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熊果酸对膀胱癌5637细胞的作用研究
目的 观察熊果酸对高危浅表性膀胱癌5637细胞株的体外作用,为熊果酸用于膀胱癌治疗提供依据.方法 体外常规培养5637细胞,取对数生长期细胞随机分为两组.实验组加入质量浓度为10、50、100、200 ug/mL的熊果酸分别处理24h、48h;对照组不加熊果酸.采用MTT法检测各组细胞生长抑制率;流式细胞仪检测凋亡率;western-bolt法检测survivin因子蛋白表达.结果 熊果酸对5637细胞有明显的抑制增殖的作用,并对其有诱导凋亡的作用.结论 10～200ug/mL熊果酸可有效抑制5637细胞增殖(P＜0.05),抑制作用呈时间-剂量依赖性.作用48h时200ug/mL的抑制率为47.38±4.69%,凋亡率为45.20±1.32%,与对照组比较,P均＜0.01;survivin因子蛋白表达随药物浓度增高而下降.
关键词： 熊果酸 5637细胞 增殖 凋亡 survivin因子 -
羟基喜树碱对3种人膀胱癌细胞体外生长作用的实验研究
目的 探讨不同浓度的羟基喜树碱(HPT)对3种人膀胱癌细胞(EJ细胞、T24细胞及5637细胞)体外生长的抑制作用.方法 通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度HPT对EJ细胞、T24细胞、5637细胞体外生长的抑制率,从而筛选出能够抑制多种膀胱癌细胞体外生长的药物浓度.结果 当加入的HPT浓度≥5ng/ml时,实验组3种膀胱细胞的OD值低于对照组,且呈剂量递减;生长抑制率高于对照组,且呈剂量逆增,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 HPT浓度在≥5ng/ml时对3种膀胱癌细胞体外生长有较好的抑制作用.
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mTOR在5637细胞中的表达与增殖及侵袭能力的关系
目的 探讨mTOR在膀胱癌5637细胞中的表达及西罗莫司对5637细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 将5637细胞贴壁培养于10％胎牛血清、100 U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的RPMI-1640培养液中,37℃、5％CO2饱和湿度培养箱中培养.取对数生长期细胞,处理组加入浓度分别为10nmol/L,100nmol/L,1000nmol/L西罗莫司;对照组不加药物,每天更换1640培养液.MTT法检测各组细胞生长抑制率,Transwell法检测5637细胞的体外侵袭能力,Real-time PCR法检测mTOR在5637细胞中的表达.结果 西罗莫司对5637细胞有增殖抑制作用,呈剂量依赖关系.西罗莫司处理后的5637体外侵袭能力明显下降,呈剂量依赖性.西罗莫司处理组的mTOR表达量明显下降,与增殖和侵袭能力下降相关.结论 西罗莫司抑制膀胱癌5637细胞增殖和侵袭能力与抑制mTOR表达相关.
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雷帕霉素对膀胱癌5637细胞增殖及细胞周期的影响
目的：探讨雷帕霉素对膀胱癌5637细胞增殖能力和细胞周期的影响。方法5637细胞贴壁培养于含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的RPMI 1640培养液中，37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养。处理组加入50、100、200和400 nmol/L的雷帕霉素，对照组不加药物，每天更换RPMI 1640培养液。MTT法检测处理组的生长抑制率，流式细胞术检测不同浓度的雷帕霉素对5637细胞增殖周期的影响。结果与对照组相比，雷帕霉素对5637细胞有明显抑制作用，呈浓度依赖性和时间依赖性。雷帕霉素可以将5637细胞周期阻滞在G0/G1期，从而抑制细胞的增殖，且未见明显的凋亡情况。结论雷帕霉素使5637细胞阻滞在G0/G1期，抑制了膀胱癌5637细胞的增殖，说明雷帕霉素的作用靶点参与了5637的增殖过程，其有望成为膀胱癌治疗的新靶点。
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盐霉素对人膀胱癌5637细胞的生长抑制作用
目的：探讨盐霉素对人膀胱癌5637细胞生长、凋亡和侵袭力的影响，阐明其可能的作用机制。方法：取体外培养的对数生长期人膀胱癌5637细胞，分为空白对照组和不同剂量（15、30和60μmol·L-1）盐霉素组。MTT比色法检测各组人膀胱癌5637细胞的生长抑制率，流式细胞术检测各组人膀胱癌5637细胞的细胞凋亡率，Matrigel侵袭实验检测各组人膀胱癌5637细胞的侵袭能力，Western蛋白印迹实验检测各组人膀胱癌5637细胞中 Wnt／β-catenin途径β-catenin蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较，各剂量盐霉素组膀胱癌5637细胞的生长抑制率明显升高（P＜0.05），细胞凋亡率明显升高（P＜0.05），细胞穿膜数目减少（P＜0.05），β-catenin蛋白表达水平减少（P＜0.05）。与低剂量（15μmol·L-1）盐霉素组比较，高剂量（60μmol·L-1）盐霉组人膀胱癌5637细胞生长抑制率升高（P＜0.05），细胞凋亡率升高（P＜0.05），细胞穿膜数目减少（P＜0.05），β-catenin蛋白表达量减少（P＜0.05）。结论：盐霉素对人膀胱癌5637细胞的生长有较明显抑制作用，促进细胞凋亡，降低细胞侵袭力，并且这种抑制作用可能是通过抑制 Wnt／β-catenin信号传导途径来实现的。
