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银杏叶提取物改善AD模型鼠学习记忆功能的作用
目的:研究银杏叶提取物(EGb)对早老性痴呆(AD)模型鼠学习记忆等认知功能的影响和对基底前脑隔区胆碱能神经元的保护作用.方法:大鼠随机分成预防组、治疗组和对照组.各组切割右侧海马伞后分别用EGb(预防组及治疗组)和蒸馏水(对照组)灌胃连续6周.其中预防组在手术前先用EGb灌胃2周.各组在术后次日及灌胃6周后进行行为学检测.脑切片经Nissl、NOS组织化学和ChAT免疫组织化学染色,观察损伤侧内侧隔核和斜角带垂直支中NOS和ChAT阳性神经元的变化,并对ChAT阳性神经元作图像分析.数据分别用方差分析、SNK检验及x2检验作统计学处理.结果:行为学检测证实,EGb用药组AD模式鼠的学习记忆等认知功能较对照组明显改善,其中预防组效果又较治疗组为好;形态学检测证实,EGb用药组AD模式鼠损伤侧内侧隔核和斜角带垂直支中NOS、ChAT阳性神经元数目及ChAT阳性神经元的面积和周径等均优于对照组,预防组结果又优于治疗组.结论:EGb对AD模型鼠学习记忆等认知功能障碍有一定的改善作用,这一作用是通过保护基底前脑隔区胆碱能神经元而实现的,其中预防效果比治疗效果更优.
关键词： 银杏叶提取物(EGb) AD模型鼠 切割海马伞 隔区 胆碱能神经元 -
Aβ31-35和ApoE4对体外大鼠基底前脑神经元存活和生长的协同作用
目的探讨β-淀粉样蛋白(Aβ)和载脂蛋白(ApoE4)对基底前脑神经元存活和生长的影响,研究Alzheimer病(AD)发病的细胞分子机制. 方法体外培养基底前脑神经细胞,MTT法和免疫细胞化学方法结合体视学分析,观察Aβ31-35和ApoE4对基底前脑神经元存活及胞体和突起生长的影响. 结果 (1)MTT法测得的Aβ-31-35+ApoE4组的A值,与对照组比较明显减小(P＜0.05),说明神经元的存活力降低,存活数量减少;(2)Aβ31-35+ApoE4组的神经元胞体长径和短径明显低于对照组和ApoE4组(P＜0.05);平均突起长度也明显低于对照组、ApoE4组和A β31-35(10μmol/L)组(P＜0.01);(3)Aβ31-35(20μmol/L)组平均突起长度比对照组、ApoE4组和Aβ31-35(10μmol/L)组明显减小(P＜0.01);(4)Aβ31-35+ApoE4组和Aβ31-35(20μmol/L)组的胆碱能神经元长突起长度、总突起长度及平均突起长度均明显低于对照组(P＜0.01);且这两组的ChAT阳性神经元的胞体平均灰度也明显低于对照组(P＜0.05),说明ChAT的活性下降.单独ApoE4对基底前脑神经元的存活和生长均无明显影响. 结论 Aβ31-35+ApoE4比单独Aβ31-35对神经元存活及胞体和突起生长的抑制作用要强,结果提示ApoE4可能有协同Aβ31-35的神经毒性效应的作用.
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胰岛素基因增强结合蛋白1基因修饰的神经干细胞向胆碱能神经元分化的实验研究
目的 探讨大鼠胰岛素基因增强结合蛋白1(Islet-1)基因是否有诱导神经干细胞(NSCs)向胆碱能运动神经元分化的能力.方法 用Islet-1基因重组逆转录病毒载体转导NSCs后,用免疫荧光组织化学染色方法检测Islet-1在NSCs内的表达;体内、体外实验观察导入Islet-1基因的NSCs向乙酰胆碱转移酶(ChAT)阳性细胞分化的情况.结果 在体外分化实验中观察到,转导Islet-1基因的NSCs向胆碱能运动神经元分化的细胞数明显多于对照组;体内移植实验发现,导入Islet-1基因的NSCs在体内可以向ChAT阳性细胞分化.结论 Islet-1基因有诱导NSCs向胆碱能运动神经元分化的能力.
