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miR-29、miR-200a在妊娠期糖尿病者外周血中表达及临床意义
目的:探讨miR-29、miR-200a在妊娠期糖尿病(GDM)患者外周血中的表达特征及临床意义.方法:选取本院接诊的80例GDM患者与80例糖耐量正常孕妇分别作为观察组与对照组,对两组孕妇进行外周血miR-29、miR-200a、miR-375检测,并进行血浆FINS、FPG、2hPG、HbAlc检测.分析miR-29、miR-200a、miR-375与血糖相关指标的相关性.结果:观察组FINS水平低于对照组,FPG、2hPG、HbAlc水平高于对照组(P＜0.05).观察组外周血miR-29表达量低于对照组,miR-375、miR-200a表达量均高于对照组(P＜0.05).相关性分析显示,miR-29表达与FPG、2hPG、HbAlc均呈正相关,与FINS呈负相关(P＜0.05);miR-375、miR-200a表达均与FPG、2hPG、HbAlc呈负相关,与FINS呈正相关(P＜0.05).结论:外周血中miR-29、miR-200a、miR-375表达与血糖相关指标密切相关,miR-29、miR-200a、miR-375表达异常预示着GDM易感性,临床可通过测定外周血miR-29、miR-375表达为临床早期诊断GDM提供一定的参考依据.
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片仔癀上调miR-200a抑制大肠癌耐药细胞转移的作用机制
目的:研究片仔癀对大肠癌耐药细胞转移的影响和对miR-200a及其靶基因E盒结合锌指蛋白ZEB1/2和下游转移相关基因表达的调控作用.方法:MTT法检测不同浓度5-氟尿嘧啶(5-FU)对HCT-8/5-FU细胞和HCT-8细胞活力的影响;采用黏附实验和Transwell法检测细胞黏附、迁移和侵袭能力的改变;通过Q-PCR检测片仔癀对HCT-8/5-FU细胞miR-200a的表达;采用免疫荧光检测miR-200a靶基因ZEB1和ZEB2及其下游E-cadherin、N-cadherin的表达.结果:MTT检测结果显示不同浓度的5-FU干预可显著降低HCT-8细胞活力,对HCT-8/5-FU细胞活力影响较小;片仔癀干预显著降低HCT-8/5-FU细胞黏附、迁移和侵袭能力;可显著上调miR-200a的表达和E-cadherin的表达,下调ZEB1、ZEB2和N-cadherin的表达.结论:片仔癀干预显著抑制大肠癌耐药细胞的转移,且通过调控miR-200a/ZEB1/2通路及其下游E-cadherin、N-cadhrin的表达可能是其抑制大肠癌转移的重要内在机制.
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上调miR-200 a的表达减弱TGF-β1刺激的大鼠胰腺星状细胞活化和胶原合成
目的：探讨miR-200a对转化生长因子β1（TGF-β1）刺激的大鼠胰腺星状细胞（PSCs）活化和胶原蛋白合成的影响。方法用组织块法培养分离PSCs，免疫荧光染色检测结蛋白（ desmin）、神经胶质原纤维酸性蛋白（ GFAP）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达鉴定PSCs；取新鲜培养的第2代PSCs，设空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1＋miR-NC组、TGF-β1＋miR-200 a mimic组，Western blot法和细胞免疫荧光染色法检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白（ col-lagen Ⅰ）的表达，荧光定量PCR检测α-SMA、collagen Ⅰ mRNA及miR-200 a的表达。结果 TGF-β1可刺激大鼠PSCs活化及促进胶原蛋白的合成（ P＜0.05），且呈时间依赖性；转染miR-200 a mimic后，在相同浓度的TGF-β1刺激下，α-SMA和collagen Ⅰ的蛋白和mRNA表达明显降低（P＜0.01）。结论上调miR-200a的表达，可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化和胶原蛋白合成的刺激作用，其可能的机制是抑制TGF-β1的生物学作用。
