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针刺对脑出血急性期血肿周围脑组织中凋亡细胞及其百分率影响的时效关系
目的:通过观察针刺对脑出血模型大鼠血肿形成后不同时间的血肿周围脑组织凋亡细胞及其百分率影响,研究针刺作用及其时效性的相关保护机制.方法:采用Wistar大鼠尾状核自体血缓慢注入法制作脑出血模型.脑组织细胞凋亡率测定分别应用TUNEL法及流式细胞术.结果:脑出血急性期TUNEL阳性细胞率显著升高,针刺各组均偏低,但高于假手术组,且针刺干预越早该比率越低;流式细胞检测结果基本与其一致.结论:针刺治疗能够改善脑出血急性期所造成的血肿周围脑组织相关的凋亡情况,从而在脑出血急性期起到保护脑组织的作用,且脑出血发生后针刺干预越早疗效越好.
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电针抗吗啡戒断大鼠胸腺细胞凋亡的实验观察
目的:观察电针对吗啡戒断大鼠免疫器官及胸腺细胞凋亡的影响.方法:连续15 d肌肉注射递增量吗啡,建立大鼠慢性吗啡成瘾模型,观察电针对吗啡戒断大鼠免疫器官胸腺、脾脏及其指数的影响,运用TUNEL法标记各组大鼠胸腺的凋亡细胞.结果:与正常组比,戒断组大鼠免疫器官胸腺、脾脏萎缩,重量下降(P<0.01),胸腺细胞凋亡率升高;电针组大鼠胸腺、脾脏萎缩减轻,重量上升(P<0.01),胸腺细胞凋亡率下降.结论:电针"足三里"穴具有保护免疫器官、抑制胸腺细胞凋亡的作用.
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止哮平喘方对哮喘大鼠肺组织EOS凋亡及Fas,Bcl-2基因表达的影响
目的:观察止哮平喘方对哮喘大鼠肺组织嗜酸性粒细胞(EOS)凋亡及Fas,B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bc1-2)mRNA表达的影响,探讨止哮平喘方影响哮喘大鼠肺组织EOS凋亡的机制.方法:SD大鼠60只,随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组(1 mg·kg-1·d-1)、止哮平喘方低、中、高剂量组(11,22,44 g·kg-1·d-1),每组10只.采用卵蛋白(OVA)致敏和激发复制哮喘大鼠模型,共治疗14 d.取右中肺组织4％多聚甲醛固定,石蜡切片,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肺组织EOS凋亡,原位杂交检测Fas,Bcl-2 mRNA的表达.结果:与正常组比较,哮喘模型组大鼠肺组织中EOS的数量较多,EOS凋亡减少,同时FasmRNA表达明显降低、Bcl-2 mRNA的表达明显增加(P＜0.01).药物干预后,各治疗组EOS凋亡增加,Fas mRNA表达增加、Bcl-2 mRNA表达降低(P＜0.01或P＜0.05).Fas mRNA表达与EOS凋亡呈正相关(P＜0.01),Bcl-2 mRNA表达与EOS凋亡呈负相关(P＜0.01).结论:止哮平喘方可促进肺组织Fas mRNA表达、抑制Bcl-2 mRNA的表达,促进肺组织EOS凋亡,减轻气道炎症,从而发挥平喘作用.
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桃仁对血液循环障碍大鼠内皮细胞凋亡及相关蛋白表达的影响
目的:了解桃仁对寒凝血瘀证(寒证)和瘀热互结证(热证)内皮细胞凋亡和相关蛋白表达的影响.方法:80只大鼠随机分为寒证对照组、模型组、桃仁(8 g·kg-1)组、川芎(8 g·kg-1)阳性对照组,以及热证对照组、模型组、桃仁(8 g·kg-1)组、丹参(14 g·kg-1)阳性对照组,每组10只.采用全身低温冷冻和注射角叉菜胶两种方法分别建立寒、热两证模型,造模同时各给药组,每天ig给药1次,连续给药7d,取心、肺、肝、肾、脾,采用HE染色、免疫组化和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测器官血管内皮细胞生长因子(VEGF)、B淋巴细胞瘤-2基因蛋白(Bcl-2)、肿瘤基因p53蛋白(p53)表达及细胞凋亡情况.结果:①两证模型大鼠均出现寒证和热证相应表征,用药大鼠相应表征均有改善；②桃仁用药后,血管内皮细胞增殖相关蛋白VEGF寒证无明显变化,热证表达明显减弱(P＜0.05)；凋亡蛋白Bcl-2寒证无明显变化,热证表达明显增强(P＜0.05)；凋亡蛋白p53寒热证均无明显变化；③桃仁用药后,两证血管内皮细胞凋亡数量均无明显变化.结论:桃仁改善寒、热两证大鼠血液循环障碍并抑制内皮细胞凋亡,其机制可能与减弱VEGF表达、增强Bcl-2表达以维持内皮细胞较高凋亡水平有关.
