,100 mg·kg-1·d-1),选取同月龄同背景的非转基因小鼠为对照组.连续灌胃3个月后,应用免疫组织化学和Western blot方法检测小鼠海马CA1区中AKT和p-AKT的蛋白表达.结果:免疫组化染色,模型组小鼠大脑海马CA1区AKT和p-AKT阳性细胞均较对照组明显减少(P ＜0.05,P＜0.01),与模型组相比,罗格列酮组与姜黄素高、中剂量组AKT和p-AKT阳性细胞均有明显恢复(P＜0.05,P＜0.01),其中姜黄素中剂量组p-AKT阳性细胞数增加为显著(P＜0.01).Western blot检测结果与免疫组化结果基本一致.结论:姜黄素可以使AD模型APP/PS1双转基因小鼠海马CA1区中减少的AKT和p-AKT细胞有所恢复,提示姜黄素可能通过调节AKT及其磷酸化过程,从而进一步调节PI3 K/AKT途径的胰岛素信号转导通路发挥抗AD作用.
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鞘氨醇激酶1促进SW480细胞迁移机制探讨
目的 鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1,SK1)具有调控细胞迁移的重要作用,丝/苏氨酸激酶(serine/threonine kinase,AKT)参与其调控过程.本研究旨在探讨SK1对结肠癌细胞株SW480迁移和侵袭的影响及与AKT信号通路的关系.方法 以不同浓度12-豆蔻酸-13-乙酸佛波醇(phorbol 12-myristate-13-acetate,PMA)干预SW480细胞,观察细胞SK1、p-AKT基因和蛋白表达水平变化情况.采用Ttranswell法观察PMA和AKT抑制剂对SW480细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 CCK8实验显示,25、50、100 nmol/L PMA刺激的SW480细胞培养液吸光度(A)值分别为0.780±0.030、0.844±0.057和0.998±0.045,与空白对照组(A值0.631±0.051)比较均明显增加,F=93.48,P＜0.001;PMA可诱导细胞内SK1基因和蛋白表达水平明显增高;Transwell实验结果显示,100 nmol/L PMA增强SW480细胞迁移和侵袭(分别为169.8±10.82和89.6±8.44),较对照组(分别为63.6±8.67和39.6±6.12)明显增加,而AKT抑制剂AKTi1/2可减少PMA诱导的迁移和侵袭SW480细胞数量(分别为91.8±9.36和57.2±8.98);PMA增强SW480细胞SK1表达同时促进AKT蛋白磷酸化水平,而AKTi1/2可拮抗PMA的作用.结论 SK1可促进SW480细胞的迁移和侵袭能力,其机制与上调AKT信号通路有关.
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激酶和核转录因子抑制剂治疗过敏性哮喘研究进展
目前全球大约有3亿人患哮喘,其中多数患者通过吸入免疫抑制剂(如糖皮质激素)和β-肾上腺素受体激动剂治疗哮喘,获得良好的效果.然而大约5％～10％的哮喘患者却对这种治疗反应效果较差.以信号通路中关键性激酶和核转录因子作为靶点治疗过敏性哮喘,多年来一直受到国内外学者的关注.本文就近年来激酶和核转录因子抑制剂治疗哮喘的进展进行综述.
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TrkA对小鼠过敏性气道反应肺组织Akt/PKB的调节作用
目的 探讨神经生长因子( NCF)受体酪氨酸激酶(TrkA)是否调控丝/苏氨酸激酶(Akt/PKB)磷酸化表达来参与小鼠肺组织过敏性免疫炎性变化.方法 制备卵清蛋白( OVA)致敏的BALB/c小鼠过敏性免疫炎症模型,应用HE肺组织病理染色确定模型成功,采用免疫组织化学、免疫荧光和定量RT-PCR等方法,观察给予TrkA抗体后小鼠肺组织磷酸化Akt( p-Akt)表达变化.结果 p-Akt在过敏性免疫炎症模型小鼠肺组织中表达水平高于正常对照组,TrkA阻断后p-Akt在小鼠肺组织中表达水平明显低于过敏性免疫炎症模型小鼠(P＜0.05).结论 TrkA受体参与NGF介导Akt/PKB传导的小鼠肺部过敏性免疫炎症反应.
关键词： 酪氨酸激酶受体A 丝/苏氨酸激酶 气道过敏性免疫炎症反应 小鼠 -
Pim-1在原发性肝细胞癌组织中的表达情况及其临床意义
目的 明确Pim-1在原发性肝细胞癌( PHC)组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学染色(IHC)方法检测122例PHC、相应的癌旁及85例正常肝组织中Pim-1蛋白的表达情况.回顾性分析Pim-1蛋白表达水平与临床病理指标的关系. Kaplan-Meier法计算不同Pim-1表达水平对PHC患者生存情况的影响.采用Cox比例风险回归模型分析影响PHC患者生存期的危险因素.结果 Pim-1蛋白在PHC组织中的总阳性率为88. 5% ,显著高于癌旁组织(73. 0% )和正常肝组织(69. 4% )(P<0. 05).单因素分析表明,Pim-1蛋白高表达患者的术前肝功能较差、肿瘤数目较多、肿瘤直径较大、淋巴结转移发生率较高且TNM分期较高(P<0. 05).生存分析提示与Pim-1高表达组患者相比,低表达组患者的生存期延长(P<0. 05).多因素分析表明,高表达 Pim-1 蛋白是影响 PHC患者生存时间的独立危险因素(P<0. 001).结论 Pim-1在PHC组织中的表达水平显著升高,与PHC的临床进展和患者生存时间有一定的关联性,其过表达提示PHC患者的预后较差.
