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特异性ILK siRNA对膀胱癌EJ细胞EMT及移植瘤生长的影响
目的 研究整合素连接激酶(ILK)特异siRNA沉默ILK基因对膀胱癌EJ细胞上皮间质转化(EMT)及移植瘤生长的影响.方法 用特异性ILK siRNA表达载体pGensil-1 siRNA1质粒和对照质粒pGensil-l siRNA3稳定转染EJ细胞,实验分为EJ siRNA组、EJ vector组和EJ细胞组;激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架;Western blot检测p-AKT、p-GSK-3β蛋白的表达;细胞免疫荧光检测p-AKT 、p-GSK-3β的表达;用免疫荧光检测整合素连接激酶和核糖核酸酶抑制因子在EJ细胞中的共定位;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;建立裸鼠移植瘤模型,肿瘤和肺组织切片HE染色,免疫组化检测瘤组织中1LK、RI、NM23-H1和E-cadherin蛋白的表达;免疫荧光检测p-AKT 、p-GSK-3β和CD31蛋白的表达.结果 EJ siRNA组细胞运动能力减弱;EJ siRNA组p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达明显降低(P ＜0.05);MTT法结果提示实验组细胞增殖明显受到抑制;下调ILK通过阻滞G0/G1期抑制细胞增殖;下i调ILK抑制膀胱癌EJ细胞移植瘤生长转移.结论 特异性ILK siRNA可以改变EJ细胞特性,抑制EMT的发生,引起增殖侵袭能力下降.
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CD44RNAi对EJ细胞增殖、迁移及其与特异性单抗结合力的影响
目的 研究EJ细胞中CD44小RNA干扰后细胞增殖、迁移功能以及其与特异性单抗KMP1结合力的改变.方法 小RNA干扰的方法抑制EJ细胞中CD44表达,Western blot和流式细胞仪检测EJ细胞与CD44特异性单抗KMP1的结合功能变化,细胞划痕实验和Boyden小室检测shCD44-EJ细胞的迁移功能,[3H]掺入法检测shCD44-EJ细胞的增殖能力.结果 shCD44-EJ细胞与KMP1的结合能力下降,CD44的表达量也降低,Wide type组和shCD44-EJ组的迁移到划痕中央的细胞数分别为257 ±32个和132±29个,shCD44-EJ组和Vector组细胞迁移到膜中和下室中的平均细胞数为356±13和672±17个,显示shCD44-EJ细胞的迁移能力较Wide type组和Vector组分别降低52％和53％,shCD44-EJ细胞的增殖活性是Vector组的73％.结论 特异性沉默CD44可降低EJ细胞与其特异性单抗KMP1的结合功能,并抑制EJ细胞的迁移和增殖能力.
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Smac基因联合12C6+离子照射对膀胱癌EJ细胞的生物效应观察
目的 观察smac基因能否提高膀胱癌EJ细胞12C6+离子照射的生物效应.方法 实验分为3组:空白对照组、转染空载体组、转染smac基因组.利用免疫组化及流式细胞仪方法检测3组细胞内smac基因表达.转染24 h后对3组分别进行0、2和4 Gy 12C6+离子照射,用克隆形成实验对3个组分别检测细胞的存活分数并利用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 免疫组化结果表明转染pcDNA3.1/smac的细胞其smac基因表达量明显高于转染空载体pcDNA3.1的细胞和空白组细胞.流式细胞仪数据显示,smac基因转染细胞smac基因的荧光强度(3080)显著高于转染空载体组(2256)(P＜0.05),而后者与空白对照组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).克隆形成实验结果表明,转染smac基因组细胞12C6+离子照射后的存活分数较转染空载体组细胞显著降低(P＜0.05).流式细胞仪测定结果表明,12C6+离子照射的转染smac基因组的细胞凋亡率明显高于转染空载体组(P＜0.05).结论 外源smac基因转染膀胱癌细胞株能显示高表达,并能提高膀胱癌细胞的凋亡率,与12C6+离子照射结合后能显著降低细胞存活分数和进一步增高凋亡率.