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持续高眼压对大鼠视网膜神经节细胞的损伤
目的观察持续高眼压对大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的损害.方法烙闭大鼠上巩膜静脉,制作大鼠持续性高眼压模型,分时点摘取眼球,光镜及TUNEL法观察大鼠视网膜各层厚度变化和RGCs凋亡率,电镜观察RGCs超微结构变化.结果随着高眼压时间持续,视网膜神经节细胞及纤维层逐渐变薄,节细胞及轴突的超微结构呈进行性损害,神经节细胞的细胞凋亡率增加.结论持续高眼压导致大鼠RGCs的病理改变过程及其结果符合青光眼视神经损伤的病理特点.
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小鼠肾脏发育中的细胞凋亡
目的 研究小鼠肾脏发育过程中的细胞凋亡规律及形态学特点。 方法 应用光镜、电镜技术和TUNEL法分别对不同胚龄、生后日龄小鼠肾脏细胞凋亡进行了观察。 结果 皮质凋亡细胞多出现在生肾区S小体之间和肾小体内，凋亡高峰期在胚龄14～18d之间。髓质凋亡细胞出现在肾小管上皮内，凋亡高峰期在生后7d左右。超微结构观察可见皮质和髓质凋亡细胞主要表现为核固缩，染色质凝集，细胞皱缩。皮质和髓质凋亡细胞结局为，被邻近细胞吞噬，或脱落到肾小管腔内。 结论 小鼠肾脏发育过程中确有细胞凋亡；皮质中细胞凋亡与生肾区的出现和肾小体发育完善有关，髓质中细胞凋亡与髓质中肾小管和集合小管的发育完善有关。
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血管紧张素Ⅱ对发育期小鼠肾小体细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体外培养E12d小鼠肾组织各期肾小体细胞增殖和凋亡的影响.方法 孕12d的母鼠40只随机分为6组,体外培养对照组(0mol/L AngⅡ)和施加不同浓度AngⅡ(10-9～10-5mol/L)组.应用免疫组织化学、原位缺口末端标记(TUNEL)法、免疫荧光双标技术及激光扫描共焦显微镜,观察体外培养2、4、6d后小鼠肾组织中各期肾小体增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡阳性细胞的表达. 结果 随培养浓度增高和培养时间延长,各期肾小体细胞增殖和凋亡指数均有增加,且增殖指数在AngⅡ低浓度(10-9、10-8、10-7mol/L)、短时间(培养2、4d)时变化明显;凋亡指数在高浓度(10-6、10-5mol/L)、长时间(培养6d)时变化明显. 结论 AngⅡ对发育期小鼠肾小体细胞有促增殖和凋亡作用,且此作用有浓度、时间依赖性.
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脑源性神经营养因子调控热应激条件下小鼠着床前胚胎发育和凋亡
目的 探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对正常和热应激条件下小鼠着床前胚胎发育和凋亡的影响.方法 150只雌性昆明小鼠用于实验,2细胞期胚胎添加或不添加10μg/L BDNF进行体外培养,早期囊胚37℃条件下或41℃热处理2h,观察胚胎发育情况,TUNEL法和Hoechst 33342分析囊胚细胞数量和凋亡情况,荧光技术分析Caspase-9的活力.结果 在37℃条件下BDNF能够促进早期囊胚发育,增加囊胚细胞数量,降低凋亡率及Caspase-9的活力,热应激能够降低早期囊胚的发育能力,减少囊胚细胞数量而增加凋亡率,且中等和高Caspase-9活力囊胚的比例热处理后明显增加,当培养基中添加10μg/L BDNF时,能够明显缓解热应激对早期囊胚发育和质量的不利影响.结论 BDNF对37℃或41℃热应激条件下小鼠着床前胚胎发育、细胞数量、凋亡和Caspase-9活力起到一定的调控作用.
