Calpain对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中自噬过程的作用

目的 探讨calpain是否通过改变细胞自噬水平而参与心肌缺血再灌注(I/R)损伤.方法 原代乳鼠心肌细胞分离培养,建立原代心肌细胞缺氧/复氧模型(H/R)模拟心肌I/R损伤,分为对照组,H组(缺氧12小时),HR组(缺氧12小时后复氧3小时),HR+ALLN组(calpain抑制剂ALLN预处理30min后缺氧12小时复氧3小时),HR+CQ组(自噬流抑制剂氯喹预处理30min后缺氧12小时复氧3小时),HR+ALLN+CQ组(氯喹和ALLN预处理30min后缺氧12小时复氧3小时).检测各组calpain活性,心肌细胞损伤指标乳酸脱氢酶(LDH),心肌细胞活力(MTT法),Western Blot检测自噬相关蛋白LC3的表达,以LC3II/LC3I比值作为自噬程度指标,以氯喹干预检验自噬流.结果 缺氧使calpain激活(p＜0.001),心肌细胞LDH释放增加(p＜0.001),心肌活力下降(p＜0.001),同时自噬上调(p＜0.05),复氧时calpain活性更高(p＜0.005),LDH量更高(p＜0.001),心肌活力更低(p＜0.001),自噬更增强(p＜0.01),而自噬流未受阻.ALLN抑制calpain激活(p＜0.001),使H/R心肌细胞LDH释放减少(p＜0.001),改善细胞活力(p＜0.001),这种改善伴随着自噬上调(p＜0.01),自噬流未受影响,提示calpain有抑制H/R心肌细胞的自噬的作用.结论 calpain通过抑制心肌细胞的自噬反应而参与I/R损伤.

急性病毒性心肌炎小鼠心肌中Calpain mRNA表达与心肌细胞凋亡的关系研究

目的 检测Calpain mRNA在柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)急性心肌炎小鼠心肌组织中的表达,并分析其与心肌细胞凋亡的关系.方法 以CVB3单次感染Balb/c小鼠建立急性病毒性心肌炎(n=10)模型,同时设立药物干预组(n=12)及药物对照组(n=10);同期小鼠腹腔无菌注射等剂量不含病毒的DMEM液作为正常对照组(n=8).以缺口末端标记法(TUNEL)检测各组心肌细胞凋亡情况,计数凋亡率.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测小鼠心肌组织中Calpain-1及Calpain-2 mRNA的表达.结果 急性病毒性心肌炎组较正常对照组及药物对照组心肌组织内Calpain-1(P=0.02及P=0.04)和Calpain-2(P＜0.01及P=0.02)mRNA表达升高,心肌细胞凋亡率亦增高(P值均＜0.01);药物对照组与正常对照组心肌组织内Calpain-1(P＞0.05)和Calpain-2(P＞0.05)mRNA及心肌细胞凋亡率均没有统计学差异(P＞0.05);药物干预组较正常组心肌组织内Calpain-1(P＜0.01)及Calpain-2(P＜0.01)mRNA表达升高,心肌细胞凋亡率亦升高(P＜0.01);药物干预组较急性病毒性心肌炎组心肌组织内Calpain-1(P=0.04)及Calpain-2(P＜0.01)mRNA表达升高,心肌细胞凋亡率亦升高(P＜0.01).各实验组小鼠心肌组织中Calpain-1及calpain-2 mRNA的表达水平分别与心肌细胞的凋亡呈正相关.结论 柯萨奇B3病毒通过激活心肌组织内Calpain,导致心肌细胞的凋亡,从而参与病毒性心肌炎的发生.

