046 膳食钙摄入与肥胖

有限的流行病学资料发现,增加膳食钙摄入能够降低体重;对大鼠的实验研究结果也显示,高钙摄入可以降低大鼠的体脂含量,减轻其体重.本文将阐述细胞内钙离子调节脂肪合成和脂肪分解的作用机制,说明增加膳食钙摄入可通过降低细胞内钙离子浓度来抑制脂肪生成,促进脂肪分解,从而达到控制肥胖的作用.

电针对神经病理性痛大鼠脊髓背角细胞内钙离子浓度以及钙-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ的影响

目的:通过观察坐骨神经分支选择性损伤(SNI)大鼠脊髓背角神经细胞内钙离子([Ca2+]i)浓度以及钙-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的变化和电针干预对其的影响,探讨电针干预神经病理性痛的脊髓机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂(AP-5)组和一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME)组,每组22只.采用SNI法制备神经病理性痛模型,假手术组仅分离不结扎.电针组电针大鼠损伤侧“委中”“环跳”穴30 min,1次/d,AP-5组予AP-5 0.7 mg· kg-1·d-1腹腔注射,L-NAME组予L-NAME 60 mg · kg-1·d-1腹腔注射,连续7d.造模前及SNI后10 d、16 d分别测定机械痛阈.激光共聚焦显微镜技术观察脊髓背角[Ca2+]i的荧光强度;Western blot和免疫组化法测定脊髓CaMKⅡ的表达.结果:与假手术组比较,SNI后10 d各组机械痛阈值均降低(P＜0.01);与模型组比较,电针组、AP-5组和L-NAME组SNI后16d时机械痛阈值均升高(P＜0.01,P＜0.05).与假手术组比较,模型组脊髓背角[Ca2+]i浓度与CaMKⅡ表达均升高(P＜0.01,P＜0.05);与模型组比较,电针组、AP-5组和L-NAME组脊髓背角[Ca2+]i浓度均被逆转(P＜0.05,P＜0.01),而CaMKⅡ的表达仅电针组被逆转(P＜0.05).结论:电针减轻大鼠神经病理性痛的机制之一,可能与其有效下调脊髓背角[Ca2+]i浓度及CaMKⅡ的表达,继而抑制其一系列后效应有关.

柴胡疏肝散对大鼠胃Cajal间质细胞活性及细胞内钙离子浓度的影响

目的 观察柴胡疏肝散含药血清对大鼠胃Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)活性及细胞内钙离子(Ca2+)浓度的影响.方法 按照血清药理学通法制备大鼠含药血清,将血清分为柴胡疏肝散组(浓度为5％、10％、20％)、多潘立酮组(10％)、空白组,急性分离并采用酶解法提取胃窦ICCs进行常规培养,免疫荧光染色法鉴定ICCs,MTT法测定ICCs对数生长曲线,以含药血清继续培养对数生长期的ICCs 3天后,通过CCK-8法检测ICCs活性,激光共聚焦显微镜进行Fluo-3荧光检测ICCs细胞内Ca2+变化,比较各组含药血清对大鼠胃窦ICCs生长的影响.结果 成功分离、培养和鉴定ICCs后,通过各组含药血清作用,与空白组同期比较,多潘立酮组、柴胡疏肝散组ICCs活性与细胞内Ca2+荧光强度均显著增强(P＜0.05);与多潘立酮组同期比较,10％、20％柴胡疏肝散组ICCs活性与细胞内Ca2+荧光强度均显著增强(P＜0.05);与5％柴胡疏肝散组同期比较,10％、20％柴胡疏肝散组ICCs活性(48、72 h)与细胞内Ca2+荧光强度均显著增强(P＜0.05).结论 柴胡疏肝散可以通过增强细胞内Ca2浓度促进ICCs活性,促进其分化生长.

