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BDE-153暴露对仔鼠海马线粒体及内质网损伤的影响
目的 研究哺乳期BDE-153染毒对成年大鼠海马线粒体和内质网结构和功能的影响,寻找BDE-153神经毒作用的靶细胞器,为研究BDE-153的神经毒性提供依据.方法 选择出生4d的新生雄性乳鼠40只,按体重随机分成:溶剂对照组(Olive oil),低剂量(1 mg/kg BDE-153)组,中剂量(5 mg/kg BDE-153)组和高剂量(10 mg/kg BDE-153)组,每组10只.仔鼠出生第10天染毒,按0.1 ml/10 g体重1次腹腔注射染毒BDE-153溶液或者橄榄油(仅对照组).继续饲养两月后处死大鼠,在冰皿上迅速分离大脑皮质和海马,用流式细胞技术检测线粒体膜电位的改变,试剂盒检测线粒体Ca2+-Mg2+-ATP ase活力的改变,电子显微镜下观察线粒体和内质网超微结构的变化,用实时荧光定量PCR技术检测内质网跨膜蛋白132a(Transmembrane protein 132a,TMEM 132a)和Caspase-12基因的表达,用Western-Blot法测定TMEM 132a和原型Caspase-12(Procaspase-12),活化的Caspase-12(Cleaved caspase-12)蛋白的表达量.结果 与对照组相比,各染毒组海马线粒体的平均荧光强度及Ca2+-Mg2+-ATP ase的活力变化不明显,差异无统计学意义(P＞0.05),随着染毒剂量的增加,线粒体结构未见明显改变,内质网出现肿胀、扩张、变形,甚至溶解消失的现象.蛋白与基因的检测结果显示,与对照组比较,各染毒组TMEM132a基因和蛋白的表达量随着染毒剂量的增加显著降低,Caspase-12基因表达量升高明显,与此同时Procaspase-12蛋白表达量明显降低,而Cleaved caspase-12的蛋白表达量明显增加.结论 内质网是BDE-153神经毒性的主要靶细胞器,可能通过Tmem132a和caspase-12信号分子介导其神经毒性.
关键词： BDE-153 线粒体 内质网 GRP 78结合跨膜糖蛋白 Caspase-12 -
心衰合剂对大鼠心肌细胞肥大模型内质网应激因子Grp78、Caspase-12表达的影响
目的 观察心衰合剂对大鼠体外心肌细胞肥大模型细胞内质网应激因子Grp78及Caspase-12表达的影响.方法 培养大鼠乳鼠原代心肌细胞,通过血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)建立肥大心肌细胞模型(模型组),分别用心衰合剂(10％含药血清组)卡托普利(卡托普利组)干预细胞.Western-blot测定胞内Grp78及Caspase-12表达的蛋白表达水平.结果 模型组心肌细胞Grp78、Caspase-12蛋白表达水平明显上调(P＜0.01);与模型组比较,10％含药血清组及卡托普利组可以显著下调Grp78、Caspase-12蛋白表达水平(P＜0.01),2组组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 心衰合剂可下调内质网应激相关蛋白Grp78、Caspase-12表达水平,提示心衰合剂通过减轻内质网应激防止细胞发生凋亡,保护心肌细胞.
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茵陈蒿汤对肝纤维化大鼠肝组织内质网应激caspase-12通路的影响
目的:观察茵陈蒿汤对胆汁瘀积性肝纤维化大鼠肝组织内质网应激caspase-12通路的影响,探讨茵陈蒿汤抗胆汁瘀积性肝纤维的作用机制.方法:将35只SD大鼠分为假手术组和造模组,采用胆总管结扎法复制胆汁瘀积性肝纤维化大鼠模型,1周后将造模组动物分为模型组和中药组,中药组予以3.5 g/kg茵陈蒿汤灌胃,4周后处死动物,HE、Masson染色观察肝脏组织病理学变化;Western blot法检测各组大鼠肝脏GRP78、eIF2α和Caspase-12蛋白表达变化.结果:肝脏组织病理学变化显示模型组大鼠肝纤维化程度较假手术组明显增加(P＜0.05),中药组大鼠肝纤维化程度较模型组减轻(P＜0.05),但仍重于假手术组.Western blot结果显示,模型组肝脏GRP78、eIF2α和Caspase-12蛋白的表达与假手术组相比显著升高(P＜0.01),中药组较模型组eIF2α和Caspase-12明显降低(P＜0.01).结论:抑制eIF2α和Caspase-12的活化,从而减少肝细胞凋亡,进而抑制内质网应激在胆汁瘀积性肝纤维化中的促进作用,是茵陈蒿汤抗胆汁瘀积性肝纤维化的作用机制之一.
