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miRNA-205调控靶基因的研究进展与趋势
传统的miRNA-靶基因-生物学功能研究思路忽略了靶基因之间、靶基因所在信号通路之间的联系，使得miRNA调控作用的整体性与关联性无法得到全面的阐释。运用整体、系统且联系的思维方式，通过对荧光素酶报告实验验证的miR-205靶基因及其信号通路的整理和分析，将明确miR-205的研究方向，并为突破现有miRNA研究的整体格局，探索新颖的miRNA调控机制提供帮助。
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miR-205通过调控PKC蛋白影响黑色素瘤细胞的增殖和凋亡
目的 探讨miR-205通过调控PKC蛋白影响黑色素瘤细胞的增殖和凋亡行为的作用和机制.方法 实验分为miR-NC组(转染阴性对照慢病毒)、miR-205-mimic组(转染miR-205过表达慢病毒)、miR-205-mimic+ PKC-siRNA组(同时转染miR-205过表达慢病毒和敲减PKCsiRNA).qPCR试验检miR-205在不同黑色素瘤细胞中的表达水平,Western blotting检测PKC蛋白在不同黑色素瘤细胞(C8161,A375,WM115和B16)中的表达水平;双荧光素酶实验检测miR-205和PKC蛋白的相互关系;MTT细胞增殖实验检测miR-205和PKC对黑色素瘤细胞株增殖能力的影响;流式细胞术实验检测miR-205和PKC对黑色素瘤细胞株凋亡行为的影响.结果 miR-205在B16细胞株中表达水平相对细胞株C8161,A375,WM115较低,PKC蛋白在B16细胞中表达水平较低(P＜0.05).双荧光素酶实验证实miR-205可以直接靶向调控PKC蛋白的表达活性.miR-205-mimic组的B16细胞增殖速率明显低于miR-NC组,凋亡率明显高于miR-NC组(P＜0.05);同时抑制PKC蛋白的表达后,miR-205-mimic+ PKC-siRNA组B16细胞的增殖速率明显高于miR-205-mimic组,凋亡率明显低于miR-205-mimic组(P＜0.05).结论 miR-205可以通过调控PKC的表达影响黑色素瘤细胞的增殖和凋亡,同时PKC蛋白对miR-205有一定的反馈调节作用.
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miR-205对Ⅱ型子宫内膜癌细胞生物学行为的调空作用研究
目的:通过实验研究下调miR-205的表达对Ⅱ型子宫内膜癌细胞增殖、侵袭力的影响及对裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,以探讨将miR-205作为Ⅱ型子宫内膜癌的靶向治疗的潜在靶点的可能性.方法:利用脂质体Lipofectamine 2000将miR-205抑制物转染入Ⅱ型子宫内膜癌细胞HEC-1-B中;利用Q-RT-PCR检测转染后各组细胞中miR-205的表达情况;CCK-8检测细胞增殖能力变化情况;Transwell实验检测穿膜细胞数变化情况;利用BALB/c免疫缺陷裸鼠建立Ⅱ型子宫内膜癌皮下移植瘤模型,并测量各组移植瘤的瘤体重量.结果:Q-RT-PCR结果显示,转染miR-205抑制物组细胞中的miR-205表达水平显著低于无关序列组和空白对照组(P＜0.01);下调miR-205表达量对HEC-1-B细胞的增殖和侵袭力均有抑制作用,并能显著降低裸鼠移植瘤的瘤体体积及重量(P＜0.01).结论:在Ⅱ型子宫内膜癌中,miR-205表现出癌基因的生物学行为,下调miR-205的表达可以显著降低Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的增殖侵袭能力,miR-205的过表达可能参与了Ⅱ型子宫内膜癌的发生、发展及侵袭转移过程,miR-205将有望成为Ⅱ型子宫内膜癌的生物靶向治疗的新靶点.
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miR-205在乳腺癌患者血浆中的表达及临床意义研究
目的:研究乳腺癌患者血浆标本中miR-205的表达水平及临床意义.方法:选取本院收治的乳腺癌患者60例为乳腺癌组,乳腺良性病变患者60例为乳腺良性病变组,健康人群60例为对照组.抽取血浆标本,检测并观察三组miR-205的水平,分析其对乳腺癌的诊断价值、与患者临床病理参数的关系,分析影响乳腺癌预后因素.结果:乳腺癌组血浆中miR-205表达水平均高于对照组和乳腺良性病变组(P<0.05);miR-205诊断乳腺癌的AUC为0.842,特异性为92.3％、灵敏度为84.6％;miR-205水平与TNM分期、肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移关系密切(P<0.05);Cox回归分析显示,肿瘤大小、淋巴结转移、miR-205水平均与乳腺癌预后密切相关,可作为独立的预后因子(P<0.05).结论:乳腺癌患者血浆中miR-205呈较高表达,与临床病理学参数关系密切,对乳腺癌的诊断价值较高,且是影响腺癌预后的因子之一.
