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肝癌中Smac和Caspase-3的表达及在细胞凋亡中的关系
目的探讨Smac和Caspase-3在原发性肝细胞癌(HCC)组织中的表达及二者在肝癌细胞凋亡中的作用和关系.方法免疫组化法检测43例肝癌组织、20例癌旁组织和11例正常肝组织中Smac和Caspase-3蛋白表达情况.RT-PCR检测Smac和Caspase-3 mRNA表达情况.结果43例HCC标本中Smac表达有20例(46.5%),而除2例癌旁组织外,其它癌旁组织和正常肝组织中均见Smac表达;Caspase-3在癌组织、癌旁组织和正常肝组织中分别有18例(41.9%)、15例(75%)和11例(84.6%)表达.Smac和Caspase-3在肝癌组织中的表达具有明显的正相关性(P＜0.05,r=0.6264).Smac mRNA表达阳性的肝癌组织的细胞调亡指数明显升高.结论Smac在肝癌组织中低表达,其表达和Caspase-3呈明显的正相关,二者可能是肝癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环.
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Smac基因转染对卵巢上皮性癌细胞凋亡的影响
线粒体促凋亡基因Smac(又称为DIABLO)是新近发现的一种由线粒体释放的凋亡促进蛋白,Smac基因的促凋亡作用是通过逆转凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAP)家族的作用,增强半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3的活性而实现的;且Smac基因在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中的表达明显低于良性及交界性卵巢肿瘤组织~([1]).
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smac基因的克隆及过表达对宫颈癌HeLa细胞γ射线敏感性的影响
目的 克隆smac(the second mitochondria-derived activator of caspases,smac)基因,构建真核表达载体pcDNA3.1/smac,并转染宫颈癌HeLa细胞,探讨smac基因过表达对宫颈癌HeLa细胞γ射线敏感性的影响.方法 用RT-PCR的方法从HeLa细胞总RNA中克隆smac基因,连入pcDNA3.1载体并测序.将测序正确的pcDNA3.1/smac载体转染HeLa细胞系,利用RT-PCR法及Western blot鉴定HeLa细胞内smac基因的表达.γ射线照射后48 h利用MTT法检测各组细胞生长抑制率.结果 测序结果表明成功的从HeLa细胞总RNA中扩增了全长smac基因.RT-PCR及Western blot结果表明,转染pcDNA3.1/smac的HeLa/smac细胞中,smac基因表达量明显高于未转染的HeLa细胞及转染空载体pcDNA3.1的HeKa/pcDNA3.1细胞的表达量.不同剂量的γ射线照射48 h后,MTT结果表明,γ射线对转染pcDNA3.1/smac的HeLa/smac细胞的生长抑制率(38.85%)显著高于空白组HeLa细胞(17.64%)及转染空载体pcDNA3.1的HeLa/pcDNA3.1细胞(20.32%).结论 成功地克隆了smac基因,在宫颈癌HeLa细胞中过表达外源smac基因能够提高其对γ射线的敏感性,有望开辟提高宫颈癌放疗敏感性的新途径.
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Smac基因联合12C6+离子照射对膀胱癌EJ细胞的生物效应观察
目的 观察smac基因能否提高膀胱癌EJ细胞12C6+离子照射的生物效应.方法 实验分为3组:空白对照组、转染空载体组、转染smac基因组.利用免疫组化及流式细胞仪方法检测3组细胞内smac基因表达.转染24 h后对3组分别进行0、2和4 Gy 12C6+离子照射,用克隆形成实验对3个组分别检测细胞的存活分数并利用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 免疫组化结果表明转染pcDNA3.1/smac的细胞其smac基因表达量明显高于转染空载体pcDNA3.1的细胞和空白组细胞.流式细胞仪数据显示,smac基因转染细胞smac基因的荧光强度(3080)显著高于转染空载体组(2256)(P＜0.05),而后者与空白对照组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).克隆形成实验结果表明,转染smac基因组细胞12C6+离子照射后的存活分数较转染空载体组细胞显著降低(P＜0.05).流式细胞仪测定结果表明,12C6+离子照射的转染smac基因组的细胞凋亡率明显高于转染空载体组(P＜0.05).结论 外源smac基因转染膀胱癌细胞株能显示高表达,并能提高膀胱癌细胞的凋亡率,与12C6+离子照射结合后能显著降低细胞存活分数和进一步增高凋亡率.