钙依赖性突触的可塑性

突触前和突触后细胞内钙离子（［Ca2+］i）在短时程和长时 程突触的可塑性中，发挥着重要的信息传递作用。兴奋后残留［Ca2+］i ，可以 激发短时程突触增强。突触前［Ca2+］i可以影响被抑制的突触前膜囊泡的更新， 并准确编码突触前和突触后信息，产生截然相反的长时程突触修饰(LTP或LTD)。

重组轮状病毒NSP4蛋白对大鼠神经元细胞内钙离子的干扰及损伤作用

目的 研究轮状病毒非结构蛋白4的86~175位氨基酸肽段(amino acid residues 86 to 175 of nonstructural protein 4,NSP486-175)对大鼠神经元细胞内钙离子的干扰及损伤作用.方法 利用前期制备好的活性NSP486-175蛋白处理原代培养的大鼠神经元细胞,观察蛋白质处理后细胞的形态变化,检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;Fluo-3 AM标记细胞内游离的钙离子,蛋白质处理细胞后,用激光共聚焦显微镜检测神经元细胞内钙离子浓度变化.结果 正常生长的神经元细胞胞体丰满,呈不规则形或梭形,细胞突起数量较多并且较长,纯化的NSP486-175蛋白刺激后的大鼠神经元细胞出现明显的细胞病变效应,细胞密度稀疏,细胞胞体皱缩,细胞突起数量减少;蛋白质处理组细胞培养液中的LDH活性均增大;外源性添加NSP486-175能引起神经元细胞内荧光强度和分布改变.结论NSP486-175 对大鼠神经元细胞具有损伤作用,这可能与它导致细胞内钙库释放引起的钙离子浓度升高有关,为轮状病毒肠道外播散感染和致病提供了一定的理论依据.

防治缺血性脑损伤的新途径--抑制神经元凋亡

近年对细胞死亡机制尤其是对凋亡(apoptosis)的研究，使人们对迟发性神经元死亡有了新的认识。缺血后脑损伤的发生不仅与神经细胞坏死有关，而且与凋亡关系密切。目前认为迟发性神经元死亡即是凋亡。该理论在成年动物全脑［1］、局部脑缺血［2，3］、新生动物缺氧缺血性脑损伤［4，5］、人类心跳骤停后［1］、婴儿猝死综合征［6］、新生儿窒息［7］均已得到证实。随着分子生物学技术飞速发展，及凋亡机制的逐步阐明，通过抑制神经元凋亡防治脑缺血损伤成为研究脑保护的热门课题。本文重点介绍有关抑制神经元凋亡的前沿研究。 一、抑制凋亡防治缺血性脑损伤的可能性 脑缺血时细胞内钙离子超载、兴奋毒性、氧化应激都可使神经元走向凋亡［1］。凋亡程序启动后凋亡不是立即发生的，而是细胞内发生一系列复杂生物化学级联反应过程，包括信号传导，多种酶激活，基因表达和蛋白质合成。凋亡程序分为三个主要阶段：启动(initiation)、信号传递(commitment)和执行(execution）。启动能被上述多种刺激触发，而信号传递和执行过程似乎更为固定。细胞走向不可逆死亡的时间需数分钟至数小时或更长，细胞是否死亡受细胞内促凋亡和抗凋亡力量间微妙平衡的影响，即取决于何种信号占优势。故在凋亡过程开始执行前，可通过操纵有关因素影响结局。这就为损伤后治疗干预提供了一个"机会窗"，在这个窗内采取一定措施挽救走向凋亡的神经元，可能起到脑保护作用。