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肝癌患者血清中miR-200a的表达及其临床意义
目的：探讨肝癌患者血清 miR-200a 表达及其临床病理特征之间的关系。方法运用实时定量PCR技术检测36例肝癌患者和21例健康人血清标本中miR-200a的表达情况，分析血清miR-200a的表达水平与肝癌患者临床病理参数之间的关系。血清中 AFP 值从临床资料中获取。结果36例肝癌患者miR-200a的表达水平为4.63±1.31，21例健康人对照为6.05±0.51，两者差异有统计学意义（P＜0.05）。在36例肝癌患者中，血清miR-200a表达水平与肝癌分化程度、TNM分期及AFP有关（P＜0.05），而与性别、年龄、抽烟、饮酒、HBV、肝硬化无关（P＞0.05）。结论血清 miR-200a 表达水平可作为新的生物学指标对肝癌的诊断具有一定的价值。
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MiR-200a通过靶向硫酸酯酶2基因抑制非小细胞肺癌细胞A549迁移
目的 研究微小RNA-200a( miR-200a)对非小细胞肺癌细胞迁移的影响,探讨其分子机制.方法 采用Real-time PCR法检测人肺癌细胞株( A549、SK-MES-1)及人正常肺支气管上皮细胞株16HBE中miR-200a的表达水平.将hsa-miR-200a mimics、NC mimics、hsa-miR-200a inhibitor、NC inhibitor分别瞬时转染A549 细胞后,transwell 小室法检测细胞迁移能力的变化.利用生物信息学软件预测miR-200a的可能靶基因,通过荧光素酶报告基因检测系统和Western blot 法对预测的潜在靶基因进行验证.结果 miR-200a在肺癌细胞系A549、SK-MES-1中表达明显降低(P＜0.05).过表达miR-200a明显抑制A549肺癌细胞的迁移能力,而将pCDNA.3-Sulf2质粒与hsa-miR-200a共转染A549细胞可以回复其迁移能力(P＜0.01).双荧光素酶报告基因显示miR-200a 可以直接作用于靶基因硫酸酯酶2 (Sulfatase 2,Sulf2)的3＇-UTR区域抑制荧光素酶活性,Western blot检测显示上调miR-200a的表达能够明显下调A549肺癌细胞Sulf2 蛋白的表达水平.结论 miR-200a通过靶向作用于Sulf2基因来抑制肺癌细胞的迁移能力.
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下调miR-200a表达对结直肠癌细胞HCT116影响研究
目的 miR-200a在多种肿瘤中被证实能调控上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),然而miR-200a在结直肠癌中调控EMT的机制仍未完全阐明.本研究探讨下调miR-200a表达对结直肠癌细胞系HCT 116增殖、迁移和凋亡的影响及可能机制.方法 实验分blank组(仅加LipofectamineTM 2000)、NC组(转染miR-200a negative control)和inhibitor组(转染miR-200a inhibitor)3组,各组细胞处理48 h后,CCK-8、Transwell迁移实验和TUNEL法分别检测细胞增殖、迁移和凋亡变化,免疫细胞化学及蛋白质印迹法检测相关蛋白变化.结果 miR-200a的抑制效率为50.9％,下调miR-200a后inhibitor组细胞增殖能力显著增强(A值为1.429±0.419),F=4.009,P=0.031;Transwell迁移结果显示,inhibitor组的穿膜数量显著增加至45.67±6.779,F=102.452,P＜0.001;TUNEL结果显示,inhibitor组细胞的凋亡指数显著减低至(0.145±0.4585)％,F=19.932,P＜0.001;下调miR-200a的表达后,免疫细胞化学检测显示,E-cadherin蛋白表达减弱,Vimentin表达增强;蛋白质印迹法显示,p-AKT和p-ERK1/2的表达增强,而AKT和ERK2表达无变化.结论 在结直肠癌细胞中下调miR-200a能增强AKT和ERK信号通路活性,后两者可能诱导细胞发生EMT,终导致促进细胞增殖和迁移,抑制细胞凋亡.
