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酸性液对大鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用
心肌缺血导致心肌细胞严重的酸中毒,复灌后细胞内外pH值的急剧变化(即"pH反常")在心肌损伤中起重要作用.我们的实验资料表明,用酸性液复灌对大鼠离体心脏缺血-再灌注损伤有保护作用[1].本实验进一步分离成年大鼠心肌细胞并复制缺氧-复氧损伤模型, 观察复氧时用不同pH值孵育液对缺氧-复氧损伤的影响.
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雌激素在心肌细胞缺氧复氧过程对钙离子的调控
钙是细胞内重要的信号分子之一,它参与调控人体的多种病理生理活动,同时,其调控又受多种因素的影响.近年,雌激素在心肌细胞缺氧复氧过程中的作用受到了人们的广泛关注,如雌激素能抑制心肌细胞缺氧/复氧过程中钙超载,但雌激素对钙离子的调控具体分子机制并不清楚,现将雌激素对心肌细胞缺氧复氧过程中对钙离子的调控相关做一综述.
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金属硫蛋白对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用
金属硫蛋白(MT)是普遍存在各种生物体内、富含硫基的小分子蛋白,在缺血/再灌注(I/R)损伤中通过清除自由基减轻心肌细胞损伤,同时MT参与预缺血保护(IPC).目前对MT在IPC中的保护作用机制及功效仍无明确研究,本实验以培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模拟缺血/再灌注损伤,检测心肌细胞在IPC处理后24 hMT的含量、脂质过氧化程度及Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活力变化,锌诱导产生的MT作用,并比较MT与抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)的保护作用,初步探讨MT的心肌保护作用机制及应用价值.
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异丙酚抗心肌细胞缺氧损伤作用的研究
异丙酚作为一种新型的静脉全麻药,因其起效快、苏醒迅速、平稳、副作用少等特点,已广泛用于临床各科手术麻醉及镇静治疗.本课题选用氰化钠造成培养心肌细胞缺氧(细胞内缺氧)模型,排除了血液动力学及白细胞在缺氧损伤中影响,以研究异丙酚对细胞缺氧损伤的直接作用.
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异丙酚对鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的保护作用
心肌缺血/再灌注损伤是围术期经常面临的一种病理生理变化,静脉麻醉药异丙酚结构上的特殊性使其对各种因素(如缺血/再灌注)所致的氧化应激的诸多环节均有阻断作用,异丙酚的抗氧化性可能为其心肌保护作用的机制之一.本文研究了异丙酚预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及该作用是否与其抗氧化性有关.
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丙泊酚通过激活PI3K-Akt信号转导通路抑制缺氧/复氧损伤致乳鼠心肌细胞凋亡
丙泊酚是临床常用静脉麻醉药,有清除自由基抗氧化作用.既往研究表明,丙泊酚对心肌缺血再灌注损伤有保护作用[1].心肌细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤心肌细胞死亡的主要方式之一,已证实丙泊酚能够抑制心肌细胞凋亡而发挥心肌保护作用[2],但其机制尚有待进一步明确.本研究通过建立离体乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,观察丙泊酚对心肌细胞凋亡的影响以及磷酸化-Akt(p-Akt)蛋白表达变化,进一步探讨丙泊酚影响心肌细胞凋亡的机制.
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内皮细胞Jaggedl下调促进PDGF诱导大鼠平滑肌细胞的增殖迁移\乙醛脱氢酶2抑制剂daidzin对大鼠心肌细胞缺氧损伤作用的机制
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利用激光扫描共聚焦显微镜观察丹参滴丸对乳鼠心肌细胞缺氧的保护作用
目的:探讨丹参滴丸对培养的乳鼠心肌细胞缺氧/再给氧的保护作用机制.方法:出生3~7 d的大白鼠乳鼠的心脏在无菌条件下取出来,剪碎,经胰蛋白酶消化分离成单个细胞,放入含15%小牛血清的1640培养液内培养36 h,将培养的细胞随机分成:Ⅰ正常对照组;Ⅱ缺氧10 min组;Ⅲ缺氧10 min加丹参滴丸组;Ⅳ缺氧10 min再给氧10 min加丹参滴丸组.缺氧时向培养瓶内通N2,流量为每分钟100个气泡(直径0.5 cm);给氧时向瓶内通O2(含5%CO2),加丹参滴丸组在通气前先加入丹参滴丸,终浓度为40 μg/mL.将实验后的细胞用0.25%的胰蛋白酶从培养瓶内消化下来,加入无血清无酚红的1640培养液清洗,离心后弃上清,用PBS清洗离心5 min,500 r/min,弃上清,加入含10 μmol的Fluo-3/AM染色,37℃恒温水浴锅内孵育1 h,经PBS清洗弃上清,放入无酚红无血清1640培养液内备用.胞内游离钙离子可与钙荧光探针Flio-3结合,产生一种荧光物质,激光扫描共聚焦显微镜(美国Meridian公司生产的Insight plus型),通过发射波长是488 nm的激光,激发细胞内游离钙产生荧光,通过纤维成像系统,可观察及测量出细胞内钙离子平均荧光强度的变化.结果:Ⅰ组细胞内钙离子平均荧光强度为1005.75,Ⅱ组钙离子强度为1509.43,经t检验,P<0.05,二者有显著差异;Ⅲ组钙离子荧光强度有所减弱,为1217.78,与Ⅰ相比无显著差异(P>0.05);Ⅳ组钙离子荧光强度为1567.91,与Ⅰ组相比有显著差异(P>0.05).结论:丹参滴丸对心肌细胞缺血缺氧后所致钙超载有拮抗作用.