耳蜗中三磷酸腺苷的来源及其释放机制

大量的研究结果表明,三磷酸腺苷(ATP)是在耳蜗及前庭功能中起着重要作用的信号分子.ATP的信号传导通过有7种亚型离子型的P2x受体(P2xR1-7)和有11种亚型的代谢型P2y受体(P2yR1-11)来实现.P2xR亚型位于毛细胞顶端尤其是静纤毛处、Deiters细胞、Reissner膜、血管平滑肌、螺旋神经节神经元胞体及其与内外毛细胞形成突触的神经末端.P2γR表达于K(o)lliker器支持细胞,毛细胞和包含血管纹的耳蜗外侧壁[1].作为非选择性的阳离子通道,P2γR为钙离子进入细胞质提供了直接通道,同时P2γR也能激活磷脂酶C释放细胞内钙离子及影响腺苷酸环化酶活性[2].ATP由哪些细胞释放及通过何种机制释放,至今尚未有确切的定论.何珊等[3]已证实血管纹缘细胞内含有ATP的囊泡,国内外一些文献陆续报道血管纹缘细胞及Corti器支持细胞等有ATP存在的证据.但ATP的释放机制仍需进一步的研究.

左西孟旦治疗急性失代偿期心力衰竭50例疗效分析

心力衰竭是心脏各种结构性或功能性疾病导致心室充盈及（或）射血能力下降而引起的综合征。随着社会的老龄化，心力衰竭的发病率明显增高。当发生急性失代偿性心力衰竭时，通常以静脉应用利尿剂、血管扩张剂和正性肌力药物治疗，以恢复患者正常的血流动力学并缓解症状。传统的正性肌力药物（如多巴酚丁胺、米力农）是通过升高细胞内钙离子及环磷酸腺苷水平发挥强心作用，长期应用可增加心肌耗氧量，影响心肌舒张，诱发心律失常，增加患者的病死率。因此，临床上迫切需要一种既能增加心肌收缩力又不增加心肌耗氧量和心律失常发生率的药物。国外相关研究表明，左西孟旦作为一种新型Ca2+增敏剂，在增加左心室收缩功能的同时，还可改善左心室的充盈和舒张功能，具有不增加心率和心肌耗氧量的优点。与其他传统的正性肌力药物相比，能带来更多的血流动力学益处[1-3]。本研究通过应用左西孟旦治疗急性失代偿性心力衰竭，与多巴酚丁胺做比较，记录并分析左西孟旦的疗效与预后，综合评估左西孟旦的临床实用价值。

丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ所致主动脉内皮细胞游离钙离子及产生一氧化氮的影响

目的 通过观察猪主动脉内皮细胞在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下时,不同浓度和不同作用时间的丹参酮ⅡA(TSN)对血管内皮细胞分泌一氧化氮(NO)及其内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响、细胞内游离钙离子浓度的变化,探讨TSN对血管内皮细胞的保护作用.方法 采用硝酸还原法、免疫组织化学法,首先分别检测不同浓度(10-8～10-6 mol/L)和不同作用时间(1、6、24 h)的AngⅡ对培养的猪主动脉内皮细胞产生NO及其eNOS蛋白质表达的影响;然后比较在10-6mol/L的AngⅡ作用的不同点(0 h点为A组、6 h点为B组)加入不同浓度(10、50 mg/L)TSN,分别检测作用1、6、24 h后内皮细胞的NO生成和eNOS的蛋白质表达变化.用激光共聚焦扫描显像系统检测内皮细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)水平的变化.结果 (1)随着AngⅡ浓度的增加、作用时间的延长,内皮细胞NO的产生及eNOS的表达呈顺序下降(P＜0.01),表现出剂量、时间依赖性的负性作用.(2)TSN可抑制AngⅡ对内皮细胞分泌NO及eNOS表达的负性作用(P＜0.01),但尚不能恢复到空白对照组水平(P＜0.05);此作用与TSN的浓度无明显关系(P＞0.05).在TSN作用1、6 h,A组的抑制效应明显强于B组(P＜0.05);随着作用时间延长至24 h,两组间差异无显著性(P＞0.05).(3)AngⅡ可引起主动脉内皮细胞[Ca2+]i显著升高(P＜0.01),TSN可部分抑制AngⅡ诱导的内皮细胞[Ca2+]i升高(P＜0.05).结论 TSN可抑制AngⅡ对血管内皮细胞分泌NO以及细胞eNOS蛋白质表达的负性作用,可能通过多种途径对血管内皮细胞及其功能起到保护作用.

