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串联siRNA干扰沉默结肠癌SW480细胞APRIL基因表达
目的 检测串联siRNA对SW480细胞中增殖诱导配体(APRIL)基因的影响.方法 设计并筛选针对APRIL基因的4条shRNA片段(sh644、sh1451、sh1938、sh2231),分别将其连接至pGenesil-1.1质粒表达载体,形成pGsh644、pGsh1451、pGsh1938、pGsh2231单一表达载体,同时将4条shRNA连接至pGenesil4-T质粒形成pG4串联siRNA表达载体.阳离子脂质体法转染至结直肠癌细胞株SW480.实时荧光定量PCR和Western blot技术检测SW480细胞中APRIL mRNA和蛋白表达水平.结果 经酶切和测序鉴定,构建的串联siRNA质粒载体符合要求.几条siRNA均可有效抑制SW480细胞APRIL基因的表达,APRIL mRNA的抑制率分别是pGsh644(56.2％)、pGsh1451(49.5％)、pGsh1938 (50.9％)、pGsh2231 (49.2％)、pG4(79.3％).蛋白质表达抑制率分别为pGsh644(56.9％)、pGsh1451(48.7％)、pGsh1938(50.1％)、pGsh2231 (46.4％)、pG4 (87.5％) (P＜0.05).其中以pG4抑制效应强.结论 与传统单一的siRNA表达载体相比,串联siRNA表达载体大大地敲低了结直肠癌细胞株中APRIL基因的表达,为针对结直肠癌APRIL基因的基因治疗提供研究基础.
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APRIL调节基质金属蛋白酶的表达对结直肠癌细胞转移侵袭能力的影响
目的 研究增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞转移侵袭能力和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)表达的影响,以进一步明确APRIL在CRC转移中的作用.方法 APRIL基因的小干扰RNA质粒载体(siRNAAPRIL)转染人CRC细胞SW480,APRIL重组蛋白(rhAPRIL)刺激CRC细胞HCT-116,Transwell小室转移及侵袭试验分析APRIL对CRC细胞转移及侵袭能力的影响;RT-PCR、ELISA检测MMPs的表达变化.结果 siRNA-APRIL转染的SW480细胞Transwell小室试验转移及侵袭细胞数显著减少(P＜0.05),rhAPRIL刺激的HCT-116细胞Transwell小室试验转移及侵袭细胞数显著增多(P＜0.05);MMP-2、MMP-9及TIMP-1 mRNA,分泌型的MMP-2、MMP-9蛋白表达在转染或刺激前后差别均有统计学意义(P＜0.05);MMP的抑制剂GM6001处理后,SW480对照组和rhAPRIL刺激后的HCT-116细胞Transwell小室侵袭细胞数显著减少(P＜0.05).结论 APRIL通过调节MMPs的表达促进结直肠癌的侵袭和转移,可为结直肠癌转移的干预及治疗提供新的靶点.
