首页 > 文献资料
-
丹参注射液对缺血豚鼠离体心肌细胞跨膜电位的影响作用
目的:观察丹参注射液对缺血豚鼠离体心肌细胞跨膜电位的干预作用及其抗心律失常的作用机制.方法:在离体豚鼠左心室流出道慢反应自律细胞上,应用玻璃微电极细胞内记录方法观察跨膜动作电位各项指标.结果:在模拟缺血状态灌流时,左室流出道细胞APD50 、APD80均明显缩短(P<0.05),VDD、Vmax和RPF显著变慢(P<0.05或P<0.01);用不同剂量丹参注射液(0.25ml、0.5ml、lml)灌流,出现剂量依赖性APD50、APD80的延长(P<0.05),VDD与RPF的加快(P<0.05或P<0.01),以大剂量组丹参注射液影响作用为明显.结论:提示丹参注射液对缺血导致的豚鼠左心室流出道慢反应自律细胞跨膜电位改变所诱发的心律失常有显著保护作用.
-
降钙素基因相关肽对缺血-再灌注心肌细胞电生理的影响
降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)近来发现它能明显延缓或者拮抗缺血-再灌注性心律失常的发生,因而倍受关注.本实验采用标准玻璃微电极技术,观察CGRP对缺血-再灌注过程中心室肌细胞电生理特性的直接作用,为其能防治缺血性和再灌注性心律失常提供理论依据. 资料和方法健康家兔24只,麻醉后迅速开胸取出心脏,制备左心室肌标本(10 mm~15 mm×3 mm×3 mm),采用标准玻璃微电极技术(电极阻抗10 MΩ~20 MΩ)记录正常状态动作电位(action potential,AP)作为对照,开始实验.由不同缺血条件分为四组:(1)缺血未用药组:用模拟缺血台式液配方(mM):NaCl 144.0,KCl 8.0,NaH2PO40.33,MgCl2@6H2O 1.05,CaCl2 1.8,HEPEs 5.0,乳酸钠20,NaOH调节pH为6.80±0.05,并在其使用前和灌流中持续充以100%N2,使动脉氧分压保持在40 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)左右灌流左心室肌20 min后,立即换成100%O2的改良台式液再灌注30 min;(2)预处理组:用含10-8MCGRP的改良台式液灌流10 min后,方法同①组进行缺血-再灌注过程;(3)缺血同时用药组:用含10-8M CGRP的模拟缺血台式液灌流20 min后,再同①组进行再灌注;(4)缺血后用药组:用模拟缺血台式液灌流10 min后,给予内含10-8M CGRP的缺血液继续灌流10 min后,再同①组进行再灌注.整个缺血-再灌注过程中的AP经微电极放大器(MEZ-8201,Nihon Kohden)输入VC-10双线记忆示波器,同时用磁带记录仪记录实验的全过程,实验结束后再经多导生理记录仪ACQ4600软件和计算机DASA软件采集参数,再由Gould 6120绘图仪绘出.测量心肌细胞AP的各项参数包括:①细胞静息膜电位(RMP);②动作电位振幅(APA);③零相大除极速率(Vamx);④动作电位时限(APD)本实验取动作电位复极至50%(APD50)和95%(APD95)的时限;⑤APD50-95(=APD95-APD50,反映动作电位后期时限);⑥APD50/APD95(反映动作电位复极前期占整个复极过程的比例).并观察缺血-再灌注过程中异常电活动的发生情况.
-
蛋白激酶C参与乳鼠心肌细胞缺氧预处理的保护作用
近年来发现,心脏自身具有强大的内源性保护机制--缺血预处理(IPC)[1],其保护作用的机制迄今不明了.我们的实验,通过建立乳鼠心肌细胞模拟缺血/再灌注损伤细胞模型,研究缺氧预处理对心肌细胞的保护作用,并从蛋白激酶C的角度探讨其在预处理中的保护机制.
-
金属硫蛋白对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用
金属硫蛋白(MT)是普遍存在各种生物体内、富含硫基的小分子蛋白,在缺血/再灌注(I/R)损伤中通过清除自由基减轻心肌细胞损伤,同时MT参与预缺血保护(IPC).目前对MT在IPC中的保护作用机制及功效仍无明确研究,本实验以培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模拟缺血/再灌注损伤,检测心肌细胞在IPC处理后24 hMT的含量、脂质过氧化程度及Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活力变化,锌诱导产生的MT作用,并比较MT与抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)的保护作用,初步探讨MT的心肌保护作用机制及应用价值.