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Lhx8在海马胆碱能神经再生中的作用
目的 探讨切割穹隆海马伞大鼠海马胆碱能神经再生过程中Lhx8的作用.方法 72只SD大鼠随机分成4组,每组18只.所分的4组分别为:对照组(未做任何处理),切割组(切割右侧穹隆海马伞),过表达组(右侧海马齿状回中注射Lenti6.3-Lhx8慢病毒)及切割联合过表达组(右侧海马齿状回中注射Lenti6.3-Lhx8慢病毒并切割右侧穹隆海马伞).28d后每组各取6只分别制备脑冷冻切片行免疫荧光检测,提取海马总RNA行Real-time PCR,提取海马蛋白行Western blotting检测.结果 与对照组相比,切割组、过表达组和切割联合过表达组中Lhx8 mRNA和蛋白水平均显著上调,以切割联合过表达组中上调为显著,组间比较差异均有统计学意义;切割组胆碱乙酰转移酶(ChAT) mRNA水平与对照组相比无统计学差异,过表达组和切割联合过表达组中ChATmRNA显著上调,且以切割联合过表达组中上调为显著;切割组、过表达组和切割联合过表达组中均检测到ChAT蛋白,组间比较差异有统计学意义;切割组、过表达组和切割联合过表达组海马齿状回门区和颗粒下层中均能检测到新生的Lhx8阳性的胆碱能神经元,且以切割联合过表达组多,组间比较差异均有统计学意义.结论 上调Lhx8的表达能促进海马中神经干细胞向胆碱能神经元分化,Lhx8可能与海马胆碱能神经再生有关.
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多奈哌齐(胆碱酯酶抑制剂)治疗阿尔茨海默病新进展
阿尔茨海默病(Alzheimer di sease，AD)是一种以组织选择性损害和特征性病理改变为基础的进行性痴呆，其特点是记忆力损害(学习新知识或回忆过去学过的知识的能力受损)和至少有一种其他认知障碍(失语、失用、失认和行为功能障碍)。AD的神经病理学基础还不十分明确[1]，但目前认为是由于大脑半球基底团及其皮层纤维突触前胆碱能神经元变性，使乙酰胆碱缺乏所致[2]。基于这种学说开发胆碱酯酶抑制剂是目前改善本病胆碱能缺陷与症状的成功的方法，这类药物抑制乙酰胆碱的分解，使其在突触间隙中贮存的时间更长，以维持脑内乙酰胆碱的含量，达到对症治疗的目的。
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高压氧对血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经元的影响及行为学疗效
目的研究高压氧(HBO)治疗对血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经元及行为的影响.方法制作血管性痴呆大鼠模型,随机分成对照组及治疗组,HBO治疗30 d后,用Morris水迷宫检测大鼠空间记忆能力,免疫组织化学染色检测海马CA1区胆碱能神经元数目的变化.结果治疗组大鼠空间记忆能力明显提高,海马CA1区胆碱能数目较对照组明显增加.结论高压氧对血管性痴呆大鼠有明显治疗作用.
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移植神经干细胞对血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经元的影响
目的研究神经干细胞移植后血管性痴呆(VD)大鼠海马胆碱能神经元的变化.方法制作VD大鼠模型,随机取用VD大鼠模型12只,分移植组6只,痴呆组6只.另外,取假手术组6只.新生大鼠脊髓神经干细胞经分离培养和纯化,移植于大鼠海马.术后8周,免疫组织化学及荧光染色检测神经干细胞能否存活、迁移及3组大鼠海马CA1区胆碱能神经元数目的变化.结果移植组大鼠海马CA1区胆碱能神经元数目较痴呆组明显增多.结论神经干细胞移植后能迁移至海马,分化或诱导海马产生具有ChAT活性神经元,所产生的ChAT活性神经元可能就是胆碱能神经元.
