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纳米雄黄抑制人乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化的机制探讨
目的:观察纳米雄黄对乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化的影响,并探讨其相关机制.方法:体外培养乳腺癌MCF-7细胞,不同浓度纳米雄黄溶液干预,并设立对照组,免疫组化实验检测各组细胞E-cad、HIF-1α表达情况,RT-PCR检测SnailmRNA表达情况.结果:各纳米雄黄组E-cad表达阳性率均明显高于对照组(P＜0.01),而HIF-1α表达阳性率均低于对照组(P＜0.01);对照组、纳米雄黄低、中、高剂量组、阿霉素组的SnailmRNA相对表达量依次为(52.16±3.87)、(30.10±2.48)、(47.08±3.45)、(41.42±4.35)、(36.07±2.45).结论:纳米雄黄可通过上调E-cad表达、下调HIF-1α及Snail mRNA表达逆转乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化发挥抗肿瘤转移作用.
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纳米雄黄对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖抑制及诱导凋亡作用的研究
目的:探讨纳米雄黄对人皮肤鳞癌A431细胞株增殖抑制及诱导凋亡作用及作用机制.方法:应用MTT比色法、流式细胞仪观察纳米雄黄体对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞的增殖及凋亡情况、RT-PCR检测纳米雄黄对生存素(Survivin) mRNA,Caspase-3 mRNA表达的影响.结果:MTT实验及流式细胞仪提示纳米雄黄具有诱导皮肤鳞癌A431细胞凋亡和抑制细胞增殖作用,且随着纳米雄黄剂量的增加作用增强,与顺铂联合应用有协同作用；对照组,5％,10％,20％纳米雄黄组,DDP组,DDP+ 10％纳米雄黄组的Survivin相对表达量依次为(68.74±1.96)％,(63.93±3.57)％,(57.12±3.93)％,(47.64±6.44)％,(41.44±4.83)％及(32.18±4.10)％；Casepase-3相对表达量依次为(26.26±2.07)％,(32.660±4.42)％,(35.29±5.26)％,(38.52±8.37)％,(45.69±4.19)％及(52.98±6.52)％；纳米雄黄剂量增加可促进Caspase-3的表达,降低Survivin的表达.结论:纳米雄黄可通过诱导肿瘤细胞凋亡和抑制其增殖发挥抗肿瘤作用；其作用机制可能与上调Caspase-3的表达和下调Survivin的表达有关.
关键词： 纳米雄黄 人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株 凋亡 增殖 -
纳米雄黄炮制方法的探讨
目的:以炮制品得率及残渣质量,粒径分布,As2S2和As203的含量为指标,考察不同炮制方法对纳米雄黄的影响,筛选其佳炮制方法.方法:采用高能球磨法制备纳米雄黄生品,利用水飞法、酸水飞法和碱水飞法对其进行炮制,计算各炮制品得率及残渣质量;利用激光散射法测定粉体粒径,电镜扫描法观察粉体的表观形貌;直接碘量法和二乙基二硫代氨基甲酸银法(Ag-DDC法)分别测定各样品中As2S2与As2O3的含量.结果:水飞品、酸水飞品和碱水飞品的得率分别为96.71％,95.86％,79.08％,残渣质量分别为0.328,0.891,2.208 g;生品及各炮制品的平均粒径分别为(157.3±4.8),(143.9±6.2),(137.7±4.5),(139.8±5.3) nm;As2S2质量分数分别为(94.26±1.33)％,(98.97±0.98)％,(99.58±1.45)％,(99.37±2.60)％,As2O3质量分数分别为(9.64±0.68),(3.44±0.29),(2.83±0.27),(18.17±1.70) mg.g-1.结论:3种炮制方法均能减小纳米雄黄生品的粉体粒径,提高其As2S2的含量,且水飞法和酸水飞法均可降低其As2O3的含量.确定佳炮制方法为酸水飞法.