-
缺血大鼠心肌细胞晚钠电流的变化规律和阿托伐他汀的作用
目的:观察不同模拟缺血时间下大鼠左室心肌细胞晚钠电流(INaL)的变化规律及阿托伐他汀对该过程的作用.方法:Wistar大鼠共40只,分离左室心肌细胞,分为正常组、缺血组、正常-他汀组和缺血-他汀组.用全细胞膜片钳分别记录4组细胞基线状态下INaL,再灌流3 min后,每2 min记录1次,记录10 min,观察INaL的变化规律.计算I/Imax作为标准化INaL,比较4组INaL标准化值.结果:取-40 mV测试电压下,(1)正常组,基线状态和记录3、5、7、9min4个时间点的INaL分别为1、0.82+0.24、1.00+0.36、0.92±0.32和1.03+0.38,各记录时间点与基线之间均无差别(分别P>0.05);(2)缺血组,基线状态INaL为1,在模拟缺血3~7 min时,INaL增大,并于3 min时达峰(1.79±0.66);(3)正常-他汀组,基线状态和4个记录时间点的INaL分别为1、0.88±0.28、1.06±0.23、1.03±0.27和0.94±0.19,各记录时间点与基线之间均无差别(分别P>0.05);(4)缺血-他汀组,与基线状态相比,模拟缺血3 min时的INaL无变化,5 min时较基线值减少0.43±0.31(P=0.035),7 min时较基线值减少0.48±0.37(P=0.044);(5)在模拟缺血3 min时,相比于正常组,缺血组INaL增大(P=0.001);相比于缺血组,缺血-他汀组INaL则减小(P=0.004);正常组和缺血-他汀组的INaL之间并无差别(P>0.05).结论:模拟缺血早期(10 min内)心室肌细胞INaL呈时间依赖性增大;5 μmol/L阿托伐他汀不改变正常状态下的INaL,却可抑制缺血状态下INaL的异常增大.
-
药理性预适应在缺血性脑损伤中的保护作用及机制研究进展
药理性预适应(pharmacological preconditioning)是在缺血预适应(ischemic preconditioning,IP)基础上发展起来的,通过药物的直接或间接药理作用模拟缺血或低氧,激活机体内源性保护机制,促进内源性保护物质生成,产生组织、细胞保护作用.
-
L-NMMA和L-Arg对体外培养海马神经元缺血缺氧损伤调控作用及其机制的研究
近年来研究发现一氧化氮(NO)在缺血缺氧机制中具有重要作用.NO与细胞凋亡的关系仍存在着较大分歧,实验证明NO既可诱导凋亡又可抑制凋亡.本研究利用体外培养海马神经元,通过去除培养液中糖和氧气模拟缺血缺氧状态,以细胞形态学、细胞存活率、乳酸脱氢酶变化描述细胞损伤程度,观察NO合成前体物左旋精氨酸(L-Arg)、NO合成酶(NOS)抑制剂N单甲基-L-精氨酸(L-NMMA)对缺血缺氧损伤体外培养海马神经元的影响,并初步探讨了两者与细胞凋亡的关系.
-
肾小管上皮细胞与基底膜的粘附特性
肾小管上皮细胞与基底膜的正常连接(粘附作用)主要由肾小管上皮细胞表面的整合素(Integrin)分子介导,研究表明:肾脏缺血再灌注时,肾小管上皮细胞表面的整合素分子会发生变化,引起肾小管上皮细胞的脱落,这些脱落的肾小管上皮细胞和细胞碎片在管腔内形成堆积物,并引起小管腔梗阻.本文得用微管吸吮技术(Micropipette aspiration technique)定量测定模拟缺血缺氧条件下肾小管上皮细胞与基底膜(Matrigel)的粘附特性.
-
吗啡预处理对缺血/再灌注后大鼠小脑神经元的保护作用
缺血性脑损害可导致高致残率和高死亡率[1],如中风和脑外伤.近有研究显示阿片类可减弱谷氨酸盐和缺氧诱发的神经死亡,而吗啡是广泛用于临床急性和慢性疼痛的阿片类药物,吗啡预处理可否诱发脑神经元的缺血耐受力,我们使用大鼠的小脑薄片,在体外以氧-糖剥夺法模拟缺血作一探讨.
-
乳化异氟醚预处理对兔缺血再灌注心肌血流动力学的影响
近年来研究表明吸入麻醉药异氟醚可模拟缺血预处理发挥心肌保护作用,减轻再灌注期心肌功能抑制[1,2].以脂肪乳为载体静脉注射的乳化异氟醚可产生麻醉作用[3],但是否也具有心肌保护作用,尚无报道.为了进一步研究乳化异氟醚预处理对心肌缺血的保护效应,本实验在兔心肌缺血再灌注模型上测定不同时点血流动力学的有关指标,旨在探讨乳化异氟醚预处理对兔缺血再灌注心肌的血流动力学影响.
