交通相关的细颗粒物(PM2.5)对6T-CEM细胞凋亡的影响

目的 探讨交通相关的细颗粒物PM2.5对6T-CEM（人T淋巴细胞白血病细胞株）增殖抑制以及诱导凋亡的情况.方法 采用四甲基偶氮唑兰(MTT)比色法测定不同浓度PM2.5对细胞24和48 h增殖功能的影响；FITCAnnexinV/PI染色流式细胞仪测定交通相关细颗粒物染毒6T-CEM细胞的早期凋亡和坏死；罗丹明123法检测PM2.5对线粒体膜电位的影响.结果 160、320和800 μg/ml PM2.5染毒细胞24 h与320和800 μg/ml PM25染毒细胞48 h可抑制细胞增殖功能,与对照组比较有统计学意义(P＜0.05)；经FITC-Annexin V/PI染色流式细胞仪测定,320 μg/mlPM2.5染毒细胞24h后,细胞早期凋亡比生理盐水组升高,20、80和320 μg/ml PM2.5染毒细胞48 h,细胞早期凋亡比生理盐水组升高,320 μg/ml PM2.5染毒细胞24和48 h,细胞坏死比生理盐水组升高,差异有统计学意义(P ＜0.05); 160和320 μg/ml PM25染毒细胞24h与80、160和320 μg/ml PM2.5染毒细胞48 h线粒体膜电位与对照组比较有统计学差异(P＜0.05).结论 交通相关的细颗粒物PM2.5对6T-CEM增殖功能有抑制作用,对细胞凋亡有一定的诱导作用,线粒体途径参与凋亡.

高温诱导ECV-304细胞凋亡及对其线粒体膜电位的影响

有文献报道高温诱导细胞凋亡有两个独特的模型: 慢死亡和快死亡.慢死亡是指细胞受热后,在失去再生能力之前能够维持生理活动几天.快死亡是指细胞受热后几天内发生的死亡,其特征是细胞脱离其培养表面.关于快死亡的机制可能与热诱导细胞凋亡有关[1].目前随着对凋亡机制研究的深入,已从细胞质膜转向线粒体.线粒体是促进能量转换、参与细胞凋亡的重要细胞器.由于细胞膜上各种生物泵的作用,使细胞膜内外维持着不同梯度的离子浓度,产生了线粒体膜电位.几乎所有诱导剂引起的各种类型的细胞凋亡均出现线粒体膜电位下降,提示线粒体膜电位下降为早期凋亡[2] .本文建立一种高温诱导ECV-304细胞凋亡的方法,并应用流式细胞仪采用AV-FITC/ PI 双染法和荧光探针JC-1 法,对高温诱导ECV-304细胞凋亡及对其线粒体膜电位的影响进行分析.

原代培养大鼠海马细胞随培养时间早期凋亡和死亡增加

神经细胞在原位组织已经完成分裂和分化,培养的神经元将不会分裂、增殖,其数目也会随着培养时间的延长而减少,但目前还没有见到对原代培养过程中神经细胞凋亡以及死亡情况的研究.利用Annexin Ⅴ-PI双染法可以将凋亡早期与凋亡晚期和死亡细胞区分开,本研究将分别收获第0、1、3、5、8、11及18d细胞进行Annexin Ⅴ-PI染色,利用流式细胞仪来研究在原代培养过程中神经元的早期凋亡和死亡.

α-干扰素对活化的肝星状细胞早期凋亡的影响

目的:研究IFN-α对活化的大鼠肝星状细胞(HSC)凋亡的影响,进一步探讨IFN-α抗肝纤维化的机制.方法:将体外培养大鼠HSC分别给予不同浓度的IFN-α作用24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝实验(MTT)测定活细胞数及应用流式细胞仪(flow cytometry)AnnexinV和PI双染方法将早期凋亡与中晚期凋亡和死细胞区分开,从而测定HSC的早期凋亡情况.结果:MTT实验观察到IFN-α作用于大鼠活化的HSC后,作用组活细胞数目减少,1×107及1×108U/L两个作用浓度组与对照组的A值比较有显著性差异(t=2.82,5.44,均P＜0.05).流式细胞仪结果示HSC的早期凋亡率随干扰素浓度的增加而提高,1×107及1×108 U/L两个作用浓度组与对照组比较早期凋亡率有显著性差异(t=4.31,5.07,均P＜0.05).结论:诱导肝星状细胞早期凋亡可能是IFN-α抗肝纤维化的机制之一.