Calpain在脓毒症伴高糖血症小鼠心肌TNF-αmRNA表达以及心功能障碍中的作用

目的 探讨calpain对脓毒症伴高糖血症小鼠心肌TNF-αm RNA表达的影响及其在心功能障碍中的作用.方法 采用链脲佐菌素(STZ,150 mg/kg)腹腔注射进行高糖血症造模,高糖血症小鼠或正常小鼠一周后腹腔内注射脂多糖(lipopolysaccharide,4mg/kg)制备脓毒症伴高糖血症模型,用荧光底物检测心肌组织中calpain的活性,Real-time PCR检测心肌TNF-αmRNA的表达,Lange-ndoff灌注装置评价小鼠心功能.结果 在脓毒症小鼠中,心肌组织calpain活性和TNF-αmRNA的表达增高,给予calpain抑制剂calpain inhibitor-Ⅲ或PD150606可抑制TNF-αmRNA的表达.与脓毒症小鼠相比,脓毒症伴高糖血症小鼠中心肌calpain活性增高,TNF-αmRNA表达增加,心功能收缩和舒张功能受损更为严重.结论 在脓毒症伴高糖血症小鼠中,心肌calpain活性增高,通过调控心肌TNF-αmRNA的表达,从而导致心功能障碍.

Calpain及抑制剂对小鼠破骨细胞分化的作用

目的 探讨Calpain及其抑制剂Calpastatin能否抑制核因子-κB活化受体配体(receptor activatorof NFκB ligand,RANKL)诱导的小鼠破骨细胞分化.方法 体外培养小鼠RAW264.7细胞,在诱导组分别加入不同浓度的RANKL(0、20、50、70、100ng/mL),并另设抑制剂组加入RANKL 50ng/mL和Calpastatin50 nmol/L,共同诱导分化6 d至破骨细胞分化成熟.第2天应用荧光定量分析试剂盒分析各组Calpain活性,并在第6天应用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色和骨凹陷分析方法(pitformation assay)比较各组破骨细胞分化程度的差异.结果 Calpain活性随RANKL剂量的增加而递增(P<0.05),其活性分别与TRAP阳性细胞数和骨凹陷面积呈正相关,相关性具有统计学意义(P<0.05).Calpastatin抑制剂组与单纯RANKL 50ng/mL诱导组相比,TRAP阳性细胞数和骨凹陷面积均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 Calpain是小鼠RAW264.7细胞中RANK L诱导的破骨细胞分化过程中的关键因子,使用Calpastatin抑制Calpain活性可以有效抑制RANKL诱导的破骨细胞分化.Calpain可能成为抑制破骨细胞分化和骨质破坏的新型治疗靶点.

钙蛋白酶抑制剂在深低温停循环中肺保护机制的实验研究

目的 评估钙蛋白酶(calpain)抑制剂对心脏手术深低温停循环(DHCA)中炎症反应性肺损伤的保护机制,并探讨其作用是否通过核转录因子kappa B(NF-κB)介导.方法 16只幼猪建立体外循环(CPB)DHCA模型,随机分为对照组和实验组,实验组CPB前1 h静脉注射calpain抑制剂LLY-FMK(苄氧羧基-亮氨酸-亮氨酸-酪氨酸-荧光甲基酮)1 mg/kg,对照组则注射同剂量的生理盐水.检测两组CPB前和CPB/DHCA后肺静态顺应性、肺血管阻力指数、肺湿干质量比、支气管肺泡灌洗液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度以及肺组织NF-κB水平;CPB/DHCA结束取肺组织HE染色光镜观察肺组织水肿和炎细胞浸润情况.结果 与CPB前相比,CPB后两组的肺静态顺应性下降,肺血管阻力、肺湿干重比和肺组织NF-κB表达增加(P<0.05),但两组相比,实验组的改变显著轻于对照组(P<0.05),实验组支气管肺泡灌注液中的TNF-α含量显著低于对照组(P<0.05),光镜下中性粒细胞渗出、肺水肿和肺泡损伤程度轻于对照组.结论 calpain抑制剂LLY-FMK能减轻DHCA后肺部炎症反应,从而改善肺功能,这种保护作用可能与降低NF-κB活性有关.

Ototoxic drug-induced apoptosis of inner ear cel s has been shown to be associated with calpain expression. Cisplatin has severe ototoxicity, and can induce cochlear cel apoptosis. This study assumed that cisplatin activated calpain expression in apoptotic cochlear cel s. A mouse model of cisplatin-induced ototoxicity was established by intraperitoneal injection with cisplatin (2.5, 3.5, 4.5, 5.5 mg/kg). Immunofluorescence staining, image analysis and western blotting were used to detect the expression of calpain 1 and calpain 2 in the mouse cochlea. At the same time, the auditory brainstem response was measured to observe the change in hearing. Results revealed that after intraperitoneal injection with cisplatin for 5 days, the auditory brainstem response threshold shifts increased in mice. Calpain 1 and calpain 2 expression significantly increased in outer hair cel s, the spiral ganglion and stria vascularis. Calpain 2 protein expression markedly increased with an in-creased dose of cisplatin. Results suggested that calpain 1 and calpain 2 mediated cispla-tin-induced ototoxicity in BALB/c mice. During this process, calpain 2 plays a leading role.

