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胃癌组织中PIM-3的异常表达及临床意义
目的 研究并分析胃癌组织中PIM-3的异常表达及其临床意义.方法 选择2013年6月～2014年2月于内蒙古医科大学附属医院行胃癌组织根治性切除的患者50例为研究对象,采用免疫组织化学法(SP法)分别测定PIM-3在50例胃癌组织和及其中25例患者的癌旁组织中的表达,分析PIM-3与性别、年龄、肿瘤大小等有关参数的相关性.结果 癌旁组织中PIM-3的表达阳性率(16％)显著低于胃癌组织(90％);PIM-3的表达与胃癌组织中分化程度、浸润程度、淋巴转移和静脉转移密切相关(P＜0.05),而与性别、年龄、肿瘤直径关系不大(P＞0.05).结论 PIM-3参与胃癌组织细胞的分化、浸润和转移,促进肿瘤恶化和癌症发展.
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重型颅脑损伤后Pim-3的表达与细胞凋亡关系的研究
目的 探讨颅脑损伤后Pim-3的表达及其与细胞凋亡的关系.方法 48只大鼠随机分为实验组与对照组.实验组大鼠制作重型颅脑损伤模型,对照组大鼠予以假手术处理,两组大鼠分别在伤后6、24、72h 及7d 免疫组化SP 法检测Pim-3蛋白表达、TUNEL 法检测细胞凋亡.结果 重型颅脑损伤后大鼠脑组织Pim-3蛋白水平、细胞凋亡水平均较对照组明显升高,并在伤后24h 达到高峰,7d 后开始下降.结论 Pim-3可能在颅脑损伤后细胞凋亡中起重要作用.
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原癌基因Pim-3对烧伤及内毒素引起的肠黏膜损伤保护作用的实验研究
目的 研究Pim-3基因在烧伤及内毒素引起的肠黏膜损伤中的保护作用.方法 体内实验在成年Wistar大鼠中进行,分为A组(烧伤组),B组(脂多糖组),C组(正常对照组).各组依次在处理后3、6、12、24、48 h取小肠,提取总RNA及蛋白质,并进行逆转录(RT)-PCR及Western印迹分别检测内源性Pim-3、细胞间黏附分子(ICAM-1)、紧密连接蛋白闭锁蛋白(occludin)在肠道的表达.观察烧伤和内毒素对内源性Pim-3基因在肠道表达的影响及Pim-3基因与肠黏膜损伤的相关性.体外实验部分,首先原代肠上皮细胞分离培养,再重组质粒pEGFP-N2/Pim-3转染和内毒素处理原代肠上皮细胞.实验分为6组:①正常对照+内毒素处理组(5 μg/ml);②空载质粒pEGFP-N2转染+内毒素处理组(5 μg/ml);③重组质粒pEGFP-N2/Pim-3转染+内毒素处理组(5 μg/ml);④正常对照组;⑤空载质粒pEGFP-N2转染组;⑥重组质粒pEGFP-N2/Pim-3转染组;内毒素处理6 h后,提取各组总RNA,利用逆转录(RT)-PCR检测各指标,并利用流式细胞仪观察各组细胞凋亡情况.结果 (1)体内实验部分:A、B组内源性Pim-3基因在3 h表达开始增多,分别为C组的(12.25±1.01)和(15.08±1.07)倍,6 h到达顶点,分别为C组的(21.13±1.78)和(25.24±1.80)倍,以后逐渐减少.A、B组ICAM-1在6 h后一直处于高表达的位置,12 h达高峰,分别为C组的(88±7)和(58±5)倍,差异有统计学意义(P《0.05).A、B组闭锁蛋白在3 h表达开始增多,6 h达顶点,分别为C组的(6.65±0.24)和(6.25±0.26)倍,差异均有统计学意义(均P《0.05).(2)体外实验部分:⑥组的Pim-3及闭锁蛋白的表达与④⑤组之间的差异均有统计学意义(均P《0.05),而④⑤⑥组之间ICAM-1表达及细胞凋亡差异无统计学意义.③组Pim-3、闭锁蛋白和ICAM-1的表达及细胞凋亡与①②组之间的差异有统计学意义(P《0.05).另外,①②③组的ICAM-1表达与④⑤⑥组之间的差异有统计学意义(P《0.05).结论 原癌基因Pim-3不但能抑制肠上皮细胞凋亡,而且还能够增强闭锁蛋白的表达,抑制脂多糖引起的肠道局部炎症反应,从而达到保护肠道机械屏障的作用.