关键词： 胆汁瘀积性肝纤维化 茵陈蒿汤 内质网应激 细胞凋亡 Caspase-12 -
通络保肾复方对糖尿病大鼠肾脏内质网应激介导的凋亡信号通路JNK、Caspase-12的影响
目的:探讨通络保肾复方及其拆方对糖尿病大鼠肾损伤内质网应激凋亡通路的影响.方法:将SD大鼠随机分成正常组、造模组,腹腔注射STZ建造糖尿病大鼠模型,造模成功后随机分成模型组、缬沙坦组、通络保肾复方组、中药通络保肾补虚组、中药通络保肾解毒组.喂养6周后测大鼠血糖(GLU)、糖化血红蛋白(HbAlc)、血浆白蛋白(ALB)、血肌酐(Scr)及肾组织GRP78、p-JNK、Caspase-12蛋白及基因的表达.结果:6周时与正常组比较,模型组GLU、HbAlc、BUN升高(P＜0.01);与模型组比较,缬沙坦组GLU、HbAlc、BUN下降(P.＜0.01);各中药治疗组HbAlc下降(P＜0.01).Western blot、qRT-PCR结果:与正常组比较,模型组大鼠GRP78、p-JNK表达上调(P＜0.01);与模型组比较,各治疗组表达下调(P＜0.01,P＜0.05).结论:通络保肾复方及其拆方可抑制内质网应激诱导JNK凋亡通路激活,6周时无Caspase-12信号激活.结合中医学方证理论,以方测证,推测糖尿病肾损伤的中医核心病机为本虚标实.
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槲皮素对高糖培养海马神经元凋亡及GRP78、Caspase-12蛋白表达的影响
目的:探讨槲皮素(Que)对高糖培养海马神经元的保护作用及其作用机制.方法:原代培养新生大鼠海马神经元3d,随机分为正常对照组、高糖组、阳性对照组及Que 2.5μmol/L(Q2.5)、Que 5 μ mol/L(Q5)、Que 7.5μmol/L(Q7.5)组,不同条件培养72h后,用流式细胞仪检测神经元凋亡、Western Blot检测GRP78、Caspase-12的表达.结果:与正常对照组比较,高糖组、Que三组及阳性对照组的神经元凋亡率及GRP78、Caspase-12表达均显著增加(P＜0.01).与高糖组比较,阳性对照组和Que各组神经元凋亡率均显著下降(P＜0.01,P＜0.05);Que各组的GRP78和Caspase-12的表达显著下降(P＜0.01),其中Q5和Q7.5组下降尤为显著,且两组比较无统计学差异;与阳性对照组比较,Q5和Q7.5组的神经元凋亡率和抑制Caspase-12表达的作用均无显著性差异.结论:槲皮素能够减轻高糖培养海马神经元凋亡,在此情况下,GRP78、Caspase-12表达均下降,提示槲皮素抑制海马神经元凋亡的作用机制可能与内质网应激有关.