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海马胆碱能神经元刺激肽促进海马胆碱能神经元再生的研究
目的:探讨海马胆碱能神经元刺激肽(HCNP)对切割穹窿海马伞后海马胆碱能神经元的促进作用.方法:36只SD大鼠随机分成两组,切割右侧穹窿海马伞后,术后连续5d腹腔注射BrdU,经侧脑室分别注射HCNP和人工脑脊液(ACSF),每3天1次,共6次.切割术前、术后及治疗术后行Morris水迷宫行为学测试;术后第35天,灌注取脑行溴脱氧尿苷(5-BrdU)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫荧光检测;提取总RNA,RT-PCR检测ChAT mRNA表达量;提取总蛋白,Western blot检测ChAT蛋白表达.结果:切割穹窿海马伞后,两组大鼠平均逃避潜伏期(AEL)均明显增加,记忆力下降,经过治疗后,实验组大鼠AEL显著缩短,对照组无改善,两组AEL有显著性差异(P＜0.05);HCNP组海马齿状回颗粒下层可见较多BrdU阳性细胞及海马ChAT阳性神经元,ACSF组仅见少量BrdU阳性细胞,未见ChAT阳性神经元;RT-PCR结果显示,HCNP组ChAT mRNA约为ACSF组2倍(P＜0.01);Western blot结果表明,实验组ChAT蛋白相对表达量为0.412±0.018、对照组为0.218±0.017,实验组明显高于对照组,二者存在显著性差异(P＜0.01).结论:HCNP可促进海马齿状回颗粒下层神经干细胞的增殖及其向胆碱能神经元分化.
关键词： 海马胆碱能神经元刺激肽 海马 神经干细胞 神经元 胆碱能神经元 -
脑源性神经营养因子与缺血性脑卒中康复
缺血性脑卒中是在全球成人中患病率、死亡率、致残率都很高的疾病,因而其康复治疗十分重要,中国传统医学与现代康复治疗手段的结合已成为缺血性脑卒中康复治疗的重要发展方向[1].脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)是继神经生长因子(nerve growth factor,NGF)后第二个被发现的神经营养因子(neurotrophic factors,NTFs)家族成员,能支持多种神经元生存、发育、分化及修复.研究表明,BDNF在体内能营养某些对NGF无反应的感觉神经元,对胆碱能神经元、多巴胺能神经元、运动神经元等多种神经亚群具有重要的生物学功能,对脑卒中、脊髓损伤、神经系统退行性疾病及其他神经系统疾患所致的神经损伤具有潜在治疗作用[2].
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肝硬化大鼠肠壁肌间氮能、胆碱能神经的变化
目的:探讨肝硬化大鼠肠壁肌间神经丛氮能、胆碱能神经元及神经纤维的变化.方法:30只SD大鼠随机分为肝硬化组和正常组,采用一氧化氮合酶(NOS)及乙酰胆碱酯酶(AchE)组织化学染色技术,在铺片上观察肝硬化大鼠肠壁肌间氮能、胆碱能神经形态特征并对其分布进行定量研究.结果:肝硬化大鼠肠壁肌间NOS阳性神经丛排列杂乱,染色模糊,神经元数量减少;Ach阳性神经纤维明显变细.模型组大鼠肠壁肌间氮能、胆碱能神经分布的密度均显著低于对照组(P＜0.05).结论:肝硬化大鼠肠壁肌间氮能、胆碱能阳性神经受到损伤.
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氨基胍对饥饿大鼠肠道胆碱能神经元及肠动力功能的保护
目的:观察饥饿大鼠肠道胆碱能神经元和肠传输功能的变化,探讨氨基胍对肠动力功能保护的神经机制.方法:90只♂SD大鼠随机分为正常对照组(C组,n=10)、全饥饿组(S组,n=40)和氨基胍(aminogManidime AG)组(A组,n=40),S、A组随机分为饥饿3、5、7、9 d亚组(n=10).A组给予AG 150 mg/(kg·d)腹腔注射.采用葡聚糖蓝染色法测定各组肠道色素推进比率,AchE组织化学染色法测定各组回肠肌间神经丛胆碱能神经元分布密度.结果:S、A组各时间点肠道色素推进率较对照组明显降低(P<0.05或0.01),并随饥饿时间延长呈进行性下降,均于9 d达低点,A组在饥饿后3、5、7 d较S组高且有显著性差异(52.2%±4.7%,49.8%±5.6%,43.3%±6.4% vs47.5%±4.2%,42.3%±5.4%,36.6%±5.2%,均P<0.05),饥饿后9 d A组较S组无显著差异.S、A组各时间点胆碱能神经元分布密度较对照组明显降低(P<0.01),并随饥饿时间延长呈进行性下降,均于9 d达低点,A组在饥饿后5、7 d较S组高且有显著性差异(均P<0.05),饥饿后3、9 dA组较S组无显著差异.结论:饥饿后早期给予氨基胍能够一定程度减轻肠胆碱能神经元损伤,改善肠传输功能,发挥肠神经保护作用.