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斑蝥酸钠对体外培养的EJ细胞的实验研究
目的 观察斑蝥酸钠对体外培养的人膀胱癌系EJ细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 EJ细胞贴壁后分为对照组、1组、2组、3组、4组、5组,分别给予0、0.5、1、5、10、15 g/L浓度斑蝥酸钠处理,24 h后采用流式细胞仪检测细胞周期情况,CCK-8法检测斑蝥酸钠对EJ细胞增值抑制的影响,荧光倒置显微镜下观察细胞的凋亡情况,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况.结果 以0.5、1、5、10、15 mg/L 5个浓度的斑蝥酸钠作用于EJ细胞24 h,EJ细胞的增殖出现不同程度的抑制,且与药物浓度成正相关.1、2、3、4、5组抑制率与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).对照组S期细胞比例为8.94％,G2/M期为4.16％,G0/G1期为86.91％,与1、2、3、4、5组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).使用斑蝥酸钠作用EJ细胞24h后,电泳出现凋亡特有的阶梯状条带,随着药物浓度的增加,凋亡带增多,而对照组则没有出现凋亡带.荧光显微镜下,对照组未出现凋亡小体,加入斑蝥酸钠的药物组有凋亡小体出现,0.5、5g/L斑蝥酸钠药物组凋亡细胞数较少,15 g/L斑蝥酸钠药物组凋亡细胞数较多.结论 斑蝥酸钠对体外培养EJ细胞增殖有显著的抑制作用,诱导EJ细胞凋亡.
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膀胱癌EJ细胞的CD44异常糖基化及其单抗KMP1的生物学功能研究
目的:研究EJ细胞单抗KMP1的结合抗原CD44的变化和KMP1对EJ细胞生物学功能的影响.方法:采用人膀胱癌EJ细胞株免疫BALB/c小鼠,获得单抗KMP1,免疫荧光检测KMP1的亲和性、结合部位及效价.流式细胞检测KMP1对膀胱癌细胞的特异性.免疫组化检测对膀胱癌组织的特异性.亲和层析分离纯化特异性抗原,检测抗原的氨基酸序列.糖基转化酶抑制剂和过碘酸氧化后分析抗原决定簇的理化性质改变.软琼脂培养克隆形成实验和细胞划痕实验检测KMP1对EJ细胞株的增殖和迁移功能的影响.结果:获得的单抗KMP1是IgG1,能与EJ、BIU-87、T24膀胱癌细胞和膀胱癌组织特异性结合,而与Lovo、HeLa、K562、HepG2、Jurkat、293、HCV29、人的红细胞和白细胞无结合性,也不能结合正常膀胱黏膜.其结合EJ细胞的抗原是异常糖基化的CD44,糖基转化酶抑制剂BG作用EJ细胞7d,KMP1对EJ细胞结合性降低,过碘酸氧化后Westernblot显示KMP1对CD44结合性降低,软琼脂培养克隆形成实验和细胞划痕实验结果示KMP1还能减弱EJ细胞的增殖和迁移功能.结论:膀胱癌的高复发性、易转移可能与出现异常糖基化的CD44高表达具有一定的相关性,KMP1可结合异常糖基化的CD44,并抑制EJ细胞的增殖和迁移.
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羟基喜树碱对3种人膀胱癌细胞体外生长作用的实验研究
目的 探讨不同浓度的羟基喜树碱(HPT)对3种人膀胱癌细胞(EJ细胞、T24细胞及5637细胞)体外生长的抑制作用.方法 通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度HPT对EJ细胞、T24细胞、5637细胞体外生长的抑制率,从而筛选出能够抑制多种膀胱癌细胞体外生长的药物浓度.结果 当加入的HPT浓度≥5ng/ml时,实验组3种膀胱细胞的OD值低于对照组,且呈剂量递减;生长抑制率高于对照组,且呈剂量逆增,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 HPT浓度在≥5ng/ml时对3种膀胱癌细胞体外生长有较好的抑制作用.
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Genistein对EJ细胞增殖抑制作用的研究
目的:观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂Genistein对膀胱癌EJ细胞增殖的抑制作用.方法:以不同浓度的Genistein作用EJ细胞,采用MTT法检测细胞的增殖程度;原位凋亡细胞检测技术和流式细胞仪检测Genistein对EJ细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:Genistein引起EJ细胞增殖比明显下降,其程度随Genistein浓度增高而增强;Genistein促进EJ细胞的凋亡,使细胞阻滞于G2/M期.结论:Genistein对EJ细胞的增殖有抑制作用,可以诱导EJ细胞的凋亡.
