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姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响
目的:旨在探讨姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖和调亡的影响.方法:细胞传代培养:培养人膀胱癌T24细胞,施加不同浓度姜黄素,观察对细胞的增殖、凋亡作用;应用四唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率(碘化丙啶染色).结果:姜黄素各组较对照组增殖降低,存在剂量-效应关系.姜黄素各组较对照组凋亡升高,存在剂量-效应关系.结论:姜黄素抑制人膀膀胱癌T24细胞增殖,姜黄素促进人膀胱癌T24细胞凋亡.
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RON基因在膀胱癌组织中的表达及对T24细胞增殖的影响
目的 探讨RON基因对T24细胞增殖与迁移的影响.方法 收集膀胱癌组织标本,通过RT-qPCR检测RON在膀胱癌组织中的表达,其次用siRNA技术干扰T24细胞RON,用RT-qPCR、Western blot检测干扰效果,CCK-8、Transwell实验及流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移及细胞凋亡.结果 膀胱癌组织中RON表达与TNM分期呈正相关(P＜0.05).在T24细胞的RON-siRNA组,细胞增殖能力减弱(P＜0.05),迁移与侵袭能力降低(P＜0.05),凋亡细胞数增加(P＜0.05),同时P-ERK蛋白表达减少,但Total-ERK表达不变.结论 RON基因促进膀胱癌细胞的增殖与迁移,有望成为膀胱癌治疗的新靶点.
关键词： siRNA 膀胱癌 T24细胞 巨噬细胞刺激蛋白受体 RON -
抑癌基因RUNX3在膀胱癌T24细胞株中的表达以及对凋亡的影响
目的 明确RUNX3抑癌基因在正常膀胱组织和膀胱癌T24细胞株的甲基化状态,并将野生型RUNX3基因转染T24细胞,探讨RUNX3基因恢复表达后对膀胱癌细胞凋亡的影响. 方法应用RT-PCR、甲基化特异性PCR和非甲基化PCR检测正常膀胱组织、膀胱癌T24细胞中RUNX3基因的表达以及基因启动子区域CpG岛的甲基化状态.构建真核载体的RUNX3-EGFP-pDest质粒,在LipefectamineTM2000介导下转染膀胱癌T24细胞,转染实验设立3组:空白对照组、空质粒EGFP-pDest转染组以及RUNX3-EGFP-pDest转染组.Western blot检测RUNX3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡情况. 结果正常膀胱组织RT-PCR可检测出1248bp的RUNX3基因条带,而膀胱癌T24细胞中无法检测出RUNX3基因的表达.正常膀胱组织RUNX3基因甲基化PCR检测阴性,非甲基化PCR阳性;T24细胞反之.正常膀胱粘膜组和RUNX3-EGFP-pDest质粒转染组Western blot检测,均表达RUNX3蛋白,而膀胱癌T24细胞未表达RUNX3蛋白.流式细胞仪检测,空白对照组的凋亡率为(3.1±0.46)%,而EGFP-pDest转染组和RUNX3-EGFP-pDest质粒转染组的凋亡率分别为(10.1±1.62)%、(41.20±1.53)%,应用方差分析的LSD法和SNK法进行均数的多重两两比较,RUNX3-EGFP-pDest质粒转染组与EGFP-pDest转染组、空白对照组凋亡率之间的差异均具有显著性,P<0.01.结论 正常膀胱组织RUNX3基因正常表达,未发生启动子区域CpG岛甲基化,而膀胱癌T24细胞可能因RUNX3基因启动子区域CpG岛发生甲基化,致RUNX3基因无法表达.转染野生型RUNX3抑癌基因后促进了膀胱癌T24细胞的凋亡.
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巴西木素对人类膀胱癌细胞T24增殖与凋亡的影响
目的 观察巴西木素对人类膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用锥虫蓝拒染法观察不同浓度巴西木素在不同时间对靶细胞的增殖抑制作用；采用均质生物发光法检测靶细胞内Caspase-3、9的活性；用流式细胞术及激光共聚焦显微镜检测巴西木素对靶细胞的凋亡作用情况.结果 不同浓度巴西木素(25、50、100、200 μg/ml)与靶细胞作用8h,细胞抑制率分别为43.19％、60.73％、86.38％、93.89％(P＜ 0.05),50 μg/ml的巴西木素与靶细胞作用4、8、24、48 h后,细胞抑制率分别为52.72％、60.73％、91.77％、96.41％(P＜ 0.05)；生物发光检测25μg/ml的巴西木素作用后靶细胞Caspase-3、9的活性略有升高,但与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；巴西木素与靶细胞作用16h后,在7.5 ～ 60.0 μg/ml范围内随着药物浓度增加细胞凋亡率分别为0.15％、1.35％、2.91％、34.76％,呈现上升趋势；激光共聚焦显微镜下可见靶细胞发生凋亡.结论 巴西木素对人类膀胱癌细胞T24具有显著的抑制作用,并诱导其发生凋亡,随药物作用呈现一定的浓度时间依赖性.
