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静压力对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响
目的研究体外静压力对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLF)增殖活性的影响.方法体外培养人牙周膜成纤维细胞,建立重力加载模型.对第4代HPDLF分别施加0,0.5,1,2,3,4和5 g/cm2持续性静压力.加力24 h后采用CCK-8法检测HPDLF增殖活性.结果CCK-8检测结果显示1~4 g/cm2静压力下细胞增殖能力相比对照组增大,其中在2 g/cm2时增殖能力强(P<0.05).当静压力达到5 g/cm2时,HPDLF增殖指数降低(P<0.05).结论适宜大小的静压力能促进HPDLF的增殖,过大的静压力会抑制细胞的增殖.
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DMSO对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL的研究
目的 研究二甲基亚砜(DMSO)浓度对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)中细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响.方法 采用组织块法,在体外培养人牙周膜成纤维细胞系.以不同浓度(0、0.05%、0.1%、0.2%)的DMSO作用牙周膜成纤维细胞1h.采用RT-PCR法检测RANKL的mRNA相对表达量.结果 人牙周膜成纤维细胞中RANKL的mRNA相对表达量与DMSO浓度呈正相关性.结论 DMSO能够促进人牙周膜成纤维细胞表达RANKL.
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CGRP受体在牙周膜成纤维细胞内的表达
目的 研究CGRP受体在体外培养人牙周膜成纤维细胞内的表达情况,以期为揭示牙周膜成纤维细胞是否为CGRP的靶细胞以及CGRP对正畸牙周组织的改建作用和机理提供依据.方法 利用体外细胞培养和原位杂交的方法,在显微镜下观察CGRP1受体在人牙周膜成纤维细胞内的定位.结果 人牙周膜成纤维细胞呈CGRP1受体呈阳性染色,受体定位在胞浆.结论 CGRP在牙周膜成纤维细胞内的发现为证实CGRP可直接作用于这些靶细胞提供了依据,提示CGRP在牙齿移动,牙周组织改建过程中发挥了重要作用.
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超声微泡介导pEGFP-N1质粒转染人牙周膜成纤维细胞的实验研究
目的 探讨超声微泡造影剂在一定能量的超声波辐照下,介导质粒pEGFP-N1转染人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的效率及安全性.方法 体外原代培养HPDLFs,以EGFP基因为报告基因,脂质微泡造影剂为载体,用超声辐照介导质粒pEGFP-N1转染HPDLFs.实验组超声+微泡+质粒组根据转染条件不同分成不同亚组,对照组为质粒组、微泡+质粒组、超声+质粒组和脂质体+质粒组.转染48 h后在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白GFP表达.同时用MTT法检测HPDLFs的活力.结果 超声微泡介导的质粒对HPDLFs的转染效率与脂质体介导的质粒转染效率相似,明显高于其他对照组.超声+微泡+质粒组中HPDLFs的活力明显高于脂质体+质粒组.结论 在一定条件下,超声微泡能安全、有效地介导外源基因的转染与表达.