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上皮源性卵巢癌中4种miRNAs的表达及其临床意义
目的：分析上皮源性卵巢癌（EOC）组织中miR-200a、miR-141、miR-205和miR-34a的表达及其临床意义。方法44例EOC患者按FIGO分期分为FIGOⅠ~Ⅱ（FIGO早期组）组15例和FIGOⅢ~Ⅳ（FIGO晚期组）组29例，用实时荧光定量PCR定量比较2组4种miRNAs的表达差异并考察4种miRNAs表达间的关联。以各组miRNAs表达的中位数将EOC患者分为miRNA高表达组和低表达组，比较2组患者间的生存差异。按年龄、FIGO分期、术后是否有残余瘤及术后化疗情况分组，进行Kaplan-Meier生存分析和Cox多因素分析。结果 FIGO晚期组miR-141的表达高于早期组（P=0.036）。miR-141的表达与miR-200a、miR-205呈正相关，与miR-34a呈负相关（均P<0.05）；miR-200a与miR-205的表达呈正相关（P<0.05）。生存分析显示，miR-200a的表达低，卵巢癌患者无进展生存期短（P=0.035），FIGO早期组生存率高于FIGO晚期组（P<0.05）。miR-200a的表达水平、FIGO分期以及年龄与卵巢癌患者总生存期和无进展生存期有关，miR-141、miR-205和miR-34a的表达水平、术后残余瘤以及化疗与患者生存无关。结论 miR-200a的表达与卵巢癌患者预后有关，可能是卵巢癌患者预后预测的独立影响指标。
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miR-205与乳腺癌关系的研究进展
微小RNA(miRNAs)作为一类进化保守的非编码RNAs,通过与靶基因mRNA的序列互补配对抑制其翻译或启动降解来发挥作用.越来越多的研究结果证实,miRNAs通过发挥促癌或抑癌作用参与调控多种肿瘤的发生与发展.其中miR-205在乳腺癌组织中表达普遍降低,将miR-205在乳腺癌细胞中过表达,则其能够通过抑制表皮生长因子受体3(ERBB3)、锌指E-盒结合同源异形盒(ZEB)1、ZEB2、血管内皮生长因子A(VEGFA)等靶基因的表达,从而抑制癌细胞增殖、转移与侵袭能力,终影响乳腺癌的治疗敏感性与预后.本综述重点阐述了miR-205在乳腺癌中对细胞增殖、凋亡、侵袭、转移等相关基因及信号通路的调控作用与机制,miR-205与乳腺癌患者治疗敏感性以及患者预后的相关性,以期为乳腺癌的诊断、治疗及预后判断提供新的思路与治疗靶点.
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miR-205调控YES1表达对人膀胱癌细胞增殖的影响
目的 探讨miR-205对膀胱癌T24细胞增殖的影响.方法 合成miR-205的模拟物并转染膀胱癌T24细胞,荧光显微镜下观察转染效率,实时荧光定量PCR法检测转染48 h后,T24细胞中miR-205的表达情况,MTT法检测转染24、48和72 h后,T24细胞的增殖情况,实时荧光定量PCR法和western blot检测转染48 h后膀胱癌细胞内源性YESl mRNA及蛋白的表达变化.结果 miR-205的模拟物转染至T24细胞的效率为80％,转染miR-205模拟物48 h后,T24细胞内miR-205的表达水平显著升高(P＜0.05),T24细胞的增殖率显著低于阴性对照组(P＜0.05),且呈时间依赖性,YES1 mRNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组(P＜0.05).结论 miR-205抑制膀胱癌T24细胞增殖可能与靶向YES1基因相关.
