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串联siRNA干扰沉默结肠癌SW480细胞APRIL基因表达
目的 检测串联siRNA对SW480细胞中增殖诱导配体(APRIL)基因的影响.方法 设计并筛选针对APRIL基因的4条shRNA片段(sh644、sh1451、sh1938、sh2231),分别将其连接至pGenesil-1.1质粒表达载体,形成pGsh644、pGsh1451、pGsh1938、pGsh2231单一表达载体,同时将4条shRNA连接至pGenesil4-T质粒形成pG4串联siRNA表达载体.阳离子脂质体法转染至结直肠癌细胞株SW480.实时荧光定量PCR和Western blot技术检测SW480细胞中APRIL mRNA和蛋白表达水平.结果 经酶切和测序鉴定,构建的串联siRNA质粒载体符合要求.几条siRNA均可有效抑制SW480细胞APRIL基因的表达,APRIL mRNA的抑制率分别是pGsh644(56.2％)、pGsh1451(49.5％)、pGsh1938 (50.9％)、pGsh2231 (49.2％)、pG4(79.3％).蛋白质表达抑制率分别为pGsh644(56.9％)、pGsh1451(48.7％)、pGsh1938(50.1％)、pGsh2231 (46.4％)、pG4 (87.5％) (P＜0.05).其中以pG4抑制效应强.结论 与传统单一的siRNA表达载体相比,串联siRNA表达载体大大地敲低了结直肠癌细胞株中APRIL基因的表达,为针对结直肠癌APRIL基因的基因治疗提供研究基础.
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串联siRNA对SW480细胞中增殖诱导配体基因表达的影响
目的 分析串联siRNA在SW480细胞中对增殖诱导配体(APRIL)基因的作用效果,探讨串联siRNA对APRIL基因表达的应用价值.方法 设计筛选4条针对于APRIL基因的shRNA片段(即sh644、sh1938、sh1451、sh2231),分别将其与pGenesil-1.1质粒表达载体连接,形成4个单一表达载体(pGsh644、pGsh1938、pGsh1451、pGsh2231),同时将4条shRNA与pGenesil4-T质粒连接,共同构成pG4串联siRNA表达载体.应用阳离子脂质体法对结直肠癌细胞株SW480进行转染.采用实时荧光定量PCR以及Western blot法对SW480细胞的APRIL mRNA和蛋白表达进行检测.结果 酶切及测序证实串联siRNA质粒载体构建成功.siRNA能够抑制SW480细胞APRIL基因表达,pG4组APRIL mRNA抑制率为77.72％,蛋白质表达抑制率为84.74％,显著高于其他质粒,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 串联siRNA表达载体能够抑制结直肠癌SW480细胞株的APRIL基因表达,为结直肠癌APRIL基因治疗提供基础.