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LncRNA RP11-79H23.3在膀胱癌细胞中 的作用及其发生、发展的研究
背景与目的:虽然许多长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)的异常表达与膀胱癌的发生有密切关系,但对于lncRNA RP11-79H23.3暂未见报道.该研究旨在探讨lncRNA RP11-79H23.3在膀胱癌EJ细胞中的作用及其发生、发展的机制.方法:采用微阵列方法对4对膀胱癌患者的癌和癌旁组织进行组学分析,随后用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测膀胱癌组织、癌旁组织及正常人膀胱上皮细胞sv-HUC-1、膀胱癌EJ细胞中RP11-79H23.3的表达.通过转染pIRES2-RP11-79H23.3上调该基因后,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和EdU的方法检测EJ细胞的增殖活性,通过Transwell小室和平板划痕实验分别检测EJ细胞的侵袭和迁移能力,应用流式细胞术、Hoechst33342及Tunel检测细胞凋亡,应用细胞免疫荧光检测PTEN在膀胱癌细胞中的定位,采用鬼笔环肽染色观察细胞骨架形成,应用蛋白[质]印迹法(Western blot)分析过表达RP11-79H23.3后EJ细胞中PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达情况.结果:LncRNA RP11-79H23.3在膀胱癌组织和膀胱癌EJ细胞中表达下调(P<0.001,P<0.01),pIRES2-RP11-79H23.3转染EJ细胞结果显示,RP11-79H23.3的表达量较转染前显著增加(P<0.01).上调RP11-79H23.3的表达可诱导膀胱癌EJ细胞的凋亡,相反,转染pIRES2-EGFP可促进EJ细胞的增殖、侵袭和迁移能力,同时,Western blot结果显示,转染pIRES2-RP11-79H23.3后可上调PTEN在EJ细胞中的表达,下调p-PI3K、p-AKT及p-Gsk3β蛋白的表达(P<0.05).结论:LncRNA RP11-79H23.3在膀胱癌组织和膀胱癌EJ细胞中低表达(P<0.001,P<0.01),并且过表达RP11-79H23.3会降低膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关.提示lncRNA RP11-79H23.3在膀胱癌恶性肿瘤中发挥重要的作用,可能会成为治疗膀胱癌的药物作用靶点.
关键词： 膀胱癌 长链非编码RNA RP11-79H23.3 EJ细胞 -
慢病毒介导的p21/Waf1基因沉默增强膀胱癌特异性溶瘤腺病毒的复制及对EJ细胞增殖的抑制作用
目的:沉默人膀胱癌EJ细胞中p21/Waf1基因的表达,并探讨p21/Waf1表达下调对膀胱癌特异性溶瘤腺病毒复制及对EJ细胞增殖的影响.方法:设计并合成特异性针对p21/ Waf1基因的shRNA,插入含绿色荧光蛋白(green f1uorescent protein,GFP)编码基因的pMagic 7.1载体,构建p21/Waf1-shRNA重组慢病毒质粒pLVT1051,并进行PCR和测序鉴定.将pLVT1051、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三种质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒.将携带有p21/Waf1-shRNA的慢病毒感染EJ细胞,采用嘌呤霉素筛选p21/Waf1-shRNA稳定转入的EJ细胞,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测p21/Waf1-shRNA稳定感染后EJ细胞中p21/waf1 mRNA和蛋白的表达水平.将膀胱癌特异性溶瘤腺病毒Ad/PSCAE/UP Ⅱ /E1A感染p21/waf1基因沉默的EJ细胞,采用蛋白质印迹法检测病毒复制相关指标E1A和Hexon蛋白的表达水平,MTT法检测腺病毒Ad/PSCAE/UP Ⅱ/E1A对EJ细胞增殖的影响.结果:成功构建了携带有p21/Waf1-shRNA的重组慢病毒表达载体并获得相应的慢病毒;经嘌呤霉素筛选2周后成功获得稳定感染的EJ细胞.p21/Waf1-shRNA能明显降低EJ细胞中p21/Waf1 mRNA及蛋白的表达水平,差异均有统计学意义(P值均＜ 0.05).膀胱癌特异性溶瘤腺病毒(Ad/PSCAE/UP Ⅱ/E1A)作用于p21/waf1基因沉默的EJ细胞后,其病毒复制相关指标E1A和Hexon的表达水平明显上调,对EJ细胞的增殖抑制作用明显增强(P＜0.01).结论:成功建立了P21/Waf1基因沉默表达的EJ细胞,沉默p21/Waf1基因的表达能增强膀胱癌特异性溶瘤腺病毒的复制能力,并对EJ细胞的增殖有明显的抑制作用.
