首页 > 文献资料
-
低氧对RAW264.7细胞中糖皮质激素受体表达的调节
目的 观察小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞在低氧培养箱(1% O2)内不同时间段糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)mRNA和蛋白表达的变化,探讨低氧对RAW264.7细胞中GR表达的调节.方法 采用体外培养的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,将细胞接种于60 mm dish内,细胞长至50%时,将培养液置换为含5%无激素胎牛血清的无糖DMEM培养液,放入低氧培养箱内,同时输入含1% O2、5% CO2、94% N2 的混合气体,分别于低氧处理4、8、12 h后将细胞取出,抽提RNA或者蛋白,应用real-timePCR 和Western印迹分析测定GRmRNA和蛋白的表达水平,以未低氧处理RAW264.7细胞为对照.结果 低氧处理4 h可使RAW264.7细胞中GR mRNA的表达明显上调为对照的1.8倍(P<0.05),处理至12 h GRmRNA的表达仍高于对照,约为对照的2.7倍(P<0.05);低氧处理RAW264.7细胞8 h GR蛋白的表达也明显升高,约为对照的1.7倍(P<0.05),至低氧处理12 h,GR蛋白的表达仍高于对照.结论 低氧可以上调体外RAW 264.7细胞GR mRNA和蛋白的表达.
关键词： 低氧 糖皮质激素受体 RAW264.7细胞 地塞米松 -
MAPK信号转导通路在CdCl2、HgCl2诱导RAW264.7细胞低剂量兴奋效应中的作用
目的 探讨MAPK信号转导通路在CdCl2、HgCl2诱导RAW264.7细胞低剂量兴奋效应过程中的作用。方法 以0、0.0005、0.005、0.05、0.5、5、50和500 μmol/L浓度的氯化镉(CdCl2)和氯化汞(HgCl2)分别染毒RAW264.7细胞12和24 h；在研究MAPK信号转导通路特异性抑制剂作用时，在染毒前分别用ERK1/2抑制剂PD98059(100μmol/L)、U0126(25 μmol/L)、JNK特异性抑制剂SP600125(25μmol/L)和P38特异性抑制剂SB203580(25 μmol/L)对细胞进行预处理。采用WST-8法测定细胞增殖情况，采用Annexin-V/PI双染流式细胞仪测定细胞凋亡，采用western blot检测MAPK磷酸化蛋白表达水平。结果 CdCl2、HgCl2作用于RAW264.7细胞后，CdCl2、HgCl2浓度为0.5μmol/L(12 h)、0.05μmol/L(24 h)时可引起细胞增殖增加(P＜0.05)，浓度为50、500μmol/L时可引起细胞增殖减少(P＜0.05)；应用ERK通路抑制剂和JNK通路抑制剂对细胞进行预处理后，未观察到细胞增殖增加。应用P38通路抑制剂对细胞进行预处理后，CdCl2、HgCl2浓度为0.5 μmol/L(12h)、0.05μmol/L(24 h)时仍可引起细胞增殖增加(P＜0.05)。CdCl2、HgCl2作用于RAW264.7细胞3和6 h后，CdCl2、HgCl2浓度为0.5 μmol/L时可引起p-JNK蛋白表达降低(P＜0.05),浓度为50 μmol/L时可引起p-JNK、p-P38蛋白表达增加(P＜0.05)；p-ERK蛋白表达无变化(P＞0.05)。结论 低剂量CdCl2和HgCl2作用于RAW264.7细胞可以引起Hormesis效应，该效应可以被JNK、ERK信号转导通路特异性抑制剂阻断。JNK、ERK信号转导通路在CdCl2、HgCl2诱导RAW264.7细胞低剂量兴奋效应中可能发挥重要作用。
-
大气PM10对两种不同细胞分泌炎性细胞因子的影响
目的 探讨大气可吸入颗粒物(PM10)对小鼠肺泡巨噬细胞(RAW264.7)和人肺成纤维细胞(HLF)分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素8(IL-8)的影响.方法 颗粒物样品采自北京市城区采暖期.两种染毒途径:(1)不同剂量的PM10直接对HLF染毒;(2)PM10首先作用于RAW264.7细胞,染毒一定时间后的细胞上清液再作用于HLF细胞.采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法测定细胞毒性;放射免疫法测定炎性因子TNF-α、IL-6和IL-8.结果 PM10作用24h后,表现为低剂量时刺激细胞增殖,而高剂量时抑制细胞增殖,细胞存活率随浓度增加而降低(P＜0.01);PM10能刺激HLF分泌炎性因子TNF-α、IL-6和IL-8,且有剂量-反应关系(P＜0.05);巨噬细胞上清液亦能刺激HLF产生TNF-α、IL-6和IL-8,且其产生量高于PM10作用于HLF产生的量(P＜0.05).结论 大气可吸入颗粒物PM10对HLF有一定毒性作用;PM10染毒24小时后能诱导人肺成纤维细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-6和IL-8;巨噬细胞上清液亦能刺激人肺成纤维细胞释放上述三种炎性因子,其产生量高于PM10.