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Pim-3、Bax与XIAP在食管鳞癌中的表达及意义
目的：：探讨Pim-3、Bax与XIAP在食管鳞癌中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学SABC法检测Pim-3、Bax及XIAP在食管鳞癌与正常食管黏膜中的表达。结果：Pim-3与XIAP蛋白在食管鳞癌中的表达高于正常食管黏膜(P<0.05)；Bax蛋白在正常食管黏膜中的表达高于食管鳞癌(P<0.05)；Pim-3、Bax及XIAP蛋白的表达与食管鳞癌的组织学分级与临床病理分期无关。结论：Pim-3、Bax与XIAP与食管鳞癌的发生发展具有相关性,Pim-3、Bax及XIAP与食管鳞癌的组织学分级和临床病理分期的关系有待进一步证实。
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Pim-3与XIAP在食管鳞癌组织中的表达与分析
目的 探讨Pim-3与XIAP在食管鳞癌组织中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学SABC法检测Pim-3与XIAP在食管鳞癌及正常食管黏膜中的表达.结果 Pim-3与XIAP在食管鳞癌中呈高表达,在正常食管黏膜中呈低表达,差异显著,具有统计学意义(P＜0.01);Pim-3与XIAP的表达与食管鳞癌的组织学分级与临床病理分期无关.结论 Pim-3与XIAP参与食管鳞癌的发生发展,推测Pim-3与XIAP可以成为食管鳞癌诊断的新指标之一.
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原癌基因Pim-3蛋白表达与食管癌术后生存的关系
目的 探讨原癌基因Pim-3蛋白表达与食管癌患者术后生存的关系.方法 应用免疫组织化学SP法对50例随访资料完整的食管癌标本进行Pim-3的基因产物测定,并将其与患者生存期进行Kaplan-Meier单因素和Cox回归多因素分析.结果 Kaplan-Meier分析显示:食管癌患者的年龄、病理分级、临床TNM分期、Pim-3表达、侵袭深度及淋巴结转移与否是影响患者预后的重要因素;Cox回归多因素分析显示:肿瘤的病理分级、TNM分期、Pim-3表达是独立的预后因素,其中以病理分级和Pim-3表达为重要.结论 Pim-3的高表达预示着食管癌患者的预后不良,是独立危险因素.