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小分子激酶抑制剂在肝纤维化治疗中的应用
激酶活性异常或过度表达与包括肝纤维化在内的多种疾病的发生密切相关,已成为治疗这些疾病的重要药物靶点.蛋白激酶中的酪氨酸激酶和丝/苏氨酸以及脂类激酶中的磷脂酰肌醇-3激酶等能够通过调节肝星状细胞的活性及肝内血管生成等直接或间接机制参与肝纤维化的发生和发展.近期研究表明,小分子激酶抑制剂能够通过靶向激酶抑制细胞增殖以及血管生成从而发挥抗肝纤维化作用,有望为肝纤维化治疗提供一种新的治疗手段.本文对酪氨酸激酶、丝/苏氨酸激酶和磷脂酰肌醇-3激酶在肝纤维化中的作用和其参与调节肝纤维化发生发展的细胞信号通路,以及小分子激酶抑制剂在肝纤维化临床前动物模型和临床试验中的新研究进展进行综述,为肝纤维化的治疗研究提供新的策略.
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棉酚通过Akt/β-catenin通路抑制胃癌细胞迁移
目的：探讨棉酚( gossypol)对胃癌细胞迁移能力的影响,并探讨相关机制。方法胃癌细胞经不同浓度棉酚处理后,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell 小室实验检测细胞迁移能力, Western blot 法检测丝/苏氨酸激酶/β-链蛋白( Akt/β-catenin)信号通路活性及相关蛋白细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白( vimentin)的蛋白表达水平。结果MTT实验显示,棉酚对胃癌细胞具有增殖抑制作用,且随浓度增加而增大；Transwell小室实验显示棉酚对胃癌细胞迁移能力具有抑制作用；棉酚对胃癌细胞迁移能力的抑制率高于增殖抑制率；与对照组相比,棉酚可明显下调胃癌细胞的p-Akt、β-catenin、cyclin D1、MMP-2和vimentin蛋白表达水平,明显上调E-cadherin蛋白表达水平。结论棉酚通过下调Akt/β-catenin通路活性抑制胃癌细胞迁移。
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Pim-3慢病毒质粒构建及其表达鉴定
目的 构建Pim-3慢病毒质粒,鉴定其在卵巢癌SKOV3细胞中基因及蛋白水平的表达.方法 RT-PCR法提取Pim-3 cDNA,经T-A克隆及双酶切将其与慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP重组;酶切鉴定及基因测序后,将阳性重组质粒导入病毒包装细胞293T中;收集病毒上清液转染SKOV3细胞,荧光显微镜下观察转染情况,应用RT-PCR及Western blot法分别检测Pim-3 mRNA及其蛋白.结果 RT-PCR法获得Pim-3基因,重组质粒酶切后片段大小及基因测序结果显示pCDH/Pim-3重组质粒构建成功.将感染重组质粒及空载体的293T细胞生产的病毒上清分别感染SKOV3细胞,感染重组质粒的SKOV3细胞中Pim-3 mRNA及蛋白表达水平均高于空载体细胞.结论 成功构建了pCDH/Pim-3重组慢病毒质粒,建立了Pim-3高表达SKOV3瞬转细胞模型,为探讨Pim-3在卵巢癌发生、发展中的作用及机制奠定实验基础.
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沉默CIT基因可抑制前列腺癌细胞的增殖和转移
目的 探究Citron Rho-interacting serine/threonine kinase(CIT)基因在前列腺癌中的表达特点,并探讨CIT基因对PC-3细胞增殖、迁移和侵袭能力的调控作用及其可能的分子机制.方法 利用TCGA和MSKCC数据库分析CIT在前列腺癌组织的表达水平和临床相关性.采用siRNA干扰CIT的表达,采用CCK-8、划痕实验和Transwell实验检测CIT对前列腺癌PC-3细胞系的增殖、迁移和侵袭特性的影响.采用Western blotting检测CIT对上皮-间质转化和Hippo-YAP通路的调控作用.结果 TCGA数据库分析表明,CIT在前列腺癌组织中表达显著上调(P<0.05);MSKCC数据库分析表明,CIT表达水平与N分期(P<0.05)、M分期(P<0.001)、Gleason评分(P=0.010)和PSA水平(P=0.004)成正相关关系.PC-3细胞中沉默CIT表达可显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,逆转上皮-间质转化进程,并抑制Hippo-YAP通路的激活.结论 CIT基因可能是前列腺癌的致病基因,其分子机制可能与Hippo-YAP通路的激活有关.
关键词： 丝/苏氨酸激酶 前列腺癌 转移 上皮-间质转化 Hippo-YAP通路 -
无血清条件对诱导转染pEGFP-C1/Akt的骨髓间充质干细胞凋亡的影响
目的 探讨无血清条件对诱导pEGFP-C1/Akt转染的骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡的影响. 方法实验分实验组(pEGFP-C1/Akt转染MSCs)、抑制组(pEGFP-C1/Akt转染MSCs+PI3K/Akt 特异性抑制剂)和对照组(MSCs).在无血清培养基条件下,分别在4、12、24和36 h 共4个时间点利用RT-PCR检测Akt及Caspase-3 mRNA表达,Western blot检测Akt蛋白表达,免疫组化检测Caspase-3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率. 结果在无血清培养4、12、24和36 h 后,实验组的Akt mRNA和蛋白的表达均高于抑制组及对照组(P＜0.01), Caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平和细胞凋亡率则均低于抑制组及对照组(P＜0.01); 抑制组及对照组间Akt和Caspase-3 mRNA及蛋白的表达和凋亡率的差异无统计学意义(P>0.05). 结论 Akt可能通过PI3K/Akt途径抑制其下游底物Caspase-3的表达,从而抑制无血清诱导的MSCs凋亡.