-
三种方法评价敌匹硫磷、残杀威与双酚A对小鼠RAW264.7细胞增殖的联合效应
目的 探讨农药敌匹硫磷和残杀威以及环境内分泌干扰物双酚A对小鼠RAW264.7细胞增殖活性的联合毒作用类型.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性.通过加权机率单位法计算敌匹硫磷、残杀威与双酚A以及它们的混合物(受试物按等毒性比混合)各自的半数生长抑制浓度(IC50)及其95%CI.采用Marking相加指数法、等效应线图解法和Logistic回归分析法判断敌匹硫磷与双酚A、残杀威与双酚A的联合细胞毒作用类型.结果染毒24h后,敌匹硫磷、残杀威与双酚A对RAW264.7细胞的IC50及其95%CI分别为194.1μg/ml(173.4～217.4μg/ml)、448.4mg/L(358.2～573.2μg/ml)和37.5μg/ml(35.3～39.9μg/ml),而敌匹硫磷与双酚A混合物、残杀威与双酚A混合物的IC50及其95%CI分别为168.8μg/ml(160.1～178.2μg/ml)、253.4μg/ml(236.0～273.0μg/ml).联合毒性评价结果显示,3种评价方法均将敌匹硫磷与双酚A联合作用类型判断为拮抗作用,而将残杀威与双酚A联合作用类型判断为相加作用.结论 敌匹硫磷与双酚A对RAW264.7细胞增殖活性的联合毒作用类型为拮抗作用,而残杀威与双酚A联合毒作用类型为相加作用.
关键词： 敌匹硫磷 残杀威 双酚A 联合毒性 RAW264.7细胞 -
桂枝茯苓胶囊及其成分对LPS诱导RAW264.7细胞产生炎症介质的影响
目的 研究桂枝茯苓胶囊及其成分的抗炎活性,并对其抗炎机制进行初步探讨.方法 采用LPS刺激RAW264.7细胞建立体外炎症模型,用Griess法检测细胞内NO的释放;ELISA法检测桂枝茯苓胶囊及其成分对PGE2、IL-1β、IL-6和TNF-α分泌的影响;Western Blot法检测桂枝茯苓胶囊及其成分对iNOS和COX-2表达的影响.结果 桂枝茯苓胶囊及其成分能有效抑制LPS刺激下RAW264.7细胞释放炎症介质NO和PGE2;降低细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌;Western blot结果表明桂枝茯苓胶囊及其成分能够下调iNOS和COX-2蛋白表达水平.结论 桂枝茯苓胶囊及其成分通过抑制iNOS和COX-2的表达进而抑制NO和PGE2的分泌,同时抑制炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的产生来发挥抗炎作用.