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miR-205对人黑素瘤A375细胞增殖、侵袭和HIF-1及VEGF蛋白表达的影响
目的 研究miR-205对人皮肤黑素瘤细胞系A375的增殖、侵袭和对缺氧诱导因子-1(HIF-1)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响,探讨miR-205影响黑色素细胞增殖、侵袭的机制.方法 将miR-205 mimics或inhibitor应用阳离子脂质体LipofectamineTM2000转染A375细胞,MTT和克隆形成实验分别检测转染后细胞增殖、侵袭能力的变化,Western blot方法检测HIF-1及VEGF蛋白表达.结果 转染miR-205 mimics后,A375细胞增殖、侵袭能力明显降低,VEGF与HIF-1蛋白表达显著降低,P＜0.01;转染miR-205 inhibitor后,A375细胞增殖、侵袭明显升高,VEGF与HIF-1蛋白表达显著升高,P＜0.01.结论 miR-205抑制人黑素瘤细胞A375的增殖与侵袭能力可能与调控HIF-1及VEGF的表达相关.
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长链非编码MALAT-1调控miR-205的表达影响非小细胞肺癌细胞的生长和迁移
目的:探讨在非小细胞肺癌中,LncRNA MALAT-1与miR-205的相互关系,以及影响肺癌细胞生物学行为的机制.方法:qPCR检测不同非小细胞肺癌中LncRNA MALAT-1的表达情况;双荧光素酶报告基因检测MALAT-1与miR-205的相互作用;Transwell侵袭实验和划痕实验检测抑制MALAT-1后肺癌细胞侵袭能力的变化,以及抑制miR-205的表达后肺癌细胞迁移和侵袭能力的恢复情况;裸鼠皮下成瘤检测抑制LncRNA MALAT-1后肺癌细胞体外成瘤体积和质量变化.结果:与其他肺癌细胞株相比,A549细胞中MALAT-1表达高,miR-205的表达水平低;双荧光素酶实验证实MALAT-1能与miR-205的3′UTR特异性结合,可以调控miR-205的表达与活性;抑制MALAT-1的表达后可以降低肺癌细胞的迁移和侵袭能力;抑制miR-205的表达水平过后,肺癌细胞的迁移和侵袭能力相对增强;抑制MALAT-1的表达后,荷瘤小鼠的肿瘤体积和重量都明显减小.结论:MALAT-1可以调控miR-205的表达影响肺癌细胞A549的侵袭和迁移能力.
关键词： 非小细胞肺癌 LncRNAMALAT-1 miR-205 侵袭 迁移 -
miR-205靶定YES1对肺癌细胞A549的增殖抑制作用
目的：利用实时定量 RT-PCR技术和双荧光蛋白报告基因分析系统检测miR-205在肺癌组织及 A549细胞系中的表达水平以及其直接靶基因 YES1，探讨 miR-205抑制肺癌细胞 A549增殖的可能机制。方法：实时定量 RT-PCR技术检测10例肺癌组织和10例癌旁正常肺组织中 miR-205的表达水平；miR-205 mimics 和control mimics分别转染A549细胞，利用细胞计数和集落形成实验检测转染后A549细胞的增殖情况。选取表达绿色荧光蛋白的质粒 pcDNA3／EGFP，将 YES13′UTR的一段特异性序列、YES13′UTR（miR-205互补位点）点突变后的序列分别插入该质粒中，构建 YES1-3′UTR 和 mut-YES1-3′UTR 的绿色荧光表达质粒。实验分为YES1-3′UTR、YES1-3′UTR 与 miR-205 mimics、YES1-3′UTR 与 control mimics、mut-YES1-3′UTR、mut-YES1-3′UTR与 miR-205 mimics 和 mut-YES1-3′UTR 与 control mimics 共6组，均与表达红色荧光蛋白pDsRed2-N1共同转染肺癌细胞系 A549，荧光分光光度计进行蛋白定性和定量检测。结果：与癌旁正常肺组织比较，miR-205在肺癌组织及 A549细胞中表达水平降低（P＜0.05）；miR-205mimics 转染组 A549细胞增殖率明显低于转染 control mimics对照组（P＜0.05）；YES1-3′UTR与miR-205 mimics共转实验组荧光蛋白表达水平低于YES1-3′UTR与control mimics共转染组（P＜0.01）；YES1蛋白高表达组A549细胞细胞克隆形成数高于细胞对照组（P＜0.05）。结论：miR-205可能通过靶定靶基因 YES1抑制了肺癌细胞 A549的增殖，提示 miR-205和YES1有可能成为肿瘤生物治疗的新靶点。
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微小RNA-205在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义
目的:观察微小RNA(microRNA,miRNA,miR)-205在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达并探讨其临床意义.方法:收集自2014年1月至2014年12月在我院甲状腺外科住院治疗的甲状腺乳头状癌患者的术后新鲜病理组织45例,其中男14例,女31例,年龄24-69岁,平均45.5岁.结节性甲状腺肿28例,癌旁正常甲状腺组织5例.提取各组织中的miRNA,应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测miR-205的表达情况.结果:甲状腺乳头状癌miR-205的表达量较非肿瘤组织(结节性甲状腺肿、癌旁组织)明显下调[(1.06± 1.76) vs (3.19± 4.88),P=0.038].伴淋巴结转移的PTC组织中miR-205表达量明显低于无淋巴结转移的PTC组织[(1.21± 1.80) vs (9.59± 1.60),P=0.003].miR-205的相对表达与PTC患者性别、年龄及浸润与否均无显著相关性,而肿瘤直径呈显著相关性.结论:miR-205在PTC中的表达异常下调,可能与PTC的发生、侵袭和转移有关.