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Smac基因过表达对宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性的影响
目的探讨转染Smac基因过表达对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响,寻求改善宫颈癌放疗疗效的新途径.方法将Smac基因转染入宫颈癌HeLa细胞株,G418筛选获得亚克隆细胞,RT-PCR、Western blot法检测癌细胞Smac基因表达.X射线照射后,采用MTT比色法检测癌细胞体外生长活性;透射电镜、Annexin V-FITC和碘化丙啶双染色流式细胞仪法检测癌细胞凋亡及比率;Westernblot、比色法检测细胞内Caspase-3蛋白表达和活性水平.结果RT-PCR和Western blot证实所获宫颈癌亚克隆细胞HeLa/Smac的Smac mRNA、蛋白表达水平均显著高于HeLa(P＜0.01).8 Gy X射线照射后,HeLa/Smac细胞生长活性较HeLa细胞减弱10.19%(P＜0.01),透射电镜下可见部分HeLa/Smac细胞发生典型凋亡形态学改变,凋亡率为16.4%,显著高于对照组HeLa细胞(凋亡率为6.2%,P＜0.01).与HeLa细胞比较,HeLa/Smac细胞内Caspase-3表达显著增加(P＜0.01),活性水平提高3.42倍(P＜0.01).结论稳定转染外源性Smac基因使其在宫颈癌细胞株中过表达,能提高癌细胞中Caspase-3的表达和活性,增强放疗对癌细胞的诱导凋亡作用,有望成为改善宫颈癌放疗效果的新途径.
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重组pcDNA3-UpIb promoter-Smac质粒转染靶向膀胱癌的促凋亡效应
目的:探讨转染新构建的UpIb启动子调控携Smac基因的真核表达质粒pcDNA3-UpIb promoter-Smac对膀胱癌细胞的促凋亡效用.方法:用脂质体将质粒转染到膀胱癌BIU-87细胞系中,24h后用RT-PCR检测Smac的表达,以低剂量丝裂霉素C诱导凋亡,利用倒置光学显微镜、Wrighs-Gimesa染色、DNA凝胶电泳技术、TUNEL-荧光标记技术、流式细胞术检测凋亡.结果:丝裂霉素C处理的各组在倒置光学显微镜和Wrighs-Gimesa染色油镜下可见到典型的凋亡形态学改变,DNA凝胶电泳呈特征性的梯形条带.TUNEL-荧光标记技术及流式细胞术检测转染pcDNA3-UpIb promoter-Smac组凋亡率显著高于单用丝裂霉素C组.结论:转染pcDNA3-UpIb promoter-Smac能够通过提高Smac的表达而有效促进丝裂霉素C诱导的膀胱癌细胞凋亡,提示该质粒配合凋亡诱导药物可能成为膀胱癌新的靶向基因治疗手段.
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pshuttle-Egr-1-hSmac质粒联合X线照射对乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖的抑制作用
目的：构建 pshuttle-Egr-1-hSmac质粒并转染人乳腺癌 MDA-MB-435细胞，观察其抑制肿瘤细胞的辐射增敏作用。方法：转染 pshuttle-Egr-1-hSmac质粒的 MDA-MB-435细胞经过2 Gy X线照射不同时间（4、8、12、24和48 h）和0.5～5.0 Gy X线照射后24 h 收集细胞，采用 RT-PCR 和 Western blotting 法检测 Smac mRNA 及其蛋白表达。将细胞分为对照组、pshuttle 质粒组、pshuttle-Egr-1-hSmac 质粒组、2 Gy 组、pshuttle＋2.0 Gy组和 pshuttle-Egr-1-hSmac＋2.0 Gy组，MTT法检测各组细胞增殖；克隆形成实验检测细胞存活能力；Annexin Ⅴ-FITC双染法检测细胞凋亡；PI单染法检测细胞周期。结果：对照组和 pshuttle质粒组MDA-MB-435细胞中 Smac mRNA无表达，而 pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组 MDA-MB-435细胞 Smac mRNA表达水平随时间延长逐渐升高，于24和48 h时表达水平高；经0.5～5.0 Gy X线照射后24 h MDA-MB-435细胞Smac mRNA表达水平随照射剂量增加而逐渐增加，在2.0和5.0 Gy X线照射后Smac mRNA表达水平高。pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组4、8、12和24 h后 Smac蛋白表达水平逐渐升高，24 h后表达水平高。经过0、0.5、1.0、2.0和5.0 Gy X线照射后24 h Smac蛋白表达水平逐渐升高，尤其以5.0 Gy X线照射时表达水平高。MTT法检测时程效应，2.0 Gy、pshuttle＋2.0 Gy和 pshuttle-Egr-1-hSmac＋2.0 Gy质粒组24、48和72 h细胞 A490值明显低于对照组（P＜0.01）；剂量效应，pshuttle-Egr-1-hSmac 质粒组1.0～5.0 Gy X 线照射后， MDA-MB-435细胞 A490值明显低于0 Gy X线照射（P＜0.05或P＜0.01）。pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组细胞存活分数明显低于对照组（P＜0.01）。pshuttle-Egr-1-hSmac＋2.0 Gy组细胞凋亡率明显高于2.0 Gy组（P＜0.01）， G0/G1期和 S期细胞百分率明显低于2.0 Gy照射组（P＜0.01）， G2/M期细胞百分率明显高于2.0 Gy组（P＜0.01）。结论：X线照射能增加 pshuttle-Egr-1-hSmac质粒转染的 MDA-MB-435细胞有效表达 Smac mRNA及蛋白，能抑制细胞存活，且诱导 G2/M期阻滞和凋亡增加；Smac基因联合放射治疗可明显增加乳腺癌细胞的放射敏感性。
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大鼠骨髓间充质干细胞谷氨酸诱导后Smac基因的表达及其意义
目的 探讨骨髓干细胞(BMSCs)经谷氨酸培养后Smac基因表达情况及其是否参与了谷氨酸诱导的BMSCs凋亡调控.方法 将原代培养的大鼠骨髓间充质干细胞,用流式细胞术鉴定细胞表型;加入30mmol/L谷氨酸培养后,采用DAPI荧光染色法,观察凋亡细胞的形态;用PI/Annexin-V双染法流式细胞仪计数各组(0、10、30、50 mmoL/L谷氨酸组)凋亡细胞的比例,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察经30 mmoL/L、50 mmol/L谷氨酸作用24 h后Smac基因mRNA的表达变化.结果 培养的BMSCs经流式细胞术鉴定发现:CD29,CD44和CD105表达阳性,CD45.CD14和CD34表达阴性,具备BMSCs的特征;经谷氨酸培养后,可见BMSCs细胞核皱缩,边聚,双核状;谷氨酸诱导组较多细胞呈凋亡改变,且随着谷氨酸浓度的增加,凋亡细胞的百分率也相应地增加(分别为14.24%、30.72%、93.31%);RT-PCR法发现经30和50 mmol/L谷氨酸作用后,BMSCs Smac基因表达较对照组升高(P<0.05),且随着谷氨酸浓度的增加,Smac基因表达也相应增加.结论 BMSCs经谷氨酸培养后Smac基因存在高表达,它可能参与了谷氨酸诱导的BMSCs凋亡调控.
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Smac基因过表达对胃癌细胞株化疗敏感性影响的研究
目的:观察Smac基因过表达对胃癌细胞株化疗敏感性的影响.方法:采用脂质体lipofectamine2000介导的方法,将Smac基因转入胃癌细胞SGC-7901,RT-PCR和Western-blot法检测未转染对照组、空载体pcDNA3.1转染对照组、pcDNA3.1-Smac转染组胃癌细胞中Smac基因的表达.选用紫杉醇(1、5、10 u g/mL)处理转染前后的胃癌细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,倒置显微镜下观察细胞形态变化并摄片.结果:同未转染对照组和空载体pcDNA3.1转染对照组比较,pcDNA3.1-Smac转染组SGC-7901细胞Smac mRNA和蛋白表达水平显著增高(P＜0.01)；紫杉醇处理24、48 h后,pcDNA3.1-Smac转染组细胞生长抑制率增加(P＜0.01)；使用化疗药物后,细胞明显变圆、折光增强、漂浮细胞增多,pcDNA3.1-Smac转染组细胞形态变化为显著.结论:转染外源性Smac基因并使其在胃癌细胞中过表达,能提高SGC-7901细胞对化疗药物的敏感性.