-
化合物TML对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎性反应的保护作用
目的：观察化合物 TML 对脂多糖诱导的 RAW264.7细胞炎性反应的保护作用。方法：采用 LPS 诱导的RAW264.7细胞株建立细胞炎性反应模型；采用Griess试剂法测定NO释放量；用MTT法测定细胞存活率。结果：化合物TML可明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放，当其剂量达到50μmol/L时，细胞NO的释放量低。化合物TML对细胞存活率无明显影响。结论：化合物TML对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎性反应有一定的保护作用。
关键词： 化合物TML 脂多糖 RAW264.7细胞 一氧化氮 -
参芪扶正注射液对化疗后免疫抑制的减毒作用
探讨参芪扶正注射液含药血清对化疗药物所造成免疫抑制的减毒作用.方法 选用Wistar雄性大鼠20只,随机分为含药血清组和空白血清组.含药血清组按40 g·kg-1·d-1的剂量尾静脉注射参芪扶正浓缩液,每日给药2次,连续给药5次.空白血清组给予生理盐水代替参芪扶正浓缩液,余相同.2组大鼠于末次给药后1h后自腹主动脉采血,分离血清.研究设药物组和对照组.药物组分别用5-氟尿嘧啶(5-Fu)注射液(50 mg·L-1)、顺铂注射液(6.25 mg·L-1)、参芪扶正注射液含药血清作用于小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞；对照组用空白血清作用于RAW264.7细胞.利用酶标仪对作用后的RAW264.7细胞进行检测,观察5-Fu注射液、顺铂注射液、含药血清对RAW264.7细胞增殖的影响.结果 单用参芪扶正注射液组与空白对照组相比能明显促进RAW264.7细胞增殖(P＜0.01).5-Fu、顺铂注射液联合含药血清后与单用5-Fu、顺铂注射液相比,对于RAW264.7细胞增殖的抑制明显降低,其差异皆有显著性(P＜0.01).结论 参芪扶正注射液在体外环境下可促进巨噬细胞的增殖,改善化疗药物所造成的免疫抑制,对不同化疗药物的减毒趋势相同而减毒强度不同.
关键词： 化疗 参芪扶正注射液 RAW264.7细胞 -
竹节参醇提物对LPS诱导RAW264.7细胞炎症的保护作用
目的:观察竹节参醇提物对脂多糖(LPS)刺激小鼠单核巨噬白血病细胞RAW264.7细胞炎症保护作用的初步探讨.方法:用不同质量浓度的竹节参醇提物处理RAW264.7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;检测LPS刺激的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)释放量以及竹节参醇提物干预后RAW264.7细胞NO释放量;酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)分泌;聚合酶链反应(PCR)法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达;免疫印迹(Westernblot)法检测胞浆胞核核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达.结果:竹节参醇提物作用RAW264.7细胞的安全范围＜100 mg·L-1;LPS的用药质量浓度为1mg·L-1;与LPS模型组相比,竹节参醇提物0.1,1,10,40 mg·L-1能有效抑制NO释放(抑制率分别为31.2％,41％,46.1％,55.2％)和抑制TNF-α,IL-1β的分泌(P＜0.05或P＜0.01);竹节参醇提物10,40 mg·L-1能下调LPS模型组iNOS mRNA表达且抑制NF-κB的核移位.结论:竹节参醇提物对LPS刺激的RAW264.7细胞炎症具有保护作用,其保护机制可能与调控NF-κB通路,进而抑制NO的释放,降低TNF-α,IL-1β,iNOS表达有关.
-
从ERα/RANK通路探讨淫羊藿苷抑制破骨细胞分化作用
目的:通过检测淫羊藿苷对破骨细胞诱导分化过程中雌激素受体α(estrogen receptor α,ERα),核转录因子-κB受体(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK) mRNA表达的影响,探讨淫羊藿苷抑制破骨细胞分化作用机制.方法:50μg·L-1核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)体外诱导RAW264.7细胞分化成破骨缅胞,利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和骨吸收陷窝对破骨细胞进行鉴定.用不同浓度的淫羊藿苷(1×10-5,1×10-6,1×10-7 mol·L-1)分别处理5d和9d后,进行TRAP染色和骨吸收陷窝分析,处理6d后,利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9),组织蛋白酶K(cathepsin-K,CK),TRAP,ERα,RANK mRNA表达水平,用雌激素受体阻断剂ICI182780阻断雌激素受体通路验证淫羊藿苷对ERα/RANK通路的调节作用.结果:与RANKL诱导组比较,淫羊藿苷可以显著抑制破骨细胞形成数量和骨吸收陷窝数(P ＜0.05,P＜0.01),同时显著下调破骨细胞MMP-9,CK,TRAP,RANKmRNA表达水平(P ＜0.05,P＜0.01),上调ERα mRNA表达水平(P＜0.05).ICI182780可抑制淫羊藿苷上调破骨细胞的ERα mRNA表达水平和下调RANK mRNA表达水平的作用(P＜0.05).结论:淫羊藿苷能抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化和骨吸收活性,该作用可能通过上调破骨细胞的ERα mRNA表达进而下调RANK mRNA表达实现的.
