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PBX3在宫颈癌中的表达及与临床病理参数和预后关系
目的:探究宫颈癌组织中前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)的表达,以及与临床病理特征及预后的关系.方法:收集本院宫颈癌以及癌旁组织82例进行研究,Western blot法、免疫组化法检测标本组织中PBX3蛋白表达,分析二者与临床病理特征及预后的关系.对影响患者生存的临床因素进行COX回归分析,所有患者均进行30个月随访,统计患者生存率,采用Kaplan-Meier分析患者生存情况,Log-Rank法检测组间生存差异.结果:与癌旁组织相比,宫颈癌组织中PBX3蛋白、蛋白阳性表达率均升高(P＜0.05).PBX3表达与年龄、病理类型、肿瘤浸润深度无关(P＞0.05),与肿瘤分期、肿瘤分化程度、肿瘤直径、浸润程度淋巴结转移有关(P＜0.05).30个月随访,24人死亡,死亡率为29.3％.COX多因素分析显示,肿瘤分期、肿瘤分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移、PBX3为影响患者预后的独立因素.PBX3阳性表达组58.1％死亡,阴性表达组23.5％死亡,两组患者Kaplan-Meier生存曲线存在差异(P＜ 0.05).结论:PBX3在宫颈癌组织中表达上调,与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移等有关,可能为宫颈癌患者预后的生物学指标.
关键词： 宫颈癌 前B细胞白血病同源盒基因3 临床意义 预后分析 -
前B细胞白血病同源盒基因3基因小干扰RNA在体外诱导脑胶质瘤细胞凋亡的机制
目的 探讨前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)基因小于扰RNA (siRNA)对脑胶质瘤细胞活力、凋亡的影响及其机制.方法 参照LipofectamineTM 2000说明,将PBX3的特异性siRNA(PBX3-siRNA组)转染人脑胶质瘤U87细胞,同时转染阴性对照siRNA(阴性组),并设置空白组,转染48 h,Western blot检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、p53、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)的蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡率.噻唑蓝(MTT)检测PBX3-siRNA转染24、48、72 h的细胞活力.结果 转染PBX3-siRNA的U87细胞PBX3表达明显低于空白组(相对表达量分别为0.096±0.010、0.467±0.051,P=0.000).与空白组比较,PBX3-siRNA组在24～72 h的细胞活力均明显降低(24、48、72 h细胞活力分别为0.336±0.034、0.549±0.057、0.671±0.073,P24h =0.001,P48h =0.004,P72h =0.004).PBX3-siRNA组较空白组在48 h的细胞凋亡率显著升高[凋亡率分别为(21.21±1.34)％,(4.71±0.32)％;P=0.000].p-p38(0.031±0.006)蛋白表达显著降低,p53(0.388±0.041)和Cleaved-Caspase-3(0.205±0.018)蛋白表达显著升高(Pp-p38=0.000,Pp53=0.000,PCleaved-Caspase-3=0.000).3组间p38和Caspase-3蛋白表达差异无统计学意义(Pp38=0.987,PCaspase-3=0.871).结论 PBX3基因siRNA可抑制脑胶质瘤细胞活力,诱导细胞凋亡,其机制可能是下调p38MAPK信号通路.
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小鼠抗人前B细胞白血病同源盒基因3多克隆抗体的制备与鉴定
目的 制备前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)多克隆抗体.方法 采用反转录PCR扩增PBX3基因区序列,并重组入原核表达载体pGEX-4T-1,重组载体转化BL21大肠杆菌,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导GST-PBX3融合蛋白的表达.SDS-PAGE纯化融合蛋白,并用GST-PBX3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,收集经过免疫的小鼠血清即抗PBX3的多克隆抗血清,采用间接ELISA检测其效价,通过免疫细胞化学技术及Western blot法鉴定其特异性.结果 成功构建pGEX-4T-1/PBX3原核表达载体,转化BL21菌株后可高效表达GST-PBX3融合蛋白,且以不可溶包涵体形式存在.SDS-PAGE纯化蛋白并免疫小鼠产生的抗PBX3血清可特异识别细胞外源过表达的PBX3蛋白,同时可检测到细胞外源性PBX3蛋白的细胞内定位情况.结论 获得效价和特异性良好的PBX3多克隆抗体.
关键词： 前B细胞白血病同源盒基因3 融合蛋白表达 多克隆抗体