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宫颈原位癌中Ki-67的表达及其与细胞凋亡的关系
目的探讨宫颈原位癌中Ki-67的表达及其与细胞凋亡的关系,及对原位癌生物学特性的影响.方法 采用免疫组化SP法检测石蜡包埋宫颈组织中Ki-67的表达,包括研究组宫颈鳞状上皮原位癌30例,对照组正常上皮组织10例、中重度不典型增生20例和浸润癌15例.并用TUNEL法原位检测细胞凋亡,以1000个细胞中增生细胞和凋亡细胞分别作为增生指数PI(‰)和凋亡指数AI(‰).结果 PI在宫颈原位癌中明显高于正常组和不典型增生组,但又显著低于浸润癌组(P＜0.01),AI在宫颈原位癌中明显高于正常,但又显著低于浸润癌(P＜0.05),且PI和AI呈显著正相关(P＜0.01):4组中PI的变异性小,AI的变异性大,尤其是原位癌组.结论宫颈原位癌是癌变过程中一个相对特殊阶段的癌,癌细胞的增殖活性虽然明显高于正常组和不典型组,但其增殖和浸润能力仍受到一定限制.细胞凋亡变异对原位癌的发展可能影响更大.
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胆汁性肝硬化大鼠肾细胞凋亡及其机制
目的:探讨胆汁性肝硬化大鼠肾脏病理组织学改变、肾脏细胞凋亡及其机制.方法:应用胆总管结扎(CBDL)技术制备大鼠胆汁性肝硬化模型.将SD大鼠随机分为:假手术组(SO)、CBDL 2 wk组与5 wk组.显微镜下观察肝脏和肾脏组织学改变;生化法测定内生肌酐清除率(Ccr),比色法测定肾组织丙二醛(MDA)含量,TUNEL法检测肾组织细胞凋亡,免疫组化测定Bcl-2,Bax蛋白的表达.结果:CBDL大鼠2 wk发生肝纤维化,5 wk则形成肝硬化;5 wk时肾小管上皮细胞有脱落、坏死;电镜下基底膜不规则增厚,系膜增宽,上皮细胞足突融合.模型大鼠5 wk组Ccr明显降低,较2 wk组与SO组有显著性差异(1.10±0.03vs 1.40±0.03,1.80±0.02,P＜0.05或0.01),肾组织丙二醛5 wk组较2 wk组与SO组显著性增高(4.07±0.51vs 2.32±0.85,0.79±0.37,均P＜0.01);模型大鼠5 wk组肾组织凋亡指数显著性高于2 wk组和SO组(68.36%±8.71%vs 24.08%±2.59%,11.43%±2.77%;均P＜0.01). SO组、2 wk组及5 wrk组Bcl-2逐渐下降,Bax表达则逐渐升高,各组间有显著差异(p＜0.05).结论:胆汁性肝硬化大鼠存在肾病理组织学改变与细胞凋亡:凋亡抑制蛋白Bcl-2低表达和凋亡诱导蛋白Bax高表达在肾损害中起作用.