内质网应激在唯BH3蛋白Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用

目的：探讨内质网应激在唯BH3蛋白Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用。
　　方法：在体外原代培养出生1-3天的大鼠心肌细胞，并用抗ɑ-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。用脂质体转染法将Bim-siRNA转染心肌细胞，制作缺血缺氧损伤模型(转染48 h后给予缺氧12 h处理)。实验分组：（1）空白对照组；（2）缺氧组；（3）缺氧+阴性对照siRNA组；(4)缺氧+脂质体组；(5)缺氧+Bim-siRNA组。用MTT法观察细胞存活率；用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞内钙离子浓度变化情况；用Western blot检测心肌细胞中Bim及内质网应激标志分子 Caspase-12和InSP3蛋白的表达情况。

瞬时受体电位C1通道在糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞上的表达及对细胞内钙离子浓度的影响

目的 探讨瞬时受体电位C1通道(TRPC1)在糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞中的表达变化及对糖尿病冠状动脉功能影响的可能机制.方法 选用8~12周龄、体重(200±20)g的健康雄性SD大鼠160只,采用随机数字表法随机分为正常对照组(80只)和糖尿病组(80只).采用腹腔链脲佐菌素注射建立1型糖尿病大鼠动物模型;采用酶消化法急性分离正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞;采用Western blotting和实时荧光定量PCR分别测定正常组和糖尿病组冠状动脉TRPC1通道蛋白和基因的表达;采用细胞内钙离子荧光成像技术测定正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度及加入TRPC1通道阻滞剂SKF96365后细胞内钙离子浓度的变化;采用血管张力测定技术测定TRPC1通道阻滞剂SKF96365对糖尿病冠状动脉功能的影响.2组间比较采用t检验.结果 糖尿病组冠状动脉平滑肌细胞上TRPC1通道蛋白表达量是正常组的(1.456±0.081)倍(t=-2.210,P<0.05);糖尿病组TRPC1通道基因表达量为正常组的(2.198±0.251)倍(t=-3.864,P<0.05);糖尿病组较正常组钙离子浓度变化增加(1.217±0.044比0.869±0.029,t=-6.644,P<0.05),正常组加入SKF96365后较加入前钙离子浓度减低(0.067±0.039比0.842±0.020,t=15.726,P<0.05),糖尿病组加入SKF96365后较加入前钙离子浓度减低(0.195±0.028比1.217±0.043,t=-19.807,P<0.05);正常组和糖尿病组冠状动脉在ET-1收缩血管后,加入10μmol/L TRPC1通道抑制剂SKF96365,糖尿病组较正常组冠状动脉舒张的百分比明显升高[(91.6±2.6)%比(69.2±6.0)%,t=-3.529,P<0.05].结论 糖尿病时冠状动脉平滑肌细胞上TRPC1通道表达增加,细胞内钙离子浓度增加,导致血管收缩和功能紊乱,这可能是糖尿病患者易发生冠状动脉病变的机制之一.

氯沙坦和雷米普利及其联合应用对自发性高血压大鼠心肌细胞内钙离子浓度的影响

白藜芦醇对重症急性胰腺炎钙离子调节失衡的影响

本研究目的旨在探讨重症急性胰腺炎时细胞内钙离子调节失衡及白藜芦醇对其的影响.