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谷氨酸诱导骨髓间质干细胞凋亡及其对Smac基因转录影响
目的 观察谷氨酸能否诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡,探讨Same基因是否参与谷氨酸诱导的BMSCs凋亡.方法 原代培养大鼠BMSCs,加谷氨酸培养后,四甲基偶氮唑蓝(MTY)法检测分别经10、30、50 mmol/L谷氨酸作用24 h后BMSCs存活率,并用PI/Annexin-V双染法流式细胞仪计数各组凋亡细胞比例,通过逆转录聚合酶链反应观察经30、50 mmol/L谷氨酸作用24 h后Smac基因mRNA表达变化.结果 谷氨酸诱导组BMSCs凋亡率较对照组升高(P＜0.05),且随谷氨酸浓度增加,凋亡细胞百分率也相应增加;RT-PCR法发现谷氨酸作用后,BMSCs Smac基因表达较对照组升高(P＜0.05),且随谷氨酸浓度增加,Smac基因表达也增加.结论 谷氨酸能诱导BMSCs凋亡,Smac基因可能参与谷氨酸诱导的BMSCs凋亡.
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Smac和Survivin基因在肝癌中的表达及与细胞凋亡的关系
目的探讨Smac 和Survivin在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及两者在肝癌细胞凋亡中的作用和关系.方法免疫组织化学法检测50例肝癌组织、20例癌旁组织和15例正常肝组织中Smac和Survivin蛋白表达情况.逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Smac和Survivin mRNA表达情况.结果 50例HCC标本中表达Smac有21例(42.0%),而除2例癌旁组织外,其他癌旁组织和正常肝组织中均见Smac表达;Survivin在癌组织、癌旁组织和正常肝组织中分别有46例、2例和0例表达;50例肝癌组织中Smac阳性率为40.0%(20/50),肝癌组织和非肝癌组织中Smac的表达差异具有统计学意义,Survivin在肝癌组织、癌旁组织和正常组织中阳性率分别为90.0%(45/50)、10.0%(2/20)和0%(0/15),肝癌组织和非肝癌组织中Survivin的表达差异具有统计学意义(P<0.05).结论 Smac在肝癌组织中低表达,其表达和Survivin呈明显的负相关,两者可能是肝癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环.
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Smac基因促丝裂霉素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究
目的探讨Smac基因的表达对于丝裂霉素(MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡的影响.方法脂质体介导Smac基因转染膀胱癌T24细胞3 d后,用低剂量丝裂霉素诱导凋亡启动,噻唑蓝(MTT)比色分析检测癌细胞生长活性,吖啶橙-溴化乙锭荧光染色法及流式细胞术法检测细胞凋亡;免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应检测Smac基因的表达.结果 T24细胞在低剂量丝裂霉素的诱导下发生凋亡,两种方法检测细胞凋亡率,用0.05 g/L丝裂霉素处理的T24细胞凋亡率分别为20.50%和18.84%,而经过转染Smac后用0.05 g/L丝裂霉素处理的T24细胞凋亡率分别为36.40%和33.52%,差异有统计学意义(P<0.05).结论促凋亡基因Smac在膀胱癌细胞中的活化表达可以明显增强细胞在刺激信号下的凋亡.
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稳定过表达smac基因胃癌细胞株的建立及其化疗敏感性研究
目的探讨smac基因过表达对胃癌细胞株化疗敏感性的影响.方法采用脂质体将smac基因真核表达载体pcDNA3.1-smac及空白载体pcDNA3.1转染入胃癌细胞株MKN-45,G418筛选获得抗性亚克隆细胞株,RT-PCR和Western Blot检测癌细胞smac基因表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、克隆形成实验检测丝裂霉素(MMC)对癌细胞的生长抑制效率.结果建立分别稳定表达smac基因、新霉素抗性基因(neo)的胃癌亚克隆细胞株MKN-45/smac、MKN-45/neo.RT-PCR和Western Blot证实MKN-45/smac细胞的smac mRNA及蛋白表达水平均显著高于MKN-45、MKN-45/neo(P＜0.01).10μg/ml MMC作用24h后,MKN-45、MKN-45/neo细胞生长抑制率分别为27.85%、28.12%,而MKN-45/smac则高达43.71%(P＜0.01);同MKN-45、MKN-45/neo细胞株比较,MKN-45/smac的克隆形成能力分别降低了14.07%(P＜0.01)、15.13%(P＜0.01).结论稳定转染smac基因使其在胃癌细胞株中过表达,能显著提高癌细胞对MMC的敏感性,为改善胃癌化疗效果奠定了实验基础.