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多发性骨髓瘤患者血清B淋巴细胞活化因子和增殖诱导配体水平的测定及临床意义
目的：检测多发性骨髓瘤（MM）患者血清 B 淋巴细胞活化因子（BAFF）和增殖诱导配体（APRIL）水平，探讨BAFF、APRIL水平与MM的发生发展以及预后的关系。方法收集2012年4月1日至2013年2月1日于沈阳军区总医院血液科住院的27例（43例次）MM患者和48例正常对照组的外周血标本，提取血清，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清BAFF和APRIL的浓度。并分析其水平在不同性别、不同分期、不同免疫分型及不同疗效时MM患者中的差异，分析BAFF和APRIL水平之间及与肿瘤负荷指标之间的相关性。结果（1）MM患者BAFF和APRIL水平明显增高，与正常对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）MM患者不同性别、不同分期及不同免疫分型之间对比，BAFF及APRIL水平差异无统计学意义。（3）MM 患者不同疗效时，初治组和无效组表达水平明显增高，与有效组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；初治组与无效组之间表达水平的差异无统计学意义。（4）BAFF、APRIL水平与白蛋白含量之间呈负相关（P＜0.05）；BAFF、APRIL水平与骨髓浆细胞数之间呈正相关（P＜0.05）；APRIL水平与肌酐含量之间呈正相关（P＜0.05）；BAFF水平与APRIL水平之间呈正相关（P＜0.05）。结论（1）BAFF、APRIL在正常B淋巴细胞和恶性B淋巴细胞表面都表达，但在MM高表达。（2）MM患者疗效不同时，初治和无效组 BAFF、APRIL 表达水平普遍更高。（3）BAFF、APRIL 水平可作为评估MM肿瘤负荷量的重要参考指标。
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胰腺癌CFPAC1细胞增殖诱导配体基因shRNA慢病毒表达载体的构建
目的 构建针对人胰腺癌细胞株CFPAC1增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)基因的shRNA慢病毒表达载体.方法 应用基因工程技术,筛选出针对APRIL基因的RNAi靶序列,与pGCL-GFP载体连接,构建慢病毒表达载体LV-shAPRIL;将连接产物转化到DHSα感受态细胞,经PCR筛选阳性克隆、测序鉴定.再用LV-shAPRIL、pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒.重组慢病毒感染CFPAC1细胞,实时定量PCR和Western blotting检测CFPAC1细胞APRIL mRNA和蛋白的表达.结果 PCR和测序结果与构建的慢病毒载体的预期结果一致,经包装产生的病毒滴度为5×107TU/ml.构建的慢病毒载体感染CFPAC1细胞后第4天、第4周和第8周,APRIL mRNA表达量较空载体慢病毒感染组分别下降了73%、70%和71%;APRIL蛋白表达量分别下降了66%、63%和62%(P＜0.05).而各时间段未感染慢病毒的细胞组与空载体组相比无明显差异(P＞0.05).结论 成功构建了APRIL基因的shRNA慢病毒表达载体LV-shAPRIL.
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shRNA沉默增殖诱导配体基因抑制胰腺癌细胞生长的研究
目的 研究靶向增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)在体内外对胰腺癌细胞生长的影响,探讨其对胰腺癌基因治疗的可行性.方法 将前期构建的LV-shAPRIL感染CFPAC1细胞,MTY法及流式细胞技术分别检测CFPAC1细胞生长和凋亡.用CFPAC1细胞建立裸鼠移植瘤模型,观察瘤内注射LV-shAPRIL对瘤生长的影响.结果 LV-shAPRIL感染CFPAC1细胞96 h后,CFPAC1细胞的生长明显受抑制,与对照组及空载体组相比有显著差异(P＜0.05);同时细胞凋亡率为(17.35±0.96)%,明显高于对照组和空载体组(P＜0.05).将LV-shAPRIL局部注射到裸鼠移植瘤内,LV-shAPRIL组肿瘤生长明显比同期对照组和空载体组减缓;第27天LV-shAPRIL组肿瘤体积和重量分别为(821.8±123.3)mm3和(2.16±0.18)g,明显小于其他两组(P＜0.05).结论 靶向APRIL基因的慢病毒表达载体LV-shAPRIL在体内外抑制胰腺癌CFPAC1细胞的生长,为胰腺癌基因治疗探索新的思路.