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p53在低氧抑制人牙周膜成纤维细胞成骨分化中的作用
目的 探讨p53在低氧抑制人牙周膜成纤维细胞(PDLCs)成骨分化中的作用.方法 体外正常氧(20％O2)和低氧(1％O2)中培养PDLCs细胞48 h,Western免疫印迹检测12、24与48 h时p53与HIF-1α的表达水平;小干扰RNA(Si-HIF1α)转染PDLCs,验证敲低HIF-1α表达后p53水平变化;进一步通过小干扰RNA(Si-p53)转染PDLCs,检测低氧下PDLCs中p53表达水平,比较碱性磷酸酶(ALP)活性,成骨标志物ALP、I型胶原(COL1)、成骨特异性转录因子(RUNX2)的mRNA表达量变化.采用SPSS 13.0软件对数据进行统计学分析.结果 相比正常氧培养后HIF-1α/GAPDH蛋白比值0.309±0.052,PDLCs在低氧培养12、24、48 h后HIF-1α/GAPDH蛋白水平显著升高为0.801±0.049、0.881±0.037与0.936±0.039,差异具有统计学意义(t=6.901、9.041、9.704,P=0.002、0.0008、0.0006);同时p53/GAPDH蛋白比值分别为0.463±0.036、0.612±0.040与0.858±0.034,相较常氧的0.233±0.035显著上调,差异具有统计学意义(t=4.595、7.140、12.84,P=0.010、0.002、0.0002).Si-HIF1α转染PDLCs并在低氧培养后,HIF1α-Si1、Si2转染组比阴性NC-Si组的HIF-1α在蛋白水平分别下降64.57％与59.94％,在mRNA水平分别下降66.67％、63.67％,差异具有统计学意义(t蛋白=9.326、6.985,P蛋白=0.0007、0.002;tRNA=5.319、5.015,PRNA=0.006、0.008);同时p53在蛋白水平分别下降36.47％与38.41％,在mRNA水平分别下降33.43％、30.67％,差异具有统计学意义(t蛋白=4.645、4.135,P蛋白=0.011、0.029;tRNA=4.373、3.912,PRNA=0.012、0.017).PDLCs经p53-Si1、Si2转染后p53蛋白表达较NC-Si阴性组分别下降56.41％与51.24％,差异具有统计学意义(t=8.194、6.621,P=0.0012、0.0027),但HIF-1α蛋白水平无明显变化,差异无统计学意义(t=1.167、1.391,P=0.308、0.237).将PDLCs转染p53-siRNA后继续在低氧培养48 h,p53-Si1、Si2组中PDLCs的ALP活性较NC-Si组升高2.05倍与2.17倍,差异具有统计学意义(t=4.889、4.346,P=0.008、0.012);成骨标志物ALP的mRNA水平分别升高2.14倍与2.05倍,差异具有统计学意义(t=5.423、4.078,P=0.006、0.015);COL1的mRNA水平分别升高2.86倍与3.03倍,差异具有统计学意义(t=7.56、6.89,P=0.002、0.002);RUNX2的mRNA水平分别升高3.41倍与3.71倍,差异具有统计学意义(t=8.15、12.21,P=0.001、0.0003).结论 低氧可上调HIF-1α与p53表达,进而抑制PDLCs成骨分化.
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人牙周膜成纤维细胞对罗红霉素的跨膜转运
目的 研究人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLF)对罗红霉素的跨膜转运,为通过根管局部及全身给药假说提供实验依据.方法 罗红霉素溶液孵育HPDLF和MC3T3-E1细胞,超声破碎细胞后,高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定不同时间点的胞内药物含量,考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量.结果 20 μg/ml的罗红霉素孵育HPDLF及MC3T3-E1细胞1、5、10分钟时均无法检测出胞内药物的存在,40 μg/ml的药物作用5分钟,同样无法检测.结论 在本实验条件下,不能检测出HPDLF以及MC3T3-E1细胞对罗红霉素的跨膜转运.
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NF-κB在人牙周膜成纤维细胞凋亡中的作用
目的:探讨人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的凋亡及NF-κB在细胞凋亡中的作用.方法:用倒置显微镜和Hochest 33258染色法,观察人牙周膜成纤维细胞在更换无血清培养液后6,12,24,36,48h的生长和凋亡变化;采用流式细胞仪检测无血清培养条件下不同时间对细胞凋亡的影响;利用RT-PCR半定量技术分析NF-κB表达情况.结果:人牙周膜成纤维细胞更换无血清培养液后,12h凋亡率高,36h凋亡率低,各组间细胞的凋亡率具有显著性差异(P<0.05).NF-KBmRNA表达量以更换无血清培养液后12h低,36h高,各组间细胞NF-κBmRNA的表达量具有显著性差异(P<0.05);NF-κBmRNA表达量与人牙周膜成纤维细胞凋亡率呈负相关.结论:体外培养人牙周膜细胞的凋亡与更换无血清培养的时间有关;NF-κB与细胞凋亡有关.