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卵巢黏液性腺癌患者癌组织Pim-3、c-Myc和PTEN表达及相关性
目的：检测卵巢黏液性腺癌患者癌组织Pim-3、c-Myc和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（ PTEN）表达及关系。方法卵巢黏液性腺癌术后组织蜡块及临床资料118例为观察组，以同期确诊为卵巢交界性黏液性囊腺瘤术后的组织蜡块65例为对照组，以同期确诊为卵巢黏液性囊腺瘤术后的组织蜡块65例为正常对照组。应用免疫组化方法检测 Pim-3、c-Myc和PTEN表达。结果观察组 Pim-3和 c-Myc表达阳性率明显高于对照组和正常对照组，观察组PTEN表达阳性率明显低于对照组和正常对照组，观察组Pim-3、c-Myc和PTEN表达阳性率与肿瘤大径、淋巴结转移、腹水中是否有癌细胞密切相关。观察组Pim-3和PTEN、c-Myc和PTEN 表达均负相关。结论卵巢黏液性腺癌中Pim-3、c-Myc高表达、PTEN低表达不仅可以促进肿瘤发生，还可以促进肿瘤进展，Pim-3和c-Myc可能通过调节抑癌基因PTEN的表达发挥作用。
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胃腺癌中莫洛尼鼠白血病病毒前病毒整合期－1、－3和原癌基因 C－MYC 的表达
目的检测胃腺癌中莫洛尼鼠白血病病毒前病毒整合基因（PIM）－1、－3和原癌基因 C－MYC（ C－MYC）的表达，分析其临床意义。方法61例行胃腺癌根治术的患者作为观察组，留取术后蜡块组织，距肿瘤边缘＞5 cm 的经病理医师证实为正常的胃黏膜组织15例作为对照组。PIM－1、PIM－3和 C－MYC 表达的检测应用免疫组化法。结果两组 PIM－1、PIM－3和 C－MYC 的表达差别有统计学意义。观察组中 PIM－1、PIM－3和 C－MYC 的表达与肿瘤的大径、浸润深度和 Ki67增殖指数密切相关，PIM－1和 PIM－3的表达与脉管内癌栓密切相关，C－MYC 的表达与淋巴结转移相关。相关分析显示观察组中三者的表达无明显相关性。结论胃腺癌中 PIM－1、PIM－3和 C－MYC 高表达是促进肿瘤形成和进展的重要因素。 PIM－1、PIM－3和 C－MYC 三者间无相关性。
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碱性成纤维细胞生长因子对肺癌A459细胞pim-3表达影响的实验研究
目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,FGF-2)对肺癌A459细胞株pim-3的影响.方法:不同浓度的(0、25、50、100 ng/ml)FGF-2在体外作用于肺癌A459细胞,半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测pim-3mRNA,Western blot检测pim-3蛋白表达.结果:与空白对照组比较,RT-PCR和Western blot检测结果显示pim-3 mRNA及其蛋白的表达在各FGF-2作用组均显著增高,各组间比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:FGF-2可以量效的方式上调pim-3的表达.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 肺癌 PIM-3 -
应用组织芯片研究Pim-3、p-STAT3在胰腺癌中的表达及临床意义
目的 探讨Pim-3、p-STAT3蛋白在胰腺导管腺癌组织中的表达情况及生物学行为意义.方法 应用组织芯片和免疫组化的方法,检测88例人胰腺导管腺癌组织和11例非癌组织中Pim-3、p-STAT3蛋白的表达,并分析其与临床病理特征及患者预后的关系.结果 在88例胰腺癌组织中Pim-3、p-STAT3的阳性表达率分别为76.1%和75.0%,在非癌胰腺组织内均为阴性表达.Pim-3在肿瘤细胞的胞质内表达,p-STAT3在肿瘤细胞的胞核与胞质内表达,两者的表达与胰腺癌的临床分期、淋巴结转移相关(P<0.01),与患者年龄、性别、肿瘤大小、位置和病理学分级无关(P>0.05),且其之间成正相关(r=0.416,P<0.01).Kaplan-Meier生存分析结果显示,胰腺癌组织中Pim-3、p-STAT3表达阳性的患者生存时间缩短.Cox多因素相关分析表明Pim-3和p-STAT3阳性表达是影响患者生存期的独立预后因素(分别P=0.003和P=0.015).结论胰腺癌中Pim-3、p-STAT3的阳性表达与肿瘤临床分期和淋巴结转移密切相关,且两者均可作为胰腺癌患者预后不良的判断因子.