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高迁移率蛋白N2对人膀胱移行细胞癌及裸鼠移植瘤的影响
目的 研究高迁移率蛋白N2( HMGN2)对人膀胱癌细胞T24及其裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 在体外细胞水平上,用噻唑蓝(MTT)法检测加入0,3, 5,7,9 μg· mL-1HMGN2的细胞活性,用流式细胞仪检测0,1,3,5 μg· mL-1 HMGN2对T24细胞的抑制作用;用Western blot法检测细胞中凋亡蛋白Bcl-2、胱天蛋白酶(caspase)-3、p53及Bax的表达.体内动物水平上,建立裸鼠移植瘤模型,分为空白组、对照组和实验组,分别注射磷酸盐缓冲液( PBS)、顺铂(DDP)和HMGN2于瘤体周边. 20 d后处死裸鼠,取出瘤块,用苏木精-伊红(HE)染色及原位末端标记法(TUNEL)检测各组瘤组织的坏死及调亡.结果MTT结果表明,3,5,7,9 μg· mL-1HMGN2 抑制了 T24 细胞的生长,且随着HMGN2浓度的增加及孵育时间的延长抑制率明显增加.流式细胞仪检测结果表明,1,3,5 μg· mL-1HMGN2对T24细胞总凋亡率分别为(13.18 ±0.83 )%, (25.79 ±1.22)%,(31.48 ±1.82)%,与0 μg· mL-1HMGN2相比,差异有统计学意义(P＜0.01).裸鼠移植瘤实验中,瘤组织的HE染色及TUNEL检测结果表明,与空白组相比,实验组和对照组瘤组织出现明显的坏死及凋亡.结论HMGN2可能通过促进瘤组织的坏死及诱导凋亡的作用抑制了T24细胞的增殖和裸鼠移植瘤的生长.
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冬凌草甲素对膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用
目的 探讨不同浓度的冬凌草甲素(ORI)在不同时间点对膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用,为临床决策提供参考依据.方法 将冬凌草甲素作用于T24细胞,利用酶标仪在不同时间点(λ=570 nm)测定不同浓度的冬凌草甲素吸光度,同样方式用MTT法检测细胞的抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,其数值均以均数±标准差表示,每组结果由两位研究者重复测量2次校对.结果 随着培养时间的延长及浓度的增加,T24细胞的吸光度数值呈明显下降趋势,差异有统计学意义(P＜0.05).浓度为8 μmol/L时抑制率递增,16 μmol/L时抑制率已接近50％,而32 μmol/L时抑制率高可达70％以上,变化显著,差异有统计学意义(P＜0.05).随时间、浓度梯度的变化,T24细胞凋亡率不断增加,高可达60％以上,差异有统计学意义(P＜0.05).证明冬凌草甲素对膀胱癌T24细胞增殖的抑制具有明显的浓度-效应与时间-效应的关系.结论 冬凌草甲素可诱导膀胱癌T24细胞凋亡,有明显的抗肿瘤作用.
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维生素C与维生素K3联合作用于人膀胱癌T24细胞系的研究
目的 探讨维生素C与维生素K3联合用药能否诱导人膀胱癌细胞株T24发生凋亡及机制.方法 (1)用噻唑蓝(MTT)法筛选出维生素C作用于T24细胞72h后的佳作用浓度.(2)用该佳浓度下的VC联合不同浓度的VK3(1,2.5,5,10μM),筛选出作用72h后的佳联合用药浓度.(3)分组并培养各组细胞:空白对照组,佳浓度的维生素C作用组,佳浓度的联合用药组.(4)用碘化丙啶(PI)流式细胞术观察上述三组的细胞凋亡情况,通过流式软件FACS分析细胞周期变化.结果 (1)以MTT法筛选出单用维生素C作用72h后的佳药物浓度为1000μM,(2)以MTT法筛选出浓度为该浓度维生素C与不同浓度的VK3联用时,VK3的佳药物浓度为10μM.(3)流式细胞仪检测各组细胞凋亡率结果 表明:10μMVK3+1000μMVC联用组与1000μMVC组相比,可显著提高细胞凋亡率(p＜0.05).(4)流式细胞仪检测各组细胞周期示:VC+K3可诱导细胞凋亡的作用集中于S期(P＜0.05).结论 维生素K3与维生素C联合用药可增强诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的作用,其机制可能与维生素C阻滞T24细胞周期于S期有关.