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结直肠癌细胞增殖诱导配体的异常表达促进肿瘤的生长和转移
目的 探讨增殖诱导配体(APRIL)对结直肠癌细胞生长和转移的影响,以进一步明确APRIL在结直肠癌生物学行为中的作用.方法 APRIL基因的小干扰RNA质粒载体(APRIL-siRNA)转染人结直肠癌细胞SW480,重组人APRIL蛋白(rhAPRIL)刺激结直肠癌细胞HCT-116,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot检测细胞周期和凋亡调控蛋白cyclin D1、p21和Bcl-2的表达水平,Transwell小室侵袭和转移试验分析细胞侵袭及转移能力,逆转录聚合酶链反应检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9 mRNA的表达变化.APRIL-siRNA转染的结直肠癌细胞SW480接种裸鼠,分析APRIL-siRNA对移植瘤生长和MMP表达的影响.结果 APRIL-siRNA组G0/G1期细胞比例(73.5％)高于非特异性序列转染组(53.9％)和未转染组(51.1％,均P＜0.05).刺激48 h后,400 ng/ml rhAPRIL组和800 ng/ml rhAPRIL组HCT-116细胞G0/G1期细胞比例(分别为34.9％和22.7％)低于未刺激组(45.1％,均P＜0.05).转染48 h后,与非特异性序列转染组相比,APRIL-siRNA组SW480细胞cyclin D1和Bcl-2蛋白表达下降,p21蛋白表达增高.刺激48 h后,与未刺激组相比,400 ng/ml rhAPRILHCT-116细胞组cyclin D1和Bcl-2蛋白表达升高,p21蛋白表达下降.APRIL-siRNA转染SW480细胞后,APRIL-siRNA组Transwell小室滤膜上每低倍视野侵袭和转移细胞数低于非特异性序列转染组.rhAPRIL(100 ng/ml)刺激HCT-116细胞后,侵袭和转移细胞数均高于未刺激组.APRIL-siRNA组SW480细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA相对表达水平低于非特异性序列转染组.rhAPRIL刺激48 h后,HCT-116细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA相对表达水平明显高于未刺激组.与非特异性序列转染组和未转染组相比,APRIL-siRNA组移植瘤的生长速度较缓慢,APRIL-siRNA组移植瘤组织中APRIL、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显降低.结论 APRIL可促进结直肠癌细胞的生长及转移,与移植瘤的形成有关.
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BLyS和APRIL调节T细胞反应在类风湿关节炎中的研究进展
肿瘤坏死因子配体超家族成员B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)与其受体(TACI、BCMA、BAFF-R)结合,调控B细胞的存活和活化.同时,BLyS也调节T细胞的功能,促进T细胞的活化和存活,在T细胞介导的自身免疫病中发挥重要作用.本文综述了BLyS及其同系物增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)-受体在调节T细胞反应和在RA病理机制中的作用,以及BLyS/APRIL靶向治疗RA药物的研究进展.
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APRIL和XIAP在结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜中的表达及意义
目的：探讨增殖诱导配体(APRIL)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学EnVision法检测结肠癌组织标本60例、结肠腺瘤30例及正常结肠黏膜组织30例中APRIL和XIAP的表达。结果结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠黏膜组织中APRIL和XIAP的阳性表达率均呈逐渐降低趋势，3组间APRIL和XIAP的阳性表达率比较，差异有统计学意义(P<0.01)。结肠癌组织中APRIL的阳性表达与组织分级、淋巴结转移以及浸润程度密切相关(P<0.01)；XIAP的阳性表达与Dukes分期、淋巴结转移以及浸润程度密切相关(P<0.01)。结论 APRIL和XIAP的表达增高不仅可能在正常黏膜-腺瘤-癌的病理形成过程中起一定作用，更与结肠癌浸润、转移等恶性生物学行为有密切关系。
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B细胞活化因子/增殖诱导配体与特发性血小板减少性紫癜
特发性血小板减少性紫癜(ITP)是目前临床为常见的自身免疫性疾病.其发病机制多认为与自身抗体介导的血小板破坏、T细胞亚群功能与凋亡异常、细胞毒性T细胞介导的细胞毒作用等有关.而新研究表明,B细胞活化因子/增殖诱导配体的过度表达在ITP发病机制中起到重要作用,但具体作用不清.抑制其过度表达从而治疗ITP,还有待进一步研究.
关键词： B细胞活化因子 增殖诱导配体 特发性血小板减少性紫癜 -
系统性红斑狼疮患者增殖诱导配体水平变化及意义
增殖诱导配体(APRIL)与B淋巴细胞刺激因子(BAFF)同属肿瘤坏死因子超家族,共享两个受体.BAFF能促进B细胞分化、增殖和未成熟淋巴细胞的生存,诱导或加重系统性红斑狼疮(SLE)病情[1,2].APRIL在SLE中作用却不清楚,研究结果甚至互相矛盾[3,4].本研究通过检测SLE患者血清APRIL水平,并同时检测与疾病活动有关的自身抗体如抗dsDNA抗体、抗核小体抗体(AnuA)和抗C1q抗体,探讨其在SLE疾病活动和系统损害中的作用和意义.