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Pim-3对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的研究
目的 研究原癌基因Pim-3对心肌细胞急性缺氧/复氧(A/R)损伤的保护作用.方法 采用原代培养新生大鼠的心肌细胞A/R损伤和缺氧预适应(APC)保护模型,将已经构建好的pEGFP-N2/Pim-3质粒导入原代培养的乳鼠心肌细胞中,实验结束后测定Pim-3 mRNA及蛋白表达水平(RT-PCR、Western blot法)的改变,同时检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 活性、四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率、TUNEL法检测细胞凋亡.结果 RT-PCR和Western blot结果显示,Pim-3在正常组几乎不表达,A/R组表达明显升高,缺氧预适应(APC)+A/R组表达则进一步升高;转染pEGFP-N2/Pim-3质粒后24 h,荧光倒置显微镜显示转染效率达30%;在A/R损伤后,Pim-3基因转染组较未转染组的心肌细胞LDH值明显降低,细胞存活率则明显升高,心肌细胞的凋亡指数明显下降.结论 在细胞水平,Pim-3参与心肌APC保护作用,导入外源性的Pim-3基因能对抗急性A/R损伤.
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Pim-3慢病毒质粒构建及其表达鉴定
目的 构建Pim-3慢病毒质粒,鉴定其在卵巢癌SKOV3细胞中基因及蛋白水平的表达.方法 RT-PCR法提取Pim-3 cDNA,经T-A克隆及双酶切将其与慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP重组;酶切鉴定及基因测序后,将阳性重组质粒导入病毒包装细胞293T中;收集病毒上清液转染SKOV3细胞,荧光显微镜下观察转染情况,应用RT-PCR及Western blot法分别检测Pim-3 mRNA及其蛋白.结果 RT-PCR法获得Pim-3基因,重组质粒酶切后片段大小及基因测序结果显示pCDH/Pim-3重组质粒构建成功.将感染重组质粒及空载体的293T细胞生产的病毒上清分别感染SKOV3细胞,感染重组质粒的SKOV3细胞中Pim-3 mRNA及蛋白表达水平均高于空载体细胞.结论 成功构建了pCDH/Pim-3重组慢病毒质粒,建立了Pim-3高表达SKOV3瞬转细胞模型,为探讨Pim-3在卵巢癌发生、发展中的作用及机制奠定实验基础.
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siRNA沉默Pim-3对T24细胞增殖和细胞周期的影响
目的:研究小干扰RNA(siRNA)沉默Pim-3对膀胱癌细胞增殖和周期的影响.方法:膀胱癌T24细胞分为3组:未处理组(不作任何处理)、对照siRNA组(采用50 nmol/L对照siRNA转染)和Pim-3 siRNA组(采用50 nmol/L Pim-3 siRNA转染).采用Western blot检测转染48 h Pim-3、Cyclin D1、Cdk2、P21蛋白表达的变化,CCK-8试剂检测转染24、48、72、96 h细胞的增殖速率,流式细胞术检测转染48 h细胞周期的变化.结果:3组膀胱癌T24细胞Pim-3、Cyclin D1、Cdk2、P21蛋白表达比较,差异有统计学意义(F=32.506、49.573、23.079、44.758,P<0.05),与未处理组和对照siRNA组相比,Pim-3 siRNA组Pim-3、Cyclin D1和Cdk-2蛋白的表达下降,P21蛋白表达升高(P<0.05).转染Pim-3 siRNA48、72和96 h后,膀胱癌T24细胞的增殖速率均明显受到抑制(F=50.067、132.504、277.389,P<0.001).3组G0/G1、S和G2/M期膀胱癌T24细胞比例比较,差异有统计学意义(F=107.970、20.039和66.872,P<0.05),Pim-3 siRNA组G0/G1期膀胱癌T24细胞比例高于未处理组和对照siRNA组(P<0.05),而S和G2/M期膀胱癌T24细胞比例低于未处理组和对照siRNA组(P<0.05).结论:Pim-3有望成为治疗膀胱癌潜在的分子靶点.
