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CARP文献资料
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CARP相互作用蛋白HTRM的表达谱分析及亚细胞定位
目的 观察CARP相互作用蛋白HTRM的组织表达谱和亚细胞定位及其对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用.方法 我们利用CLONTECH公司的成人多组织膜,通过Northern杂交的方法 ,检测HTRM在心脏、脑、胎盘、肺、肝、骨骼肌、肾脏以及胰腺中的表达情况.将HTRM带上GFP标签转染HEK293S细胞,观察其亚细胞定位情况.再将HTRM及对照载体转染VSMC细胞,通过细胞计数以及MTT两种方法检测细胞的增殖情况.结果 Northern Blot实验显示HTRM有两个转录本,2.4kb的转录本主要在心脏和骨骼肌中表达,1.35kb的转录本主要在胎盘中表达;亚细胞定位显示HTRM是一个胞浆蛋白;高表达HTRM可以轻微的促进VSMC细胞增殖.
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CARP编码蛋白的相互作用蛋白筛选
目的:筛选与CARP编码蛋白相互作用的蛋白,为其功能研究奠定基础. 方法: 将编码全长CARP的DNA序列插入到pGBKT7-BD载体中,转化AH109酵母,然后与含有已克隆到pACT2载体上的人心脏cDNA文库的Y187酵母融合.CARP与相应的人心脏cDNA片段编码的蛋白发生相互作用后,可激活报告基因的表达.阳性克隆的质粒进行测序分析.同源性检索搜寻GenBank中与之相同或相似的序列. 结果: 共筛选约3×107个cDNA,筛选出9个阳性克隆,其中包括FLNa(actin-binding protein-280). 结论: CARP编码蛋白在酵母中可以特异性的结合FLNa,提示CARP可能通过与FLNa相互作用参与调控细胞增殖