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纳米雄黄对药物敏感性白血病细胞的凋亡诱导作用
目的:研究纳米雄黄对药物敏感性白血病细胞的凋亡诱导作用.方法:采用机械研磨法制备纳米雄黄.以白血病药物敏感K562细胞为靶细胞,采用MTT法检测纳米雄黄对K562细胞的增殖抑制作用,AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡,细胞流式细胞术检测Bax,Bcl-2,P-gp,BCRP,P-53蛋白的表达水平,Caspase-3活性.结果:雄黄经高能球磨机球磨10～50h,扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察,电镜测量纳米雄黄的平均粒径为(72.72 ±22.18) nm,符合纳米颗粒的形貌特征.纳米雄黄对K562细胞有明显的增殖抑制作用.24,48,72 h的IC5o分别为43.48,20.52,16.07 mg·L-1.20,50 mg·L-1纳米雄黄作用48 h后Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增高,凋亡率分别为10.52％,73.25％.纳米雄黄作用48 h后Bax蛋白表达由对照的(75.80±2.40)％升高到(87.50±1.20)％和(99.60±0.10)％；Bcl-2蛋白表达由对照的(73.85±0.15)％升高到(94.80±2.00)％和(97.75±0.55)％.20,50 mg·L-1纳米雄黄处理K562细胞24h后,K562细胞Caspase-3蛋白表达水平由对照的(3.14±0.24)％升高到(8.87±2.74)％和(72.55±1.45)％；细胞的BCRP,P-gp蛋白,P53蛋白表达总体呈上升趋势,共表达也呈上升趋势.结论:纳米雄黄可以显著诱导白血病药物敏感K562细胞发生凋亡.
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固体分散体技术对纳米雄黄稳定性及体外溶出的影响研究
目的:制备纳米雄黄固体分散体以提高纳米雄黄的稳定性及体外溶出度.方法:分别以聚乙二醇6000(PEG6000)、泊洛沙姆188(F68)为载体,采用熔融法制备纳米雄黄固体分散体并用X-射线衍射法、显微观察鉴别药物在载体中的存在状态.采用二乙基二硫代氨基甲酸银分光光度法对As2O3进行含量测定并进行稳定性考察试验,采用氢化物原子吸收分光光度法进行含量测定,对固体分散体中砷的体外溶出进行考察.结果:X-射线衍射和显微观察结果显示,纳米雄黄以无定型状态存在于固体分散体中,2种载体的固体分散体均能增加纳米雄黄中砷的溶出量和溶出速度并减少纳米雄黄的团聚和As2O3的含量.结论:以F68为载体制备的固体分散体能显著提高纳米雄黄的稳定性和体外溶出度.
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不同粒径及纯度的雄黄颗粒对HepG2细胞的凋亡诱导作用
目的 探讨不同粒径及纯度的雄黄颗粒对HepG2细胞的凋亡诱导作用及其作用机制.方法 按前期实验方法制备各组不同粒径及纯度的雄黄颗粒,实验分为6组:天然雄黄(CR)组、纯化雄黄(PR)组、天然纳米雄黄(CRN)组、纯化纳米雄黄(PRN)组、丝裂霉素(Mit)组、对照组,分别使用相应药物处理HepG2细胞,对照组不进行处理.噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的各组雄黄颗粒作用HepG2细胞12、24、48、72 h后的细胞增殖率并筛选佳作用浓度和作用时间.各组HepG2细胞分别经20.0 μ/ml的不同药物处理24 h后观察细胞形态学变化,流式细胞术测定凋亡率,实时PCR测定Bcl-2、BaxmRNA表达水平.结果 MTT法显示,经不同组别雄黄颗粒处理后HepG2细胞增殖率均有不程度降低,且其抑制作用具有时间效应和浓度效应;通过MTT法筛选出佳作用浓度及作用时间为20.0 μ/ml和24 h.细胞形态学检测发现各组雄黄颗粒能诱导HepG2细胞出现核溶解、破裂等特征性凋亡形态变化.流式细胞术证实各组雄黄颗粒均可诱导HepG2细胞发生凋亡,主要表现为早期凋亡.实时PCR显示,与对照组比较,不同组别雄黄颗粒处理后Bcl-2 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调(均P＜0.05).结论 雄黄颗粒对HepG2细胞的诱导凋亡作用随着粒径的降低及纯度的提高而增强,其作用机制可能与下调Bcl-2基因表达、上调Bax基因表达有关.