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苦参碱对人膀胱癌EJ细胞株凋亡的影响及机制
目的 为苦参碱用于膀胱癌治疗提供依据.方法 将EJ细胞贴壁培养于10%胎牛血清、10万U/L青霉素、100 mg/L链霉素的1640培养液中,37 ℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养,取对数生长期细胞随机分为两组,苦参碱组加入质量浓度为0.5、1.0、2.0 mg/ml的苦参碱;对照组不加苦参碱,每天更换RPMI1640 培养液.采用MTT法检测各组细胞生长抑制率;荧光显微镜观察EJ细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;并对凋亡相关Bcl-2蛋白表达进行检测.结果 0.5～2.0 mg/ml苦参碱可有效抑制EJ细胞增殖,抑制作用呈时间-剂量依赖性,作用72 h时2.0 mg/ml的抑制率为50.65%±2.78%,凋亡率为36.35%±2.06%,与对照组比较,P均＜0.01;荧光显微镜下可观察到细胞内空泡与核碎裂现象;Bcl-2蛋白表达随药物浓度增高和作用时间延长而下降.结论 苦参碱能诱导EJ细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关.
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芸香对人膀胱癌EJ细胞体外作用的研究
目的:探讨芸香对人膀胱癌EJ细胞的作用.方法:MTT法检测EJ细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期改变和免疫组化SP法检测Ki-67蛋白表达的变化.结果:芸香浓度为30、60、90 μmol/ml时,EJ细胞的生长受到不同程度的抑制,且具有时间和浓度依赖性.EJ细胞经不同浓度的芸香作用24 h后G0/G1期细胞比率明显下降,而G2/M期比率明显上升.EJ细胞Ki-67的阳性率随芸香浓度的增高而下降(P＜0.05).结论:芸香能抑制癌细胞的生长增殖.其机制可能通过诱导癌细胞周期阻滞于G2/M期、下调Ki-67表达有关.
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人膀胱癌EJ细胞株CD44基因的小RNA干扰抑制细胞侵袭功能
目的 研究人膀胱癌EJ细胞株中CD44基因小RNA干扰后细胞侵袭功能的变化.方法 小RNA干扰的方法 抑制EJ细胞中CD44基因表达,细胞划痕实验和Boyden小室研究shCD44-EJ细胞的侵袭功能改变.结果 流式细胞学检测显示shCD44-EJ细胞与CD44的单克隆抗体的结合性下降,Western blot检测CD44蛋白的表达量减少,细胞划痕实验和Boyden小室研究结果 显示shCD44-EJ细胞的侵袭能力降低约50%.结论 特异性沉默CD44可抑制EJ细胞的侵袭能力.
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苦参素对人膀胱癌EJ细胞抑制作用研究
目的 探讨苦参素对人膀胱癌EJ细胞的抑制作用及可能机制.方法 MTT法检测EJ细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测EJ细胞周期改变,免疫组化检测EJ细胞Ki-67表达.结果 2.5 mg·mL-1苦参素作用24和72 h对EJ细胞的生长抑制率分别为(15.12±2.10)%和(52.61±7.02)%;浓度为10 mg·mL-1时24和72 h抑制率分别为(42.42±7.30)%和(88.52±10.93)%.随着苦参素浓度的增加,G0/G1期和S期EJ细胞所占比例逐渐上升,G2/M期细胞所占比例逐渐下降,且Ki-67的表达下降.结论 苦参素能通过诱导人膀胱癌EJ细胞周期阻滞于G0/G1和S期,下调Ki-67的表达来抑制癌细胞的生长增殖.
