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噬菌体裂解酶作用机制及用于细菌感染治疗的研究进展
噬菌体裂解酶具有高效性、高稳定性、潜在广泛杀菌性和安全性,能特异性的杀灭细菌而且不容易使细菌产生耐药性.在有噬菌体存在的 情况下,噬菌体侵入细菌并编码产生裂解酶,裂解酶在细菌内"自内裂解"细菌,在没有噬菌体存在的情况下,穴蛋白协助裂解酶"自外裂解"细菌 .此外,本文还回顾了裂解酶对革兰阳性菌如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌,阴性菌如鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌感染的治疗新进展 .
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胱硫醚-β-合成酶在SHR脑组织表达下调
内源性硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)由L-半胱氨酸在胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-1yase,CSE)及半胱氨酸转移酶催化作用下产生,它通过中枢机制参与调节心血管活动[1-2].高血压时脑内局部H2S浓度的改变可能参与了高血压的发病,自发性高血压大鼠(SHR)脑内CBS表达未见报道.本实验检测CBS在SHR脑组织的分布及表达,探讨其与高血压发病的关系.
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甲羟戊酸途径代谢酶HMGL研究概述
3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶 A 裂解酶(HMGL)是一种参与生物体内3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶 A(HMG-CoA)代谢的重要酶类,在自然界中广泛存在,具有多种功能。作为 HMGL 作用的前体物质,HMG-CoA 在生物体内主要有两方面作用。首先,HMG-CoA 可在 HMGL 作用下形成酮体,酮体能够提供能量;其次,作为甲羟戊酸途径中一个重要中间体,可用于合成甾体、辅酶 Q、萜类等生命活性物质[1-3]。
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裂解酶片段长度多态性对沙眼衣原体的初步分型
裂解酶片段长度多态性(CFLP)技术具有快速、灵敏、准确、操作简便等优点[1],我们根据现有的条件将方法略加修改,初步对沙眼衣原体(Ct)基因做了分型.
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血管性血友病因子裂解酶的研究进展
大量研究表明,在生理条件下,血浆中血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)主要受金属蛋白酶,即血管性血友病因子裂解酶(von Willebrand factor-cleaving protease,VWF-cp)的调节,VWF-cp活性异常致血浆中超大VWF多聚体(UL-VWF)无法降解并蓄积,是导致血栓性血小板减少性紫癜(thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP)发病的重要机制.
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利用内源性同型半胱氨酸拮抗剂防治高同型半胱氨酸血症
同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)是体内蛋氨酸循环的正常代谢产物,是能量代谢和许多需甲基化反应的重要中间产物,Hcy缺乏将导致能量代谢障碍及激素生成障碍等代谢性疾病发生.Hcy通过转硫途径代谢,即在维生素B6依赖的胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β- synthetase,CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)作用下被代谢为非必需氨基酸半胱氨酸、α-酮丁酸及NH+4.半胱氨酸进一步合成为谷胱甘肽等含硫蛋白质,或者分解形成α-酮丁酸、牛磺酸(taurine)以及硫化氢(见图1)[1].
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胱硫醚γ-裂解酶/硫化氢通路在病毒性心肌炎发病中的作用
目的:研究胱硫醚γ-裂解酶(CSE)/硫化氢(H2S)通路在病毒性心肌炎小鼠体内的表达情况及硫化氢对病毒性心肌炎的保护作用。
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分枝杆菌噬菌体D29裂解酶基因的表达与鉴定
目的:在耻垢分枝杆菌中表达预测的噬菌体D29裂解酶基因片段,鉴定其细胞壁裂解活性.方法:在分析分枝杆菌噬菌体D29开放阅读框序列的基础上,用PCR法从噬菌体D29基因组DNA中扩增出与裂解酶同源性较高的序列gene10,将其克隆入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒后,在耻垢分枝杆菌中进行诱导表达.对表达产物进行SDS-PAGE检测,对诱导培养重组菌进行混浊度测定、透射电镜观察以鉴定其裂解活性.结果及结论:成功构建了重组穿梭质粒pUV-gene10并使gene10在耻垢分枝杆菌中获得表达,表达产物能有效降低宿主菌培养液混浊度,降解宿主菌细胞壁,证实gene10表达产物为噬菌体裂解酶,并推测其为非经典分泌蛋白.
关键词: 裂解酶 分枝杆菌噬菌体D29 大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒 -
气体信号分子硫化氢对心血管系统的调节作用
近期研究发现,硫化氢(H2S)为一种新型气体信号分子[1-3],它在体内持续产生,并且对多种病理生理过程发挥重要的调节作用.一、内源性H2S的生成及代谢内源性H2S在体内是由半胱氨酸作为底物,主要通过胱硫醚-β-古成酶(CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)催化生成.这两种酶在哺乳动物的组织和细胞中广泛分布[4],其中CBS主要分布在脑组织[5],而CSE在外周组织活性高,主要包括肝、肾、心脏和血管[6].