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Smac过表达对人胰腺癌MiaPaCa-2细胞的化疗增敏作用
0引言Smac是第二个线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂,主要通过拮抗IAPs对caspase的抑制作用,参与线粒体凋亡通路和死亡受体凋亡通路,促进细胞凋亡.近年来在对肺癌、结直肠癌、胃癌、膀胱癌等的研究中发现,Smac与肿瘤的发生、发展,肿瘤的分期、转移等密切相关,Smac在肿瘤组织中的表达下降可能是引起肿瘤组织中细胞凋亡减少的重要原因[1],有研究显示[2]用一些药物诱导Smac过表达可以引起肿瘤细胞的凋亡,也可以使耐药肿瘤细胞对化疗和放疗的敏感度显著提高.
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姜黄素对胃癌细胞株凋亡抑制蛋白家族及Smac基因表达的影响
目的观察姜黄素(curcumin)对人胃癌细胞株凋亡抑制蛋白(IAP)家族和Smac基因表达的影响,探讨姜黄素诱导胃癌细胞凋亡的分子机制. 方法 10～40 μmol/L 姜黄素分别处理胃癌细胞株MKN-45 6～24 h后,MTT比色法检测癌细胞生长活性,末端TdT酶标记技术和DNA Ladder检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测IAP家族(Survivin、XIAP)和Smac基因表达;比色法检测癌细胞Caspase-3活性改变. 结果同对照组比较,不同浓度姜黄素作用后癌细胞生长明显减慢,抑制率为12.18%～68.15%(P<0.01),部分细胞呈现典型凋亡形态学改变,凝胶电泳可见"梯形"条带,凋亡率为9.24%～28.12%(P<0.01);Survivin、XIAP基因mRNA和蛋白水平显著下调(均P<0.01),而Smac基因表达增强(P<0.01),癌细胞Caspase-3活性增强2.27 ～6.67倍(P<0.01). 结论姜黄素可显著诱导胃癌MKN-45细胞凋亡,通过上调Smac、下调Survivin和XIAP基因表达,进而活化Caspase-3是其作用机制之一.
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PSA增强子启动子调控Smac基因表达载体的构建
目的 构建携带Smac基因、人前列腺特异性抗原(PSA)增强子(PSAE)/PSA启动子(PSAP)调控的前列腺特异性真核表达载体.方法 切除含Smac基因的真核表达载体pcDNA 3.1-Smac内部的人巨细胞病毒/T7启动子序列,替换为在前列腺组织特异性表达的PSAE、PSAP调控序列.构建的质粒经双酶切凝胶电泳及测序鉴定.结果 成功构建携带Smac基因人PSAE-PSAP调控的前列腺特异性真核表达载体pcDNA3-PSAE-PSAP-Smac质粒.结论 新构建的载体为前列腺癌的靶向基因治疗奠定了基础.
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携Smac基因人尿路斑块蛋白Ⅰb启动子调控的真核表达载体的构建
目的构建携带Smac基因、人尿路斑块蛋白Ⅰb(Uroplakin Ⅰb,UpⅠb)启动子(promoter)调控的膀胱移行上皮特异性真核表达载体.方法切除含Smac基因的真核表达载体pcDNA3.1-Smac内部的人巨细胞病毒和T7启动子序列,替换为在膀胱移行上皮特异表达的UpⅠb的启动子.构建的质粒经双酶切凝胶电泳及测序鉴定.结果成功构建携带Smac基因人UpⅠb启动子调控的膀胱移行上皮特异性真核表达载体pcDNA3-UpⅠb promoter-Smac质粒.结论新构建的载体为膀胱癌的靶向基因治疗奠定了基础.