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食管鳞状细胞癌组织中Pim-3和微小染色体7蛋白的表达
目的:探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中Pim-3和微小染色体7(MCM7)蛋白的表达及临床意义.方法:采用免疫组化SP法检测77例ESCC组织、70例癌旁不典型增生组织及46例正常食管黏膜组织中Pim-3和MCM7蛋白的表达情况,分析ESCC组织中Pim-3和MCM7蛋白的表达与各临床病理因素的关系及二者表达的相关性.结果:ESCC组织中Pim-3和MCM7蛋白的表达高于癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织(H=113.160,64.507,P均<0.001).Pim-3和MCM7蛋白的表达与TNM分期、淋巴结转移有关(χ2分别为3.368、3.424及2.827、2.362,P<0.05),且MCM7蛋白的表达还与癌细胞分化程度、外膜浸润有关(χ2=3.672和2.760,P<0.05).ESCC组织中Pim-3蛋白表达与MCM7蛋白表达无关(r=0.116,P=0.316).结论:Pim.3和MCM7与ESCC的发生、发展有密切关系.
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三氧化二砷抑制食管癌细胞EC-9706体内增殖及机制研究
目的:研究三氧化二砷(As2O3)对食管癌细胞系EC-9706的体内增殖抑制作用及可能机制.方法:以不同剂量的As2O3作用于裸鼠移植瘤模型,每周测量裸鼠移植瘤的大小,绘制肿瘤生长曲线;采用West-ern blot法检测Pim-3和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白的表达变化.结果:不同剂量的As2O3均能明显抑制裸鼠移植瘤的生长,以4 mg/kg As2O3组的抑制作用强,肿瘤重量抑制率和肿瘤体积抑制率分别为81.13％和81.48％.Pim-3和Bcl-2蛋白的表达受到抑制.结论:As2O3可能通过抑制Pim-3使Bcl-2表达降低,促进肿瘤细胞凋亡.
关键词： 三氧化二砷 食管癌 PIM-3 B细胞淋巴瘤/白血病-2 -
骨肉瘤和良性骨肿瘤中PIM-3和p-STAT3蛋白表达的相关性及临床病理意义
目的 探讨PIM-3及p-STAT3蛋白表达与骨肉瘤发生、发展的关系.方法 应用免疫组化SP法检测60例骨肉瘤和20例良性骨肿瘤组织中PIM-3及p-STAT3蛋白表达.结果 60例骨肉瘤组织中PIM-3及p-STAT3蛋白阳性表达率分别为56.7％和51.7％;20例良性骨肿瘤中PIM-3及p-STAT3蛋白阳性表达率分别为25.0％和10.0％,骨肉瘤组织和良性骨肿瘤组织PIM-3及p-STAT3蛋白表达差异有统计学意义(X2=6.020及10.746,p＜0.05).PIM-3蛋白表达与骨肉瘤组织的Enneking分级密切相关,组间比较差异有统计学意义(X2 =7.163,P＜0.05)；与骨肉瘤的分化程度、有无远端转移及病理分型均无关,组间比较差异均无统计学意义(f =5.266、2.986及0.703).p-STAT3蛋白表达与骨肉瘤组织的分化程度及Enneking分级密切相关,组间比较差异均有统计学意义(X2=14.528及7.901,P＜0.05)；与骨肉瘤的Enneking分级及病理学分型均无关(X2 =7.901及3.695,p＞0.05).二者蛋白表达呈正相关关系(yp =0.339,P＜0.05).结论 PIM-3和p-STAT3在骨肉瘤发生、发展过程中起重要作用,PIM-3及p-STAT3的联合检测可望成为骨肉瘤早期诊断和判断预后的分子指标之一.
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pim-3基因的分子生物学特性及作用
Pim家族是一组编码丝/苏氨酸蛋白激酶的原癌基因,由pim-1、pim-2、pim-3组成.它们在人体不同组织器官中广泛分布,对其正常生长发育、分化、成熟起重要作用.Pim-3作为Pim家族的新成员,与Pim-1、Pim-2相似能磷酸化众多特异性底物,在细胞周期和细胞凋亡进程中起重要调控作用.同时,其在成体组织中的表达上调可导致某些恶性肿瘤的发生.
