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氧化应激通过调节TLR4/NF-κB诱导血管钙化
目的 研究Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)在氧化应激诱导的血管平滑肌细胞成骨样分化和钙化过程中的作用.方法 本研究采用过氧化氢(Hydrogen peroxide,H2O2)处理血管平滑肌细胞后,用western blot和qPCR的方法检测TLR4的表达水平和细胞成骨样分化,用邻甲酚酞络合剂法测钙离子浓度.结果 H2O2能促进血管平滑肌细胞成骨样分化和钙化,同时上调TLR4的表达水平.抑制TLR4能明显阻断H2O2诱导的细胞成骨样分化和钙化及核转录因子(Nuclear factor-κB,NF-κB)激活.此外,抑制NF-κB能减轻H2O2诱导的细胞钙化.结论 TLR4/NF-κ B参与了H2O2诱导的血管平滑肌细胞成骨样分化和钙化.
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长链非编码RNA-ANCR对小鼠血管平滑肌细胞成骨样分化的影响
目的 观察长链非编码RNA-抗分化非编码RNA (anti-differentiation non-coding RNA,ANCR)对动脉钙化细胞模型的影响,探讨其可能的作用机制.方法 以10 mmol/L β-甘油磷酸钠(beta-glycerophosphate,β-GP)诱导小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)成骨样分化以建立动脉钙化细胞模型,构建ANCR过表达慢病毒载体并感染小鼠VSMCs,qPCR检测Runt相关转录因子2(Runt related transcription factor 2,Runx2),骨形成蛋白-2(bone morphology protein-2,BMP-2)和ANCR的表达,Western blot检测胞质蛋白Runx2、BMP-2及核内核转录因子-Kappa B(nuclear factor kappa B,NF-κB) p65的表达,茜素红染色观察矿化结节的形成.结果 (1)β-GP刺激后小鼠VSMCs中Runx2和BMP-2的表达显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05),茜素红染色可见明显的矿化结节.(2)β-GP刺激后小鼠VSMCs中ANCR的表达显著降低,Runx2和BMP-2的mRNA表达显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05).(3) ANCR过表达慢病毒感染后与对照组相比,Runx2和BMP-2的mRNA水平和蛋白水平均显著下降,NF-κBp65的蛋白表达显著降低,钙化结节形成显著减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ANCR能抑制Runx2和BMP-2的表达,且可能通过削弱NF-κB信号通路抑制β-GP诱导的小鼠VSMCs成骨样分化.
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槲皮素调节ROS/TLR4信号通路抑制Ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化
目的 观察槲皮素对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞成骨样分化和钙化的作用,并阐明其分子机制.方法 采用Ox-LDL处理人血管平滑肌细胞,茜素红染色检测细胞钙化,测定碱性磷酸酶(ALP)活性和qPCR测骨相关蛋白Msx2、BMP2、Osterix以及收缩蛋白SMA和SM22a mRNA表达水平.观察槲皮素对Ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化,ALP活性,TLR4、Msx2、BMP2、Osterix、SMA和SM22α的mRNA表达水平,ROS含量及SOD活性的影响.采用TLR4 siRNA转染血管平滑肌细胞,观察敲低TLR4对细胞钙化,ALP活性及Msx2、BMP2、Osterix、SMA和SM22α mRNA表达水平的影响.结果 Ox-LDL可促进血管平滑肌细胞钙化和上调TLR4表达水平(P＜0.05);槲皮素能明显减轻Ox-LDL诱导的细胞钙化和降低ALP的活性,下调Msx2、BMP2、Osterix mRNA的表达水平,上调血管平滑肌收缩蛋白SMA和SM22α mRNA的表达水平(P＜0.05).此外,槲皮素可明显提高SOD的活性,降低活性氧物质(ROS)的含量,下调TLR4的表达水平(P＜0.05);TLR4 siRNA也能 减轻Ox-LDL诱导的细胞钙化(P＜0.05).结论 槲皮素可明显抑制Ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞钙化,其机制可能与ROS激活的TLR4信号通路有关.
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中性鞘磷脂酶2/神经酰胺调节高磷高钙诱导的血管平滑肌细胞成骨样分化和钙化
[目的]阐明nSMase2是否调控高磷高钙诱导的血管平滑肌细胞钙化.[方法]采用人血管平滑肌细胞钙化体外模型,用高磷高钙诱导血管平滑肌细胞钙化.分别用鞘磷脂酶抑制剂GW4869和siRNA干扰敲低nSMase2处理血管平滑肌细胞,检测骨相关蛋白BMP2、Runx2、Osterix的表达和细胞钙化程度.[结果]在细胞钙化过程中nSMase2的表达水平和神经酰胺的含量增高(P＜0.05);GW4869药理抑制或nSMase2 siRNA敲低nSMase2均能减轻高磷高钙诱导的细胞钙化和下调Runx2、BMP2、Osterix的表达水平(P＜0.05).相反,ceramide可加速高磷高钙诱导的细胞钙化和增加ALP的活性(P＜0.05).[结论]nSMase2/ceramide促进高磷高钙诱导的血管平滑肌细胞钙化,提示nSMase2/ceramide可能参与慢性肾病血管钙化的过程.