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盐霉素单药及联合用药对膀胱移行细胞癌T24细胞增殖的体外抑制作用
目的 通过体外研究观察不同浓度盐霉素及其联合应用紫衫醇、丝裂霉素对膀胱移行细胞癌T24细胞增殖活性的抑制作用.方法 将盐霉素(SAL)单药分别配成盐霉素0.1、0.2、0.4、0.8和1.6mg/mL培养液并分不同浓度处理组;盐霉素(SAL)联合紫杉醇(PAC)联合用药处理:使用细胞培养液配成五种不同浓度,以PAC 0.5μg/mL为阳性对照组;盐霉素(SAL)联合丝裂霉素(MMC)联合用药处理五种浓度,并以MMC 2.0μg/mL为阳性对照组;各组均设空白及阴性对照.分别于药物处理24h(或48h)及48h(或72h)后通过CCK8法测定吸光度,并计算细胞生长抑制率及相对细胞生长抑制率.结果 不同浓度盐霉素单独用药后对细胞的生长出现增殖活性均有抑制作用;不同浓度盐霉素联合紫杉醇对增殖活性明显的抑制作用,且具有一定的时间依赖性.盐霉素联合丝裂霉素对膀胱移行细胞癌T24细胞的体外增殖活性有显著抑制作用.结论 不同浓度盐霉素单用及联合应用紫杉醇或丝裂霉素均对T24细胞增殖活性有抑制作用,并且与浓度和时间一定的依赖性.
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羟基喜树碱对3种人膀胱癌细胞体外生长作用的实验研究
目的 探讨不同浓度的羟基喜树碱(HPT)对3种人膀胱癌细胞(EJ细胞、T24细胞及5637细胞)体外生长的抑制作用.方法 通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度HPT对EJ细胞、T24细胞、5637细胞体外生长的抑制率,从而筛选出能够抑制多种膀胱癌细胞体外生长的药物浓度.结果 当加入的HPT浓度≥5ng/ml时,实验组3种膀胱细胞的OD值低于对照组,且呈剂量递减;生长抑制率高于对照组,且呈剂量逆增,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 HPT浓度在≥5ng/ml时对3种膀胱癌细胞体外生长有较好的抑制作用.
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维生素K3增强吉西他滨诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的研究
目的 探讨维生素K3(VK3)是否能影响吉西他滨诱导人膀胱癌T24细胞凋亡.方法 用噻唑蓝(MTr)法筛选出吉西他滨作用T24细胞72 h后的适宜作用浓度,再用该浓度联合不同浓度的VK3(2,5,10,20 μnol/L)筛选出作用72 h后的适宜联合用药浓度.分为三组:空白对照组,吉西他滨组,药物联用组.用PI流式细胞术观察各组细胞凋亡情况,并通过流式软件分析细胞周期变化.结果 MTT法筛选出吉西他滨与VK3的适宜药物浓度分别是1.0 μg,/ml和10 μmol/L.药物联用组与吉西他滨组相比,可显著提高细胞抑制率和细胞凋亡率(均P<0.05).VK3可显著增强吉西他滨诱导细胞集中于S期的作用.结论 联用维生素K3可增强吉西他滨诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的作用,可能与细胞周期s期阻滞增高有关.
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木犀草素对膀胱肿瘤T24细胞的影响
目的 研究木犀草素对膀胱肿瘤T24细胞体外增殖的抑制和诱导凋亡作用.方法 不同浓度木犀草素作用于指数生长期膀胱肿瘤T24细胞后应用MTS比色法检测细胞增殖的抑制作用.通过DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡情况.结果 浓度为0.01~0.04 mg/mL的木犀草素对体外培养的膀胱肿瘤T24细胞有明显的抑制作用.DNA凝胶电泳结果 显示:空白对照组没有出现DNA"梯带";其他4组(除木犀草素0.004 mg/mL组)均出现不同程度的DNA"梯带",显示出细胞凋亡的特征.结论 木犀草素在浓度为0.01~0.04 mg/mL时对膀胱肿瘤T24细胞有通过诱导细胞凋亡的方式抑制细胞生长的作用,可能具有治疗膀胱肿瘤的临床价值.