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60Coγ-射线诱导人膀胱癌EJ细胞中磷酸化组蛋白H2AX焦点形成
目的 探讨60Coγ-射线是否可在人膀胱癌EJ细胞中诱导磷酸化组蛋白H2AX焦点形成以及形成的焦点数量与照射剂量及照射后时间的关系.方法 免疫印迹法和流式细胞分析法用于检测不同剂量60Coγ-射线照射后EJ细胞中γH2AX蛋白表达的变化;免疫荧光法检测不同剂量照射后以及2 Gy照射后不同时间EJ细胞中γH2AX焦点的数量.结果 γ射线照射后γH2AX蛋白表达明显增加,但量效关系不明显;免疫荧光法可检测γH2AX焦点形成的数量和大小,并且存在剂量-效应关系及有时间依赖性,随着照射剂量的增加,γH2AX焦点数目及大小均明显增加,照射的剂量范围从0.1～4.0 Gy均可检测,照射后24 h仍可检测到γH2AX焦点,但焦点数随时间延长而减少、减弱. 结论 免疫荧光法检测照射后γH2AX焦点数目可敏感、直观地反映DNA损伤及修复情况,有望成为辐射检测及辐射致癌的好的生物指标.
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姜黄素对膀胱癌EJ细胞的作用研究
目的:观察姜黄素对膀胱癌系细胞EJ的体外作用,并探讨其可能的作用机制.方法:应用光镜形态学,MTT法、流式细胞仪和免疫细胞化学法观察了5、10、20 mg/L姜黄素在体外对膀胱癌EJ细胞的生长抑制和诱导凋亡作用,以及对细胞DNA含量,对NF-κB、Cyclin D1表达的影响.结果:所有浓度组姜黄素均对膀胱癌EJ细胞有明显的生长抑制作用,抑制率≥(27.5±3.1)%(P＜0.05).10 mg/L以上浓度均可出现显著的诱导调亡作用,凋亡率≥4.6%±1.8%(P＜0.05),下调NF-κΒ(表达率≤35.8%±4.2%,P＜0.05),下调Cyclin D1的表达(表达率≤29.7%±3.2%,P＜0.05).姜黄素导致的细胞周期阻滞以G1期为主,使S期细胞比例显著减少(P＜0.05).结论:姜黄素对膀胱癌细胞系EJ有明显的生长抑制和诱导凋亡作用,其作用机制与其影响细胞周期和下调NF-κB、Cyclin D1的表达相关,显示了姜黄素用于治疗膀胱癌的可能性.
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尼美舒利联合表阿霉素对人膀胱癌EJ细胞的体外作用
目的:探讨尼美舒利对人膀胱癌EJ细胞的体外作用及其与表阿霉素的协同抗肿瘤作用.方法:通过MTT法检测尼美舒利及其与表阿霉素联合对EJ细胞的生长抑制作用.流式细胞仪Annexin V-FITC/PI荧光染色法检测EJ细胞在尼美舒利作用下的凋亡率,免疫组化sP法检测尼美舒利时EJ细胞中Bcl-2和Bax表达的影响.结果:40 μmol/L尼美舒利作用24、48、72 h细胞生长抑制率分别为15.18%、30.79%和43.50%;浓度360 μmol/L时,抑制率分别升为50.45%、70.98%和88.67%.单用表阿霉素(0.2 mg/L)作用48 h抑制率为25.51%:合用40、120、400 μmol/L尼美舒利抑制率升为58.52%、69.38%和80.30%.40、120、400 μmol/L的尼美舒利作用12 h时细胞的凋亡率为2.41%、8.27%和15.05%,作用36 h时凋亡率分别升为13.32%、27.60%和42.48%.随着尼美舒利浓度增加,EJ细胞中Bcl-2表达下调,Bax的表达上调(P<0.05).结论:尼美舒利可能通过下调Bcl-2表达和上调Bax表达来抑制人膀胱癌EJ细胞的增殖并诱导其凋亡,与表阿霉素具有协同作用.
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单抗KMP1的体内抑制膀胱癌EJ细胞株成瘤的动物实验
目的 研究膀胱癌单抗KMP1的体内抑制EJ细胞成瘤功能.方法 免疫组化鉴定单抗KMP1与EJ 、EJ-GFP的结合性,荧光活体成像观察KMP1的抑制EJ-GFP裸鼠移植瘤的生长状况,免疫组化和HE染色鉴定移植瘤的肿瘤特征.结果 EJ和EJ-GFP细胞成瘤功能的生长曲线近似,EJ-GFP呈现良好的绿色荧光,EJ和EJ-GFP细胞都能与KMP1结合,且KMP1治疗组移植瘤重量明显低于mIgG对照组(P＜0.001).结论 KMP1能良好的抑制EJ-GFP细胞在裸鼠体内移植瘤生长,KMP1能抑制膀胱癌EJ细胞株体内移植瘤,是一种可能的靶向治疗药物.