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结直肠癌miR-200a与miR-92a表达水平及其与临床病理特征的关系
目的 研究miR-200a、miR-92a在结直肠癌中的表达水平及其与患者临床病理特征的关系.方法 选取201 1年2月～2012年8月在新疆医科大学附属肿瘤医院接受手术治疗的结直肠癌患者60例,采集结直肠癌组织与癌旁组织标本各60例.采用原位分子杂交技术检测上述标本中miR-200a表达阳性率,采用实时荧光定量PCR法检测上述标本中miR-92a表达情况.分析miR-200a及miR-92a表达情况与结直肠癌患者的临床病理特征相关性.随访5年,根据生存状态分为存活组与死亡组,比较两组患者miR-200a、miR-92a表达情况差异.结果 结直肠癌组织中miR-200a表达阳性率及miR-92a相对表达明显高于癌旁组织(均P＜0.05).中高分化、TNM Ⅰ～Ⅱ期结直肠癌患者miR-200a表达阳性率明显低于低分化、TNMⅢ～Ⅳ期的结直肠癌患者,分别为40.00％(18/45)比73.33％(11/15)、58.06％(18/31)比86.21％(25/29),差异均有统计学意义(均P＜0.05).而TNM Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移结直肠癌患者miR-92a相对表达量均明显低于TNMⅢ～Ⅳ期、有淋巴结转移患者(均P＜0.05).随访5年,生存组21例,死亡组39例.存活组miR-200a表达阳性率及miR-92a相对表达量均明显低于死亡组,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).结论 结直肠癌组织的miR-200a、miR-92a高表达,与病情严重程度及预后密切相关.
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小鼠β-catenin基因3'端非编码区荧光素酶报告载体的构建及其与miR-200a靶向调控关系的研究
目的 构建小鼠β-catenin基因野生型及突变型重组荧光素酶报告质粒和小鼠miR-200a过表达质粒,验证miR-200a与β-catenin的靶向调控关系.方法 采用生物信息学方法预测miR-200a与β-c ate nin基因的结合位点.采用PCR法扩增小鼠β-catenin基因3'端非编码区(3'UTR)片段和pre-miR-200a基因片段,分别克隆至pGL3-control载体和p Le nti-CMV-EG FP载体,构建野生型及突变型重组荧光素酶报告质粒.293T细胞分为6组,分别将野生型与突变型荧光素酶质粒与miR-200a过表达质粒以及对照质粒共转染,检测6组细胞中荧光素酶的活力.结果 电泳和测序结果证实成功构建小鼠β-c ate nin基因野生型和突变型重组荧光素酶报告质粒以及miR-200a过表达质粒;双荧光素酶活力检测结果显示,野生型实验组相对荧光素酶活力均低于野生型对照组和阴性对照组,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建小鼠β-catenin基因野生型和突变型重组荧光素酶报告质粒以及miR-200a过表达质粒,miR-200a可以靶向抑制β-catenin的表达.
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miR-200a抑制YAP1基因表达对肺癌细胞增殖的影响
目的:研究微小RNA-200a(miR-200a)对肺癌细胞增殖的影响,并探讨其分子机制.方法:采用Real-time PCR检测15例非小细胞肺癌组织和对应癌旁组织、人肺癌细胞株(A549、NCI-H520、SK-MES-1)及人正常肺支气管上皮细胞株16HBE中miR-200a的表达水平.用CCK-8法检测miR-200a对A549肺癌细胞增殖活性的影响.通过生物信息学方法预测miR-200a可能的靶基因,双荧光素酶报告基因实验结合Real-time PCR和Western blot验证miR-200a对靶基因YAP1的调控作用.CCK-8法检测下调靶基因YAP1对A549肺癌细胞株增殖活性的影响.结果:miR-200a在非小细胞肺癌组织和肺癌细胞系中表达明显降低(P<0.01).上调miR-200a表达后明显抑制A549肺癌细胞的增殖活力(P<0.01).双荧光素酶报告基因显示miR-200a可以直接作用于靶基因YAP1的3'-UTR区域抑制荧光素酶活性(P<0.01),Real-time PCR和Western blot检测显示上调miR-200a的表达能够明显下调A549肺癌细胞YAP1 mRNA和蛋白的表达水平(P<0.01).CCK-8法显示下调YAP1的表达能够明显抑制A549肺癌细胞的增殖活性(P<0.01).结论:miR-200a通过靶向作用于YAP1基因来抑制肺癌细胞的增殖,从而在肺癌中发挥抑癌基因的功能.