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纳米雄黄对肺癌A549细胞增殖影响及其机制的探讨
目的:探讨纳米雄黄对肺癌A549细胞增殖的影响及其可能机制.方法:制备纳米雄黄,体外培养肺癌A549细胞株.实验分组:对照组,纳米雄黄干预组(10％和25％纳米雄黄),DDP干预组(2μg/mL),10％联合组(10％纳米雄黄+ DDP),25％联合组(25％纳米雄黄+DDP).运用免疫组化法测定β-catenin蛋白表达情况,RT-PCR法检测c-myc mRNA表达.结果:肺癌A549细胞在加入纳米雄黄干预下,β-catenin蛋白表达与c-myc mRNA表达均受到不同程度的抑制,对照组、10％纳米雄黄组、25％纳米雄黄组、DDP组、10％联合组及25％联合组的β-catenin蛋白表达阳性率分别为(78.26±5.21)％、(53.64±5.57)％、(50.82±4.39)％、(45.26±3.75)％、(31.22±1.63)％和(24.07±1.15)％,c-myc mRNA相对表达量依次为(0.41±0.030)％、(0.35±0.015)％、(0.30±0.018)％、(0.26±0.019)％、(0.14±0.012)％及(0.06±0.010)％；与对照组相比,随着纳米雄黄药物浓度的增加及联用化疗药物,β-catenin蛋白表达阳性率逐渐降低,c-myc mRNA的表达量不断下降,纳米雄黄抑制作用与药物浓度呈依赖性,药物浓度越大抑制作用越明显,并且与化疗药DDP联用具有协同作用.结论:纳米雄黄可通过降低β-catenin及c-myc mRNA在肺癌A549细胞中的表达,阻断Wnt信号转导通路,有效抑制细胞增殖发挥抗肿瘤作用.
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纳米雄黄的急性毒性实验
目的 探索纳米雄黄对小鼠的急性毒性作用,为其临床应用提供依据.方法 将60只小鼠随机分6组,每组10只.均采用灌胃给药:对照组给予0.5％羧甲基纤维素钠,其他组分别给予1031、515.5、257.8、128.8、64 mg·kg-1的纳米雄黄混悬液;灌胃容积为25 ml·kg-1.观察小鼠灌胃后毒性反应及死亡情况,Bliss法计算半数致死量(LD50).对各组死亡小鼠及时解剖,取心、肝、脾、肺、肾进行病理检查.结果 给药后,各组小鼠活动减少,不进食水,耳缘颜色变暗,呼吸急促,精神萎靡,眼球分泌物增加,粪便呈灰黑色.1031 mg·kg-1组全部死亡,515.5 mg·kg-1组死亡9只,257.8 mg·kg-1组死亡2只,128.8 mg ·kg-1组死亡1只,64 mg ·kg-1组无死亡.用Bliss法计算LD50为309.72 mg·kg-1,LD50(Feiller校正)的95％可信限为226.97～422.93 mg·kg-1,LD5=137.36 mg ·kg-1,LD95 =698.35 mg ·kg-1.死亡小鼠尸检观察,双肺、肝脏弥漫性充血,脾脏肿大发黑,小肠壁弥漫性充血,小肠胀气,部分肠道肿胀,发黑坏死.未死亡小鼠未见异常.结论 小鼠灌胃给予纳米雄黄在64.4 mg·kg-1时未见明显急性毒性反应;当剂量大于64.4 mg ·kg-1时,小鼠中毒现象会随着剂量的增大而增强.
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纳米雄黄抗肿瘤作用及在荷瘤小鼠组织中的分布
目的:研究纳米雄黄抗肿瘤作用和在荷瘤小鼠体内的分布情况,并与原料雄黄进行比较.方法:采用计算抑瘤率的方法研究纳米雄黄对动物移植瘤生长的影响,应用MTT法检测纳米雄黄对体外培养人肿瘤细胞株生长的抑制作用,用石墨炉原子吸收光谱法检测荷瘤小鼠组织样品砷浓度.结果:纳米雄黄对小鼠艾氏腹水癌实体型和小鼠肝癌H22均有抑制作用,且纳米雄黄50 mg·kg-1剂量组的抑瘤作用与原料雄黄100 mg·kg-1剂量组的抑瘤作用相当.纳米雄黄对HL-60细胞和U937细胞的抑制作用强于原料雄黄.纳米雄黄组肝、脾、肿瘤中砷浓度显著高于同剂量原料雄黄组.结论:纳米雄黄抗肿瘤作用强于原料雄黄,并具有肝、脾和肿瘤组织靶向性.
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纳米雄黄粒度测定的扫描电镜法和激光光散射法
目的:建立纳米雄黄的粒度分析研究方法.方法:利用扫描电镜对纳米雄黄表观形态进行直接观察测定,用激光光散射法对纳米雄黄的粒度分布范围进行分析测定.结果:经扫描电镜和激光光散射颗粒度测定仪的测量,粒径在100 am以下的纳米雄黄约达90%,其中较大颗粒又是由粒径在5～30 nm左右的细小晶粒和其周围的非晶体聚集而成.结论:扫描电镜法和激光光散射法快速、简便、准确,可用于纳米雄黄的粒度检测.