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噬菌体裂解酶在医疗卫生中的应用及展望
噬菌体裂解酶是由双链DNA噬菌体编码的在基因组复制晚期合成的一类蛋白质,它能够水解细菌细胞壁的肽聚糖从而杀灭细菌.噬菌体裂解酶在体内外的实验中都表现出了很高的杀菌性、种属特异性和安全性,因而具有广阔的应用前景.该文从噬菌体裂解酶的结构性质,对不同致病菌的抗菌性能及在医疗卫生中的应用进行综述.
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单纯阿狄森氏病与Ⅱ型多腺体自身免疫综合征中抗肾上腺P450酶抗原的自身抗体
〔英〕/Seissler J…∥Exp Clin Endocrinol Diabetes.-1999,107.-208~213 本研究旨在探讨抗肾上腺P450酶抗原的自身抗体:21-羟化酶抗体(21OH-A)、17α-羟化酶抗体(17OH-A)以及侧链裂解酶抗体(SCC-A)与单纯阿狄森氏病(IAD)及多腺体自身免疫综合征Ⅱ型(APSⅡ)的关系以及抗体间的相互联系。 对象与方法 25例特发性阿狄森氏病患者,40例肾上腺功能减退的APSⅡ患者且同时合并下列疾病之一:Graves病、桥本氏甲状腺炎、1型糖尿病和恶性贫血,90名单腺体病变者(Graves病20例,桥本氏甲状腺炎30例,1型糖尿病40例)及恶性贫血患者10例,另有200份健康人血清作为对照。 应用cDNA克隆技术及聚合酶链反应(PCR)扩增技术合成了肾上腺P450酶抗原:即21-羟化酶(21-OH)、17 α-羟化酶(17-OH)及侧链裂解酶(SCC),对抗原混合物进行放射标记后转移至96微孔板上,标本血清中的抗体与抗原反应后,通过抗原特异性放射配体测定法即可测得抗体效价。每一次试验均有一个相同的阳性血清(Serum P1)和一个阴性血清(Serum C1)作对照以计算抗体滴度,公式为(测得血清-C1)/(P1-C1)×100。抗体滴度高于正常对照99%即为阳性。 结果 25个IAD患者中19人21OH-A阳性(76%),3人17OH-A阴性(12%),1人SCC-A阳性(4%);40个APSⅡ患者中34人21OH-A阳性(85%),12人17OH-A阳性(30%),13人SCC-A阳性(33%);单腺体自身免疫性病变患者中无一例SCC-A阳性,仅一例桥本氏病患者17OH-A及21OH-A阳性。 这3种抗体之间显著相关。APSⅡ患者21OH-A阳性的人群中,17OH-A阳性率为83.3%(12人中占10人),SCC-A阳性率为76.9%(13人中有10人),且有10例APSⅡ患者同时具备这3种抗体,而这种情况在IAD患者中无一例出现。这3种抗体与抗肾上腺皮质自身抗体(ACA)的存在也密切相关:52个ACA阳性的患者中49例21OH-A阳性(94.2%),11例17OH-A阳性(21.2%),9例SCC-A阳性(17.3%)。结果显示,通过联合测定17OH-A及21OH-A即可诊断ACA阳性的患者。 讨论 21-OH是IAD与APSⅡ患者主要的靶抗原,而17OH-A与SCC-A是自身免疫性阿狄森氏病同时合并多腺体自身免疫的一种标志。在21OH-A阳性的患者中进行17OH-A及SCC-A的测定,可以了解患者有无合并多腺体自身免疫性疾病以及有无存在这方面的危险因素。(张新焕摘东野光校)
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食物功用有新知 (下 )
蒜头 蒜头--青春守护神丹麦研究人员发表的一份研究报告指出,蒜头能使人保持年轻.他们认为,蒜头中含有一种名叫蒜氨酸的高效物质,它可以通过蒜氨酸裂解酶转变成蒜素.这种物质与现代抗生素作用相同,它能阻止体内细菌的生长.一些科研报告指出,蒜素能降低血压、调节胆固醇、阻止真菌的生长、促进机体的解毒功能、抵制动脉硬化.另外,蒜头浸膏会促使皮肤细胞更快地增加,延缓衰老过程.
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噬菌体治疗细菌感染的临床疗效探究
进入21世纪,医疗的不断发展促使细菌尤其是耐药性细菌不断滋生,传统的抗生素已经难以有效治疗细菌感染.此时,噬菌体作为一类细菌依赖性病毒应运而生,鉴于其能够对细菌病毒起到很好的控制作用,因而被广泛应用到细菌感染的临床治疗中去.本文即结合噬菌体的分布及分类,就其在治疗细菌感染中的进展及其发展前景加以探讨.
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肿瘤坏死因子转化酶(TACE)新研究进展
1 TNF-α裂解酶的发现TNF-α前体(TM-TNF-α)需要加工去除氨端76个氨基酸残基,才能成为游离型TNF-α(S-TNF-α),进入循环系统.80年代末,人们认为这一加工过程依赖于丝氨酸蛋白水解酶;到了90年代,人们知道参与TNF-α加工过程的酶是一种或几种基质金属蛋白酶,但是还不了解该酶的结构.1997年,Black等[1]发现了一种新的特异性催化TNF-α前体裂解的金属蛋白酶,命名为TNF-α转化酶(TACE),并测定了其氨基酸序列.同年,Moss等[2]克隆了TACE的基因.
