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连夏配方颗粒对心肌梗死后大鼠心梗周围区神经生长因子mRNA、酪氨酸激酶受体A mRNA表达的影响
目的观察连夏配方颗粒对心肌梗死后大鼠心梗周围区心肌组织神经生长因子( nerve growth factor, NGF) mRNA、酪氨酸激酶受体A( tyrosine kinase receptor A,TrKA) mRNA表达的影响。方法将90只清洁级健康7周龄Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、心梗模型组、美托洛尔组、连夏配方颗粒高、中、低剂量(189．00、94．50、47．25 mg/kg)组。各组均结扎左冠状动脉前降支以复制心肌梗死大鼠模型,假手术组只穿线,不结扎。假手术与心梗模型组大鼠予生理盐水,余各组予相应实验药物；连续灌胃给药30天,采用Real-time RT-PCR方法检测心梗周围区NGF mRNA、Tr-KA mRNA表达水平。结果与假手术组比较,心梗模型组大鼠心梗周围区心肌组织NGF mRNA、TrKA mRNA表达均明显增高(P<0．01)；与模型组比较,连夏配方颗粒高、中、低剂量组大鼠心梗周围区NGF mRNA表达均明显降低(P<0．01)；连夏配方颗粒高、中剂量组大鼠心梗周围区TrKA mR-NA表达均明显降低(P<0．01)；与美托洛尔组比较,连夏配方颗粒高剂量组大鼠心梗周围区NGF mRNA表达明显降低(P<0．05)。结论连夏配方颗粒可显著降低心肌梗死后大鼠心梗周围区心肌组织NGF mRNA、TrKA mRNA的表达,达到改善心肌梗死后大鼠心梗周围区自主神经重构的作用。
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电针对骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠脊髓组织中神经生长因子和酪氨酸激酶受体A表达的影响
目的:观察电针对骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠脊髓组织内神经生长因子(NGF)及其酪氨酸激酶受体A(TrkA)表达的影响,以探讨电针治疗该病的可能机制.方法:SD雌性大鼠40只,随机抽取10只为空白组,其余造模后随机分为模型组、电针穴位组和电针对照点组,每组10只.术后第15天起按组电针大鼠“次髎”、“中极”、“三阴交”三穴,分别施以7次治疗,治疗结束后取脊髓组织行Western blot检测NGF及其受体TrkA在脊髓组织中的表达.结果:电针治疗7天后,脊髓组织中NGF及受体TrkA的表达均提高,而且针刺穴位组效果明显优于针刺对照点组.结论:电针骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠“次髎”、“中极”、“三阴交”三穴可显著提高脊髓组织中NGF及受体TrkA的表达,并可能通过提高NGF及受体TrkA的表达而达到抑制膀胱逼尿肌亢进,恢复膀胱功能活动的目的.
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黄芪注射液对视神经牵拉伤大鼠NGF、TrkA表达的影响?
目的：观察黄芪注射液对视神经牵拉伤大鼠视网膜组织神经生长因子( NGF)及酪氨酸激酶受体A( TrkA)蛋白表达的影响。方法将48只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组及黄芪治疗组，每组16只大鼠。横向定量牵拉法制作大鼠视神经损伤模型，假手术组仅暴露视神经，不予牵拉；术后黄芪治疗组给予黄芪注射液腹腔注射，模型组给予生理盐水腹腔注射；治疗14 d后取大鼠视网膜组织，采用蛋白免疫印迹法( Western blot)检测NGF和TrkA蛋白表达变化。结果与假手术组比较，视神经牵拉伤模型大鼠视网膜组织NGF、TrkA蛋白表达显著下降( P<0.05)；给药14 d后，与模型组比较，黄芪治疗组大鼠视网膜组织NGF及TrkA蛋白表达明显增加( P<0.05)。结论黄芪注射液能够上调大鼠视网膜组织NGF、TrkA 的蛋白表达，具有视神经保护作用。
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TrkA对小鼠过敏性气道反应肺组织Akt/PKB的调节作用
目的 探讨神经生长因子( NCF)受体酪氨酸激酶(TrkA)是否调控丝/苏氨酸激酶(Akt/PKB)磷酸化表达来参与小鼠肺组织过敏性免疫炎性变化.方法 制备卵清蛋白( OVA)致敏的BALB/c小鼠过敏性免疫炎症模型,应用HE肺组织病理染色确定模型成功,采用免疫组织化学、免疫荧光和定量RT-PCR等方法,观察给予TrkA抗体后小鼠肺组织磷酸化Akt( p-Akt)表达变化.结果 p-Akt在过敏性免疫炎症模型小鼠肺组织中表达水平高于正常对照组,TrkA阻断后p-Akt在小鼠肺组织中表达水平明显低于过敏性免疫炎症模型小鼠(P＜0.05).结论 TrkA受体参与NGF介导Akt/PKB传导的小鼠肺部过敏性免疫炎症反应.