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电针对脑缺血再灌注大鼠内质网应激关键因子GRP-78、Caspase-12表达的影响
目的 观察电针对脑缺血再灌注大鼠不同时间点脑缺血区脑神经细胞凋亡及内质网应激凋亡通路信号分子葡萄糖调节蛋白(GPR78)和Caspase-12影响.方法 126只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,其中假手术组6只,模型组和电针组各60只.模型组和电针组再随机分为再灌注6、12、24、48、72 h组,每组12只,采用改良线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型.电针组电针百会和大椎,每次30 min,每12h治疗1次,假手术组和模型组大鼠捆绑固定30 min,不做任何治疗.假手术组于手术后24 h、各组大鼠于相应时间进行神经学分级评定后处死大鼠并提取脑组织,观察海马CA1区形态学改变.TUNEL法检测各组神经细胞凋亡指数,免疫组化法和Western blot检测脑组织GRP78、Caspase-12蛋白表达的变化.结果 模型组和电针组海马CA1出现不同程度细胞凋亡变形.与本组前一时间点比较,模型组及电针组再灌注12、24、48、72 h神经功能评分降低(P ＜0.05,P＜0.01),再灌注12、24 h神经细胞凋亡指数、Caspase-12阳性细胞数、Caspase-12蛋白表达升高(P ＜0.05,P＜0.01),再灌注48、72 h神经细胞凋亡指数、Caspase-12阳性细胞数及蛋白表达降低(P ＜0.05,P＜0.01),再灌注12 h GRP78阳性细胞数、GRP78蛋白表达升高(P ＜0.05,P＜0.01),再灌注24、48、72 h GRP78阳性细胞数及蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01).与模型组同期比较,电针组再灌注12、24、48、72 h神经学评分、Caspase-12阳性细胞数降低(P＜ 0.05,P＜0.01);电针组各时间点神经细胞凋亡指数、GRP78阳性细胞数及蛋白表达、Caspase-12蛋白表达降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论 缺血再灌注24 h为神经元凋亡高峰,Caspase-12的免疫活性出现的时间晚于GRP78.电针可能通过抑制GRP78、Caspase-12的释放和激活减轻脑缺血再灌注后不同时间所致缺血脑神经细胞凋亡.
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GRP78和caspase-12在支气管肺发育不良大鼠肺组织中的表达及意义
目的 探讨内质网应激(ERS)相关蛋白GRP78和caspase-12在支气管肺发育不良(BPD)大鼠肺组织中的表达及意义.方法 利用早产新生大鼠持续高氧暴露复制BPD模型.将48只SD早产鼠随机分为高氧组和空气组.高氧组持续暴露于85％ O2中,空气组置于同一室内常压空气中.两组分别于建模后7、14和21 d取肺组织,HE染色观察肺组织病理改变并行辐射状肺泡计数(RAC),TUNEL法检测细胞凋亡,实时荧光定量RT-PCR和Westernblot技术分别检测GRP78和caspase-12 mRNA和蛋白表达.结果 高氧组早产大鼠出现肺结构简单化,肺泡变大及数量减少等类似BPD病理学特征.与同日龄空气组相比,高氧组RAC明显减少,细胞凋亡明显增加,GRP78和caspase-12 mRNA和蛋白表达均明显升高(P＜0.01),且随高氧暴露时间延长,呈逐渐上升趋势.结论 GRP78和caspase-12表达增加可能与BPD发生发展有关.
关键词： GRP78 Caspase-12 高浓度氧 支气管肺发育不良 -
机械创伤升高大鼠心肌细胞凋亡蛋白表达
目的 观察钙蛋白酶(calpain)对机械创伤大鼠心肌细胞凋亡蛋白caspase-3和caspase-12表达的影响.方法 将大鼠分为对照组、创伤组和calpain抑制剂(MDL28170)干预组(i.p.,24 mg/kg);用Western blot检测caspase-3、caspase-12、calpain-1和calpain-2蛋白表达;用试剂盒检测caspase-3和caspase-12的活性;用real-time PCR检测calpain-1和calpain-2 mRNA表达.结果 与对照组相比,大鼠创伤后心肌细胞caspase-3和caspase-12蛋白表达和活性均升高(P<0.01),calpain-2表达上调(P<0.01);与创伤组相比,给予抑制剂MDL28170干预后,心肌细胞calpain-2表达下降(P<0.05),caspase-3和caspase-12蛋白表达和活性均明显降低(P<0.05).结论 机械创伤所引起的心肌细胞calpain-2表达上调可能是导致凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-12表达和活性升高的重要原因.