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小鼠经口给予纳米雄黄后砷的药动学特点
目的:研究纳米雄黄与传统水飞雄黄中砷在小鼠体内的药动学行为差异,为新药的研发及临床用药提供一定的实验基础.方法:以140只小鼠为研究对象,随机分为两组,每组70只,分别单次灌胃2.062 mg·mL-1的纳米雄黄和水飞雄黄混悬液0.5 mL,于服药后不同时间点摘眼球采血,用电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)测得血中砷元素浓度,计算主要药动学参数.结果:纳米雄黄组与传统水飞雄黄组中砷的药代动力学参数经统计学分析均有显著差异(P<0.05).纳米雄黄中砷达峰时间早、峰浓度高、药时曲线下面积(AUC)大,前者砷的消除半衰期较长,吸收速率常数较大.结论:纳米雄黄组在达峰时间、峰浓度、AUC等方面优于传统雄黄组.纳米雄黄组与传统水飞雄黄组相比,砷吸收快,消除慢,药物在体内维持时间长,说明雄黄经过纳米化后,其药动学特性发生明显变化,吸收速率增大而消除速率减小.
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复方黄黛对NB4细胞生长抑制及促凋亡作用的研究
目的:研究纳米雄黄、青黛、复方黄黛对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞系NB4细胞的生长抑制和促凋亡作用.方法:以APL细胞系NB4细胞为体外模型,用四噻唑蓝(MTT)法检测药物处理NB4细胞后细胞的生长抑制率,并用光学显微镜和透射电子显微镜观察药物处理NB4细胞后细胞的形态学变化.结果:纳米雄黄和复方黄黛对NB4细胞均表现浓度依赖性的的生长抑制作用,纳米雄黄的IC50为8.683 mg·L-1,青黛的IC50为3 818 mg·L-1,复方黄黛的IC50为5.203 mg·L-1.复方黄黛对APL细胞系NB4细胞的抑制作用强,青黛几乎无抑制作用.结论:复方黄黛中主要是君药纳米雄黄抑制APL细胞株NB4细胞的增殖,臣药青黛抑制APL细胞系NB4细胞增殖的作用极小.
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雄黄抗癌作用的研究进展
中药雄黄在我国传统医学中应用历史悠久,近年来在肿瘤的治疗中发挥着越来越大的作用,本文介绍雄黄抗癌作用的研究与进展,包括治疗研究、作用机理、不良反应及其新剂型-纳米雄黄的研发等,并对雄黄抗癌作用的未来进行展望.
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基于高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法的大鼠口服纳米雄黄后体内砷形态分析
目的 对大鼠口服雄黄与纳米雄黄后血清、肝、肾、脾中三价砷[As(Ⅲ)]、五价砷[As(Ⅴ)]、一甲基砷酸(MMA)、二甲基砷酸(DMA)4种砷形态进行定量分析,比较两组大鼠体内砷形态的差异.方法 SD大鼠分别ig给予800 mg/kg的雄黄与纳米雄黄,28d后采集血清及各组织样本,经前处理后采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)测定生物样本中砷形态含量并进行比较.结果 4种砷形态在大鼠血清和肾脏样本中均被检出,肝脏中检出了3种,脾脏中检出了2种;各砷形态在纳米雄黄组中的含量明显高于雄黄组.结论 纳米化提高了雄黄的生物利用度,更多的砷被吸收进入体内并发生代谢转化,这可能导致纳米雄黄肝、肾等毒性增加.
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纳米雄黄抗肿瘤研究探讨
纳米雄黄抗肿瘤作用在粒径效应、靶点效应、逆转耐药效应、增效减毒方面优势明显,其抗肿瘤机理主要包括诱导细胞凋亡、促进细胞分化、抑制肿瘤血管生成、直接细胞毒作用以及调控癌基因与抑癌基因表达等方面.目前已有相关实验对纳米雄黄的抗肿瘤作用及机制进行了探讨,且在临床应用中不断探索,以期为纳米雄黄抗肿瘤深入研究提供依据.