关键词： 淫羊藿苷 RAW264.7细胞 破骨细胞 雌激素受体α 核因子κB受体 -
当归超临界提取物及其不同馏分抗炎作用的比较
目的:比较当归超临界总提取物及其馏分之间抗炎能力的差异,探讨是否存在作用更强的组分.方法:将当归超临界总提取物采用分子蒸馏技术在不同温度下分离出6个馏分,使用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度药物组对小鼠巨噬细胞RAW264.7的细胞毒性.以脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7建立炎症模型,亚硝酸盐(Griess)法检测炎症因子一氧化氮(N0)的含量、酶联免疫吸附法(ELISA)检测前列腺素(PGE2)的释放量.实时荧光定量PCR法(qPCR)检测环氧化酶-2(COX-2)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达.结果:各药物组均有抗炎作用,且馏分4的抗炎能力强.结论:当归酯类成分之间按一定比例协同可发挥更好的抗炎作用.
关键词： 当归超临界总提取物 分子蒸馏 RAW264.7细胞 抗炎 炎症因子 -
祛浊通痹方抗炎镇痛作用及对脂多糖诱导Raw264.7细胞的抗炎活性
目的:研究祛浊通痹方(QZTB)抗炎镇痛及对脂多糖(LPS)诱导Raw264.7细胞的抗炎活性.方法:采用二甲苯致小鼠耳肿胀法评价QZTB抗炎作用以及热板法和醋酸致扭体法评价其镇痛作用.ELISA法测定LPS诱导Raw264.7细胞培养上清的前列腺素E2(PGE2)含量.结果:QZTB中、高剂量组能有效缓解小鼠二甲苯所致的耳廓肿胀(P＜0.05,P＜0.01),而QZTB低、中、高剂量组均明显提高小鼠痛阈值,并显著减少醋酸致小鼠扭体次数(P＜0.01).QZTB对LPS诱导Raw264.7细胞中PGE2的产生具有明显抑制作用(P＜0.05,P＜0.01).结论:QZTB具有较好的抗炎镇痛作用及对体外LPS诱导Raw264.7炎性细胞具有抗炎活性,为进一步研究QZTB治疗痛风作用机制提供一定的理论依据.
关键词： 祛浊通痹方 抗炎 镇痛 前列腺素E2 RAW264.7细胞 -
鼠诺如病毒感染RAW264.7细胞中干扰素和干扰素激活基因转录水平研究
诺如病毒(Norovirus,NoV)是全球急性胃肠炎散发病例和暴发疫情的主要致病原.鼠诺如病毒(Murine norovirus,MNV)是研究诺如病毒的理想研究模型.本研究通过实时定量荧光PCR检测急性感染毒株MNV-CW1和持续性感染毒株MNV-SH1603感染Balb/e小鼠后的排毒情况以及感染RAW264.7细胞后不同时间点病毒RNA扩增、干扰素(Interferon,IFN)和干扰素激活基因(Interferon-stimulated gene,ISG)转录水平,以探讨不同的MNV毒株感染诱导IFNs和ISGs基因表达的特征.研究显示MNV-CW1和MNV SH1603病毒感染Balb/c小鼠后排毒时间不同.MNV-CW1和MNV-SH1603病毒感染RAW264.7细胞后,6h后出现明显扩增,48h达到病毒复制高峰,随后复制速度减慢.MNV-SH1603增殖比MNV-CW1快.两种病毒感染RAW264.7细胞后能上调IFN-β,IFN-λ2,ISG15和ISG54转录水平.MNV-CW1感染后,诱导IFN-β,IFN-λ2和ISG15基因表达上调,而ISG54在感染24h后转录水平下降.MNV-SH1603感染初期IFN-p,IFN-λ2,ISG15和ISG54基因转录水平持续增高,感染24h后IFN-β和ISG54的转录水平明显降低,IFN-λ2和ISG15转录水平峰值在感染后72h.研究揭示MNV病毒感染RAW264.7细胞后能上调IFN和ISG基因表达,但是MNV-CW1和MNV-SH1603诱导的基因表达特征有异同.