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黄芩苷对流感病毒PR8感染小鼠内质网应激反应的干预作用
目的 观察黄芩苷(Baicalin)对流感病毒PR8感染小鼠急性肺损伤内质网应激相关蛋白PERK、CHOP、pJNK及Caspase-12表达的影响,探讨其对PR8小鼠感染急性肺损伤的保护作用及机制. 方法 实验分为健康对照组,PR8组,黄芩苷治疗组,黄芩苷预防给药组,利巴韦林治疗对照组.用流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/4(H1N1)建立小鼠流感病毒性肺炎模型后按相应治疗方案进行给药治疗,观察小鼠肺组织病理变化,应用Western blot法检测PERK、CHOP、p-J NK及Caspase-12蛋白水平. 结果 黄芩苷治疗和预防给药肺指数(0.98±0.13、1.25±0.14)较比PR8组(1.42±0.11)明显降低(F-43.850,P＜0.01;F=5.750,P＜0.05),肺组织病变减轻;黄芩苷治疗和预防给药组各指标相对表达量分别为PERK(1.53±0.09、1.96±0.21)、CHOP(2.10±0.26、2.75±0.12)、pJNK (2.57±0.33、3.42±0.34)及Caspase-12(1.75±0.21、2.44±0.38),与PR8组(2.86±0.23、4.75±0.38、5.02±0.49、3.64±0.36)相比,表达量显著下降(F=135.340,P＜0.01;F=74.100,P＜0.01). 结论 黄芩苷治疗和预防给药均能缓解甲型流感病毒PR8诱导的小鼠肺炎性病理损伤,通过下调内质网应激反应和抑制组织细胞的凋亡,发挥抗流感病毒感染的作用.
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氯氧甲苯咪唑诱导白血病细胞凋亡的实验研究
为了研究氯氧甲苯咪唑(econazole)诱导鼠粒单核白血病细胞WEHI-3凋亡的机制,利用Annexin-Ⅴ/PI双染实验测定细胞凋亡,Fura-2荧光负荷技术检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i),并抽取WEHI-3细胞内质网部分蛋白,利用Western blot测定caspase-7、caspase-12的蛋白表达.结果显示:econazole作用后WEHI-3出现典型的凋亡改变,细胞内游离[Ca2+]i较对照明显升高,caspase-12和caspase-7表达随着细胞内钙离子浓度的提高而逐渐增加.结论:econazole能诱导WEHI-3细胞凋亡,caspase-12在此过程中起重要作用.
关键词： 氯氧甲苯咪唑 细胞凋亡 细胞质[Ca2+]i Caspase-12 -
甜菜碱对酒精性肝损伤大鼠凋亡基因caspase-12表达的影响
目的:研究甜菜碱对凋亡基因caspase-12表达的影响,探讨其抗酒精性肝损伤(ALD)大鼠肝细胞凋亡的机制.方法:采用酒精加鱼油灌胃配合高脂饮食建立酒精性肝损伤模型,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组化法检测大鼠肝组织凋亡基因caspase-12 mRNA和蛋白水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠肝组织caspase-12表达明显增强(mRNA:1.00 vs 0.18,P＜0.01;蛋白:0.2969±0.045 1 vs 0.0526±0.0234,P＜0.01),但高、低剂量甜菜碱能抑制其表达(mRNA:0.10,0.12vs 1.00,P＜0.01;蛋白:0.121 5±0.0130,0.1850±0.008 5 vs 0.2969±0.045 1,P＜0.01).甜菜碱高、低剂量组之间有显著差异(mRNA:0.10 vs 0.12,P＜0.05;蛋白:0.121 5±0.0130 vs 0.1850±0.0085,P＜0.05).结论:甜菜碱能抑制凋亡基因caspase-12 mRNA和蛋白的表达,可能是其减少凋亡的机制之一.