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丹参酮ⅡA磺酸钠对MKN-45胃癌裸鼠移植瘤增殖及血管生成的影响
目的:明确丹参酮ⅡA磺酸钠(TanⅡA)在体内的抗癌作用及其对肿瘤血管生成的影响.方法:建立MKN-45胃癌裸鼠移植瘤模型,随机分成对照组和低、中、高丹参酮ⅡA磺酸钠干预组,每组6只.干预组分别用TanⅡA磺酸钠1、5、10 mg/kg,ip,1次/d,连续14d.对照组等量生理盐水干预.2 wk后处死裸鼠,分离瘤块,观察抑瘤率;TUNEL法测凋亡指数:CD34标志法观察四组瘤块微血管密度(MVD);免疫组化法观察缺氧诱导因子HIF1α、血管内皮生长因子(VEGF)、COX2的蛋白表达.结果:与对照组相比,3组干预组凋亡指数AI明显上升(36.02%±3.41%,34.78%±3.41%,30.05%±3.41% vs 10.83%±0.92%,均P<0.05).低剂量组增殖减慢,抑瘤率为20.69%±1.79%;中、高剂量瘤重反而增加,高剂量组抑瘤率为-(21.4%±2.38%).与对照相比,3组干预组MVD、VEGF表达上调,尤以中高剂量组差异显著(8.11±1.011,10.01±0.89 vs6.56±0.42;63628±611,70957±684 vs 51056 ±410,均P<0.05);3组干预组COX-2表达与对照无明显差异;HIF1α在低剂量组表达略有下调,但未达到统计学差异,中高剂量组表达则有明显上调(29468±204,42227±214 vs15691±106,P<0.01或0.05)结论:丹参酮ⅡA体内的抗肿瘤效果没有体外细胞实验显著,高剂量丹参酮ⅡA的抗癌效应可被HIF的代偿高表达抵消甚至逆转.
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胰腺癌组织Survivin的表达与细胞凋亡、增殖的关系
目的:观察胰腺癌组织Survivin的表达与细胞凋亡、增殖的关系.方法:采用TUNEL法和免疫组化法检测64例胰腺癌及癌旁组织的细胞凋亡指数(AI)与增殖指数(PI)及Survivin表达,分析AI、PI与Survivin表达和临床病理因素的相关性.结果:Survivin蛋白在癌旁组织无表达,在胰腺癌组织阳性率为87.9%,两者比较差异显著(P<0.001).AI与年龄、性别及肿瘤部位无关,随胰腺癌组织分化程度的增加而增加,癌旁组织显著高于胰腺癌组织(30.47% vs 1.64%,P<0.001):PI与年龄、性别、肿瘤部位及淋巴结转移无关,而与癌组织的分化程度相关,随着胰腺癌分化程度的降低而增加.从分化程度观察,胰腺癌组织AI与Survivin表达水平呈负相关(r=-0.85),PI与Survivin表达水平呈正相关(r=0.87);从有无转移来看,胰腺癌AI与Survivin表达水平呈负相关(r=-0.81).结论:Survivin凋亡抑制基因在胰腺癌发生和发展中起重要作用.
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缺氧诱导离体培养乳鼠心肌细胞的凋亡
目的:建立一种新的SD乳鼠心肌细胞的缺氧模型,探讨心肌细胞缺氧损伤和心肌细胞凋亡的分子变化及其时序分布特点.方法:SD乳鼠的培养心肌细胞随机分为5组:对照组、缺氧12 h组(I12)、缺氧24 h组(I24)、缺氧48 h组(I48)和缺氧72 h组(I72).应用原位缺口末端标记法(TUNEL)和透射电镜手段检测心肌细胞凋亡的改变.结果:在本实验的心肌细胞缺氧模型中,TUNEL法检测发现,对照组各时间点培养的心肌细胞未见或偶见TUNEL阳性细胞;心肌细胞缺氧12h即有少量的TUNEL阳性细胞,随着缺氧、缺血时间的延长,TUNEL阳性凋亡细胞数目和密度逐渐增高,当培养心肌细胞在本实验模型中缺氧72h可见大量的TUNEL阳性凋亡细胞.透射电镜检查发现,正常对照组、缺氧12h组心肌细胞结构基本正常.凋亡的心肌细胞在本实验模型中缺氧24h即出现,但不典型,缺氧48 h心肌细胞出现了典型的早期凋亡特征,并以缺氧72 h多见.结论:本实验乳鼠心肌细胞缺氧模型可导致心肌细胞凋亡,凋亡程度和心肌细胞缺氧时间有关,并可导致和在体心肌缺血相似的心肌损伤.细胞凋亡在心肌缺氧心肌细胞死亡中起重要作用.