Even though many studies have identified roles of proteasomes in axonal degeneration, the mo-lecular mechanisms by which axonal injury regulates proteasome activity are stil unclear. In the present study, we found evidence indicating that extracellular calcium influx is an upstream regula-tor of proteasome activity during axonal degeneration in injured peripheral nerves. In degenerating axons, the increase in proteasome activity and the degradation of ubiquitinated proteins were sig-nificantly suppressed by extracellular calcium chelation. In addition, electron microscopic findings revealed selective inhibition of neurofilament degradation, but not microtubule depolymerization or mitochondrial swel ing, by the inhibition of calpain and proteasomes. Taken together, our findings suggest that calcium increase and subsequent proteasome activation are an essential initiator of neurofilament degradation in Wal erian degeneration.

急性离心运动后骨骼肌超微结构、钙依赖性蛋白酶和泛素的动态变化

目的:探讨1次离心运动后大鼠骨骼肌超微结构、Calpains和Ubiquitin的动态变化.方法:30只雄性SD大鼠随机分为对照组和1次离心运动后即刻组、24 h组和7天组.各运动组大鼠进行1次下坡跑运动,速度16 m/min,坡度-16.,运动100 min后休息10 min,再运动100 min,总时间200 min.分别在急性运动后即刻、24 h和第7天取材,测定血清LDH、CK活性和股四头肌超微结构及Calpain-1、Calpain-2和Ubiquitin含量.结果:①1次离心运动后即刻组大鼠股四头肌肌丝排列混杂、卷曲；运动后24 h出现轻度溶解、断裂,Z线不规则,局部Z线消失；运动后7天超微结构与对照组相比无显著变化.血清CK和LDH活性变化与股四头肌超微结构变化一致.②与对照组相比,运动后即刻组大鼠股四头肌Calpain-1、Calpain-2和Ubiquitin含量均有所降低,但均无显著性差异；运动后24 h组股四头肌Calpain-1、Calpain-2和Ubiquitin含量均显著高于对照组和运动后即刻组；运动后7天组与运动后24 h组相比均显著下降,而与对照组相比均无显著性差异.结论:①1次离心运动所致的骨骼肌损伤有一定的延迟性,骨骼肌损伤在运动后即刻从整体看并不严重,但在运动后24 h出现明显损伤,运动后7天基本恢复.②急性离心运动后骨骼肌Calpain和Ubiquitin含量变化与骨骼肌损伤的动态变化基本一致.

局灶性脑缺血后嗜酸性神经元死亡的通路

目的 局灶性脑缺血后产生各种类型的嗜酸性神经元(ENs).为了探讨大鼠局灶性脑缺血后大脑皮质中心区和周边区ENs的形态学特征,及细胞死亡相关因子在ENs中的表达.方法 夹闭蒙古沙鼠单侧颈总动脉制作前脑缺血模型,于3h至2周在显微镜下行ENs形态学和免疫组织化学分析.结果 光镜:细胞核轻度异常的ENs缺血3h后出现于中心区,12h后出现于周边区,calcium、μ-calpain、GRP78和ubiquitin在该型ENs中呈阳性.中心区,核固缩和胞体不规则萎缩的ENs缺血12h后达峰值,calcium、μ-calpain表达进一步增高;核固缩和胞体极度萎缩的ENs 4d后达峰值,calcium、TUNEL染色呈阳性.周边区,ENs的胞体轻度萎缩,于1周后相继呈现核固缩、核碎裂、核溶解,同时calcium、TUNEL染色呈阳性.活化型caspase 3在中心区与周边区的各型ENs中均呈阴性.电镜:中心区,ENs的染色质凝集成不规则团块状,细胞质中出现大量空胞,核膜及胞膜均破裂.周边区,ENs的染色质凝集、碎裂呈不规则团块,终均质化,核膜边界模糊,胞膜仍保持完整.结论 局灶性脑缺血后ENs呈现了两种死亡途径:缺血中心区核固缩伴胞体极度萎缩;周边区核溶解伴胞体轻度萎缩.ENs不同形态学的改变与不同细胞死亡相关因子的活化相对应.