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miR-205在鼻咽癌组织中的表达及对细胞增殖、侵袭能力的影响
目的 探讨miR-205在鼻咽癌组织中的表达及对细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 选取57例初治鼻咽癌患者和40例对照组,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测2组组织中的miR-205表达.培养人鼻咽癌细胞CNE-2,根据转染物不同,将细胞分为miR-205 minic组、minic-对照组、miR-205 inhibitor组和inhibitor-对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测各转染组细胞中miR-205表达,四氮唑蓝(MTT)比色法检测各转染组细胞增殖情况,划痕实验检测各转染组细胞迁移能力,Transwell法检测各转染组细胞侵袭能力.结果 鼻咽癌组织中miR-205的相对表达量为1.85±0.17,高于对照组的1.14±0.12,差异有统计学意义(t=25.099,P＜0.05).鼻咽癌组织中miR-205的相对表达量与临床分期、病理分级和颈淋巴结转移有关(P＜0.05).miR-205 minic组细胞中miR-205的相对表达量为0.87±0.12,显著高于miR-205 inhibitor组、minic-对照组和inhibitor-对照组,分别为0.34±0.09、0.53±0.11和0.55±0.12,且miR-205 inhibitor组低于minic-对照组和inhibitor-对照组(P＜0.001).miR-205 minic组细胞48 h、72 h和96 h的增殖能力显著高于minic-对照组和inhibitor-对照组,而miR-205 inhibitor组则低于minic-对照组和inhibitor-对照组(P ＜0.001).miR-205 minic组细胞迁移率和侵袭细胞数均高于miR-205 inhibitor组、minic-对照组和inhibitor-对照组,且miR-205 inhibitor组细胞迁移率和侵袭细胞数均低于minic-对照组和inhibitor-对照组(P ＜0.001).结论 miR-205在鼻咽癌组织中呈高表达,下调miR-205表达可减少鼻咽癌CNE-2细胞增殖、抑制细胞迁移和侵袭能力.
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MALAT1靶向调控miR-205与骨肉瘤侵袭的实验研究
目的 探讨人肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)与miR-205的关系,揭示MALAT1促进骨肉瘤发生发展的分子机制.方法 实时荧光定量PCR(QPCR)法检测骨肉瘤组织、癌旁正常组织、人成骨细胞(hFOB)以及骨肉瘤MG63、Sao-2细胞株中MALAT1和miR-205的表达;生物信息学及荧光素酶实验观察MALAT1对miR-205的靶向调控;miR-205mimics转染Sao-2和MG63细胞后QPCR检测MALAT1表达,si-MALAT1转染Sao-2和MG63细胞后QPCR检测miR-205表达;miR-205 mimics和si-MALAT1分别转染MG63细胞,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Western blotting检测MMP-2、MMP-9表达.结果 骨肉瘤组织、癌旁正常组织中MALAT1和miR-205表达量分别为4.7±0.6、2.6±0.08和2.2±0.09、3.7±0.3,差异有统计学意义(P＜0.05);MG63、Sao-2细胞株中MALAT1和miR-205表达量分别为2.4±0.7、2.1±0.05和0.53±0.04、0.47±0.02,与hFOB中的0.9±0.01、0.82±0.04比较,差异有统计学意义(P＜0.05);生物信息学及荧光素酶检测显示MALAT1序列中存在miR-205的3个互补序列,且两者存在靶向调控作用;转染si-MALAT1的Sao-2和MG63细胞中miR-205的表达量分别为3.4±0.7、3.8±0.6,对照组为1.4±0.5、1.0±0.1,差异有统计学意义(P＜0.05);转染miR-205 mimics的Sao-2、MG63细胞中MALAT1的表达量分别为0.51±0.05、0.42±0.03,而对照组为1.5±0.7、1.28±0.4,差异有统计学意义(P＜0.05);Transwell实验结果显示miR-205 mimics组MG63细胞侵袭数为(28.52±3.68)个,低于miR-205 mimics与pMALAT1共转染组的(42.63±5.67)个,差异具有统计学意义(P＜0.05);Western blotting结果显示miR-205 mimics组MMP-2、MMP-9的表达量分别为0.41±0.02、0.49±0.04,显著低于miR-205与pMALAT1共转染组的0.73±0.01、0.80±0.05,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 MALAT1与miR-205之间存在双向抑制关系,MALAT1通过抑制miR-205的表达促进骨肉瘤细胞的侵袭.