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Pim-3在肺癌组织中的表达
目的 探讨Pim-3在肺腺癌A549细胞系和肺癌组织中的表达及临床意义.方法 免疫组化法检测Pim-3蛋白在肺癌细胞系、不同类型肺癌组织和非肺癌支气管肺组织中的表达,分析组间差异.结果 Pim-3蛋白在肺癌细胞系和不同类型肺癌组织中阳性表达率均为100％,而癌周组织未见明显阳性表达；在正常支气管肺组织中,未见阳性表达；不同类型肺癌组织阳性表达率无统计学差异.结论 Pim-3蛋白有可能成为新的肺癌标志物.
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Pim-3、Cdk-2蛋白在肺鳞癌中的表达及其意义
目的 探讨Pim-3、Cdk-2蛋白在肺鳞癌中的表达及其意义.方法 用免疫组化方法检测40例肺鳞癌、20例肺大疱旁正常肺组织中Pim-3和Cdk-2蛋白的表达.结果 40例肺鳞癌组中Pim-3 和Cdk-2蛋白的阳性表达均显著高于正常组(P<0.001).肺鳞癌组中Pim-3蛋白的阳性表达与肺鳞癌的分化程度之间有相关性(rs=0.477,P＝0.002),高、中分化组显著低于低分化组(P＜0.01).Pim-3和Cdk-2蛋白的阳性表达均与患者的性别、年龄、吸烟、肿瘤大小病理特征之间无关(P>0.05),淋巴结转移组中Pim-3和Cdk-2蛋白的阳性表达均显著高于无淋巴结转移组(P<0.001).此外,Cdk-2蛋白的表达水平与肿瘤的TNM分期相关(rs=0.345,P＜0.05),Ⅲ、Ⅳ期组高于Ⅰ、Ⅱ期组(P＜0.05);而Pim-3 的表达与TNM分期无关(P>0.05).癌组中Pim-3与Cdk-2蛋白的表达之间呈正相关(rs=0.509,P=0.001).结论 Pim-3及Cdk-2蛋白的高表达可能涉及了肺鳞癌的发生、发展过程.Pim-3及Cdk-2蛋白有可能作为指导肺鳞癌患者临床治疗、评价预后的生物学指标.
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小鼠Pim-3基因siRNA慢病毒载体的构建及表达
目的:本研究拟构建针对Pim-3基因的siRNA慢病毒载体,诱导靶细胞中Pim-3基因沉默.方法:分析Pim-3 mRNA序列特征,根据siRNA设计原则,设计并合成特异性针对小鼠Pim-3的siRNA靶DNA序列及阴性对照序列.用限制性核酸内切酶将pGCSIL-GFP载体线性化,将寡DNA片段退火成含有粘性末端的DNA双链后,与慢病毒骨架质粒连接转化至大肠杆菌中进行重组,运用PCR技术筛选阳性克隆并测序,得到pSC-Pim-3 shRNA质粒.采用脂质体将pSC-Pim-3 shRNA质粒和辅助包装质粒共转染到HEK293细胞中包装形成慢病毒.采用倍比稀释法测定慢病毒滴度.慢病毒感染NIH3T3细胞,运用实时定量PCR技术检测Pim-3基因mRNA表达水平,运用蛋白免疫印迹技术检测Pim-3蛋白表达水平.结果:酶切后获得7.5 kb的pGCSIL-GFP片段.DNA片段成功连接到pGCSIL-GFP载体；重组慢病毒的滴度约为2×109 TU/mL.慢病毒能够高效感染靶细胞,并显著抑制内源性Pim-3基因的mRNA(抑制率超过70％)和蛋白(抑制率超过80％)表达.结论:针对Pim-3基因靶序列CCTCTTCGACTTCATCACT的shRNA重组慢病毒能够有效沉默靶细胞Pim-3基因.