钙蛋白酶及其抑制剂对心肌肥厚模型大鼠心肌肥厚作用的研究

目的 研究钙蛋白酶calpain及其抑制剂MDL28170与心肌肥厚的关系,探讨心肌肥厚可能的作用机制.方法 50只280～350 g成年雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组,n=5)、假手术组(SO组,n=5)、手术组(AO组,n=20)、手术+治疗组(AO+T组,n=20).对AO组及AO+T组大鼠施行腹主动脉缩窄术建立心肌肥厚大鼠模型.4周后行心脏彩超检查.AO+T组大鼠MDL28170治疗2周后再行心脏彩超检查.取心脏称重,计算心重指数.Western blot检测心肌中calpainl、calpain2、CaN A的表达.结果 心脏彩超证实4周后AO组及AO+T组大鼠心肌肥厚模型建立成功.药物干预后,AO+T组大鼠心肌肥厚得到控制,进展延缓,与AO组相比差距明显(P＜0.05).AO组、AO+T组大鼠心脏质量、心重指数较NC组和SO组增加,AO组增加更明显(均P＜ 0.05).与NC组相比,calpain1、calpain2、CaNA表达量在其余3组均有增加;而AO+T组与AO组比较calpain1、calpain2、CaN A表达量降低(P＜0.05).结论 钙蛋白酶calpain与心肌肥厚关系密切,CaN途径是其作用机制之一;calpain抑制剂MDL28170对实验条件下的心肌肥厚具有明显阻遏作用.

Ca2＋与Calpain在白内障形成过程中作用及其机制的研究进展

白内障是一种眼科常见病、多发病，是全球主要的致盲性眼病之一。虽然随着技术的进步，手术治疗白内障已经被广泛应用于临床，然而巨大的经济负担和手术相关的并发症依然是患者选择白内障手术治疗的主要顾虑。因此，白内障防治性药物的探索成为世界眼科专家研究的主要方向。而白内障发病机制及其形成过程是研究白内障药物治疗方法的基础。许多研究发现：在成熟期白内障患者的晶状体中 Ca2＋浓度成倍增加，过度激活体内多种蛋白水解酶，引起晶状体蛋白质的水解、沉淀。在这些依赖Ca2＋激活的蛋白酶中， Calpain是目前研究者为关注的、被认为与白内障形成密切相关。本文结合近年来国内外对白内障发病机制的研究进展，着重阐述Ca2＋依赖的蛋白水解酶—Calpain在白内障形成过程中的作用，以及其相关抑制剂在延缓白内障的发展甚至抑制白内障形成方面的作用机制。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂减少大鼠脑缺血模型caspase-3的表达

目的:研究半胱氨酸蛋白酶caspase-3及calpain抑制剂干预治疗对大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型caspase-3表达的影响.方法:大鼠随机分为经左侧侧脑室注射caspase-3抑制剂Ⅲ组(DEVD组)、calpain抑制剂Ⅰ组(ALLN组)、联合治疗组(DEVD+ALLN组)、溶剂二甲基亚砜对照组(DMSO组)以及左侧大脑中动脉缺血/再灌注对照组(MCAO组),诱导左侧大脑中动脉缺血2 h,再灌注24或48 h;再灌注24 h进行TTC染色观察梗死灶的形成情况;用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测鼠脑中的神经元凋亡情况;并分别通过原位杂交和免疫组化技术检测鼠脑中caspase-3 mRNA及活性蛋白的表达.结果:DMSO组的各项指标与MCAO组无明显差异;DEVD组或ALLN组缺血侧脑中细胞凋亡数、caspase-3 mRNA及活性蛋白的表达均明显减少,联合治疗组作用更强.结论:caspase-3与calpain抑制剂干预治疗可减少大鼠缺血再灌注脑区神经元凋亡和caspase-3的表达,从而产生神经保护作用,并具有潜在的临床应用价值.