Alzheimer病的抗β淀粉样蛋白治疗:期望还是现实

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)的主要病理学特征是老年斑、神经原纤维缠结和基底前脑胆碱能神经元退变[1].老年斑的主要成分是β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ),主要是Aβ42 [1].虽然AD的确切病因不明,但广泛认可的Aβ假说认为,Aβ启动了AD的发病过程,并在其发生、发展中起关键作用[1],其他病理生理变化,如tau蛋白过度磷酸化、蛋白激酶激活、氧化应激、自由基形成、细胞内钙离子稳态破坏、诱导凋亡、慢性炎症、补体激活等都是Aβ毒性作用的结果[2,3].脑中Aβ水平增加与突触丧失或功能下降相关[4],也与认知能力下降相关[5].现有证据提示,无论是可溶性Aβ原纤丝/寡聚体[6,7]还是不溶性Aβ纤丝[8]甚至斑块[9]都有神经毒性.因此,针对Aβ的治疗策略得到了广泛研究.这些策略可以概括为减少Aβ生成、防止Aβ聚集和形成纤丝、增加Aβ降解或清除.下面的内容将涵盖广义的抗Aβ的途径,但由于篇幅的限制,有些内容仅略述.

人类免疫缺陷病毒Ⅰ型慢病毒载体在脑梗死基因治疗中的应用

脑梗死的主要病理生理改变是能量耗竭、酸中毒、细胞内钙离子超载、氧自由基损伤、兴奋性氨幕酸毒性、炎症细胞因子损害等.

石斛散对人视网膜神经细胞钙离子变化的影响

目的 通过观察石斛散对人视网膜神经细胞内钙离子持续升高导致的细胞凋亡的保护作用,探讨其在治疗视网膜变性类疾病方面的作用及机制,为临床治疗同类疾病提供药理学依据.设计实验性研究.研究对象体外培养的人眼视网膜神经细胞.方法 利用体外培养的贴壁、伸展以及生长良好人视网膜神经细胞,用Fluo3/AM标记,通过激光共焦扫描显微镜动态观察和记录石斛散和维拉帕米对细胞内钙离子水平以及谷氨酸引起的钙超载的影响.主要指标细胞内钙离子水平(荧光强度).结果 加入谷氨酸后,荧光强度较原基础值增加88%;而石斛散可使荧光强度降低14.8%;维拉帕米降低幅度为57.3%.对先用谷氨酸干预的细胞,石斛散不能降低胞内钙离子水平,但预先用石斛散干预的细胞,谷氨酸升高胞内钙离子30%,与未干预组比较有统计学差异(P=0.000).结论 石斛散具有降低体外培养人视网膜神经细胞内钙离子的作用,同时可以抵抗谷氨酸损伤细胞后引起的胞内钙离子升高,提示其具有抵抗钙超载,抑制视网膜细胞凋亡的作用.(眼科,2006,15:408-410)

糖尿病大鼠胃窦平滑肌细胞内钙离子的变化及意义

目的探讨糖尿病大鼠胃窦平滑肌细胞内钙离子(Ca 2+)的改变及其意义.方法 50只大鼠随机分为对照组( n =20)和糖尿病模型组( n =30),用链尿佐菌素建立大鼠糖尿病模型,3个月后测定胃排空时间,并用流式细胞仪测定平滑肌细胞凋亡发生率,用激光共聚焦方法测定细胞内Ca 2+浓度.结果与对照组大鼠相比,模型组大鼠胃排空时间明显延长( P ＜0.01),平滑肌细胞凋亡发生率及细胞内Ca 2+浓度明显增加( P ＜0.01).结论糖尿病大鼠胃窦平滑肌细胞内Ca 2+增加,从而使平滑肌细胞受损,平滑肌功能发生相应改变.