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儿童急性特发性血小板减少性紫癜患者B淋巴细胞刺激因子和增殖诱导配体表达及意义
目的 探讨B淋巴细胞刺激因子(BLyS)和增殖诱导配体(April)在儿童急性特发性血小板减少性紫癜(ITP)免疫发病机制中的可能作用.方法 急性ITP患儿30例,同龄正常对照儿童30名.采用RT-PCR及实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测BLyS和April及其受体BR3、BCMA、TACI,细胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-15 mRNA表达;流式细胞术检测血小板表面自身抗体PAIgG表达的相对平均荧光强度(MFI).结果 ①急性ITP患儿单核-巨噬细胞(MC)BLyS mRNA[(8.30±2.31)×10-1]和April mRNA[(7.51±1.93)×10-3]表达明显高于同龄正常对照组[分别为(3.95±1.44)×10-1和(3.08±0.82)×10-3](P<0.01);②BLyS和April受体BR3、BCMA和TACI基因转录水平亦明显增高(P<0.01);③急性ITP患儿抗体类型转换相关细胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-15mRNA表达水平明显高于同龄正常对照组(P<0.01);④ITP患儿BLys和April表达调控因子IFN-α、IL-10 mRNA表达水平显著增高(P<0.01);⑤急性ITP患儿PAIgG表达的相对MFI值(67.4±28.1)高于正常对照组(19.5±8.5)(P<0.01),与BLyS和April及其受体(BR3、BCMA和TACI)mRNA的表达呈正相关(r值分别为0.56、0.53、0.62、0.70、0.45,P值均<0.01),激素治疗后明显下降,与BLys和April及其受体表达变化相一致.结论 急性ITP患儿BLyS和April过表达可能是导致ITP免疫功能紊乱的因素之一.
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改良PCD方案治疗多发骨髓瘤患者对血清铁蛋白和增殖诱导配体及护骨素水平的影响
目的 改良PCD方案治疗多发骨髓瘤患者的疗效及其对血清铁蛋白,增殖诱导配体(APRIL)和护骨素(OPG)水平的影响.方法 选择2012年1月至2013年12月多发性骨髓瘤患者76例,根据治疗方法不同分为观察组和对照组,每组38例.对照组予以PCD方案化疗,观察组予以改良PCD方案化疗.观察2组治疗后的疗效和毒副作用,治疗前后血红蛋白、β2-MG、骨髓浆细胞比例、KPS、铁蛋白、APRIL和OPG水平变化.结果 观察组总有效率为78.95％,对照组总有效率为68.42％,2组疗效差异无统计学意义(χ2=0.611,P>0.05).治疗后观察组在乏力、胃肠道反应和血液毒性发生率方面明显低于对照组(P<0.05),而2组在周围神经炎和感染方面差异无统计学意义(P>0.05).2组治疗前血红蛋白、β2-MG、骨髓浆细胞比例、KPS铁蛋白、APRIL和OPG比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后2组血红蛋白、KPS和OPG较治疗前明显升高(P<0.01),而β2-MG、骨髓浆细胞比例、铁蛋白和APRIL较治疗前明显降低(P<0.01),观察组血红蛋白、β2-MG、铁蛋白、APRIL和OPG水平较对照组升高或降低更加明显(P<0.01).结论 改良PCD方案治疗多发骨髓瘤患者疗效确切,具有毒副作用小,可能与降低机体的铁蛋白和APRIL水平,升高机体的OPG水平有关.
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B细胞活化因子/增殖诱导配体系统与系统性红斑狼疮的研究进展
系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病,其发病机制还不完全明确,现有治疗方法效果也不确切.近年来关于肿瘤坏死因子家族新成员B细胞活化因子(BAFF)及其与SLE发病和SLE临床治疗的研究有较多报道.本文从以下几个方面对相关研究进行综述:BAFF/增殖诱导配体(APRIL)系统的研究进展;BAFF/APRIL系统在SLE发病机制中的作用;BAFF/APRIL系统与SLE不同临床表型的关系和该系统作为疾病活动生物标志物的研究进展;BAFF/APRIL系统与SLE靶向治疗的关系.为进一步开展BAFF/APRIL系统与SLE的研究提供参考.