关键词： 鼠诺如病毒(MNV) RAW264.7细胞 干扰素基因 干扰素激活基因 -
α-硫辛酸降低脂多糖诱导的Raw264.7细胞TNF-α的分泌
目的 观察α-硫辛酸(ALA)对脂多糖(LPS)在体外诱导的Raw264.7细胞TNF-α释放及机制.方法 用ALA或者ALA联合ERK或NF-κB的抑制剂或者激活剂预处理2h,再用LPS(1 mg/L)体外刺激巨噬细胞Raw264.7;采用MTT法检测ALA对Raw264.7细胞活力影响,利用ELISA方法对Raw264.7释放在培养上清中的细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)的浓度,及用Western blot方法检测T-pERK、pERK和NF-κB的表达.结果 ALA可抑制LPS诱导的Raw264.7细胞TNF-α表达(P＜0.05),用ALA联合ERK或NF-κB的激活剂预处理后可减弱ALA产生的抑制效果(P＜0.05).同时ALA抑制LPS诱导的Raw264.7细胞pERK和NF-κB的表达(P＜0.05),用ALA联合ERK或NF-κB的抑制剂预处理后可加强ALA产生的抑制效果(P＜0.05).结论 ALA可能通过抑制LPS诱导的Raw264.7细胞的ERK和NF-κB信号通路来抑制TNF-α释放.
关键词： α-硫辛酸 脂多糖 RAW264.7细胞 肿瘤坏死因子 -
双氢青蒿素抑制核因子κB受体激动剂配体诱导RAW264.7细胞分化破骨细胞的研究
目的 探讨双氢青蒿素(DA)对核因子κB受体激动剂配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞形成破骨细胞的影响.方法 通过细胞计数试剂盒(CCK-8)确定不同浓度(1、5、10、50、100、200 μmol/L)DA对RAW264.7细胞的生存影响.分别用50 ng/mL RANKL及50 ng/mL RANKL+5、10、50、100 μmol/L DA诱导RAW264.7细胞形成破骨细胞,共3 d.对形成的破骨细胞用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并计数,TRAP染色阳性且细胞核数目>3个认为是成熟的破骨细胞.50 ng/mL RANKL及50 ng/mL RANKL+10、100 μmol/L DA培养RAW264.7细胞24 h,用Trizol试剂提取总RNA,并使用荧光实时定量PCR检测破骨细胞分化相关基因NFATc1、c-fos及Cathepsin K的表达.结果 1、5、10、50、100 μmol/L DA对RAW264.7细胞毒性较小,细胞存活率均>90%.TRAP染色显示,5、10、50、100 μmol/L DA可以减少RANKL诱导成熟破骨细胞的数目,并呈剂量依赖关系(F=139.156, P<0.01).实时荧光定量PCR结果显示,10、100 μmol/L DA具有下调破骨细胞分化关键基因NFATc1和c-fos表达的作用,且100 μmol/L抑制作用比10 μmol/L明显,但两种浓度DA对Cathepsin K的表达无明显影响.结论 DA对RAW 264.7细胞毒性较低,通过下调RAW 264.7细胞NFATc1和c-fos基因表达抑制RANKL诱导破骨细胞形成.DA可以作为治疗骨质破坏性疾病的潜在药物.
关键词： 青蒿素 双氢青蒿素 核因子κB受体活化因子配体 破骨细胞 RAW264.7细胞 -
不同粒径纳米二氧化硅的体外细胞膜毒性作用
探讨不同粒径纳米二氧化硅对体外培养细胞膜的损伤作用及其机制.20 nm、60 nm SiO2及微米SiO2对RAW264.7巨噬细胞染毒后,分别采用MTT法、显微镜及透射电镜、能谱分析、荧光漂白恢复技术(FRAP)、丙酮酸法、荧光探针2', 7'-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA),测定染毒细胞的活性、形态及超微结构,细胞内外Si元素分布、膜流动性,细胞外液中乳酸脱氢酶(LDH)含量和细胞内活性氧生成.试验结果显示:20 nm、60 nm SiO2及微米SiO2粒子的细胞半数抑制浓度(IC50)分别为2.07、6.82和14.71 mg/mL;染毒后细胞数量减少,呈气球样变,线粒体肿胀、破坏;细胞内吞噬泡和细胞间隙颗粒均含Si元素;31.25、125、500 μg/mL的20 nm、60 nm SiO2组及500 μg/mL微米SiO2组细胞膜荧光恢复率降低(P＜0.05);125、500 μg/mL两种粒径纳米SiO2组及500 μg/mL微米SiO2组细胞膜扩散系数降低(P＜0.05);两种粒径纳米SiO2组细胞外液中LDH活性升高(P＜0.05),500 μg/mL的20 nm SiO2较60 nm SiO2和微米SiO2致细胞荧光恢复率降低,LDH活性升高(P＜0.05);两种粒径纳米SiO2及微米SiO2可致染毒细胞内活性氧水平升高(P＜0.05).结果表明,20 nm、60 nm SiO2可通过诱导脂质过氧化引起细胞生长抑制、形态异常、超微结构改变和细胞膜损伤,相同剂量20 nm SiO2产生的毒性效应较60 nm SiO2明显,说明纳米SiO2的尺寸效应是一个值得关注的问题.