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木犀草素对膀胱肿瘤T24细胞的影响
目的 研究木犀草素对膀胱肿瘤T24细胞体外增殖的抑制和诱导凋亡作用.方法 不同浓度木犀草素作用于指数生长期膀胱肿瘤T24细胞后应用MTS比色法检测细胞增殖的抑制作用.通过DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡情况.结果 浓度为0.01~0.04 mg/mL的木犀草素对体外培养的膀胱肿瘤T24细胞有明显的抑制作用.DNA凝胶电泳结果 显示:空白对照组没有出现DNA"梯带";其他4组(除木犀草素0.004 mg/mL组)均出现不同程度的DNA"梯带",显示出细胞凋亡的特征.结论 木犀草素在浓度为0.01~0.04 mg/mL时对膀胱肿瘤T24细胞有通过诱导细胞凋亡的方式抑制细胞生长的作用,可能具有治疗膀胱肿瘤的临床价值.
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miR-205调控YES1表达对人膀胱癌细胞增殖的影响
目的 探讨miR-205对膀胱癌T24细胞增殖的影响.方法 合成miR-205的模拟物并转染膀胱癌T24细胞,荧光显微镜下观察转染效率,实时荧光定量PCR法检测转染48 h后,T24细胞中miR-205的表达情况,MTT法检测转染24、48和72 h后,T24细胞的增殖情况,实时荧光定量PCR法和western blot检测转染48 h后膀胱癌细胞内源性YESl mRNA及蛋白的表达变化.结果 miR-205的模拟物转染至T24细胞的效率为80％,转染miR-205模拟物48 h后,T24细胞内miR-205的表达水平显著升高(P＜0.05),T24细胞的增殖率显著低于阴性对照组(P＜0.05),且呈时间依赖性,YES1 mRNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组(P＜0.05).结论 miR-205抑制膀胱癌T24细胞增殖可能与靶向YES1基因相关.
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miR-34a调控HMGB1表达对人膀胱癌细胞增殖的影响
目的 探讨miR-34a对膀胱癌T24细胞增殖的影响.方法 合成miR-34a的模拟物并转染膀胱癌T24细胞,荧光显微镜下观察转染效率,实时荧光定量PCR法检测转染48 h后,T24细胞中miR-34a的表达情况,MTT法检测转染24、48和72 h后T24细胞的增殖情况,实时荧光定量PCR法和western blot方法检测转染48 h后膀胱癌细胞内源性HMGB1 mRNA及蛋白的表达变化.结果 miR-34a的模拟物转染至T24细胞的效率为80％,转染miR-34a模拟物48 h后,T24细胞内miR-34a的表达显著升高(P＜0.05),T24细胞的增殖率显著低于阴性对照组(P＜0.05),且呈时间依赖性,HMGB1 mRNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组(P＜0.05).结论 miR-34a抑制膀胱癌T24细胞增殖可能与靶向HMGB1基因相关.
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pp242对膀胱癌T24细胞增殖及侵袭能力的影响
目的 探讨pp242对膀胱癌T24细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 将T24细胞贴壁培养于10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素的1640培养液中,37 ℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养.取对数生长期细胞,处理组加入浓度为50、100、200、500 nM pp242;对照组不加药物,每天更换1640 培养液.采用CCK-8法检测各组细胞生长抑制率、transwell小室法检测细胞体外侵袭能力的变化.结果 pp242对T24细胞有显著的增殖抑制作用,transwell法检测pp242处理后的T24体外侵袭能力明显下降,均呈剂量依赖性.结论 pp242对膀胱癌T24细胞具有抑制增殖和侵袭能力的作用,有望成为一种新的膀胱癌治疗药物.
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姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用
目的 本研究旨在探讨姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖的影响.方法 培养人膀胱癌T24细胞,施加不同浓度姜黄素(10,50,100,250,500μM),观察对细胞增殖的影响.应用四唑盐比色法(MTT法)观察细胞增殖抑制情况;应用彩色图像分析系统观察细胞形态学特征(HE染色).结果 姜黄素各组较对照组增殖降低;姜黄素各组,存在剂量-效应关系(10～500μM)和时间-效应关系(12h,24h,48h,72h).结论 姜黄素抑制人膀胱癌T24细胞增殖.
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雷帕霉素对膀胱癌T24细胞增殖及侵袭能力的影响
目的 探讨雷帕霉素对膀胱癌T24细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 将T24细胞贴壁培养于10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100μg/ml链霉素的RPMI 1640培养液中,37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养.取对数生长期细胞,随机分为处理组(加入浓度为10-1000 nmol/L的雷帕霉素)和对照组(不加药物),每天更换RPMI 1640培养液.采用MTT法检测各组细胞生长抑制率,transwell小室法检测细胞体外侵袭能力的变化.结果 雷帕霉素对T24细胞有增殖抑制作用,呈剂量依赖关系.transwell法检测结果显示,雷帕霉素处理后的T24细胞体外侵袭能力明显下降,与雷帕霉素呈剂量依赖性.结论 雷帕霉素具有抑制膀胱癌T24细胞增殖和侵袭能力的作用.