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机械压力对人牙周膜成纤维细胞TGF-β1蛋白表达的影响
目的:探明机械压力与人牙周膜成纤维细胞转化生长因子β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)蛋白表达的关系.方法:本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加0kPa、250kPa、500kPa,1000kPa的压力,通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量.结果:加载25OkPa组、500kPa组在细胞受力后各个时段TGF-β1含量没有变化;1000kPa组在细胞受力后的第12h,TGF-β1含量显著降低.结论:人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1受到机械压力的调控,在一定载荷作用下,TGF-β1的含量随着压力的增大而有所降低.
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人牙周膜成纤维细胞对甲硝唑替硝唑的跨膜转运
目的:研究人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLF)对甲硝唑和替硝唑的转运,为根管全身给药提供实验依据.方法:正畸拔除的前磨牙,组织块法作HPDLF原代培养.甲硝唑和替硝唑孵育HPDLF和MC3T3-E1细胞一定时间后,超声破碎细胞,高效液相色谱法测定胞内药物含量,考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量.结果:(1)高效液相色谱法可以精确测量细胞内甲硝唑和替硝唑含量;(2)检测不到HPDLF胞内的甲硝唑,但是可以检测到MC3T3-E1细胞内的甲硝唑;(3)两种细胞胞内的替硝唑的含量存在差异,含量与细胞外液的药物浓度以及药物作用时间有关.结论:甲硝唑不存在人牙周膜成纤维细胞的跨细胞膜转运,但是替硝唑存在,转运与胞外药物浓度有关,甲硝唑与替硝唑的跨细胞膜转运存在细胞特异性.这种差异性为指导临床用药、特别是根管全身给药的筛选提供参考.
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低氧激活HIF-1α对人牙周膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响
目的:初步探讨低氧环境对人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)增殖与凋亡的影响,以及低氧诱导因子-1 α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在该过程中的作用.方法:体外常氧条件和低氧(1％O2)条件下培养PDLCs,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测低氧诱导前后PDLCs生长速度的差异;流式细胞术比较PDLCs凋亡水平的变化.Western免疫印迹和实时定量PCR检测HIF-1α的表达水平.通过小干扰RNA(HIF1α-Si)转染PDLCs,检测低氧诱导下HIF-1α水平、细胞活性以及细胞凋亡水平的变化.结果:人PDLCs在低氧环境中培养48h后细胞活性显著抑制,凋亡水平增高,HIF-1α在蛋白和mRNA水平均显著升高.小干扰RNA(aRNA)转染PDLCs并于低氧下培养后HIF-1α表达明显降低,同时细胞活性增加、细胞凋亡显著下降.结论:低氧能通过上调HIF-1α表达抑制PDLCs增殖并促进其凋亡.
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人牙周膜成纤维细胞对甲硝唑摄取机制的研究
目的:研究人牙周膜成纤维细胞对甲硝唑的摄取,探讨摄取的机制及为通过牙根管给药途径提供实验依据.方法:采用高效液相色谱法研究人牙周膜成纤维细胞与甲硝唑孵育后不同时间细胞内药物的浓度,细胞内药物浓度与细胞外药物浓度的关系,以及温度、pH和转运抑制剂丙磺舒和腺嘌呤对细胞摄取甲硝唑的影响.结果:(1) 孵育3min后人牙周膜成纤维细胞胞内甲硝唑浓度即可达到细胞外水平,之后胞内甲硝唑浓度出现逐渐降低,并在15min后达到平稳;(2)细胞内甲硝唑浓度随着细胞外甲硝唑浓度的增加而呈线性增加;(3)温度、pH和转运抑制剂对人牙周膜成纤维细胞摄取甲硝唑无明显影响.结论:人牙周膜成纤维细胞可快速摄取甲硝唑;甲硝唑通过简单扩散方式进入细胞内.