关键词： 酒精性肝损伤 甜菜碱 Caspase-12 -
熊去氧胆酸对急性肝功能衰竭大鼠肝细胞凋亡内质网途径的阻断作用
目的：探讨熊去氧胆酸对急性肝功能衰竭大鼠肝细胞凋亡内质网途径的阻断作用。方法以D-氨基半乳糖（D-Gal）腹腔注射一次性诱导大鼠出现急性肝功能衰竭模型，将模型鼠（60只）随机分为A、B两组，每组30只。A组为熊去氧胆酸药物治疗组，B组为空白对照组，于不同时间点检测大鼠的生存率和肝功能，采用琼脂糖凝胶电泳检测肝细胞DNA凋亡带，用半定量逆转录聚合酶链反应检测肝组织中Caspase-12 mRNA的表达水平。结果 D-Gal成功完成了大鼠急性肝功能衰竭模型，两组大鼠在24小时内无死亡，24～48小时死亡多，96小时后两组均无死亡。B组24小时肝组织DNA梯度分析显示出现典型凋亡带，48小时时未减弱，72小时时开始减弱，直至7天后消失，ALT于48小时达到峰值，TBil水平变化不显著，ALB水平无变化，Caspase-12 mRNA在48小时亦达到峰值，随后其表达量逐渐降低。A组24小时与48小时时肝组织DNA梯度分析均显示非典型凋亡带，72小时后无显著凋亡带出现。ALT水平和Caspase-12 mRNA表达量与B组相比，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。结论熊去氧胆酸对急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡内质网途径有明显阻断作用。
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丹参多酚酸对大鼠脑缺血再灌注内质网应激的影响
目的 研究注射用丹参多酚酸对大鼠脑缺血再灌注内质网应激的影响.方法 将54只雄性SD大鼠随机分为3组(n=18):Sham(假手术)组、IR(缺血再灌注)组、丹参多酚酸组.采取Zea Longa法制备脑缺血再灌注模型,丹参多酚酸组在缺血2小时再灌注24小时后给予尾静脉注射10mg/kg丹参多酚酸,连续7天,每日1次,IR组及Sham组给予同等剂量生理盐水尾静脉注射.末次给药6小时后进行神经功能评分;脑梗死体积测定及HE染色法观察大脑神经元的组织病理学变化;Western Blotting法测定脑组织Caspase-12的蛋白含量.结果 Sham组大鼠脑组织红染,未见梗死灶;IR组大鼠脑梗死体积明显增大,皮质梗死灶明显;神经元坏死明显增多;Caspase-12的蛋白表达均上调(P<0.05),丹参多酚酸组大鼠神经功能评分降低(P<0.05);脑梗死体积明显小于IR组(P<0.05);Caspase-12的蛋白表达下降(P<0.05).结论 注射用丹参多酚酸可能通过抑制内质网应激而起到脑保护作用.
关键词： 脑缺血再灌注 注射用丹参多酚酸 内质网应激 Caspase-12 -
内质网应激介导的细胞凋亡途径及新靶点药物
目的 综述内质网应激介导的细胞凋亡信号转导途径,以及以各条途径中所涉及的关键酶为新靶点开发研制药物的进展情况.方法 着重以近几年国外该领域有代表性的文献为依据,进行分析、归纳、总结.结果与结论 Caspase,C/EBP homologous protein(CHOP),Bcl-2,凋亡信号调节激酶(ASK1)等酶在内质网应激介导的细胞凋亡的信号转导途径中发挥着非常重要的作用,针对这些酶所设计的抑制荆或激活剂,可以抑制或促进细胞的凋亡,从而达到治疗相关疾病的目的.
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内质网应激与蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的相关性研究
目的 探讨CAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、海马葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和caspase-12在蛛网膜下腔出血(SAH)后的表达及其在早期脑损伤(EBI)中的作用.方法 选取健康雄性SD大鼠78只,采用随机数字表法将其分为空白对照组(6只)、假手术组(36只)与SAH组(36只).将假手术组和SAH组分别于1、6、12、24、48、72h,采用简单随机抽样法选取6只大鼠,神经功能缺陷评分后处死.比较各组不同时间点光镜及电镜下大鼠海马神经元形态改变、CHOP、GRP78、caspase-12相对表达水平、海马神经元凋亡细胞水平、脑水肿严重程度及神经功能缺陷评分情况.结果 通过Western blot法检测CHOP、GRP78和caspase-12的表达,SAH组与空白对照组、假手术组在12、24、48、72h比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且在SAH后24h达到峰值.TUNEL法检测大鼠海马区神经元凋亡显示,SAH组与对照组、假手术组在6、12、24、48、72h比较,差异均有统计学意义(P<0.05),在电镜下,SAH后24h节点可见明显的神经元凋亡.SAH组12、24、48、72h的神经功能缺陷评分及脑水肿程度明显重于空白对照组及假手术组,在24h达高峰,差异均有统计学意义(P<0.05).SAH组大鼠的CHOP、GRP78和caspase-12 Western blot法检测结果与脑水肿严重程度及神经元凋亡结果之间呈极显著正相关,与神经功能缺陷评分呈极显著负相关(P<0.05).结论 SAH后72h内确实造成了EBI,同时发生了内质网应激,内质网应激与EBI严重程度之间均呈正相关,揭示内质网应激在SAH后EBI的病理过程中发挥了重要作用.