关键词： 酪氨酸激酶受体A 丝/苏氨酸激酶 气道过敏性免疫炎症反应 小鼠 -
腺病毒介导的IL-24基因抑制人脑胶质瘤细胞增殖的机制研究
目的:探讨IL-24抑制人脑胶质瘤细胞增殖的可能机制.方法:用腺病毒介导的IL-24(Ad.IL-24)及腺病毒空载体感染人脑胶质瘤细胞U251,通过荧光显微镜观察腺病毒的感染效率,RT-PCR法检测IL-24的转录水平;用MTT法、流式细胞仪检测IL-24对U251细胞增殖的影响;用蛋白质印迹方法检测神经生长因子(NGF)、酪氨酸激酶受体A(tyrosine kinase A, TrkA)的表达水平,并分析其相关性.结果:Ad.IL-24及腺病毒空载体转染U251后,RT-PCR结果显示Ad.IL-24组出现高表达电泳条带,而腺病毒空载体组则未出现电泳条带;MTT结果显示Ad.IL-24明显抑制了U251细胞的增殖,且流式细胞仪细胞周期检测发现Ad.IL-24处理组较对照组G2/M期明显延长,蛋白质印迹结果显示过表达IL-24的U251细胞中NGF及TrkA表达降低.结论:IL-24可能通过减少细胞中TrkA和NGF的表达来抑制肿瘤细胞的增殖.
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NGF 对 LASIK 及 Epi- LASIK术后角膜中 TrkA受体表达作用的研究
目的观察兔眼准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）及准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术（Epi- LASIK）术后局部点用神经生长因子（NGF）后角膜组织中酪氨酸激酶受体A（TrkA）的表达情况，探索术后干眼症的防治方法。方法将30只新西兰纯种兔，抽取15只30眼接受LASIK手术，余接受Epi- LASIK手术。术后每只兔子一眼滴NGF滴眼液，为实验眼，对侧眼滴0.9%氯化钠溶液，为对照眼。1周后进行免疫组化分析，检测角膜上皮细胞层以及角膜基质层中TrkA的表达情况。结果观察TrKA的表达，接受LASIK或Epi- LASIK手术后，滴用NGF滴眼液的眼均较对照眼强。LASIK组以及Epi- LASIK组滴用NGF眼两者比较TrkA的表达无统计学差异。结论滴用NGF的兔眼，其LASIK或Epi- LASIK术后TrkA受体表达均较高，可能有助于防治近视激光术后干眼症。
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阿魏酸钠对老年大鼠学习记忆能力改善作用及机制
尔采末病(AD)是一种慢性原发、进行性脑变性病,病因复杂,发病机制尚不清楚,但有研究表明,AD患者认知功能下降与突触素(SYP)的丢失存在相关性.另有研究表明,神经生长因子(NGF)可促进海马内突触的重建来提高SYP的表达从而改善AD大鼠的学习记忆能力[1].NGF必须与其特异性高亲和力受体酪氨酸激酶受体A(TrkA)结合才能发挥作用,当TrkA受体的膜外部位点与NGF结合后形成TrkA二聚体,自身膜内部酪氨酸残基磷酸化,通过PI3KAkt途径,终启动即早基因和延迟反应基因的转录[2].