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茶多酚对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡及炎症因子的影响
目的：探讨茶多酚对脂多糖(LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)凋亡及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)分泌的影响。方法：体外培养HPDLFs， MTT法筛选茶多酚浓度梯度，再分别用LPS(1μg/ml)和LPS(1μg/ml)+茶多酚(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)刺激HPDLFs，流式细胞仪检测细胞凋亡， Elisa法检测TNF-α、 IL-6分泌。结果： LPS可显著诱导HPDLFs凋亡，上调TNF-α、 IL-6表达。茶多酚可显著降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF-α、 IL-6表达，且呈量效依赖性。结论：茶多酚可通过有效降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF-α、 IL-6表达。
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模拟失重对人牙周膜成纤维细胞生物学性能的影响
目的 观察三维回转模拟失重对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hP-DLFs)形态和功能的影响.方法 回转组hPDLF细胞运用三维回转器(TDC)分别培养48 h,72 h和96 h,对照组常规培养.利用HE染色、细胞计数法、MTT活性检测、流式细胞术、Hoechst 33258核染色及免疫荧光分析的方法,比较两组细胞间形态、增殖、周期、凋亡及细胞骨架等生物学性能的差异.结果 与各自对照组相比,hPDLF细胞三维回转培养48 h后,细胞核面积较对照组缩小(P<0.01),微丝结构略显模糊,但细胞增殖和凋亡无明显变化;回转72 h后,细胞活力显著增强(P<0.01),但细胞形态与凋亡无明显变化;回转96 h后,hPDLF细胞增殖能力较对照组显著增强(P<0.01),细胞活力明显升高(P<0.01),S期所占周期比例明显增加(P<0.05),细胞形态与凋亡与对照组比较仍无明显差异.结论 短期(48 h)暴露于三维回转培养条件使hPDLF细胞骨架结构和胞核形态发生变化,但随着刺激时间的延长(72 h后),细胞内部恢复正常,并表现出细胞活力及增殖能力增强的趋势.
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TGF-β1对人牙周膜成纤维细胞合成胶原的影响
目的:观察不同浓度的转化生长因子β1对体外培养的人牙周膜成纤维细胞合成胶原的影响.方法:采用组织块培养技术进行人牙周膜成纤维细胞的体外培养,采用羟脯氨酸试剂盒来观察细胞合成胶原的情况.结果:0.1、1.0、10.0、50.0 ng/ml的转化生成因子β1可以促进牙周膜成纤维细胞合成胶原,其中10 ng/ml的TGF-β1在48 h促胶原合成作用明显,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:转化生长因子β1有促进人牙周膜成纤维细胞合成胶原的作用.
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丹参酮ⅡA对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响
目的 研究丹参酮ⅡA对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响.方法 将人牙周膜成纤维细胞培养在含不同浓度的丹参酮ⅡA培养液中(实验组),同时设不含丹参酮ⅡA的空白对照组,24、48、72 h后,以CCK-8法检测细胞的增殖情况.结果 在倒置显微镜下,实验组贴壁人牙周膜成纤维细胞数目明显减少.加药培养48、72 h,不同浓度丹参酮ⅡA组细胞的光密度(OD)值明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 丹参酮ⅡA对人牙周膜成纤维细胞增殖有一定的抑制作用.
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转化生长因子明胶微球的制备及其对人牙周膜细胞增殖作用的影响
目的:通过转化生长因子(TGF-β1)明胶微球的制备,探讨其用于牙周病治疗的可行性.方法:采用改良的乳化冷凝法制备TGF-β1的明胶缓释微球.体外培养人牙周膜成纤维细胞(hPDLCs),并将不同浓度(1、5、10 mg/ml)的载药明胶微球作用于hPDLCs,用四甲基偶氮唑盐微量反应比色法(MTT法)测定细胞增殖情况.结果:微球大小均匀,分散度好,平均粒径为(10.28±2.24)μm,药物包封率为78.5%,微球中TGF-β1载药量为785 ng/g.体外7 d内药物累积释放94%,TGF-β1明胶微球可明显促进hPDLCs的生长.结论:TGF-β1明胶微球能较长时间持续释放TGF-β1,促进hPDLCs持续增殖.该种药物剂型有望用于治疗牙周病.