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纳米雄黄对肺癌A549细胞增殖、凋亡及迁移的影响
背景：有研究发现雄黄具有抗肿瘤作用，但关于纳米雄黄对肺癌A549细胞增殖、凋亡及迁移作用的研究不多。
目的：观察纳米雄黄对肺癌A549细胞增殖、凋亡及迁移的影响。
方法：取生长状态良好的肺癌A549细胞悬液，接种于6孔板，实验组加入100 mg/L纳米雄黄4μL，对照组加入等量生理盐水。培养48 h，显微镜下观察细胞生长；培养24，48，72 h，MTT法检测细胞增殖；培养24，48 h，流式细胞仪检测细胞凋亡；培养24 h，免疫组织化学法检测整合素β1和上皮钙黏素表达。
结果与结论：①细胞生长：实验组细胞体积缩小变形，数目减少，形状变为圆形或椭圆形，细胞呈散在生长；对照组细胞贴壁生长，体积较大，胞浆比价丰富，形状呈梭形，生长比较旺盛，大小均匀，部分细胞融合成片；②细胞增殖：实验组不同时间点的A值低于对照组(P<0.05)，不同时间点的细胞生长抑制率高于对照组(P<0.05)；③细胞凋亡：实验组晚期凋亡率、总细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)；④免疫组织化学检测结果：实验组细胞整合素β1阳性细胞面密度、上皮钙黏素阳性细胞面密度明显低于对照组(P<0.05)；⑤结果表明：纳米雄黄可抑制肺癌A549细胞的增殖、侵袭和转移，诱导其凋亡。 -
正交试验优化纳米雄黄温敏凝胶基质处方
目的:探索温敏凝胶药物制剂基质中辅料泊洛沙姆407(P407)、泊洛沙姆188(P188)、1,2-丙二醇(PG)对胶凝温度和黏度的影响,从而考察辅料的性能及其用量,制备出纳米雄黄温敏凝胶制剂.方法:采用正交设计,选取P407、P188和PG的浓度为考察因素,以胶凝温度、黏度和溶解度的综合评分为指标,优化纳米雄黄温敏凝胶的基质处方.结果:优选的基质处方为20％的P407、1％的P188和10％的PG.结论:按优选的基质处方制得的纳米雄黄温敏凝胶制剂黏度和胶凝温度良好.
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雄黄抗肿瘤作用的研究进展
目的 综述了近年来雄黄(As4S4)在体内和体外治疗各种肿瘤的应用近况及其药理作用.方法 查阅相关文献43篇,对雄黄(As4S4)在临床上的应用以及其在体内和体外治疗各种肿瘤的应用现状和药理作用进行了归纳总结.结果 雄黄(As4S4)在临床能够用于治疗血液疾病、关节疾病及皮肤病(外用),能够通过多种途径抑制多种肿瘤细胞的增殖和诱导凋亡.结论 雄黄(As4S4)在多种肿瘤相关疾病的治疗方面具有广阔的应用前景.
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纳米雄黄干预肺癌A549细胞对血管内皮生长因子及缺氧诱导因子－1表达的影响
目的：探讨纳米雄黄干预肺癌A549细胞对血管内皮生长因子（ VEGF）、缺氧诱导因子（ HIF）－1表达的影响及其相关机制。方法培养肺癌A549细胞，采用RT－PCR技术与免疫组化法观察纳米雄黄对人肺癌A549细胞VEGF、HIF－1的表达的影响，进而探讨纳米雄黄抗肿瘤血管生成的作用机制。结果与对照组比较，纳米雄黄可明显降低VEGF、HIF－1表达（P＜0．05），并随药物浓度增高作用增强（P＜0．05），与顺铂联合应用有协同作用（P＜0．05）。结论纳米雄黄抑制肿瘤血管生成途径实现抗肿瘤作用的机制可能与下调VEGF、HIF－1的表达有关。
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应用活体生物发光成像技术研究纳米雄黄的抗小鼠恶性黑色素瘤肝肺转移作用
目的 采用小动物活体成像技术研究纳米雄黄对小鼠B 16-luc恶性黑色素瘤的抗转移作用和机制.方法 以萤火虫荧光素酶(luciferase,luc)基因标志小鼠B16黑色素瘤细胞(B16-luc),BALB/c小鼠的尾静脉注射B 16-luc细胞制作小鼠黑色素瘤肺转移瘤模型,每日4 mg/kg和8 mg/kg纳米雄黄灌胃24 d,阳性对照组隔日腹腔注射顺铂(DDP)2 mg/kg,阴性对照组灌胃生理盐水0.02 L/kg.小动物活体成像系统动态观察肿瘤细胞转移情况.治疗末期处死动物,取出肺和肝,置活体成像系统下直接成像,并肉眼观察肺和肝表面转移瘤结节形成;另对肺、肝肿瘤组织作HE染色,光镜下观察组织形态变化.结果 活体成像显示纳米雄黄可显著抑制小鼠黑色素瘤细胞在肺和肝中的转移(P＜0.05),解剖肉眼可见肝、肺表面转移灶显著减少或消失,病理学检查显示纳米雄黄治疗组小鼠的肺脏内转移瘤结节小、数量较少,大多数瘤结节中央呈坏死液化改变,肝脏内未见到转移瘤结节.结论 纳米雄黄可有效抑制小鼠恶性黑色素瘤B 16-luc细胞的肺转移和肝转移能力.