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乙酰胆碱受体抗体IgG对大鼠隔斜角带核胆碱能神经元损害的研究
目的研究乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)IgG 对大鼠隔斜角带核区胆碱能神经元的损害作用. 方法大鼠一侧隔斜角带核区注入重症肌无力(MG)患者 AChRAb IgG或等量健康人IgG,14 d后应用免疫组化方法测定隔斜角带核A、B、C 3区胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性神经元数目.结果大鼠内侧隔斜角带核区ChAT阳性细胞数实验组注射侧明显少于非注射侧(P<0.01),实验组注射侧明显少于对照组注射侧(P<0.001),实验组非注射侧明显少于对照组非注射侧(P<0.05);实验组注射侧与非注射侧ChAT阳性细胞比率明显少于对照组注射侧与非注射侧的比率(P<0.01).结论内侧隔斜角带核区定向注射 AChRAb IgG可损害该处胆碱能神经元,使其明显减少,且其毒性效力存在一定的距离效应.表明 AChRAb可被动转移损伤大鼠隔斜角带核区胆碱能神经元.
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Alzheimer病的抗β淀粉样蛋白治疗:期望还是现实
阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)的主要病理学特征是老年斑、神经原纤维缠结和基底前脑胆碱能神经元退变[1].老年斑的主要成分是β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ),主要是Aβ42 [1].虽然AD的确切病因不明,但广泛认可的Aβ假说认为,Aβ启动了AD的发病过程,并在其发生、发展中起关键作用[1],其他病理生理变化,如tau蛋白过度磷酸化、蛋白激酶激活、氧化应激、自由基形成、细胞内钙离子稳态破坏、诱导凋亡、慢性炎症、补体激活等都是Aβ毒性作用的结果[2,3].脑中Aβ水平增加与突触丧失或功能下降相关[4],也与认知能力下降相关[5].现有证据提示,无论是可溶性Aβ原纤丝/寡聚体[6,7]还是不溶性Aβ纤丝[8]甚至斑块[9]都有神经毒性.因此,针对Aβ的治疗策略得到了广泛研究.这些策略可以概括为减少Aβ生成、防止Aβ聚集和形成纤丝、增加Aβ降解或清除.下面的内容将涵盖广义的抗Aβ的途径,但由于篇幅的限制,有些内容仅略述.
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不同浓度的Aβ(25～35)对原代培养的大鼠基底前脑胆碱能神经元生长存活及TrkA表达的影响
阿尔茨海默病(AD)是一种中枢胆碱能神经系统退行性变引起的以进行性痴呆为主要临床特征的老年性疾病.
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腹部外科手术操作对大鼠肠道运动功能和肠神经系统的影响
目的 观察不同的腹部外科手术操作对大鼠肠道运动功能以及肠神经系统内乙酰胆碱酯酶(AchE)神经元和一氧化氮合酶(NOS)神经元的影响,探讨腹部外科手术对肠道运动功能影响的神经机制.方法 48只SD大鼠随机分为单纯开腹组、肠道按摩组、肠道手术组和正常对照组(n=12),各组术后灌服炭末,测定小肠炭末推进率,同时取各组相同部位的小肠和大肠,制作肠肌间神经丛铺片标本,采用AchE和NADPH-d组化染色观察AchE、NOS阳性神经元的分布密度和染色情况.结果 炭末推进率(%)肠道手术组、肠道按摩组低于单纯开腹组和正常对照组(P＜0.01),肠道手术组低于肠道按摩组(P＜0.05),单纯开腹组与对照组比较降低不明显(P＞0.05);与正常对照组比较,肠道手术组、肠道按摩组的小肠和大肠肌间神经丛内AchE阳性神经元数量(个/200倍视野)减少(P＜0.01),阳性表达减弱,NOS阳性神经元数量增多(P＜0.01),阳性表达增强,节间束纤维粗大,而单纯开腹组的变化不明显;与肠道按摩组比较,肠道手术组小肠和大肠肌间神经丛内的NOS阳性神经元数量较多(P＜0.01),胞体大而染色深,节间束纤维较粗大,而AchE阳性神经元数量和染色的差异不明显.结论 腹部外科手术在一定程度上会影响或损伤肠神经系统的胆碱能和氮能神经,这可能是腹部外科手术后发生肠道运动功能障碍的神经机制之一.