-
麦冬多糖通过S1P1通路保护OGD条件下细胞生存
为研究1-磷酸鞘氨醇受体1(S1P1)通路在模拟缺血的OGD(氧气和糖剥夺)条件下麦冬多糖MDG-1的细胞保护作用中的角色,以阐明MDG-1细胞保护作用机制.利用RT-PCR和Western blotting实验,研究MDG-1对S1P1通路的调节作用,并利用化学合成siRNA阻断S1P1表达,同时构建S1P1-全长cD-NA序列的真核表达载体作为阳性对照,在OGD条件下,用LDH法检测细胞死亡率.结果表明MDG-1具有显著的细胞保护作用,可保护细胞减少OGD诱导的细胞死亡,上调S1P1蛋白表达,而转染siRNA能阻断S1P1表达,并使MDG-1的细胞保护作用受到明显抑制.限制性酶切消化、PCR、测序结果证实S1P1-pcDNA3.1b载体构建成功,转染入S1P1-pcDNA3.1b载体的HEK293细胞S1P1表达增强,并可减少OGD诱导的细胞死亡.这些结果表明MDG-1可能是通过激活S1P1通路,减少OGD诱导的细胞死亡,起到细胞保护作用.
关键词: 麦冬多糖 1-磷酸鞘氨醇受体1 模拟缺血 真核表达载体 siRNA -
银杏酮酯对缺血豚鼠心室肌细胞I_(Ca-L)和游离钙的影响
目的 观察银杏酮酯GBE50对模拟缺血游离豚鼠心室肌细胞L型钙电流和游离钙浓度的影响,探讨GBE50抗心肌缺血的作用机制.方法 应用单酶酶解法分离游离单个豚鼠心室肌细胞,采用膜片钳全细胞记录心室肌细胞L型钙电流,通过激光共聚焦显微镜扫描测定细胞内游离钙浓度的动态变化.结果 缺血抑制豚鼠心室肌细胞的 I_(Ca-L) (n =9, P <0.01),使豚鼠心室肌细胞内游离钙增加(n =10, P <0.01),而50 mg·L~(-1) GBE50减轻缺血对 I_(Ca-L) 的抑制效应(n=6,P >0.05),减少缺血后心室肌细胞内游离钙浓度的增加(n =10, P >0.05).结论 GBE50可减轻心肌缺血区域与非缺血区域电生理的异质性,维持缺血后豚鼠心肌细胞电生理的稳定性,并减轻缺血后心肌细胞内钙超载介导的心肌损伤.
-
阿托伐他汀对大鼠模拟缺血左室心肌细胞瞬时外向钾电流的作用
目的 观察在单细胞水平,阿托伐他汀对大鼠模拟缺血左室心肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)的作用.方法 Wistar大鼠32只,酶解获取左室心肌细胞,随机分4组:对照组(正常Ito外液)、他汀组(正常Ito外液+5μmol/L阿托伐他汀)、缺血组(缺血Ito外液)和缺血加他汀组(缺血Ito外液+5 μmol/L阿托伐他汀).采用全细胞膜片钳记录各组正常外液中的基础Ito,灌流不同电极外液,记录灌流后5~ 20 min的Ito.结果 ①标准化Ito峰值(测试电位+50 mY):对照组灌流前后无变化;与基础水平比,灌流5 min时,他汀组、缺血组和缺血加他汀组分别减小13.60%±5.74%、17.94% +3.18%和21.87%±4.36%(均P<0.01),三组间两两比较互无差异;灌流5 min后,他汀组和缺血组继续减小;②门控参数:与基础水平比,灌流5 min时,他汀组半激活电压(V1/2,a)增加5.70%±2.43%(P=O.001),半失活电压(V1/2,i)增加16.32%±13.41% (P =0.034);缺血组和缺血加他汀组V1/2,a分别减小6.95%±3.13%和12.56% +5.75%(均P<0.01),V1/2,i分别减小31.80%±14.06%和36.66%±15.52%(均P<0.01),缺血组和缺血加他汀组之间V1/2,a和V1/2,i均无差异,而分别与他汀组比较时,V1/2,a和V1/2,i均存在差异.结论 ①阿托伐他汀可能有一定的Ito阻滞样作用,并呈时间依赖性减轻;②模拟缺血20 min内Ito持续减小;③5μmol/L阿托伐他汀不影响模拟缺血20 min内的Ito;④阿托伐他汀和模拟缺血对Ito的V1/2,a和V1/2,i作用方向相反.