关键词： 阿魏酸钠 突触素 酪氨酸激酶受体A 磷酸化磷酸肌醇依赖的蛋白激酶1 蛋白激酶B -
脑卒中后抑郁大鼠额前皮质神经生长因子的表达变化
目的：观察脑卒中后抑郁（ PSD）大鼠额前皮质神经生长因子（ NGF）及其高亲和力酪氨酸激酶受体A （ TrkA） mRNA的表达变化。方法将32只健康成年雌性SD大鼠随机分为正常组、抑郁组、卒中组、PSD组，每组8只。卒中组采用线栓法制备局灶性脑缺血模型；抑郁组采用慢性不可预见的中等应激刺激结合孤养法制备大鼠慢性应激抑郁模型；PSD组采用线栓法制备局灶性脑缺血模型，术后1周加以中等应激刺激及孤养方法制备PSD模型。于造模后第29天各组取0．5 cm厚的大脑额前皮质约100 mg，采用RT-PCR法检测额前皮质组织NGF及TrkA mRNA的表达。结果各组额前皮质组织中均有NGF、TrkA的表达。 PSD组NGF mRNA表达低于正常组（ P＜0．05），其余各组相比NGF mRNA表达差异无统计学意义（P＞0．05）。各组TrkA mRNA表达差异无统计学意义。结论 PSD大鼠额前皮质NGF mRNA的表达减少，可能与PSD发病有关。
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神经生长因子与人胆管癌神经浸润转移的相关性分析
目的探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其酪氨酸激酶受体A(TrkA)与人胆管癌神经浸润、淋巴转移和病理类型的关系.方法采用免疫组织化学技术,检测92例人胆管癌组织中β-NGF和TrkA的表达情况,Spearman's等级相关检验β-NGF的表达与胆管癌神经浸润、淋巴转移以及病理分型的关系.结果β-NGF和TrkA均在胆管癌组织中高表达,二者存在相关性,且在神经浸润组和无神经浸润组的表达差异有统计学意义;NGF阳性表达随着肿瘤恶性程度的增高而增高,且与肿瘤的淋巴转移密切相关.TrkA还表达于神经鞘膜.结论 NGF与胆管癌神经浸润密切相关.NGF可能通过旁分泌途径与TrkA作用促使癌细胞沿神经转移;通过自分泌作用促进胆管癌细胞增殖.
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运动训练对脊髓损伤大鼠脊髓内神经生长因子及其受体TrkA表达的影响
目的：研究运动训练对脊髓损伤(SCI)大鼠脊髓内神经生长因子(NGF)及其酪氨酸激酶受体A (TrkA)表达的影响。方法成年雌性SD大鼠24只分为假手术组(n=6)、损伤对照组(n=9)和运动训练组(n=9)。采用通用型脊髓打击器建立大鼠T10脊髓损伤模型。损伤后7 d起，对SCI大鼠进行4周运动训练，假手术组和损伤对照组不进行运动训练。损伤前及损伤后第1、2、3、4、5周采用BBB评分评定大鼠运动功能，训练结束后取T12~L1节段脊髓组织行病理切片，免疫组织化学法检测脊髓内NGF和TrkA蛋白表达及分布，Western blot检测脊髓内NGF和TrkA蛋白含量。结果损伤后第3周(即运动训练两周)起，运动训练组BBB评分高于损伤对照组(P<0.05)。NGF免疫反应阳性产物多分布于脊髓前角，运动训练组NGF阳性染色颗粒增多，平均光密度值较假手术组及损伤对照组增加(P<0.05)。TrkA免疫反应阳性产物于脊髓前角、后角、中央管周围处出现分布；运动训练组TrkA阳性染色颗粒增多，平均光密度值较假手术组及损伤对照组增加(P<0.05)。Western blot结果显示运动训练组大鼠脊髓内NGF及TrkA表达较假手术组、损伤对照组增加(P<0.05)。结论运动训练可诱导SCI大鼠脊髓内NGF及其受体TrkA表达，促进SCI大鼠运动功能恢复。
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全反式维甲酸诱导神经母细胞瘤分化及TrkA剪接异构体表达的研究