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rhIGF-Ⅰ微球对人牙周膜成纤维细胞作用的实验研究
目的:探讨重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ明胶微球(recombinant human insulin-like growth factor-Ⅰ-gelatin mierospheres,rhIGF-Ⅰ-GMs)保存rhIGF-Ⅰ生物活性的情况及其对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts.HPDLFs)生物学活性的影响.方法:改良乳化冷凝聚合法制备rhIGF-Ⅰ-GMs.ELLS法测定其载药特性;体外培养HPDLFs,rhIGF-Ⅰ和rhIGF-Ⅰ-GMs梯度含量分别作用于HPDLFs,酶动力学方法及ELISA法动态观察其碱性磷酸酶(alka-line phosphatase,ALP)活性及对合成纤维结合蛋白(fibronection,Fn)的影响.结果:微球表面光滑圆整,微球载药量和包封率分别为930 ng/g和93.0%;培养1 d后,对照组、rhIGF-Ⅰ组和rhIGF-Ⅰ-GMs组人牙周膜成纤维细胞ALP活性和合成Fn均无显著性差异(P>0.05);3 d后,各组人牙周膜成纤维细胞ALP活性和Fn的合成依次为rhIGF-Ⅰ-GMs组>rhIGF-Ⅰ组>对照组,rhIGF-Ⅰ-GMs组和rhIGF-Ⅰ组比较,有显著性差异(P<0.01).结论:rhIGF-Ⅰ-GMs及其冻干粉剂制备良好;rhIGF-Ⅰ-GMs通过对rhIGF-Ⅰ的缓释作用,可较长时间地增强HPDLFs的ALP活性和促进Fn的合成.
关键词： 重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ 缓释 人牙周膜成纤维细胞 -
甘草酸二铵对脂多糖诱导下人牙周膜成纤维细胞表达前列腺素E2的影响
目的 脂多糖(LPS)干预下,不同浓度甘草酸二铵(Diammonium glycyrrhizinate,DG)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)表达前列腺素E2(PGE2)的影响.方法 取用组织块法原代培养的人牙周膜成纤维细胞,对细胞进行形态学及免疫学鉴别后,以浓度为10 mg/L的LPS进行诱导,用不同浓度的甘草酸二铵进行干预,采用免疫组织化学方法检测PGE2在HPDLFs中的表达变化.结果 不同浓度甘草酸二铵能够下调同一浓度LPS诱导的HPDLFs表达的PGE2,随甘草酸二铵浓度的增加PGE2的表达量呈逐渐减弱趋势(P < 0.05).结论 甘草酸二铵可能对LPS诱导的HPDLFs致炎症过程中表达PGE2有重要的抑制作用,为临床牙周病治疗提供新的科研资料.
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人牙周膜成纤维细胞对诺氟沙星的跨膜转运
目的 研究人牙周膜成纤雏细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLF)对诺氟沙星的跨膜转运,为根管全身给药假说提供实验依据.方法 诺氟沙星溶液孵育HPDLF和MC3T3-E1细胞.超声破碎细胞后,高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定胞内药物含量,考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量.结果 10μg/mL诺氟沙星孵育1、5、lO分钟时HPDLF胞内药物含量分别是0.095±0.032ng/μg0.096±0.052ng/μg、0.104±O.078ng/μg;1Oμg/mL诺氟沙星孵育l、5、10分钟时MC3T3-El胞内药物含量分别是0.033±0.018ng/μg、0.034±0.013ng/μg、O.082±0.029ng/μg,10分钟组数据显著性高于前两组数据,20μg/mL诺氟沙星孵育5分钟时MC313-El细胞内药物含量是0.070±0.057ng/μg.结论 HPLC可用于胞内诺氟沙星的测定.HPDLF对诺氟沙星存在跨膜转运,这种转运与细胞外药物浓度及孵育时间有关,还存在着细胞差异.
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磁性附着体模拟静磁场对人牙周膜成纤维细胞形态和超微结构的影响
目的 探讨磁性附着体静磁场对人牙周膜成纤维细胞形态和超微结构的影响.方法 对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别进行12.5mT、125mT和250mT静磁场持续加载4天,另设无外加静磁场作用的对照组,在倒置显微镜和透射电镜下观察人牙周膜成纤维细胞的形态、生长情况和细胞超微结构的变化.结果 各试验组细胞的形态、数量、排列及分布与对照组细胞无差异,未观察到细胞超微结构的明显改变.结论 12.5mT～250mT磁性附着体静磁场加载4天对体外培养的人牙周膜成纤维细胞形态和超微结构无明显影响.