抗坏血酸盐、过氧化氢酶改善冻融人精子质量的研究

目的 探讨抗氧化剂--抗坏血酸盐、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)对冻融人精子质量的影响.方法 30份健康可生育男性精液分别添加改良人精子冷冻保护液,依所添加的抗氧化剂及终浓度分7组:未添加者为阴性对照组,余为抗坏血酸盐300、600 μmol/L组,CAT 200、400 U/ml组,SOD 200、400 U/ml组.检测各组精液冻融前后常规参数,冻融后活性氧(reactive oxidative species,ROS)水平、线粒体膜电位(△Ψm)和早期凋亡事件(Ann+PI-%、Ann-PI-%).结果 ①冻融后各组a+b级精子均比冷冻前下降(P＜0.01),但抗坏血酸盐300 μmol/L组与2种浓度的CAT组a+b级精子(43.5±10.0)%、(43.9±8.2)%、(44.3±9.4)%下降少于对照组(38.1±7.9)%,P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01;相对应组的精子活率复苏率分别为(67.2±14.1)%、(68.4±13.8)%、(68.8±14.8)%,也高于对照组(58.8±10.1)%,P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01;而这3组ROS水平(29.6±12.8)%、(30.0±11.2)%、(31.1±11.0)%则分别低于对照组(36.7±17.0)%,P值均＜0.05.②2种浓度CAT组的△Ψm(34.6±12.9)%、(32.9±11.2)%均高于对照组(27.5±10.8)%,P＜0.01、P＜0.05;而且低浓度抗坏血酸盐组和CAT组凋亡(Ann+PI-%)的精子(15.3±3.0)%、(15.6±2.2)%,以及未出现凋亡(Ann-PI-%)的活精子(14.0±3.8)%、(13.2±2.6)%分别低于对照组(18.1±3.9)%(P值均＜0.01)和高于对照组(10.1±4.0)%(P值均＜0.01).余实验组的检测指标与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).③冻融后各实验组a+b级精子,抗坏血酸盐600 μmol/L组、2种浓度CAT组、SOD 400 U/ml组的△Ψm,以及抗坏血酸盐组、CAT 200 U/ml组、SOD 200 U/ml组的Ann-PI-%均分别与对应组的ROS水平呈负相关;而抗坏血酸盐组、CAT 200 U/ml组的Ann+PI-%则与对应组的ROS水平呈正相关,P＜0.05或P＜0.01.结论 在精液冷冻保护剂中添加一定浓度的抗坏血酸盐、CAT可改善冻融人精子质量.

抗凋亡细胞因子治疗急性放射病的实验研究进展

骨髓造血干细胞及各系造血祖细胞因其高度的增殖活性而成为辐射攻击的主要靶细胞,以往人们利用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等刺激残存定向造血干/祖细胞(HSPCs)增殖的造血因子作为急性辐射损伤(ARI)治疗研究的重点且卓有成效~([1]).随着科学的发展和研究的进一步深入,发现照射后造血细胞早期凋亡和坏死是导致体内造血干/祖细胞缺失的关键因素,不仅造血细胞而且非造血组织细胞在照射后都会发生凋亡~([2]).

双歧杆菌完整肽聚糖体外诱导大肠癌Lovo细胞凋亡的实验研究

目的 探讨双歧杆菌表面分子完整肽聚糖(whole peptidoglycan,WPG)的抗肿瘤作用及其机制.方法 体外培养大肠癌Love细胞,应用MTT法、流式细胞术观察WPG对大肠癌Lovo细胞的增生抑制作用及对细胞的凋亡诱导作用.结果 经WPG处理过的大肠癌Lovo细胞生长被抑制,且具有剂量和时间依赖性;早期凋亡细胞明显增加,与空白组比较有显著性差异(P<0.01).结论 WPG能够抑制大肠癌Lovo细胞的增生,其机制与诱导癌细胞早期凋亡有关.

4'-甲醚-黄芩素诱导绒毛膜癌JAR细胞凋亡的实验研究

目的 探讨4'-甲醚-黄芩素(4-MS)对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡的相关机制.方法 应用MTT法、激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞术和实时定量PCR法,体外观察4-MS对JAR细胞的影响.结果 不同质量浓度(10、20、40 mg/L)的4-MS对JAR细胞均有增殖抑制作用,呈剂量依赖,作用72 h后其增殖抑制率分别为(14.14±0.75)%、(34.34±2.99)%、(61.11±2.99)%(P＜0.01);4-MS作用72 h后细胞内Ca2+浓度分别为81.3±6.7、103.3±5.9、120.7±11.0,与对照组相比差异有显著性(P＜0.05).40 mg/L 4-MS作用12、24、36 h后其早期凋亡率分别为(2.36±0.19)%、(4.22±2.44)%、(7.34±0.56)%,明显高于对照组(P＜0.01).20、40 mg/L 4-MS作用48 h后hTERT mRNA的表达量为0.05±0.01和0.02±0.01,明显低于对照组(P＜0.01).结论 4-MS能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖,诱导凋亡,其机制与提高细胞内Ca2+浓度、降低hTERT mRNA的表达有关.