关键词： 骨肉瘤 人肺腺癌转移相关转录本1 miR-205 侵袭 -
CD99及miR-205在隆突性皮肤纤维肉瘤中的表达及意义
目的 探讨隆突性皮肤纤维肉瘤(DFSP)及皮肤纤维瘤(DF)中CD99及miRNA的表达及临床意义.方法 免疫组化染色及Western印迹检测DFSP和DF中CD99蛋白表达.实时PCR检测miR-637、miR-576-5p、miR-23a、miR-23b、miR-625及miR-205在DFSP和DF中的表达差异.结果 免疫组化染色结果显示,CD99蛋白在DFSP(73.33％)中阳性表达率明显高于DF(6.77％),差异有统计学意义(P＜0.05).Western印迹检测结果显示,DFSP组织中CD99蛋白含量(1例,CD99/黏着斑蛋白=11.289)明显高于DF(2例,DF1:CD99/黏着斑蛋白=4.743,DF2:CD99/黏着斑蛋白=2.402).实时PCR检测结果显示,与DF相比,DFSP中miR-205表达明显下降(DF:DFSP=1:0.160);生物信息学分析表明,miR-205可以作用于CD99 mRNA的3'UTR区域.结论 CD99及miR-205均可作为鉴别诊断DFSP和DF的分子标记物.
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miR-21 miR-205联合检测对非小细胞肺癌的诊断价值
目的 探讨联合检测血液中microRNA-205(miR-205)和microRNA-21(miR-21)对非小细胞肺癌的诊断价值.方法 收集27例非小细胞肺癌患者术前及术后血清,并收集29例健康志愿者血清作为对照.应用实时荧光定量PCR法检测以上标本中miR-205和miR-21的表达水平,并分析其与临床病理特征的相关性,评估miR-205和miR-21联合检测对非小细胞肺癌的诊断价值.结果 非小细胞肺癌患者术前血清中miR-205和miR-21的表达水平均高于健康人群(P＜0.05),其中23例非小细胞肺癌患者术后血清中miR-205的表达水平较术前明显降低(P＜0.01),术前与术后miR-21表达水平无显著性差异(P＞0.05).而术前血浆中miR-205和miR-21的表达水平与患者淋巴结转移及Dukes分期存在相关性(P＜0.05).miR-205和miR-21的受试者(ROC)曲线下面积为0.968,非小细胞肺癌患者和健康人群的敏感度和特异度分别为96.3％和89.7％.结论 血清miR-205和miR-21作为新的生物学指标,两者联合检测对非小细胞肺癌的诊断和预后监测有一定价值.
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miR-205慢病毒表达载体的构建及其对乳腺癌细胞作用的初步研究
目的 构建micoRNA-205(miR-205)慢病毒表达载体,感染乳腺癌细胞MB231,建立稳定表达miR-205的MB231细胞株,观察其增殖能力的变化.方法 酶切慢病毒载体GV369,设计并合成miR-205引物,通过PCR扩增目的基因连接到慢病毒载体上.对重组质粒双酶切鉴定,进行慢病毒hsa-miR-205的包装和滴度测定.用构建好的慢病毒感染MB231细胞,定量PCR检测细胞中miR-205表达水平的变化,MTT和划痕实验观察过表达miR-205后MB231细胞增殖和迁移能力的变化.结果 测序显示,目的基因连接慢病毒载体成功.慢病毒稳定感染了MB231,定量PCR结果显示,感染hsa-miR-205的MB231中miR-205表达明显提高,MTT和划痕实验结果显示感染后MB231的细胞增殖和迁移能力受到抑制.结论 成功构建了miR-205慢病毒表达载体,并建立了稳定表达miR-205的细胞株MB231,显示其可能负调控乳腺癌细胞的恶性生物学行为,为后期进一步研究miR-205的功能和机制奠定了基础.