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B细胞活化因子/增殖诱导配体在类风湿关节炎发病机制及治疗中的研究进展
B细胞活化因子(B cell activating factor of the TNF family,BAFF)是Schneider等于1999年发现的肿瘤坏死因子(TNF)家族的新成员,又叫做B细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)~([1-2]).BAFF是由283个氨基酸残基组成的相对分子质量为313 000的Ⅱ型跨膜蛋白,可分为胞内区、跨膜区、胞外区3个部分.其N端的1～46位氨基酸为胞内区片段.47～73位氨基酸为跨膜区片段,其余为胞外区片段~([1]).
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B细胞激活因子和增殖诱导配体与原发性干燥综合征发病机制的研究
目的 探讨原发性干燥综合征(pSS)患者B细胞激活因子(BAFF)和增殖诱导配体(APRIL)的表达情况及其与发病机制的关系.方法 分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法、实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、免疫组织化学方法检测pSS患者血清、外周血单个核细胞(PBMC)、唇腺组织中BAFF、APRIL的表达情况,分析其相互关系及与临床指标相关性.结果 pSS患者的血清BAFF高于健康对照组[(7.4±3.9)ng/ml和(3.7±1.1)ng/ml,P＜0.01]、血清APRIL高于健康对照组[(26±15)ng/ml和(16±15)ng/ml,P=0.039];且血清BAFF与IgG浓度、红细胞沉降率(ESR)、总球蛋白水平、抗核抗体(ANA)滴度相关(r＝0.490,0.402,0.429,0.406,P＜0.05),血清APRIL与ESR、唇腺淋巴细胞灶数相关(P＜0.05),两者均与外周血白细胞、血小板计数呈负相关(r=0.046.0.541,P＜0.05).pSS患者唇腺组织BAFF和APRIL蛋白表达在淋巴细胞浸润区均高于对照组(P＜0.05).而PBMC的BAFF mRNA表达相对量低于对照组[(0.023±0.024)和(0.245±0.188),P＜0.01],APRIL mRNA表达相对量均低于对照组[(0.047±0.035)和(0.130±0.097),P=0.002].血清BAFF与APRIL水平呈正相关(r＝0.534,P=0.002).结论 pSS患者BAFF和APRIL在血清、唇腺组织淋巴细胞浸润区表达异常增高并与临床指标相关,提示该系统可能参与pSS的发病过程;PBMC的BAFF、APRIL mRNA表达相对量的降低提示血清BAFF、APRIL蛋白的分泌产生和调节可能存在更复杂的机制.
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系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞增殖诱导配体及其受体的表达
目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中增殖诱导配体(APRIL)及其受体B细胞成熟抗原(BCMA)、跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子(TACI)mRNA的表达和意义.方法 应用实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)技术,检测66例SLE患者及25名正常人PBMC中APRIL及其受体mRNA的表达,采用2-AACT对目标基因的表达量进行评估.结果 SLE活动组和缓解组的APRIL mRNA、BCMA mRNA和TACI mRNA的表达水平均明显高于正常对照组(均P<0.01);且SLE活动组的APRIL mRNA和TACI mRNA的表达水平显著高于SLE缓解组(分别P<0.01,P<0.05),BCMA mRNA的表达在SLE活动组与缓解组之间比较差异无统计学意义;此外,APRILmRNA和TACI mRNA在SLE肾损组的表达显著高于非肾损组(均P<0.01).结论 SLE患者PBMC中APRIL及其受体的表达水平增高,可能在SLE发病机制中发挥重要作用.