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当归超滤物抗阿霉素致心肌细胞损伤的作用研究
目的 探讨当归超滤物抗阿霉素致乳鼠心肌细胞损伤的作用及其可能机制.方法 用阿霉素诱导Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞建立损伤模型,用不同浓度的当归超滤物进行干预,实验分为正常对照组、阿霉素损伤模型组、当归超滤物不同浓度(3.75、7.5、15g/L)干预组.四氮唑蓝(MTT)法检测各组心肌细胞的存活率,2,4二硝基苯肼显色法检测各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,Ca2+-ATP酶试剂盒测定Ca2-ATP酶活性,蛋白印迹半定量测定各组细胞内caspase-3、caspase-12蛋白的表达.结果 与阿霉素损伤模型组比较,当归超滤物各干预组心肌细胞存活率明显升高,LDH含量显著降低(P＜0.05),Ca2+-ATP酶活性显著提高(P＜0.05),caspase-3、caspase-12表达显著降低(P＜0.05).结论 当归超滤物具有拮抗阿霉素致心肌细胞损伤的作用,其机制与其增强细胞ATP酶活性、降低细胞内LDH释放、抑制凋亡因子释放有关.
关键词： 当归 阿霉素 心肌细胞 Caspase-3 Caspase-12 -
化痰通络法对rt-PA溶栓后急性脑梗死大鼠神经细胞凋亡及Caspase-12表达的影响
[目的]观察化痰通络方对急性脑梗死大鼠经重组组织纤溶酶原激活剂（rt-PA）溶栓治疗后内质网应激（ERS）神经细胞凋亡途径中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（Caspase-12）蛋白和基因表达及神经元凋亡的影响。[方法]选择160只健康的SD大鼠，随机分为假手术组、模型组、rt-PA组和实验组共4组。采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型（MCAO），实验组与rt-PA组大鼠经尾静脉注入rt-PA（浓度：5.67 mg/kg）溶栓治疗，并联合化痰通络法中药灌胃（浓度：7.2g/kg），每日2次。每组分别于为6h、24h、3d和7d4个时相，观察梗死区域脑组织神经细胞Caspase-12蛋白和基因的表达，及神经元细胞凋亡的情况。[结果]与假手术组相比，模型组各时相Caspase-12蛋白与基因的表达量均明显增加（P＜0.05）。与模型组相比，除7 d时rt-PA组 Caspase-12蛋白表达减少，差异无统计学意义（P＞0.05）外，rt-PA组和实验组在其他各时相Caspase-12蛋白与基因的表达均明显减少（P＜0.05）。与rt-PA组相比，实验组 Caspase-12基因在1 d、7 d时表达量明显减少（P＜0.05），而Caspase-12蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05），但有下降趋势。[结论]化痰通络法中药可降低急性脑梗死大鼠溶栓治疗后梗死区域Caspase-12蛋白和基因的表达，该法可能通过影响该环节，进而部分抑制内质网应激后期神经细胞的凋亡，从而防治急性脑梗死溶栓后缺血/再灌注的发生与发展。
关键词： 化痰通络法 急性脑梗死 溶栓 凋亡途径 Caspase-12 -
右美托咪定对肺缺血/再灌注损伤小鼠内质网应激相关分子Caspase-12表达的影响
目的:探讨右美托咪定(DEX)对肺缺血/再灌注(I/R)损伤小鼠内质网应激(ERS)相关分子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(Caspase-12)表达的影响.方法:选用C57BL/6J小鼠复制在体左肺原位I/R损伤模型.随机将40只小鼠分为4组(n=10):假手术组(sham组),I/R损伤组(I/R组),生理盐水对照组(NS组),右美托咪定干预缺血/再灌注组(DEX组).DEX组在夹闭小鼠左肺门30 min前经腹腔注射DEX25μg/kg,NS组为用同DEX组等体积的生理盐水替代DEX,其余操作同DEX组.3h肺再灌注结束后,留取左肺.测定肺组织湿/干重比(W/D)及总肺含水量(TLW),光镜观察肺组织形态学改变,对肺组织进行损伤评估(IQA).原位末端标记(TUNEL)法检测组织细胞凋亡指数(AI),蛋白免疫印迹法(Western blot)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测Caspase-12、葡萄糖调节蛋白78(grp78)蛋白和mRNA表达水平.结果:与sham组比,I/R组和NS组肺W/D、TLW、IQA、AI均明显升高(P＜0.01),肺组织形态结构破坏明显,Caspase-12、grp78蛋白和mRNA表达量增加(P＜ 0.01);I/R组与NS组相比,两组Caspase-12、grp78蛋白和mRNA表达量无明显差异(P＞0.05).DEX组与I/R组比,W/D、TLW、IQA和AI均有下降(P＜0.01或P＜0.05),肺组织形态学改变明显减轻,Caspase-12和grp78蛋白和mRNA表达量下降(P＜0.01).结论:DEX可有效缓解小鼠肺缺血/再灌注性损伤,其机制可能与其对抗ERS中Caspase-12引起的细胞凋亡有关.