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Smac基因过表达对胃癌细胞株 MKN-45 化疗敏感性的影响
背景与目的:细胞凋亡异常是肿瘤细胞产生耐药性的关键因素之一. Smac(second mitochondria-derived activator of caspases,Smac或称 DIABLO)是新近发现的一种凋亡调节基因,在介导化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡中起重要作用.本研究旨在观察 Smac基因过表达对胃癌细胞株化疗敏感性的影响.方法:采用脂质体 GeneSHUTTLE-40介导的方法,将 Smac基因转入胃癌细胞 MKN-45, RT-PCR和 Western blot法检测癌细胞中 Smac的表达;选用顺铂 (1、 5、 10 μ g/ml)、丝裂霉素 (0.1、 1、 10 μ g/ml)和姜黄素 (10、 20、 40 μ mol/L)分别处理转染前后的胃癌细胞,四甲基偶氮唑蓝( MTT)比色法检测细胞增殖活性,倒置显微镜下观察细胞形态变化并摄影, Annexin V-FITC和碘化丙啶双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:同未转染对照组比较,转染外源性 Smac基因后 MKN-45细胞 Smac mRNA和蛋白表达水平显著增高( P< 0.01);各浓度顺铂、丝裂霉素和姜黄素处理 24 h后,细胞生长抑制率分别 增加 10.10%～ 23.80%( P< 0.01)、 10.01%～ 15.86%( P< 0.01)、 11.28%～ 22.12%( P< 0.01),细胞明显变圆、折光增强、漂浮细胞增多,细胞凋亡率分别增加 6.7%～ 20.2%( P< 0.01)、 5.4%～ 13.2%( P< 0.01)、 10.6%～ 20.1%( P< 0.01).结论:转染外源性 Smac基因并使其在胃癌细胞中过表达,能提高 MKN-45对化疗药物的敏感性.
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多发性骨髓瘤患者survivin和smac基因表达及临床意义
目的:通过检测survivin和smac基因在多发性骨髓瘤(MM)患者中的表达,从而探讨其与多发性骨髓瘤(MM)病情发展及疾病预后的关系.方法:采用实时荧光定量RT-PCR技术检测29例MM患者和12例正常人骨髓细胞中survivin与smac的mRNA的表达水平.结果:survivin与smac mRNA在MM患者骨髓瘤细胞中阳性表达率分别为65.5%和75.9%,其mRNA的表达水平初治组较正常对照组明显升高(P＜0.01),治疗缓解后(缓解组)其表达水平明显下降,与初治组比较差异亦有统计学意义(均P＜0.05).在复发组中suivivin和smac mRNA的表达水平又复升高.二者在MM中的表达水平成正相关(r=0.924,P＜0.01).结论:survivin和smac基因的表达与MM发病及预后密切相关,可作为MM发病、复发及预后判断的有意义指标之一.
关键词： 多发性骨髓瘤 Survivin基因 Smac基因 凋亡 -
Smac基因过表达联合顺铂对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨Smac基因过表达联合顺铂对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用脂质体介导的转染方法 ,将重组质粒pcDNA3.1+hSmac导入人肝癌细胞株SMMC-7721中,采用Western blot和流式细胞术检测转染前后Smac蛋白表达情况.转染24 h后分别加入终浓度为5、15、25 μg/ml的顺铂诱导细胞凋亡.采用四甲基偶氮唑盐比色法检测癌细胞的增殖抑制作用,吖啶橙-溴化乙锭荧光染色法和膜联蛋白V/碘化丙啶双染标记流式细胞术检测细胞凋亡. 结果 Westernblot和流式细胞术检测结果证实转染后Smac蛋白表达明显增加(P＜0.01).与空白对照相比,Smac基因过表达可抑制癌细胞增殖,促进凋亡(P＜0.01).而且给予顺铂处理后,与空白对照组相比,细胞生长抑制率随剂量增加而显著上升,且转染Smac的细胞生长抑制率较相应未转染Smac的细胞明显升高(P＜0.01).吖啶橙-溴化乙锭荧光染色法和流式细胞术检测显示,转染Smac加顺铂处理组较单纯顺铂处理组细胞凋亡明显增加,差异具有统计学意义(P＜0.01).这表明Smac基因过表达可增强顺铂对肝癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用. 结论 促凋亡基因Smac可在肝癌细胞中过表达,抑制癌细胞的增殖和促进凋亡;而且过表达的Smac基因可增强癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性,这为研究Smac在癌细胞凋亡过程中的调控作用以及肝癌化学治疗效果的改善提供了实验基础.