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分枝杆菌噬茵体D29裂解酶gp10的原核表达及抗脓肿分枝杆菌活性
目的 克隆并原核表达分枝杆菌噬菌体D29裂解酶gp10基因,观察重组蛋白对脓肿分枝杆菌的抑菌作用.方法 以噬菌体D29基因组DNA为模板,PCR扩增gp10基因片段,克隆至pET-32a(+)载体上,构建重组原核表达质粒pET-32a-gp10,转化E.Coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,亲和层析纯化后,采用杯碟法检测其抑菌活性.结果 PCR扩增获得长1 454 bp的gp10基因片段,重组表达质粒pET-32a-gp10经PCR、双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为54 800,表达量占菌体总蛋白的97.4%,破菌上清及破菌沉淀中均可见目的蛋白的表达,纯化后纯度可达90%,浓度为0.5mg/ml;重组蛋白对脓肿分枝杆菌有抑菌作用.结论 已成功表达重组分枝杆菌噬菌体D29裂解酶gp10,其对脓肿分枝杆菌具有抑菌作用,为抗脓肿分枝杆菌及其他非结核分枝杆菌感染新药物的研制提供了依据.
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噬菌体及其裂解酶控制金黄色葡萄球菌的研究进展
近70年来,由于抗生素的广泛使用,耐药金黄色葡萄球菌不断出现。美国1999~2005年因感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)而入院的患者增加1倍多,其中诊断为败血症的患者增加81.2%。因此,寻找控制耐药菌的新对策十分迫切。目前有望替代抗生素的控菌手段有抗菌肽、噬菌体等。其中,噬菌体的发现早于抗生素,后因抗生素的普及而被忽视。如今,耐药菌株的流行使噬菌体治疗再次受到关注。本文就应用噬菌体及其裂解酶控制金黄色葡萄球菌的研究进展进行综述。
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vWF 及 ADAMTS13在肝脏疾病中的意义
微循环障碍参与了多种疾病的进展,例如脓毒症、多器官衰竭等。血管性假性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)可使血小板粘附聚集于血管内皮细胞,导致血小板血栓形成;血管性血友病因子特异性裂解酶(a disintegrin-like and metalloprotease with thrombo-spondin type I repeats 13, ADAMTS13)可裂解 vWF 多聚体,预防血栓形成,vWF:Ag /ADAMTS13活性比值升高常常导致微循环障碍,同时也是微循环障碍和微血栓形成的主要血清学标记物。近期研究表明肝脏疾病也存在微循环障碍,vWF:Ag / ADAMTS13活性比值显著异常。现对 vWF:Ag/ADAMTS13活性比值与在肝脏疾病的意义及其影响因素综述如下。
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2型糖尿病患者血管并发症与血浆血管性血友病因子裂解酶的关系
目的检测2型糖尿病患者血浆血管性血友病因子裂解酶(vWF-cp)活性,探讨其在糖尿病血管并发症中的意义.方法将74名2型糖尿病患者根据是否合并有血管并发症分为无并发症组(24例)、微血管并发症组(27例)、大血管并发症组(23例).观察不同组患者血浆vWF-cp活性水平,并与正常对照组(40例)比较.结果 2型糖尿病患者血浆vWF-cp活性水平明显低于正常对照组(P<0.05);合并大血管病变组vWF-cp水平明显低于其他糖尿病组(P《0.05).结论血浆vWF-cp活性水平下降可能是2型糖尿病患者容易形成血栓的另一重要原因.vWF-cp活性异常可能在糖尿病的临床进展和并发症的发生中起重要作用.
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血清/尿液中枸橼酸浓度自动化检测参数建立及评价
枸橼酸是重要的代谢中间物,人类枸橼酸经肾脏代谢及排泄.枸橼酸通过表面活性机制阻碍钙盐结晶的形成及聚集并阻止尿液中草酸盐及磷酸盐的过度饱和.国外研究表明,一些泌尿系统钙盐结石患者常有低枸橼酸尿症.目前测定枸橼酸浓度的方法主要是基于枸橼酸裂解酶,苹果酸脱氢酶,乳酸脱氢酶及NADH的连锁反应,我们对引进的测定尿液及血清枸橼酸浓度的试剂盒进行评估,报告如下.
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噬菌体治疗细菌感染的研究进展
噬菌体是一种细菌依赖性病毒,在治疗细菌特别是耐药性细菌感染方面,与传统的抗生素比较具有独特的优势,其代谢动力学及给药途径是目前的研究热点.噬菌体裂解酶作为一种新的治疗手段,具有比活性噬菌体制剂更多的优点.文中就噬菌体在细菌感染治疗方面的作用机理、给药途径和基因工程的应用,及噬菌体裂解素的研究进展进行综述,对噬菌体治疗细菌感染提出展望.