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下调microRNA-205表达对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和侵袭的作用
目的:探讨下调microRNA-205(miR-205)表达对人子宫内膜样腺癌细胞系Ishikawa增殖和侵袭的作用及可能的机制.方法:将miR-205抑制剂(miR-205 inhibitor)瞬时转染Ishikawa细胞,下调miR-205的表达；应用实时荧光定量PCR方法(qRT-PCR)检测miR-205的表达；噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力；Transwell小室法检测细胞侵袭能力.qRT-PCR和Western blot分别检测miR-205的预测靶基因ESRRG mRNA和蛋白表达水平.应用双荧光素酶分析方法鉴定miR-205和ESRRG 3UTR的表达调节关系.结果:miR-205在Ishikawa细胞中呈高表达；转染miR-205 inhibitor的Ishikawa细胞中,miR-205表达降低了86.9％,细胞增殖和侵袭能力下降,同时细胞ESRRG mRNA和蛋白表达升高；miR-205通过直接与ESRRG mRNA 3UTR结合负调节其表达.结论:下调miR-205表达可抑制Ishikawa细胞增殖、侵袭能力；miR-205的生物效应可能与调节潜在抑癌基因ESRRG有关.
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人miR-205真核表达载体的构建及鉴定
目的 构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-205,并使其在肾上腺皮质癌细胞SW-13中稳定表达.方法 依据miRbase数据库中pre-miR-205序列设计引物,PCR扩增pre-miR-205基因并将其克隆至线性化的pcDNA3.1(+)质粒中,获得重组表达载体pcDNA3.1(+)-miR-205,经双酶切及测序分析后,将其及对照空载体转染肾上腺皮质癌SW-13细胞,采用实时定量RCR法鉴定miR-205在SW-13细胞中表达.结果 酶切和测序结果均证实pcDNA3.1(+)-205重组质粒构建成功,经实时定量RCR检测表明转染pcDNA3.1(+)-205的SW-13细胞中miR-205阳性高表达.结论 真核表达载体pcDNA3.1(+)-205在SW-13中稳定转染,为进一步研究miR-205在肾上腺皮质癌细胞SW-13中的功能及基因调控机制奠定了实验基础.
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膀胱尿路上皮癌及正常膀胱组织microRNA21、205表达研究
目的 探讨microRNAs (miRNAs)在膀胱尿路上皮癌与正常膀胱组织中的表达差异性及意义.方法 采用基于2-△△cT的实时定量PCR(Real-time PCR)方法 检测50例膀胱尿路上皮癌与21例正常膀胱组织中miR-21及miR-205的表达情况.结果 与正常组织相比,癌组织miR-21表达上调(P＜0.01),miR-205表达下调(P＜o.o1).癌组织中miR-21与miR-205表达量的比值约3.6倍于正常组织中表达量的比值.结论 miR-21高表达、miR-205低表达可能参与膀胱尿路上皮癌的发生、发展.
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基于qRT-PCR检测非小细胞肺癌患者血浆miR-205方法的建立及临床应用
目的 建立一种定量检测血浆miR-205的qRT-PCR检测方法,并探讨其在NSCLC早期诊断及预后监测中的临床应用价值.方法 针对miR-205的序列,构建qRT-PCR扩增体系.收集27例NSCLC患者术前和术后的血浆以及29例健康人血浆进行miR-205测定,并对受试者行ROC分析.结果 本研究建立的qRT-PCR法检测miR-205的灵敏度为1.53×10-9μmol/L,精密度实验CV值均＜5％.NSCLC患者手术前血浆中miR-205表达水平高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);与术前相比,术后一周血浆中miR-205的表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).miR-205所得ROC曲线下面积为0.765(95％ CI:0.63～0.899),区别NSCLC患者和健康体检者的敏感度为77.8％,特异度为69.2％.结论 NSCLC患者血浆中miR-205的表达情况,可作为NSCLC潜在的生物标志物,本实验建立的血浆miR-205 qRT-PCR检测方法具有良好的精密度和灵敏度,有望成为一种新的有效辅助NSCLC早期诊断及判断预后的方法.
关键词： 非小细胞肺癌 实时荧光定量逆转录PCR miR-205