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鼠脑缺血神经元DNA单链断裂和双链断裂的比较性研究
目的研究类缺血再灌注不同时间点神经元DNA单链和双链断裂的损伤情况.判断早期DNA损伤形式并讨论其意义.方法以培养的皮质神经元类缺血再灌注模型,采用TUNEL法和Klenow法对缺血再灌注各时间点培养的神经元进行检测,并应用图像分析仪对Klenow法检测结果进行平均灰度检测.结果 TUNEL法检测发现,未经缺血处理的对照组神经元阳性细胞比率为(10.5±1.29)%,随缺血时间延长,其阳性细胞比率明显增加,在6 h时阳性细胞数达高峰[(86.5±4.72)%];Klenow法检测发现,未经缺血处理的对照组神经元平均灰度为72.4±1.00,在2 h达高峰为135.5±1.3l,之后又逐渐降低.结论在培养的皮质神经元缺血再灌注模型中发现,DNA早期损伤以DNA单链断裂为主,大约在再灌注2 h达高峰,再灌注6 h则为DNA双链断裂的高峰.
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TUNEL法检测复方葛根片对衰老模型大鼠肝脏细胞的保护作用
目的 研究复方葛根片对衰老模型大鼠肝脏细胞的保护作用.方法 40只大鼠随机分为正常组、模型组(生理氯化钠10 ml·kg-1)和复方葛根片低、中、高剂量组[200、400、800mg(生药)·kg-1],每组8只.除正常组外,其他各组大鼠每天9:00腹腔注射D-半乳糖溶液250 mg·(kg·d)-1复制衰老模型,每天15:00灌胃注射相应药物,连续给药8周.计算肝脏指数,采用TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测衰老大鼠肝脏组织的细胞凋亡情况.结果 与正常组比较,模型组大鼠肝脏指数显著增加(P＜0.01);肝脏组织中红色荧光明显增多,凋亡指数显著增加(P＜0.01);与模型组比较,复方葛根片高、中、低剂量组中大鼠肝脏指数显著减小(P＜0.05或P＜0.01);肝脏组织中红色荧光明显减少,亮度降低,凋亡指数显著减小(P＜0.05或P＜0.01).结论 复方葛根片能抑制衰老模型大鼠肝细胞凋亡,减少凋亡细胞的产生,起到保护肝脏细胞的作用.
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中药骨痹通消颗粒干预激素性股骨头坏死模型兔的细胞凋亡
背景:股骨头坏死属于中医"骨痿"范畴,其疼痛是风寒瘀血阻滞造成的.而中药骨痹通消颗粒具有补肾壮骨、活血通络等功效,临床应用有效果,但其治疗机制尚不清晰.目的:分析中药骨痹通消颗粒对激素性股骨头坏死的治疗效果,并研究其对细胞凋亡的影响,为中药骨痹通消颗粒的临床应用提供一定的实验依据.方法:纳入54只健康家兔,随机分为对照组、模型组和治疗组,每组18只.对照组不作处理,模型组与治疗组均制备激素性股骨头坏死模型,造模成功后模型组生理盐水灌胃,治疗组给予骨痹通消颗粒灌胃治疗,1次/d,持续12周.治疗后4,8,12周,各组分别处死6只动物,取出双侧股骨头,检测股骨头坏死空骨陷窝率、细胞凋亡指数,并置于光镜下进行观察.结果与结论:①治疗后不同时间点对照组与治疗组股骨头坏死空骨陷窝率显著低于模型组(P<0.05);②光镜观察可见,对照组的股骨头坏死空骨陷窝情况基本维持不变;模型组第4周时存在明显的骨空陷窝,并随着时间的延长,数量逐渐增多,断裂现象明显;治疗组第4周时存在一定的骨空陷窝,随时间延长,空骨陷窝进一步减少;③治疗后不同时间点,对照组与治疗组的细胞凋亡指数显著低于模型组(P<0.05);④结果提示,中药骨痹通消颗粒治疗激素性股骨头坏死家兔模型效果显著,可有效减少细胞凋亡,并改善坏死部位的病理变化.