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基底前脑在睡眠-觉醒调节中的作用研究进展
基底前脑不仅在运动、注意行为和学习记忆中发挥重要作用,而且在睡眠-觉醒行为中扮演着重要的角色.虽然基底前脑神经元存在较强的异质性,但主要以胆碱能、y-氨基丁酸(y-aminobutyric acid,GABA)能以及谷氨酸能3种类型的神经元为主.本文综述基底前脑这3种不同神经递质类型的神经元对睡眠-觉醒行为调节作用的研究进展.基底前脑胆碱能神经元具有促进皮层激活和睡眠-觉醒时相转换的作用.基底前脑皮层投射型GABA能神经元接收局部胆碱能和谷氨酸能神经元投射,发挥中枢促觉醒和觉醒维持作用;而中间型GABA能神经元可能通过抑制附近的觉醒相关型神经元的活动来发挥促睡眠作用.基底前脑谷氨酸能神经元既可作用于局部觉醒相关型神经元,亦有可能通过向皮层的直接投射通路发挥促觉醒作用.
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毒蕈碱型受体对痛觉的调制和阿片类药物依赖的机制
乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)作为外周和中枢神经系统胆碱能神经元的化学性神经递质,广泛分布于生物体内.Ach在体内除参与学习、记忆、睡眠、觉醒、体温等生理功能调节外,近几年实验研究表明Ach通过毒蕈碱型(muscarinic,M)受体也参与脊髓上和脊髓水平的疼痛调制和阿片类药物依赖的形成.
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一种Alzheimer痴呆小鼠模型的建立
目的 建立Alzheimer痴呆(Alzheimer dementia, AD)小鼠模型. 方法 C57BL/6小鼠基底巨细胞核(NBM)注射Ibotenic 酸制成AD模型.8周后应用8方向迷宫评价小鼠痴呆程度,应用免疫组织化学染色观察NBM和脑皮质胆碱能系统和β-淀粉样蛋白表达改变. 结果 NBM内胆碱能神经元明显减少,5-羟色胺(5-HT)神经元和GABA神经元轻度减少.同侧额、顶叶皮质内胆碱能神经纤维显著减少,5-HT神经轴突轻度减少,伴大量β-淀粉样蛋白表达,GABA神经元则无明显变化.NBM毁损小鼠的工作记忆错误显著升高,小鼠的近事记忆明显损害. 结论 NBM注射Ibotenic 酸能建立一种可靠的AD小鼠模型.
关键词： 基底巨细胞核 胆碱能神经元 Alzheimer痴呆模型 小鼠 -
胆碱能神经元及其受体与阿尔茨海默病的关系
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD),是与年龄相关的进行性记忆丧失和高级认知功能减退的神经系统退行性疾病.其病理变化主要表现为:细胞外聚集的β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)沉积形成的老年斑块、细胞内高度磷酸化Tau蛋白所致的神经元纤维缠结(NFT),以及前脑基底胆碱能神经元的显著丢失.
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β-淀粉样蛋白在阿尔茨海默病中的研究进展
随着人类寿命的普遍延长,阿尔茨海默病(AD)的发病率也逐渐增加.AD患者大脑中老年斑的主要成分β-淀粉样蛋白可能是该病发病机制中的起始因素和关键环节.因此,对于β-淀粉样蛋白的产生、代谢及其如何引起AD的机制和临床防治研究已经成为国内外关注的热点.本文就近年来β-淀粉样蛋白在AD中的研究进展予以综述.