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上皮源性卵巢癌中4种miRNAs的表达及其临床意义
目的：分析上皮源性卵巢癌（EOC）组织中miR-200a、miR-141、miR-205和miR-34a的表达及其临床意义。方法44例EOC患者按FIGO分期分为FIGOⅠ~Ⅱ（FIGO早期组）组15例和FIGOⅢ~Ⅳ（FIGO晚期组）组29例，用实时荧光定量PCR定量比较2组4种miRNAs的表达差异并考察4种miRNAs表达间的关联。以各组miRNAs表达的中位数将EOC患者分为miRNA高表达组和低表达组，比较2组患者间的生存差异。按年龄、FIGO分期、术后是否有残余瘤及术后化疗情况分组，进行Kaplan-Meier生存分析和Cox多因素分析。结果 FIGO晚期组miR-141的表达高于早期组（P=0.036）。miR-141的表达与miR-200a、miR-205呈正相关，与miR-34a呈负相关（均P<0.05）；miR-200a与miR-205的表达呈正相关（P<0.05）。生存分析显示，miR-200a的表达低，卵巢癌患者无进展生存期短（P=0.035），FIGO早期组生存率高于FIGO晚期组（P<0.05）。miR-200a的表达水平、FIGO分期以及年龄与卵巢癌患者总生存期和无进展生存期有关，miR-141、miR-205和miR-34a的表达水平、术后残余瘤以及化疗与患者生存无关。结论 miR-200a的表达与卵巢癌患者预后有关，可能是卵巢癌患者预后预测的独立影响指标。
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miR-200a靶向调控AP-2γ表达抑制神经母细胞瘤SK-N-AS细胞增殖
目的 明确miR-200a具有靶向调控转录因子活化蛋白(AP)-2γ表达而抑制神经母细胞瘤细胞增殖的能力,进一步揭示miR-200a抗瘤的分子机制.方法 通过双荧光素酶报告基因分析检测miR-200a对AP-2γ3'UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-200a模拟物转染神经母细胞瘤细胞,利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)方法检测AP-2γ表达水平的改变;将AP-2γshRNA转染SK-N-AS细胞,MTS细胞增殖活性检测分析干扰AP-2γ表达对神经母细胞瘤细胞增殖能力的影响;将AP-2γ重组质粒与miR-200a模拟物共转染神经母细胞瘤细胞,通过MTS检测细胞增殖能力.结果 miR-200a处理组细胞活性(66.33±5.13)与对照组的(100±0)相比,细胞增殖受到明显抑制(F=114,P<0.05).与未转入的相对荧光素酶活性(0.982±0.119)相比,miR-200a转染明显抑制AP-2γ的3'UTR驱动的荧光素酶活性(0.624±0.051).且miR-200a模拟物明显降低神经母细胞瘤细胞中AP-2γ的mRNA和蛋白表达水平;此外,与对照组相比,shRNA干扰AP-2γ表达能明显抑制SK-N-AS细胞的增殖(62.5±2.4),它能部分模拟miR-200a的抑制增殖能力.后,发现过表达AP-2γ能部分逆转miR-200a对SK-N-AS细胞的增殖抑制作用(92.4±1.4).结论 miR-200a通过靶向下调AP-2γ表达而抑制神经母细胞瘤细胞的增殖.
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miR-200a及AFP在肝癌、肝硬化患者血清中表达比较分析
目的:分析miR-200a及AFP在肝癌、肝硬化患者血清中的表达水平并进行比较,探索其成为肝癌早期诊断血清标志物的可能性.方法:临床收集肝正常、肝硬化、肝癌患者血液标本.运用实时定量PCR技术检测血清miR-200a的相对表达情况,血清AFP水平从临床资料中提取.结果:临床标本分析结果显示,miR-200a在肝硬化及肝癌患者中均显著下调(P＜0.05),AFP仅在肝癌患者中出现异常表达.结论:血清miR-200a极大程度地参与了肝癌发生,对肝硬化及肝癌具有一定的诊断价值.
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和络泄浊颗粒对大鼠肾间质纤维化miR-200a表达影响
目的:探索和络泄浊颗粒对大鼠肾脏纤维化中miR-200a表达的影响及探讨其可能存在的作用机制.方法:30只SD雄性大鼠随机分为6组:假手术组(Sham)、手术组(UUO)及和络泄浊颗粒(UUO+ REG)组各2组,运用单侧(左)输尿管结扎法制造肾间质纤维化模型,但Sham组仅游离输尿管,而其余两组则游离并结扎输尿管.术后各组按1 mg/kg·d-1的量进行灌胃,UUO+ REG组给予REG,其余两组则予生理盐水.术后第7天和14天,摘除左梗阻侧肾脏进行免疫组化检查α-SMA和荧光定量PCR检测miR-200a的表达.结果:在UUO及UUO+ REG组,α-SMA表达明显高于Sham组(P＜0.01);UUO+ REG组低于UUO组(P＜0.05).miR-200a表达水平在UUO组和UUO+ REG组都是降低的,但是UUO组与Sham组差别明显(P＜0.01),其与UUO+REG组亦有明显的差别(P＜0.05).结论:和络泄浊颗粒可以通过上调miR-200a延缓肾脏纤维化进展.