内质网应激与炎症、肥胖、脂代谢和运动关系研究进展

内质网是广泛分布于哺乳动物细胞内的一种重要的亚细胞器,参与蛋白质的合成、修饰加工(包括糖基化、羟基化、酰基化、二硫键形成等)、折叠、组装以及向高尔基体的运输.同时内质网也是细胞内钙离子的储存场所,在细胞内具有重要的生理功能[1].内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是指由于各种原因导致的细胞内质网功能发 生紊乱的一种生理病理过程.多种因素如缺血缺氧、 钙离子失衡、糖耗竭、蛋白糖基化障碍或二硫键形 成异常等均可使内质网内稳态失衡,引起内质网应 激,激活未折叠蛋白反应.内质网应激过程中,机 体通过增加应激蛋白基因的表达,上调内质网伴侣 蛋白,抑制蛋白翻译和启动内质网相关蛋白降解,改善细胞生理状态,加强内质网的自我修复功能.内质网应激实际上是一种细胞的自我保护性功能.本文就近年来内质网应激热点领域的研究进展做一综述.

灵芝多糖肽对培养乳大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的 研究灵芝多糖肽(GLPP)对培养乳大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用.方法 用出生1～3d的SD乳大鼠进行心肌细胞原代培养,取培养3～4d的心肌细胞分为正常对照组、H/R组和GLPP给药组(12.5,25,50和100 mg· L-1).MTT法检测细胞存活率;电镜检测细胞形态改变和线粒体损伤;用Annexin V-FITC/PI双标记细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率;以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,用激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞内钙离子荧光强度变化;以活性氧(ROS)敏感的荧光探针2,7-二氢二氯荧光素(DCFH-DA)标记细胞,激光共聚焦显微镜下观察ROS含量变化.结果 与正常对照组比较,H/R组细胞存活率降低(P＜0.05);GLPP 12.5,25,50和100 mg· L-1组细胞存活率与H/R组比较明显增加(P＜0.01).与正常对照组比较,H/R组可见线粒体损伤,GLPP给药组可以减轻线粒体损伤.流式细胞仪检测结果表明,与正常对照组比较,H/R组细胞凋亡率增加(P＜0.01);GLPP组与H/R组比较细胞凋亡率明显减小(P＜0.01).与正常对照组比较,H/R组[Ca2+]i增加,细胞内ROS含量增高(P＜0.01);与H/R组比较,GLPP给药组细胞[Ca2+]i减少,细胞内ROS含量降低(P＜0.01).结论 GLPP对H/R损伤的乳大鼠心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与减少细胞内自由基含量和减轻细胞内钙超负荷有关.

左卡尼汀对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨左旋尼汀对心肌细胞凋亡的抑制作用及其可能的作用机制.方法 采用培养的新生乳大鼠心肌细胞制备H2O2 200 μmol· L-1氧化损伤模型.实验分为正常对照组、H2O2 200 μmol·L -1模型组、左卡尼汀(0.3,0.6及1.2 mmol· L-1)组、左卡尼汀1.2 mmol·L -1+ H2O2 200 μmol·L-1组.左卡尼汀0.3,0.6和1.2 mmol· L-作用1h后加入H2O2 200 μmol·L-1培养12 h,MTT法测定心肌细胞存活率,流式细胞仪测定心肌细胞的凋亡率,Western印迹法测定胱天蛋白酶3表达；用试剂盒方法检测过氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平.左卡尼汀1.2 mmol· L-1作用5 min后加入H2O2 200μmol·L-1,采用Till 阳离子测定系统监测5 min的心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化.结果 H2O2200 μmol·L-1作用于心肌细胞12 h能引起心肌细胞凋亡.左卡尼汀0.3,0.6和1.2 mmol· L-1能够不同程度的逆转由H2O2所致的损伤,使SOD活性明显增加,MDA水平明显降低(P＜0.01).左卡尼汀1.2 mmol· L-1作用强,能够明显降低心肌细胞胱天蛋白酶3表达(P＜0.01),明显降低H2O2引起的[Ca2+]i瞬间变化升高(P＜0.01),但对于H2O2引起无钙血清培养的心肌细胞静息钙升高无影响.结论 左卡尼汀能够抑制由H2O2引起的心肌细胞凋亡,该抑制作用可能与其保护细胞膜和减轻钙通道的损害、纠正[Ca2+]i瞬变失调及其抗氧化作用有关.