-
不同频率振动应力对破骨细胞特异性基因及骨保护素/核因子κB受体活化因子配体表达的影响
目的:观察不同频率振动应力对RAW264.7细胞体外诱导分化过程中,其特异性基因及骨保护素(OPG)/核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响.方法:应用复合振动仪,将不同频段3-10Hz、15-35Hz、35-45Hz、50-70Hz和70-90Hz振动应变分别作用于体外诱导分化的RAW264.7细胞,分别为B、C、D、E、F组,未进行振动干预组为A组,振动应变加载3天和6天时,应用RT-PCR方法检测破骨细胞特异性基因(TRAP、MMP-9和CATK)与OPG/RANKL的表达水平.结果:不同振动频率组破骨细胞特异性基因表达水平逐渐减低,同时B、C、D组逐渐上调OPG基因表达,而RANKL基因的表达逐渐下调.结论:不同频率振动应力均抑制RAW264.7细胞向成熟破骨细胞增殖分化.
-
羧胺三唑对脂多糖诱导的 RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响
目的研究羧胺三唑对脂多糖诱导的 RAW264.7细胞炎症模型中炎症因子的影响。方法脂多糖（1μg/ml）刺激生长良好的RAW264.7细胞，建立细胞炎症模型，并用不同浓度羧胺三唑处理。 CCK-8法检测羧胺三唑对RAW264.7细胞的毒性作用，ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量，分光光度法检测一氧化氮（ NO）含量。结果羧胺三唑在2.5～40μmol/L的浓度范围内对RAW264.7细胞无毒性作用（P＞0.05）。脂多糖可以明显诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6和NO（P＜0.01），10、20、40μmol/L的羧胺三唑能够显著抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞释放TNF-α、IL-6和NO的水平（ P＜0.05和P＜0.01），20、40μmol/L的羧胺三唑能够抑制脂多糖诱导的IL-1β的释放（ P＜0.01）。结论羧胺三唑可以抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应，其抗炎作用与减少炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和NO有关。
关键词： 脂多糖类 一氧化氮 细胞因子类 羧胺三唑 RAW264.7细胞 -
IRAK-M短发夹RNA对RAW264.7细胞内毒素耐受性的抑制作用
目的:观察白介素-1受体相关激酶-M(IRAK-M)基因沉寂后RAW264.7细胞内毒素耐受性的改变, 进而探讨IRAK-M在内毒素耐受形成中的作用.方法:构建表达IRAK-M短发夹RNA(shRNA)的阳性重组质粒(pshIRAK-M-A)和阴性重组质粒(pshIRAK-M-B), 转染RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞系)细胞; 各组细胞经10 μg/L脂多糖(LPS)预处理24 h后(或直接)用100 μg/LLPS刺激; 3 h后, 酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养液中TNF-α水平, 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中的TNF-α mRNA表达水平, 蛋白印迹法(Western blotting)检测细胞中IRAK-M蛋白的表达, 凝胶电迁移率分析法(EMSA)检测细胞中NF-κB的活性.结果:pshIRAK-M-A对IRAK-M蛋白表达抑制率为83%左右, pshIRAK-M-B对IRAK-M蛋白表达无明显抑制作用; 两种转染细胞在用100 μg/L LPS直接刺激后, 其培养液中TNF-α水平、细胞内TNF-α mRNA表达及NF-κB活性无显著性差异; 两种转染细胞对L P S的再次应答均明显弱于初次应答细胞( P<0.05), 但pshIRAK-M-A转染组细胞对LPS的再次应答明显强于pshIRAK-M-B转染组细胞( P<0.05).结论:IRAK-M表达受抑导致细胞内毒素耐受性减弱, IRAK-M在内毒素耐受形成中起重要作用.