"细胞凋亡信号传导途径及其检测方法"教学探讨

《细胞凋亡信号传导途径及其检测方法》课程主要是针对生物医学研究生开设的一门课程,其终目的是协助他们完成细胞凋亡方面的科研工作.通过对《细胞凋亡信号传导途径及其检测方法》课程教学进行探讨,针对课程教学中存在的问题,提出相应的教学建议和改进措施,其目的是确保教学质量,提高教学效果.

健脾化瘀方对肝癌HepG2细胞生物行为学的影响

目的:本研究旨在探讨:①健脾化瘀方体外对人肝癌细胞株HepG2增殖、黏附和侵袭的生物行为学影响；②健脾化瘀方体外对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响.方法:①采用MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭迁移实验,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2增殖、黏附和侵袭的影响；②利用流式细胞仪,AnnexinV/PI双染色法,研究不同浓度健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2早期凋亡的诱导作用.结果:①健脾化瘀方有抑制人肝癌细胞株HepG2增殖的作用,并呈一定的浓度依赖性:同一时间不同浓度各组细胞的生长抑制率有明显差异(P＜0.01).②健脾化瘀方高、中浓度(2、1mg/mL)作用HepG 2细胞40、60和120min时,细胞的黏附能力明显降低(P＜0.01).健脾化瘀方作用HepG 2细胞24h后,侵袭的细胞数减少(P＜0.05).③健脾化瘀方对人肝癌细胞HepG2作用48h后,有诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用(P＜0.05).结论:①健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2的增殖具有抑制作用；②健脾化瘀方能抑制人肝癌细胞株HepG2的黏附能力和侵袭能力；③健脾化瘀方有诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用.

C2-神经酰胺诱导大鼠脑胶质瘤细胞C6的早期凋亡作用

目的:研究外源性C2-神经酰胺对大鼠脑胶质瘤细胞C6活力的抑制作用以及早期凋亡诱导作用.方法:采用MTT法测定C2-神经酰胺对C6细胞活力的影响;倒置荧光显微系统观察细胞形态变化;Annexin Ⅴ/PI双染色流式细胞术对细胞早期凋亡进行定量分析.结果:C2-神经酰胺可显著抑制C6细胞的活力,IC50为 2.2×10-5 mol·L-1;荧光染色可见核浓染等细胞凋亡特征形态改变;流式细胞术分析表明C2-神经酰胺可诱导C6细胞发生早期凋亡作用,且凋亡百分率呈时间及浓度依赖性,C2-神经酰胺2×10-5 mol·L-1 处理 24 h 后平均早期凋亡率高达 49.3%.结论:C2-神经酰胺主要通过诱导早期细胞凋亡对大鼠脑胶质瘤C6细胞发挥细胞毒作用,提高神经酰胺水平有望成为肿瘤化疗的新途径.

转染c-kit基因对A375细胞增殖和凋亡的影响

目的:明确转染c-kit基因对A375细胞增殖、凋亡的影响.方法:体外培养人恶性黑素瘤A375细胞,分为A组(实验组)、B组(转染空病毒载体的阴性对照组)、C组(空白对照组).转染后采用RT-PCR检测c-kit mRNA表达情况,在倒置相差显微镜观察A375细胞分化及形态,MTT比色分析法检测对A375细胞增殖抑制的影响,流式细胞分析术,Anexin-v-PI双染色检测细胞早期凋亡的变化.结果:转染后A组细胞出现不同程度的皱缩、破裂,漂浮细胞增多.RT-PCR半定量分析结果显示,A组扩增出c-kit cDNA 230 bp大小片段,而B、C组则没有扩增出相应大小的片段.转染后A组OD值低于B、C组(P<0.05),A组早期凋亡率高于B、C组有显著性差异(P<0.05).结论:转染c-kit后A375细胞增殖被抑制,早期凋亡增加.