大鼠短暂局灶性大脑中动脉缺血后calpain的表达

目的:研究calpain在缺血性脑损伤中的作用,进一步探讨缺血性脑血管病的分子机制,为治疗研发提供理论依据.方法:用Belayev改良的Langa线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉(MCA)缺血/再灌注模型,TTC染色观察梗死灶的形成,分别用原位杂交及免疫组化技术检测鼠脑中calpain mRNA与活性蛋白的表达.结果:缺血2 h再灌注24 h,TTC染色见明显的梗死灶形成,正常脑组织、假手术组及MCAO缺血对侧脑中有少量的calpainmRNA表达,但活性蛋白几无表达;缺血脑组织calpain mRNA表达及蛋白质活化均显著增加,呈双峰式,MCA缺血2 h增加,再灌注4 h减少,至24 h更明显增高,而48 h又有所下降.结论:Calpain参与了缺血性脑损伤过程,尤其在迟发性神经元死亡中起重要作用.

Caspase和calpain在神经元凋亡和亨廷顿舞蹈病发病机制中的作用

亨廷顿舞蹈病(Huntington disease,HD)是由亨廷顿蛋白(huntingtin,Htt)N端多聚谷氨酰胺序列延长引起的神经退行性疾病.一组半胱氨酸蛋白酶(caspase)和钙蛋白酶(calpain)可剪切突变Htt,产生毒性较大的N端Htt片段.近年的研究表明,该剪切作用导致N端片段的产生是舞蹈病发病机制中的重要一步,阻断这一过程可能为这种目前无法治愈的疾病提供潜在的治疗方案.

Caspase-3抑制剂对大鼠短暂局灶性脑缺血模型的神经保护作用

目的:研究caspase-3抑制剂ⅢAc-DEVD-CMK干预治疗对大鼠短暂局灶性脑缺血模型的神经保护作用.方法:大鼠或不进行预处理(MCAO组),或分别经左侧侧脑室注射Ac-DEVD-CMK(DEVD组)、溶剂二甲亚砜(DMSO组)后,用线拴法制作大鼠左侧大脑中动脉(MCA)缺血/再灌注模型;通过Klenow标记及TUNEL染色技术检测鼠脑中单、双链DNA断裂;分别用原位杂交及免疫组化技术检测鼠脑中caspase 3和calpain mRNA及活性形式蛋白质的表达.结果:与MCAO组相比,DMSO组鼠脑缺血侧DNA单、双链断裂,caspase-3和calpain mRNA及活性蛋白质的表达均无明显差异;DEVD组缺血侧脑中Klenow及TUNEL阳性细胞数均明显减少,caspase-3及calpain的表达也明显减少.结论:Caspase-3抑制剂干预治疗短暂局灶性脑缺血具有潜在的临床应用价值.

局灶性脑创伤海马急性calpain Ⅰ的激活及Dyrk1A的截断

目的:研究创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)小鼠模型中是否有calpain激活——Dyrk1A (dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 1A)截断——tau磷酸化和tau病理.方法:利用表达6种人tau变异体的转基因小鼠(Tg/hTau)制备轻度到中度的局灶性脑创伤(controlled cortical impact,CCI)模型,用Westem Blot和免疫荧光染色研究CCI小鼠海马中calpain的激活、Dyrk1A截断和tau的磷酸化及tau的病理.结果:CCI后30 h小鼠海马中calpain被激活、Dyrk1A截断增加、tau在Thr205和Ser396/404磷酸化水平升高、4R-tau/3R-tau比例增加,在CCI后6周小鼠海马中Dyrk1A的截断没有增加,但在对照侧海马齿状回有异常过度磷酸化tau聚集.结论:局灶性脑创伤导致Tg/hTau小鼠calpain的急性激活,截断并激活Dyrk 1A,促进tau磷酸化和tau病理的发生.