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丁苯酞氯化钠注射液预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠GRP78及caspase-12表达的影响
目的:探讨丁苯酞氯化钠注射液预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及caspase-12表达的影响.方法:健康成年雄性SD大鼠36只,SPF级,体质量260～280 g,月龄2～3月,采用随机数字表法,将其随机分为3组:假手术组(S组)、局灶性脑缺血再灌注组(I/R组)及丁苯酞氯化钠注射液预处理组(NBP组).I/R组和NBP组大鼠采用改良线栓法阻断右侧大脑中动脉2h,再灌注24 h,制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型;S组仅分离血管.NBP组于缺血前1h经尾静脉注射NBP注射液2.5 mg/kg;I/R组经尾静脉注射等容量生理盐水.各组大鼠于再灌注24 h时行神经功能缺陷评分,随后断头取脑组织,采用TUNEL法计数凋亡神经细胞,计算凋亡指数;免疫组化法检测缺血侧皮质GRP78及caspase-12表达.结果:与S组比较,I/R组和NBP组神经功能缺陷评分升高的大鼠例数增多(P＜0.01),神经细胞凋亡指数升高,GRP78及caspase-12表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,NBP组神经功能缺陷评分升高的大鼠例数减少,神经细胞凋亡指数降低,GRP78表达上调,caspase-12表达下调(P＜0.05).结论:丁苯酞氯化钠注射液预处理可通过上调GRP78表达和下调caspase-12表达,减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.
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茵陈蒿汤对酒精性肝纤维化大鼠肝组织 Caspase-12通路的影响
目的 观察茵陈蒿汤对酒精性肝纤维化大鼠内质网应激的同型半胱氨酸(Hcy)-真核生物翻译起始因子(eIF2α)-Caspase-12通路引起的细胞凋亡的影响,探讨茵陈蒿汤防治酒精性肝纤维的作用机制.方法 将40只SD大鼠随机分为空白组、模型组和茵陈蒿汤组,模型组和茵陈蒿汤组采用乙醇灌胃的方法复制酒精性肝纤维化大鼠模型,茵陈蒿汤组同时给予3.5 g/kg茵陈蒿汤灌胃,10周后处死动物,采用赖氏法检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,采用HE和Masson三色染色观察各组大鼠肝脏组织病理学表现,采用Real-Time PCR法检测各组大鼠肝脏组织中GRP78、eIF-2α、Caspase-12 mRNA表达情况.结果 模型组大鼠血清ALT、AST水平明显高于空白组(P均<0.05),茵陈蒿汤组大鼠血清ALT、AST水平均明显低于模型组(P均<0.05).肝脏组织病理学显示,模型组大鼠出现明显肝纤维化表现,茵陈蒿汤组大鼠肝纤维化程度较模型组明显减轻.模型组大鼠肝脏组织中GRP78、eIF-2α、Caspase-12 mRNA表达水平均明显高于空白组(P均<0.05),茵陈蒿汤组大鼠肝脏组织中GRP78、eIF-2α、Caspase-12 mRNA表达水平均明显低于模型组(P均<0.05).结论 茵陈蒿汤抑制GRP78、eIF-2α、Caspase-12的活性可能是其抗酒精性肝纤维化的作用机制之一.
关键词： 酒精肝纤维化 茵陈蒿汤 内质网应激 Caspase-12