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利用脂质代谢组学研究n-3多不饱和脂肪酸及其代谢产物心肌梗死后保护心功能作用及其机制
目的:富含n-3多不饱和脂肪酸( n-3PUFA)的鱼油可有效降低动脉粥样硬化、心肌梗死等心血管疾病的发生率和死亡率,但其机制尚未明确。本研究利用脂质代谢组学研究心肌梗死小鼠模型中n-3PUFA代谢谱及具体产物在冠心病防治中的价值与意义。方法:运用富含EPA/DHA的鱼油饲料喂养C57BL/6小鼠3周,普食喂养作为对照组。造心梗模型,利用高通量PUFA靶向代谢组学平台,检测血浆、组织等n-3PUFA代谢产物、心肌梗死面积、心脏功能等。同时利用Fat-1转基因小鼠作为阳性对照。结果:代谢组学分析得到70余种PUFA代谢产物。发现鱼油喂食与Fat-1转基因组的体内n-3PUFA及其代谢产物明显增高,而n-6PUFA代谢产物含量明显降低。不同处理组心肌梗死7 d后,发现转基因组和鱼油喂食组心梗面积较对照组小,心功能较好。细胞实验证明EPA对心肌细胞缺氧具有保护作用。进一步将要验证不同代谢通路产物对心肌细胞功能的影响及代谢酶活性变化。结论:n-3PUFA具有保护心梗后心肌损伤作用,通过代谢组学可以发现具有保护作用的代谢通路及产物。
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WDR26过表达对大鼠心肌细胞缺血所致线粒体自噬的影响
目的:观察WDR26过表达对大鼠心肌细胞缺氧所致线粒体自噬的影响,探讨其作用机制。方法:构建真核表达载体pcDNA3.1,克隆入WDR26ORF,转染H9c2心肌细胞株;实验分为对照组和实验组(转染pcDNA3.1-WDR26);建立H9c2心肌细胞缺氧模型;采用免疫荧光、Western blot等技术检测缺氧后心肌细胞线粒体自噬情况及PINK1、Parkin线粒体自噬相关蛋白的表达情况。结果:(1)WDR26过表达时可以促进H9c2心肌细胞缺氧时线粒体自噬;(2)WDR26过表达时可以促进缺氧所致的Parkin向线粒体聚集。结论:WDR26参与心肌细胞缺血所致的线粒体自噬,并且通过与线粒体蛋白发生相互作用形成复合物,影响PINK-Parkin信号通路,从而调控线粒体自噬,在心肌缺血过程中起到内源性保护作用。
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参麦注射液对急性缺氧-复氧心肌细胞凋亡的影响
目的:观察参麦注射液对急性缺氧-复氧后心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制.方法:采用出生3天的Wastar大鼠,原代培养心肌细胞.实验分为3组:(1)正常组:心肌细胞不做任何处理,按正常条件培养(含10%胎牛血清的低糖DMEN培养液,青霉素100U/L,链霉素100 mg/L,37℃、5%CO2、91%湿度环境培养).(2)缺氧-复氧组:将心肌细胞进行缺氧-复氧处理.(3)参麦注射液组:心肌细胞复氧同时加入5 mL/L(1g/L)参麦注射液15 min.模型使用化学缺氧法,将Na2S2O4加入无糖、无氧的D-Hank's液中,制成缺氧溶液(pH 7.0-7.4),替换正常培养液使心肌细胞缺氧5min,再将缺氧液换成正常含血清培养液孵育15 min模拟再给氧,复制心肌细胞急性缺氧-复氧(anoxia-reoxygenation,A/R)模型.然后以Annexin V-FITC/PI双染色法,用流式细胞仪检测细胞早期凋亡百分率;激光扫描共聚焦显微镜观察Fluo-3负载的心肌细胞内钙离子水平的变化.