-
阿托伐他汀对大鼠左室心肌细胞瞬时钠通道电流的作用
目的 观察阿托伐他汀对正常和模拟缺血大鼠左室心肌细胞瞬时钠通道电流(INa)的作用.方法 Wistar大鼠30只,用于分离左室心肌细胞.细胞按异体配对原则分为他汀组(阿托伐他汀5 μmol/l+乙醇8.575 mmol/L)和对照组(乙醇8.575 mmol/L).采用全细胞膜片钳技术记录INa:测定正常和模拟缺血状态下,用药前和用药后3~5 min的数据;比较标准化INa峰值、半激活电压(V1/2)、激活曲线斜率(k)和衰减时间常数(τ).结果 正常状态下,他汀组用药后在-40 mV、-35 mV和-30 mV测试电位下的标准化INa峰值分别由0.93±0.14,0.92±0.06和0.88±0.08降低至0.68±0.16,0.68±0.17和0.65±0.18(P均<0.01);用药前后V1/2、k不变;用药后在-30 mV、-25 mV和-20 mV测试电位下的τ值(ms)分别由1.22±0.27,1.12±0.23和1.04±0.21延长至1.34±0.33,1.24±0.31和1.17±0.30(P均<0.05).他汀组用药后对模拟缺血细胞INa的作用和正常细胞的作用相似.对照组对照液使用后不引起INa上述指标的变化.结论 阿托伐他汀对正常和模拟缺血状态的大鼠左室心肌细胞的INa均有钠通道阻滞样作用.
-
Diazoxide对乳鼠窦房结细胞模拟缺血-再灌注时的保护作用研究
目的为探讨KATP通道开放剂Diazoxide对模拟缺血-再灌注时培养乳鼠窦房结细胞的保护作用及其可能机制.
-
模拟缺血-再灌注对窦房结细胞自发性动作电位的影响及 Pinacidil的干预作用
目的探讨模拟缺血-再灌注对窦房结细胞动作电位的影响及KATP通道开放剂的干预效果.
-
缺血对家兔心室不同部位心肌细胞动作电位的时相性影响及离子机制探讨
目的缺血是导致心律失常的重要原因之一.众多的研究表明,缺血对心肌细胞的电活动有着显著的影响,导致动作电位(action potential,AP)改变就是其中之一.本研究利用膜片钳技术记录兔心室内膜下和外膜下心肌细胞在模拟缺血情况下不同时段动作电位时程的变化及其相应的离子流变化,进一步揭示缺血导致心律失常的机制.
-
低浓度利多卡因对缺血大鼠海马CA1区神经元持续钠电流的影响
抑制持续钠电流在缺血缺氧性脑损伤中是某些神经保护剂发挥缺血脑保护作用的重要机制[1].低浓度利多卡因(10μmol/L)其脑保护作用机制可能与钠通道阻滞有关[2,3].利多卡因对瞬时钠电流的有阻滞[4],但其难解释高浓度利多卡因为何没有脑保护作用[5,6 ].我们通过观察低浓度利多卡因对模拟缺血状态下大鼠海马CA1区神经元持续钠电流的影响,探讨其缺血脑保护的机制.
-
ATP敏感性钾通道开放剂对培养乳鼠窦房结细胞模拟缺血时细胞活性的影响
目的观察ATP敏感性钾(KATP)通道开放剂对模拟缺血窦房结细胞活性的影响,并探讨其作用机制.方法取培养2 d的窦房结细胞,以低渗(85 mosmol/L)台盼蓝染色及四唑盐(MTT)比色观察窦房结细胞活性的变化.结果模拟缺血4 h后,窦房结细胞脆性增加、活性降低;KATP通道开放剂Pinacidil和Diazoxide能显著降低模拟缺血窦房结细胞脆性,增加细胞的活性,但两组间无明显的统计学差异;KATP通道阻断剂5-HD能逆转Pinacidil及Diazoxide的上述作用.结论 KATP通道开放剂Pinacidil和Diazoxide对缺血窦房结细胞具有显著的保护作用,但这种效果能为KATP通道阻断剂5-HD阻断.本研究提示窦房结细胞线粒体内膜可能有KATP通道存在,它的开放可能是细胞获得保护的关键.
-
淫羊藿苷对缺血/再灌致神经元损伤的保护作用研究
目的:观察淫羊藿苷对体外模拟缺血/再灌致神经元损伤的保护作用,初步探讨其可能的作用机制.方法:原代培养大鼠乳鼠大脑皮层神经元,分别在缺氧和缺糖(6h)/再复氧和复糖培养后不同时间点(0、3、12、24h)检测细胞活度、LDH活性、细胞凋亡率和细胞内游离钙离子浓度.