关键词： 盐霉素 膀胱肿瘤 5637细胞 Wnt/β-catenin信号传导途径 -
miR-372-3p在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响
目的:检测miR-372-3p在膀胱癌组织和转染miR-372-3p mimics膀胱癌细胞中的表达,研究miR-372-3p对膀胱癌5637和T24细胞增殖、迁移与侵袭的影响.方法:采集2016年3月至2017年1月武汉中心医院收治的6例膀胱癌患者癌及癌旁组织(距离肿瘤边缘＞5 cm),qPCR检测膀胱癌及癌旁组织miR-372-3p表达.采用脂质体转染法将miR-372-3p mimics或者miR-NC转入膀胱癌5637和T24细胞.用qPCR和Western blotting检测转染miR-372-3p mimics和miR-NC膀胱癌细胞miR-372-3p和ATAD2 mRNA和蛋白E-cadherin、N-cadherin蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期分布,MTT法和集落形成实验检测细胞增殖和集落形成能力,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力.结果:膀胱癌组织miR-372-3pmRNA的表达显著低于癌旁组织(0.65±0.56 vs 1.76-0.34,P＜O.01).和转染miR-NC膀胱癌细胞相比,转染miR-372-3p mimics膀胱癌细胞的miR-372-3pmRNA表达显著增加,ATAD2 mRNA和蛋白的表达显著降低,E-cadherin蛋白表达上调,N-cadherin蛋白表达下调,细胞周期明显阻滞,细胞集落形成和增殖能力显著降低,细胞迁移数和侵袭数减少.结论:miR-372-3p的低表达可能与膀胱癌的发生发展有关,其通过靶向调控ATAD2抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能成为膀胱癌生物治疗的新靶标.
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Bcl-w对膀胱肿瘤细胞5637增殖、顺铂敏感性的影响
[目的]探讨过表达的Bcl-w蛋白对膀胱肿瘤细胞5637的增殖能力、顺铂敏感性的影响.[方法]采用质粒pcDNA3.1(+)构建Bcl-w过表达载体,转染5637细胞后用Westernblot验证过表达效果,用CCK-8、平板克隆形成实验、流式细胞仪检测pcDNA3.1-Bcl-w细胞和对照组细胞的增殖和生存曲线、克隆形成能力、细胞周期.[结果]成功构建pcDNA3.1-Bcl-w重组质粒并转染5637细胞.pcDNA3.1-Bcl-w细胞增殖曲线在24、48、72h均高于对照组(0.814±0.022 vs 0.727±0.017,P=0.006; 1.259±0.017vs1.078±0.027,P=0.001; 1.787±0.024 vs1.520±0.021,P＜0.001),差异具有统计学意义;克隆形成能力高于对照组(60.67±6.03 vs48.67±6.11,P＜0.001),差异具有统计学意义;处于GdG1期的比例低于对照组(50.76％vs57.02％,P＜0.001),差异具有统计学意义;在30、50、70、90、110μmol/L各浓度顺铂处理下生存曲线高于对照组[(83.8％±1.7％)vs(93.9％±1.2％),P＜0.001;(59.5％±0.7％)vs(72.5％±1.9％),P=0.028:(50.5％±2.2％)vs(57.2％±1.2％),P=0.007;(37.2％±0.7％)vs(45.7％±1.4％),P＜0.001;(29.1％±0.5％)vs(33.2％±0.6％),P＜0.001],差异具有统计学意义.[结论]高表达的Bcl-w增强了膀胱癌细胞5637的增殖能力,削弱了肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性.
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桔梗皂苷D对人移行细胞癌5637细胞株的诱导凋亡作用及其分子机制
目的 探讨桔梗皂苷D对人移行细胞癌5637细胞诱导凋亡作用及分子机制.方法 HE染色和透射电子显微镜观察细胞的形态学变化;流式细胞学技术检测细胞凋亡率的变化;Western blot法检测凋亡通路相关蛋白的表达变化;PCR法检测p53、Bcl-2、Bax mRNA表达;免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白表达的影响.结果 通过HE染色和电子显微镜观察桔梗皂苷D组5637细胞,可见凋亡细胞,凋亡指数明显高于对照组(P＜0.01);与对照组细胞相比,桔梗皂苷D组5637细胞Survivin、Livin表达量明显下降(P＜0.05);Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3、Cyt-c表达量与对照组比较,明显增加(P＜0.05);p53、Bax mRNA水平明显升高,Bcl-2mRNA表达下降(P.＜0.01);Bax、Caspase-9、Caspase-8以及Caspase-3表达较对照组增多,而Bcl-2表达则明显下降(P＜0.01).结论 桔梗皂苷D能诱导人移行细胞癌5637细胞凋亡,其作用机制可能与上调Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3、Cyt-c、p53和下调Bcl-2表达、激活线粒体途径和死亡受体途径有关.