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水解南珠液能促进人微血管内皮细胞的增殖和迁移
背景:珍珠有镇静安神的药效,临床可应用于高血压病,但水解珍珠液对高血压病的防治作用及相关机制研究目前报道尚少.目的:观察水解南珠液对人微血管内皮细胞生物学行为和分泌功能的影响.方法:人微血管内皮细胞培养,传代.实验分为水解南珠液高、中、低剂量组:分别加入含质量浓度为120, 60,30 mg/L水解南珠液的培养基200 μL;对照组:只加 200 μL的培养基.CCK8法检测人微血管内皮细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞的周期分布,TUNEL法了解细胞的凋亡情况,Transwell法检测细胞迁移情况,硝酸还原酶法检测细胞的NO分泌量及化学荧光法检测细胞活性氧的分泌情况.结果与结论:①与对照组相比,低、中、高剂量水解南珠液对人微血管内皮细胞均有促增殖作用,且浓度越高,对细胞的促增殖能力越强(P ＜ 0.05),因此确定120 mg/L水解南珠液为佳作用浓度;②与对照组相比,水解南珠液组细胞S期和G2期百分比增加,而G1期的细胞比例则减少(P ＜ 0.05),提示水解南珠液可以促进血管内皮细胞的周期进展;③各组均未发现有细胞核被染成绿色的凋亡细胞;④水解南珠液组的迁移细胞数比对照组显著增加(P ＜ 0.05);⑤水解南珠液组细胞NO分泌量明显高于对照组(P ＜ 0.05),活性氧量显著低于对照组(P ＜ 0.05);⑥结果表明,水解南珠液能促进体外培养的人微血管内皮细胞的增殖和迁移,并具有促进其分泌NO及抑制其活性氧分泌的功能,在保护内皮细胞功能方面可能有积极的作用.
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TUNEL法检测乳酸杆菌对小鼠宫颈鳞癌的凋亡诱导作用
目的应用脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法--TUNEL法,检测乳酸杆菌(Lactobacillus,LB)对小鼠宫颈鳞癌的凋亡诱导作用.方法建立615近交系小鼠U14移植瘤动物模型,并随机分组,TUNEL法检测各组细胞凋亡指数(apoptosis index,AI).结果乳酸杆菌实验组的AI为(11.25 ±4.06)%,与对照组的差异有非常显著性(P＜0.01),与抗癌药顺铂组的差异有显著性(P＜0.05).结论乳酸杆菌可诱导U14移植瘤细胞凋亡,这可能是其抑癌机制之一.
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糖尿病大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡 --TUNEL法研究
目的:确定早期糖尿病视网膜病变(糖网病)大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡并观察凋亡特征.方法:选成年wistar大鼠40只,随机分成正常对照(GON)、糖尿病1月(DM1)、3月(DM3)及6月(DM6)组.采用链脲佐菌素腹腔内注射诱发大鼠糖尿病.取各组大鼠视网膜制备血管铺片,TUNEL法标记,光镜观察.结果:TUNEL法标记的阳性周细胞核出现于DM3和DM6组,而内皮细胞见于DM6组.CON和DM1组未见阳性反应细胞.被标记的周细胞核小而圆,位于毛细血管侧面,稍突出于血管壁.而内皮细胞核大而呈现椭圆形,位于毛细血管中央,与血管平行,阳性反应细胞染色质分布不均,表现为环形核、新月形核等典型的凋亡细胞特征.结论:早期糖网病大鼠视网膜毛细血管周细胞丧失的性质为细胞凋亡,内皮细胞亦存在凋亡.
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Tfh细胞在原发性干燥综合征中的致病作用
目的:探讨Tfh细胞在原发性干燥综合征中的致病作用;方法:应用免疫组织化学方法检测Tfh细胞的标记物CXCR5、IL-21在30例原发性干燥综合征患者唇腺组织中的表达,22例口腔外科黏液腺囊肿、下唇外伤等非白身免疫性疾病患者唇腺组织中的表达,采用TUNEL法检测所有患者唇腺组织中细胞凋亡情况;结果:①原发性干燥综合征组患者唇腺组织中CXCR5,IL-21的表达增高;②IL-21、CXCR5的表达与组织中细胞凋亡数呈正相关.结论:①Tfh细胞可能与原发性干燥综合征的发病机制有关;②Tfh细胞可能与细胞凋亡的发生有关.