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Bmi-1shRNA抑制膀胱癌EJ细胞侵袭和转移的实验研究
目的:研究Bmi-1基因沉默对膀胱癌EJ细胞侵袭和转移的影响.方法:用细胞划痕实验和Transwell侵袭实验观察Bmi-1 shRNA对膀胱癌EJ细胞侵袭和转移的影响.用RT-PCR方法检测Bmi-1 shRNA对MMP-2 mRNA表达的影响.用Westem Blotting方法检测Bmi-1 shRNA对E-Cadherin和α-SMA表达的影响.结果:Transwell侵袭实验结果显示实验组细胞的穿膜细胞数为(77.0 ±4.8)个,未转染组细胞的穿膜细胞数为(152.1 ±4.3)个,空质粒组细胞的穿膜细胞数为(155.0 ±6.5)个.细胞划痕实验结果显示实验组细胞迁移能力明显降低.RT-PCR结果显示,与不加TGF-β组相比,TGF-β作用后,未转染组和空质粒组中MMP-2表达明显升高,而Bmi-1 shRNA组MMP-2表达没有变化.Western结果显示,与不加TGF-β组相比,TGF-β作用后,未转染组和空质粒组中E-Cadherin表达明显降低和α-SMA表达明显升高,而Bmi-1 shRNA组E-Cadherin和α-SMA表达没有变化.结论:Bmi-1 shRNA可以抑制膀胱癌EJ细胞侵袭和转移,其机制可能是通过阻断TGF-β促进肿瘤细胞侵袭和转移作用完成的.
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Genistein对bFGF诱导的EJ细胞增殖的抑制作用
目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人膀胱癌细胞株EJ细胞的增殖作用;以及酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂Genistein对bFGF诱导的EJ细胞增殖的抑制作用.方法:以不同浓度的bFGF刺激EJ细胞,再对由bFGF引起的细胞增殖施加不同浓度的Genistein;以MTT法检测细胞的增殖程度,原位凋亡细胞检测(TUNEL)和流式细胞仪(FCM)检测Genistein对EJ细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:bFGF可以使EJ细胞增殖比明显上升,Genistein可引起细胞增殖比明显下降,其程度均随浓度增高而增强;Genistein可以促进EJ细胞的凋亡,使细胞阻滞于G2/M期.结论:bFGF可以诱导EJ细胞的增殖,Genistein可以诱导EJ细胞凋亡,对bFGF诱导的细胞增殖有抑制作用,可能为膀胱肿瘤的治疗提供新的方法.
关键词： genistein 碱性成纤维细胞生长因子 EJ细胞 增殖 凋亡 -
HMFG1-β-葡萄糖苷酶偶联物联合苦杏仁苷体外对膀胱癌EJ细胞杀伤作用的研究
目的：本实验将鼠源性免疫球蛋白G1（以下简称HMFG1）与β-葡萄糖苷酶连接，研究HMFG1-β-葡萄糖苷酶偶联物联合苦杏仁苷在体外特异性杀伤人膀胱癌细胞（以下简称EJ细胞）的作用，探讨HMFG1-β-葡萄糖苷酶偶联物联合苦杏仁苷用于膀胱癌治疗的前景。方法将不同浓度的苦杏仁苷加入HMFG1-β-葡萄糖苷酶偶联物、HMFG1单抗、HMFG1单抗加β-葡萄糖苷酶中，作用于EJ细胞，采用四氮噻唑蓝比色法（以下简称MTT法）与水溶性四唑盐比色法（以下简称WST-8法）进行实验。结果在不同方法下，不同苦杏仁苷浓度的HMFG1-β-葡萄糖苷酶偶联物对EJ细胞的杀伤活性吸光度值与其他组比较，差异有统计学意义（P<0.01）；在不同方法下，各组对EJ细胞的抑制率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。偶联物在250 mmol·l-1浓度下，MTT法IC50为2.12 mmol·l-1、WST-8法IC50为1.17 mmol·l-1。结论本实验证明HMFG1-β-葡萄糖苷酶偶联物联合苦杏仁苷具有明显特异性杀伤EJ细胞的作用，HMFG1-β-葡萄糖苷酶偶联物联合苦杏仁苷可能成为治疗膀胱癌的有效策略，可以进入动物实验进行进一步验证。
关键词： HMFG1-β-葡萄糖苷酶偶联物 苦杏仁苷 EJ细胞