-
RAW264.Z细胞M1/M2亚型的诱导和鉴定
目的 诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7分化为M1/M2亚型,并分别根据其标志物的表达情况进行鉴定.方法 干预前一天以10(5)个/ml密度铺好细胞,用不同浓度的IFN-γ +LPS干预,刺激分化为M1亚型;用不同浓度IL-4干预,刺激分化为M2亚型.分别于干预后12h提取细胞的总RNA.用realtime PCR方法对M1/M2亚型的标志物iNOS,CD86/MR(CD206),I型精氨酸酶(ArginaseI,Arg-I)进行mRNA水平表达量的鉴定,终选择合适的刺激浓度进行后续试验.结果 (1).不同浓度干预试剂刺激12h后,大剂量干预组RAW264.7的细胞状态差,死亡细胞数多,中小剂量组细胞状态良好,完全贴壁,但细胞的形态发生改变;(2).2.5ng/ml IFN-γ +200ng/ml LPS共同作用12h后,RAW264.7的iNOS和CD86表达量高,较基础水平有明显差异;(3).10ng/ml IL-4作用12h后,RAW264.7的MR(CD206)和ArgI的表达量高,较基础水平有明显差异.结论 用适当浓度的IFN-γ +LPS/IL-4刺激RAW264.7细胞12h,可使其分化为M1/M2亚型.
关键词： RAW264.7细胞 M1/M2亚型 炎症 动脉粥样硬化 -
地拉罗司通过NF-κB信号抑制小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化
目的：探讨地拉罗司（ deferasirox ， DFS）体外对小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响及相关机制。方法体外培养小鼠单核细胞RAW264.7，在核因子κB受体活化因子配体（ receptor activator of NF-κB ligand， RANKL）的作用下诱导分化为破骨细胞，并使用不同浓度DFS （0、5、10、20μmol／L）进行干预，用CCK-8法检测细胞的增生活性，抗酒石酸酸性磷酸酶（ tartrate-resistant acid phosphatase ， TRAP）染色法观察TRAP阳性破骨细胞的形态并计数，实时定量PCR法检测细胞转录因子c-Fos、转录因子活化T细胞核因子（nuclear factor of activated T cell c1， NFATc-1）和组织蛋白酶K （cathepsin K， CTK） mRNA的表达，双荧光素酶报告基因系统检测核转录因子κB （ nuclear transcription factor kappa B ， NF-κB）报告基因的表达，蛋白免疫印迹（ Western blotting ）法分别检测细胞质蛋白、核蛋白NF-κB P65的表达。结果 DFS 0、5、10、20μmol／L组TRAP染色阳性的数目分别为63.67±3.78、55.33±3.21、34.00±5.00、16.00±4.58，各浓度组组间比较，差异有统计学意义（ P＜0.05），提示DFS在实验浓度围内可减少RANKL 诱导的RAW264.7细胞TRAP染色阳性的数目； DFS 0、5、10、20μmol／L组c-Fos mRNA表达量分别为1.83±0.11、1.46±0.13、0.88±0.13、0.30±0.09，各浓度组组间比较，差异有统计学意义（ P＜0.05）， NFATc-1 mRNA表达量分别为4.09±0.20、3.21±0.22、2.28±0.23、1.47±0.22，各浓度组组间比较，差异有统计学意义（ P＜0.05）， CTK mRNA表达量分别为3.51±0.08、3.21±0.19、2.55±0.22、1.50±0.19，各浓度组组间比较，差异有统计学意义（ P＜0.05），以上结果提示DFS在实验浓度围内可下调c-Fos、 NFATc-1、 CTK mRNA的表达；在RANKL的基础上加入DFS后NF-κB报告基因的表达量为0.119±0.019，与RANKL组0.202±0.017比较明显下降，差异有统计学意义（ P＜0.05），提示DFS可抑制RAW264.7细胞NF-κB报告基因的表达；在RANKL的基础上加入DFS后细胞质内NF-κB P65蛋白表达量为0.56±0.08，与RANKL组0.42±0.09比较明显增加，差异有统计学意义（ P＜0.05），细胞核内NF-κB P65蛋白表达量为1.49±0.12，与RANKL组1.71±0.08比较明显减少，差异有统计学意义（ P＜0.05），提示DFS可抑制RAW264.7细胞NF-κB P65向细胞核转位。结论 DFS可能通过抑制NF-κB信号活性来抑制小鼠单核RAW264.7细胞向破骨细胞分化。
关键词： 地拉罗司 RAW264.7细胞 核转录因子κB 骨质疏松