银杏二萜内酯葡胺注射液通过下调calpain信号通路抑制脑缺血神经细胞凋亡

研究银杏二萜内酯葡胺注射液(diterpene ginkgolides meglumine injection,DGMI)对缺氧缺糖/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡的抑制作用及其机制.采用试剂盒、Fluo3 AM法、Western blot检测SH-SY5Y细胞氧糖剥离损伤4h后,与药物一起复氧1h细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量、caspase-3/7酶活力、细胞质中核小体含量、胞浆游离钙离子浓度以及calpain、cleaved caspase-12蛋白量的变化.结果显示DGMI能极显著降低OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞LDH的漏出量,抑制caspase-3/7酶活性,减少细胞核核小体的释放量,下调细胞内游离钙离子浓度、calpain和cleaved caspase-12蛋白量,抑制calpain凋亡信号通路保护神经细胞.DGMI对OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有显著的抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞内Ca2+/calpain/caspase-12/capase-3信号通路有关.

N-乙酰基半胱氨酸对Aβ25-35活化calpain活性的影响及可能机制

目的探讨 N-乙酰基半胱氨酸( N-acetyl-L-cysteine, NAC)对β淀粉样蛋白毒性片段25-35( Aβ25-35)活化cal-pain活性的影响及可能机制。方法运用Aβ25-35来诱导皮质神经元的损伤,实验分为空白对照组、Aβ25-35组、NAC与Aβ25-35共同作用组,采用荧光酶标法检测calpain活性、氧自由基( H2 O2)和线粒体膜电位；用化学发光法测定神经元内ATP水平。结果 Aβ25-35(20μmol·L-1)作用12 h可明显升高calpain活性；与 Aβ25-35处理组相比, NAC (10 mmol · L-1)预先作用24 h,然后再与Aβ25-35共同作用12 h,可明显降低 calpain活性；与空白对照组相比, Aβ25-35处理组中的H2 O2明显升高、线粒体膜电位和ATP水平明显下降；而与Aβ25-35处理组相比,NAC预处理组中的H2 O2水平下降、线粒体膜电位和ATP水平升高,这些差异皆有统计学意义。结论这些研究结果提示, NAC可能通过线粒体的保护作用来降低Aβ25-35诱导的异常活化的calpain活性。

日本血吸虫Calpain序列分析及DNA疫苗体系的构建

目的探讨日本血吸虫疫苗候选分子-钙离子激活的中性蛋白激酶(Calpain)在抗日本血吸虫感染的保护性作用及其保护性免疫机制.方法从日本血吸虫成虫中提取RNA,用RT-PCR扩增Calpain含多个B,T细胞表位的片段,引物中包含BamHI和EcoRI的酶切位点,PCR扩增产物经纯化后TA克隆,转化的阳性TA克隆经PCR筛选后,液体培养大肠杆菌并回收质粒DNA,质粒DNA经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,目的基因亚克隆到真核表达质粒pVAC载体,构建pVAC-Calpain真核表达体系,转化的阳性亚克隆经PCR筛选,液体培养大肠杆菌并回收pVAC-Calpain质粒DNA,质粒DNA经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切和DNA序列分析鉴定被亚克隆的Calpain基因.结果 RT-PCR从日本血吸虫RNA中扩增了453bp的Calpain基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切和DNA序列分析鉴定Calpain基因被克隆到真核表达质粒pVAC载体.结论日本血吸虫疫苗候选分子Calpain的DNA疫苗体系的建立将有助于解析这个疫苗候选分子抗日本血吸虫感染的保护性免疫作用及保护性免疫机制.

颅脑损伤后大鼠脑皮质中神经丝的改变Calpain活性的变化及两者之间的关系研究

目的 观察颅脑损伤后大鼠脑皮质中神经丝的改变,同时检测Calpain活性的变化,探讨两者之间的关系及其对治疗颅脑损伤的意义.方法 25只雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组、颅脑损伤组(颅脑损伤后6h、12h、24 h、72 h)共5组,每组5只.采用Myneurolab脑立体定向仪和Benchmark颅脑损伤撞击器制作创伤性颅脑损伤模型.应用免疫组化法检测上述时间点损伤灶周围皮层中神经丝的形态改变,检测Calpain活性的变化.结果 颅脑损伤后,神经丝的结构紊乱,降解逐渐增多,伤后24 h时降解达到高点,随后降解的神经丝逐渐减少.颅脑损伤后Calipain活性随时间逐渐升高,伤后24 h时活性达到高点,随后逐渐降低.结论 颅脑损伤后神经丝降解的机制可能与Calipain活性的变化有关.