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Survivin基因沉默对膀胱癌T24细胞增殖及对塞来昔布敏感性的影响
目的：研究Survivin基因沉默对人膀胱癌T24细胞增殖和对化疗药物塞来昔布敏感性的影响。方法设计合成 Survivin的 siRNA序列，Lipofectamine TM 2000转染入T24细胞。采用RT-PCR和Western印迹检测Survivin在干扰后mRNA和蛋白的表达情况，利用流式细胞仪检测细胞周期。通过MTT法和细胞克隆形成试验法察Survivin基因沉默后T24细胞对塞来昔布的敏感性。结果 Survivin基因沉默48 h后，T24细胞的Survivin基因和蛋白表达明显降低（P＜0.05）。细胞周期被阻滞在G0/G1期，S期细胞数减少。塞来昔布的敏感性显著性增强。结论 Survivin特异性siRNA能显著沉默T24细胞Survivin基因表达，抑制细胞增殖，并增强T24细胞对塞来昔布的敏感性。
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人核糖核苷酸酶抑制因子表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化的影响
目的 探讨人核糖核苷酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 干涉质粒pGensil-1-RI稳定转染T24细胞,经G418筛选阳性克隆,并设实验组、空质粒对照组及未转染对照组,RT-PCR检测各组细胞中RI基因mRNA的转录水平、细胞免疫荧光和Western blot检测RI蛋白的表达水平；HE染色检测细胞形态的变化；Western blot检测各组细胞中E-cadherin、Twist、Slug和Vimentin等相关蛋白表达水平；将3组细胞注入BALB/c裸鼠皮下,35 d后取瘤并称重；免疫组织化学检测瘤组织中RI、E-cadheiin和Vimentin蛋白的表达水平.结果 荧光显微镜下观察可见,干涉质粒pGensil-1-RI转染成功；实验组RI基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平较两对照组分别降低了63.31％和64.11％、49.6％和49.5％(P＜0.001);实验组细胞呈梭形,核质比增大；与实验相比,两对照组E-cadhein蛋白表达水平分别增加52.76％和46.93％(P＜0.001),而Twist、Slug和Vimentin蛋白分别降低了50.49％和54.63％、43.74％和51.55％、60.35％和53.77％(P＜0.001)；两对照组的瘤重明显低于实验组,分别低84.91％和80.89％(P＜0.01),其RI和E-cadherin蛋白表达水平降低,而Vimentin蛋白表达水平则增加.结论 沉默RI基因能明显增加T24细胞的转移、侵袭及EMT的能力.
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慢病毒介导NDRG2基因过表达抑制人膀胱癌T24细胞的侵袭和迁移
目的:观察N-Myc下游调节基因-2(N-Myc downstream-regulated gene 2,NDRG2)过表达对人膀胱癌T24细胞体外侵袭和迁移的影响.方法:采用携带NDRG2基因的慢病毒Lenti-NDRG2感染T24细胞,构建稳定过表达NDRG2的细胞株.Western blotting检测T24细胞中NDRG2、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2和MMP-9的表达,Transwell体外迁移和侵袭实验观察过表达NDRG2对T24细胞体外迁移和侵袭的影响.结果:建立了稳定过表达NDRG2的T24细胞株.与Lenti-Lacz组和空白对照组相比,Lenti-NDRG2组NDRG2蛋白的表达[(30.1±1.27)vs(9.9±1.24)、(8.2±1.28),P＜0.01]明显提高；Lenti-NDRG2组MMP-2[(13.5 ±1.32) vs (30.7±1.29)、(28.8±1.30),均P＜0.01]和MMP-9[(11.7±1.27)vs(25.2±1.28)、(26.4±1.31),均P＜0.01]的表达明显降低；Lenti-NDRG2组T24细胞的侵袭细胞数[(18.1±3.4)vs (88.5 ±4.2)、(90.2±4.1)个,均P＜0.01]和迁移细胞数[(20.1±3.5)vs(109.4±5.6)、(113.0±4.9)个,均P＜0.01]明显减少.结论:慢病毒介导的NDRG2基因过表达可能通过降低MMP-2和MMP-9的表达而抑制人膀胱癌T24细胞的转移与侵袭.
关键词： 膀胱癌 T24细胞 N-myc下游调节基因-2 侵袭 迁移