目的:通过对NB细胞系SH-SY5Y进行体外实验,研究ATRA对NB细胞的增殖抑制与诱导分化作用,进而探讨TrkA剪接异构体在不同分化程度的SH-SY5Y细胞中的表达情况.方法:将SH-SY5Y细胞取对数生长期细胞培养分组,利用台盼蓝拒染计数活细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化.采用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法检测TrkA三种剪接异构体的表达水平.结果:对照组活细胞数随着培养时间延长而增多,实验组中ATRA对SH-SY5Y的生长抑制作用在(0.1-10)μmol/L浓度范围内有剂量依赖关系.不同浓度的ATRA均可诱导SH-SY5Y细胞产生形态学上的变化,对照组细胞分化百分率随时间延长无明显变化,各时间段间比较,差异不显著(F=2.889,P=0.079 ).TrkAⅠ/ⅡmRNA 表达水平增加与ATRA浓度及作用时间呈正相关.TrkAⅢ mRNA表达与ATRA浓度及作用时间呈负相关.结论:在SH-SY5Y细胞中,ATRA对细胞生长抑制作用呈明显的时间和剂量依赖关系;TrkAⅠ/Ⅱ表达与ATRA作用时间、剂量呈正相关;随着ATRA作用浓度及作用时间的增加,TrkAⅢ mRNA表达降低.
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神经生长因子对胆管癌细胞67-kDa层黏连蛋白受体表达的影响
目的 研究外源性神经生长因子(NGF)对QBC939细胞67-kDa层黏连蛋白受体(67LR)表达的影响,探讨胆管癌神经浸润的机制.方法 (1)细胞免疫荧光染色法检测QBC939细胞表面NGF高亲和力酪氨酸激酶受体A(TrkA)表达情况.(2)用不同浓度的重组人神经生长因子(β-NGF)对QBC939细胞进行处理,采用Real-Time PCR和Western blot检测QBC393细胞67LR mRNA和蛋白表达情况.实验分为对照组、β-NGF(1、10、100、200μg/L)组.(3)根据上述实验结果选定佳β-NGF浓度,再加入不同浓度的TrkA阻断剂K252a,再次检测QBC939细胞67LR mRNA和蛋白表达情况.实验分为对照组、100μg/Lβ-NGF组、K252a(100、200、300 nmol/L)阻断组.数据采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法.结果 (1)QBC939细胞膜上TrkA表达明显.(2)对照组和β-NGF(1、10、100、200 μg/L)组QBC939细胞67LRmRNA和蛋白表达水平分别为0.35±0.06、0.38±0.14、0.62±0.14、0.90±0.08、0.70±0.10和0.32±0.05、0.50±0.09、0.69±0.13、0.93±0.07、0.76±0.07,两者比较,差异有统计学意义(F=22.4,14.6,P＜0.05),其中100ng/ml β-NGF作用明显(t=19.0,21.0,P＜0.05).(3)对照组、100 μg/L β-NGF组、K252a(100、200、300 nmol/L)阻断组QBC939细胞67LR mRNA和蛋白表达水平分别为0.35±0.10、0.88±0.14、0.80±0.08、0.67±0.12、0.43±0.07和0.41±0.10、0.84±0.10、0.76±0.04、0.61±0.09、0.50±0.12,两者比较,差异有统计学意义(F=14.1,8.9,P＜0.05),其中经300 nmol/L K252a处理后,QBC939细胞67LR mRNA和蛋白表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(t=1.02,0.85,P＞0.05).结论 外源性NGF通过与其高亲和力受体TrkA结合,可增强QBC939细胞67LR表达,这可能是促进胆管癌细胞延外周神经纤维间隙浸润的机制之一.