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MiR-200a在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义
目的 探讨miR - 200a上皮性卵巢癌组织中的表达及与临床病理特征关系.方法 采用Taqman茎环探针实时荧光定量PCR方法检测40例上皮性卵巢癌和30例良性上皮性卵巢肿瘤组织标本中miR- 200a的表达,分析miR-200a的表达量与临床病理特征关系.结果 miR - 200a在卵巢癌组织中的相对表达量显著高于良性卵巢肿瘤组织(P＜0.01),在晚期卵巢癌组织中表达低于早期卵巢癌组织(P＜0.05),在低分化卵巢癌中表达有下降趋势.miR - 200a表达与病理类型及淋巴结转移无相关性.结论 miR-200a在上皮性卵巢癌组织中表达升高,在晚期卵巢癌中表达下降,提示其可能在卵巢癌的发生发展中起原癌基因的作用,并参与晚期卵巢癌的侵袭转移.
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miR-200a在成釉细胞瘤中的表达及意义
目的:研究miR-200a的表达与人成釉细胞瘤之间的相关性.方法:应用RNAhybrid和miRanda软件预测β-catenin基因可能的靶向miRNA；选择30例人成釉细胞瘤标本和5例正常牙胚标本,应用实时荧光定量PCR方法检测标本中miR-200a的表达情况.结果:RNAhybrid和miRanda软件分别在β-catenin mRNA第68～96碱基和第69～94碱基位置预测到一个miR-200a结合位点.与正常牙胚组织标本相比,miR-200a在人成釉细胞瘤组织标本中的表达存在明显的下调,差异显著(P＜0.05).结论:miR-200a的表达改变与人成釉细胞瘤相关,miR-200a可能为β-catenin的靶基因之一.
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腹腔热灌注化疗对卵巢癌患者血清miR-200a的影响
目的:探讨腹腔热灌注化疗对卵巢癌患者血清miR-200a的影响.方法:将82例手术治疗后的卵巢癌患者随机分为两组,观察组与对照组各41例.观察组采用全身静脉化疗联合腹腔热灌注化疗,对照组采用全身静脉化疗联合普通腹腔灌注化疗.治疗3个疗程后观察疗效,并且测定患者血清miR-200a.结果:观察组总有效率为87.8％,对照组总有效率为73.2％,两组差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后两组患者血清miR-200a均有明显降低,观察组降低更加明显(P＜0.05).结论:腹腔热灌注化疗对卵巢癌的效果更明显,可能与减少miR-200a的表达有关系.
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miR-200a对肺癌A549细胞增殖、迁移及凋亡的影响
目的 探讨miR-200a在肺癌细胞中的表达及其对A549细胞增殖、迁移及凋亡等生物学功能的影响.方法 采用RT-PCR检测肺癌细胞株A549、H23、H460和永生化人支气管上皮细胞株16HBE的表达水平.采用脂质体转染法将miR-200amimics和阴性对照序列(miR-negtive control,miR-NC)分别转染A549细胞,运用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的改变情况;Transwell实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况.利用生物信息学方法预测miR-200a的靶基因.结果 miR-200a在肺癌细胞株A549、H23和H460相对表达水平均低于16HBE组,差异有统计学意义(P＜0.05).miR-200a mimics和miR-NC组分别转染A549细胞,CCK-8实验显示miR-200a mimics组在第4、5天时的OD值明显低于miR-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05);平板克隆形成实验显示miR-200a mimics组细胞克隆形成率为(33.13±0.74)％,明显少于miR-NC组(45.57±1.27)％,差异有统计学意义(P＜0.05).Transwell实验显示,miR-200a mimics穿膜细胞数为(71.60±17.90)个,少于miR-NC组[(140.20±17.88)个],差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术检测显示,miR-200a mimics凋亡率为(17.80±1.90)％,明显高于miR-NC组[(11.33±1.96)％],差异有统计学意义(P＜0.05).生物信息学方法预测Tiam1等可能是miR-200a的靶基因.结论 miR-200a能够抑制肺癌细胞A549的增殖、迁移并促进其凋亡,为肺癌的治疗提供潜在靶点.miR-200a可能通过靶基因Tiam1发挥其对肿瘤的调控作用.