重组人血管内皮抑制素对体外培养血管瘤内皮细胞的影响

重组人血管内皮抑制素可以直接作用于血管内皮细胞，能有效地抑制新生血管，具有较好的疗效和安全性，临床主要运用于治疗肺癌，但尚未见治疗血管瘤报道。本研究将重组人血管内皮抑制素作用于体外培养的血管瘤血管内皮细胞，观察对血管瘤内皮细胞增殖的抑制作用及其早期凋亡的影响并探讨其作用机制，为血管瘤的治疗提供实验依据。

人牙周膜成纤维细胞的培养及牵张应变诱导凋亡研究

目的:探讨人牙周膜成纤维细胞的分离、培养及在牵张应变作用下发生早期凋亡的情况.方法:刮取健康人前磨牙牙周膜,进行牙周膜成纤维细胞的分离、培养及生长曲线描绘.经3～4代传代培养后,对细胞加载1％～20％的牵张应变,加载时间分别为30 min,1h、6h、12h然后通过流式细胞仪检测Annexin V- FITC(异硫氰酸荧光素)及激光扫描共聚焦显微镜进行细胞的早期凋亡鉴定.结果:人牙周膜成纤维细胞传代到12代以后,细胞逐渐呈衰老生状,胞体变大,细胞生长缓慢.人牙周膜成纤维细胞的凋亡率在30 min组低于对照组,但两者间无统计学差异.在6h内,人牙周膜成纤维细胞的凋亡情况随加载时间和加载应力的增加而增加(P＜0.05).在12 h时所有组的细胞凋亡均减少.结论:人牙周膜成纤维细胞的使用好在12代以内,尤其是3～4代细胞的活力、增殖能力较好.牵张应变可以诱导细胞发生早期凋亡.

参麦注射液对急性缺氧-复氧心肌细胞凋亡的影响

目的:观察参麦注射液对急性缺氧-复氧后心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制.方法:采用出生3天的Wastar大鼠,原代培养心肌细胞.实验分为3组:(1)正常组:心肌细胞不做任何处理,按正常条件培养(含10%胎牛血清的低糖DMEN培养液,青霉素100U/L,链霉素100 mg/L,37℃、5%CO2、91%湿度环境培养).(2)缺氧-复氧组:将心肌细胞进行缺氧-复氧处理.(3)参麦注射液组:心肌细胞复氧同时加入5 mL/L(1g/L)参麦注射液15 min.模型使用化学缺氧法,将Na2S2O4加入无糖、无氧的D-Hank's液中,制成缺氧溶液(pH 7.0-7.4),替换正常培养液使心肌细胞缺氧5min,再将缺氧液换成正常含血清培养液孵育15 min模拟再给氧,复制心肌细胞急性缺氧-复氧(anoxia-reoxygenation,A/R)模型.然后以Annexin V-FITC/PI双染色法,用流式细胞仪检测细胞早期凋亡百分率;激光扫描共聚焦显微镜观察Fluo-3负载的心肌细胞内钙离子水平的变化.

APOE基因亚型及其短肽COG1410对神经细胞损伤后早期凋亡的影响

目的 探讨载脂蛋白E(APOE代表基因,apoE代表蛋白)亚型特异性及其短肽与早期凋亡的相关性,以期明确APOE亚型影响脑创伤病情转归及预后的病理机制.方法 采用稳定表达人APOE各等位基因的APOE敲除鼠的神经干细胞,优化诱导分化条件,构建神经元/胶质细胞共培养体系及细胞划痕损伤模型.通过Annexin V/PI联合流式细胞技术检测损伤后各组细胞早期凋亡率,分析人APOE各等位基因及其短肽影响继发性神经细胞损伤的差异.结果 成功构建携带人源性APOE各亚型的细胞划痕损伤模型;伤后24 h时间点各组细胞早期凋亡率较6、12 h明显增高(P＜0.05),且人APOEε4组较其余亚型组早期凋亡率明显增高(P＜0.05).在伤后24 hapoE短肽COG1410可显著降低各亚型组早期凋亡率(P＜0.01).结论 APOEε4携带者可能通过早期凋亡导致脑创伤急性期病情加重.而apoE短肽COG1410可通过降低早期凋亡发挥神经保护作用.

狼疮肾炎患者外周血淋巴细胞早期凋亡率的分析

目的探讨狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)患者外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes,PBL)早期凋亡的改变与其自身抗体产生的相关性,并探讨淋巴细胞凋亡在LN发病机理中的作用.方法应用新的Annexin V试剂盒及流式细胞仪(flow cytometry,FCM)对LN患者及年龄、性别相匹配的正常人PBL进行早期凋亡细胞的检测;并运用免疫印迹法检测LN患者组自身抗体谱及应用免疫浊度法检测补体C3含量.结果①LN患者PBL凋亡率较对照组明显增高(t=7.738,P＜0.001).②LN患者中,能测定出两种以上自身抗体阳性者凋亡率明显高于至多有一种自身抗体阳性者凋亡率(t=5.417,P＜0.001);且活动期LN患者PBL凋亡率与补体C3含量呈高度负相关(r=-0.859,P＜0.01).结论LN患者PBL凋亡率明显高于正常人,这种凋亡的异常可能是LN发生发展的重要原因之一.

纳洛酮对缺氧心室肌细胞早期凋亡的影响