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串联siRNA对SW480细胞中增殖诱导配体基因表达的影响
目的 分析串联siRNA在SW480细胞中对增殖诱导配体(APRIL)基因的作用效果,探讨串联siRNA对APRIL基因表达的应用价值.方法 设计筛选4条针对于APRIL基因的shRNA片段(即sh644、sh1938、sh1451、sh2231),分别将其与pGenesil-1.1质粒表达载体连接,形成4个单一表达载体(pGsh644、pGsh1938、pGsh1451、pGsh2231),同时将4条shRNA与pGenesil4-T质粒连接,共同构成pG4串联siRNA表达载体.应用阳离子脂质体法对结直肠癌细胞株SW480进行转染.采用实时荧光定量PCR以及Western blot法对SW480细胞的APRIL mRNA和蛋白表达进行检测.结果 酶切及测序证实串联siRNA质粒载体构建成功.siRNA能够抑制SW480细胞APRIL基因表达,pG4组APRIL mRNA抑制率为77.72％,蛋白质表达抑制率为84.74％,显著高于其他质粒,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 串联siRNA表达载体能够抑制结直肠癌SW480细胞株的APRIL基因表达,为结直肠癌APRIL基因治疗提供基础.
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稳定表达人可溶性增殖诱导配体(sAPRIL)的CHO细胞株的建立及鉴定
目的:构建稳定表达人可溶性增殖诱导配体(soluble a proliferation-inducing ligand,sAPRIL)的CHO细胞株.方法:利用RT-PCR方法克隆出sAPRIL基因,构建表达该基因的慢病毒表达载体,与辅助质粒共转染HEK-293T细胞,以包装病毒颗粒.将病毒上清感染CHO细胞,获得稳定表达sAPRIL的细胞株.利用RT-PCR、Western blot及FACS等方法鉴定其表达.结果:成功克隆出人sAPRIL基因,RT-PCR、Western blot及FACS结果显示成功构建了稳定表达sAPRIL的CHO细胞株.结论:结论:成功获得了稳定表达sAPRIL的细胞株,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
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PCR检测结直肠癌组织APRIL表达与免疫组化方法的比较
目的 观察PCR法、免疫组化染色法检测结直肠癌组织中增殖诱导配体(APRIL)的相关性.方法 实时荧光定量PCR法检测29例结直肠癌患者肿瘤组织及自身癌旁组织;免疫组化染色法检测相同29例结直肠癌患者组织及正常结直肠组织12例的APRIL蛋白表达.结果 29例结直肠癌组织中实时荧光定量PCR法检测APRIL阳性率为93.1％(27/29)；免疫组化染色法检测APRIL阳性率为89.6％(26/29)；两方法比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 实时荧光定量PCR法、免疫组化染色法检测APRIL的表达方法,能为临床提供有诊断参考价值的信息.
关键词： 荧光定量PCR结直肠癌 增殖诱导配体 免疫组化 -
实时定量PCR检测自身免疫中APRIL mRNA表达
建立检测增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)mRNA的SYBR Green I实时定量PCR方法,了解自身免疫性疾病[系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)]患者外周血单个核细胞(PBMC)中APRIL的表达水平,研究APRIL mRNA的表达与自身免疫性疾病发病机制、预后之间的关系.方法构建克隆载体pGEM-T Easy-APRIL作为定量模板,Line Gene FQD-33A荧光定量PCR仪定量检测58例自身免疫性疾病(SLE、RA)确诊病人和20例正常健康献血者的外周血APRIL mRNA表达含量,以APRIL mRNA和内参GAPDH mRNA含量比值作为APRIL表达水平的指标.结果58例自身免疫病患者的APRIL mRNA表达范围3.95～192,均值为29.68±4.5.20例正常对照标本PBMC APRIL mRNA的表达范围3.1～18.7,均值为10.56士2.0.自身免疫病患者外周血中APRIL mRNA的表达水平高于正常对照组,其中久治不愈或疗效差者APRIL mRNA表达水平明显高于初发患者及治疗后缓解患者,但后两组差异无显著性意义.结论成功建立了人APRIL基因表达含量的SYBR Green I实时定量检测方法.自身免疫性疾病(SLE、RA)患者的APRIL mRNA的表达含量升高,其中疗效差久治不愈患者有更高表达水平.研究APRIL表达和自身免疫病发展、早期诊断、预后等相关性,为寻找自身免疫病治疗新靶点打下基础.
关键词： 增殖诱导配体 自身免疫病 SYBR Green I荧光染料