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miR-200 a、PTEN在结直肠癌中的表达及其临床意义
目的：探讨miR-200a与PTEN在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法收集结直肠癌手术标本87例以及距癌灶边缘5 cm以上切缘的正常结直肠黏膜作为对照,应用原位分子杂交和免疫组化EnVision两步法检测结直肠癌及癌旁组织中miR-200a与PTEN的表达,分析二者与结直肠癌临床病理特征的关系。结果原位分子杂交结果显示,结直肠癌组织中miR-200a的阳性率明显高于癌旁对照组(P<0．01),miR-200a表达与肿瘤分化程度相关(rs =0．503,P<0．01)。免疫组化结果显示,结直肠癌组织中PTEN的阳性率明显低于癌旁对照组(P<0．01),PTEN表达与肿瘤分化程度有相关性(rs =-0．493,P<0．01)。二者在结直肠癌组织中的表达均与患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期等无显著相关性(P>0．05)。相关性分析显示,结直肠癌中miR-200a与PTEN的表达呈显著负相关(P<0．01)。结论高表达的miR-200a通过靶向抑制PTEN的表达参与结直肠癌的发生、发展,miR-200a与PTEN有望成为结直肠癌早期诊断、治疗、预后判断的潜在生物学指标。
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MiR-200a抑制Wnt/β-catenin信号通路缓解肾间质纤维化
目的:探讨miR-200a对单侧输尿管梗阻小鼠肾Wnt/β-catenin信号通路的影响,进一步探讨miR-200a对肾间质纤维化的作用.方法:应用单侧输尿管结扎(UUO)建立肾间质纤维化模型,24只6周C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组,UUO组,UUO+miR-200a组,UUO+NC组,每组6只.从模型建立第一天开始,给予UUO+miR-200a组每只小鼠尾静脉注射40 mg/kg的miR-200a,给予UUO+NC组每只小鼠尾静脉注射40mg/kg的Negative Control,连续3d.第7天取肾组织行HE及Masson染色,RT-PCR及WesternBlot检测Wnt4、β-catenin、Fibronectin、α-SMA mRNA和蛋白在肾组织中的表达.结果:与假手术组比较,UUO组中肾小管损伤,间质胶原沉积明显,Wnt4、β-catenin、Fibronectin、α-SMA mRNA及蛋白表达升高(P＜0.05).与UUO组比较,UUO+ miR-200a组肾小管损伤和间质胶原沉积亦明显减轻,Wnt4、β-catenin、Fibronectin、α-SMA基因及蛋白表达降低(P＜0.05).结论:miR-200a能够抑制Wnt/β-catenin通路缓解肾间质纤维化.
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miR-200a对肾小管上皮细胞转分化的调控作用
目的:探讨miR-200a对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞间质转分化的影响.方法:体外培养肾小管上皮细胞(HK-2),TGF-β1(终浓度为10 ng/mL)作用12、24、48 h,采用qPCR检测miR-200a的表达,qPCR和Western Blot检测上皮转分化相关蛋白E-cadherin和α-SMA的mRNA和蛋白表达;用agomir和antagomir分别转染细胞,其中转染agomir后用TGF-β1诱导肾小管上皮细胞,qPCR、Western Blot和细胞免疫荧光检测E-cadherin和α-SMA的mRNA和蛋白表达情况.结果:在TGF-β1诱导下miR-200a的表达随着时间逐渐降低(P＜0.05),E-cadherin表达呈降低趋势(P＜0.05),α-SMA表达逐步上调(P＜0.05);agomir使miR-200a表达明显升高(P＜0.05),antagomir使miR-200a表达降低(P＜0.05);与转染NC-miRNA相比,agomir在mRNA和蛋白水平上调E-cadherin的表达(P＜0.05),下调α-SMA的表达(P＜0.05);antagomir则抑制E-cadherin的表达(P＜0.05),增加α-SMA的表达(P＜0.05),细胞免疫荧光表达情况与蛋白水平相符.结论:miR-200a能减弱TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化.
