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MicroRNA 调控高密度脂蛋白的合成及转运
血浆高密度脂蛋白（ HDL）具有心血管保护作用；但近年研究表明，仅升高血浆HDL胆固醇（ HDL－C）水平并不能降低心血管疾病的发生风险；可见，HDL的功能而并非单纯HDL－C水平才是其发挥心血管保护作用的关键。微小核糖核酸（ miRNAs）是参与脂质代谢过程的新型调控因子，在HDL生物合成、细胞内胆固醇动员、肝脏HDL摄取与代谢等胆固醇逆向转运关键环节中均发挥了重要作用。对脂质代谢相关miRNAs的深入研究，将有助于进一步探明HDL介导的胆固醇逆向转运过程及血浆HDL－C水平的分子调控机制，从而更科学、更全面的认识HDL在心血管疾病发生、发展中的作用。（中华检验医学杂志，2015，38：436－438）
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谷氨酸诱导对鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体的调控
目的 研究底物谷氨酸对视网膜Müller细胞L-谷氨酸和L-天门冬氨酸转运体(GLAST)的调控作用.方法 采用L-3H-谷氨酸摄取分析方法研究底物谷氨酸诱导对GLAST活性影响.并提取细胞总蛋白,采用免疫印迹法分析视网膜Miiller细胞GLAST蛋白质表达量的差异.结果 在培养的鼠视网膜Müller细胞中加入不同浓度的谷氨酸培养30 min后,发现随着底物谷氨酸浓度增加(5～1000 μmol/L),L-3H-谷氨酸的摄取量增加.平均摄取量分别为(3100.7±86.8)、(3247.0±84.2)、(3840.0±118.6)、(4493.7±229.2)、(6429.0±81.5)、(6305.3±31.0)、(6346.3±36.2)cpm·mg-1·ml-1.当谷氨酸浓度为100 μmol/L时,L-3H-谷氨酸摄取量大.随着谷氨酸浓度的增加,谷氨酸转运体GLAST蛋白质的表达量增加,当谷氨酸浓度为100 μmol/L时,GLAST蛋白质表达量达大.结论 谷氨酸的底物诱导可增加GLAST摄取活性,且上调GLAST蛋白质的表达.
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人牙周膜成纤维细胞对罗红霉素的跨膜转运
目的 研究人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLF)对罗红霉素的跨膜转运,为通过根管局部及全身给药假说提供实验依据.方法 罗红霉素溶液孵育HPDLF和MC3T3-E1细胞,超声破碎细胞后,高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定不同时间点的胞内药物含量,考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量.结果 20 μg/ml的罗红霉素孵育HPDLF及MC3T3-E1细胞1、5、10分钟时均无法检测出胞内药物的存在,40 μg/ml的药物作用5分钟,同样无法检测.结论 在本实验条件下,不能检测出HPDLF以及MC3T3-E1细胞对罗红霉素的跨膜转运.
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人牙周膜成纤维细胞对四环素的跨膜转运
目的 研究人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLF)对四环素的跨膜转运,为通过根管局部或全身给药假说提供实验依据.方法 盐酸四环素溶液孵育HPDLF和MC3T3-E1细胞,超声破碎细胞后,高效液相色谱法测定胞内药物含量,考马斯亮蓝法测定细胞蛋白质量.结果 10 mg/L四环素孵育1、5、10 min后细胞内四环素含量与细胞蛋白质量的比值分别为(0.192±0.008)、(0.212±0.082)、(0.620±0.075)ng/μg.20 mg/L四环素孵育5 min后细胞内四环素含量与细胞蛋白质量的比值为(0.503±0.056)ng/μg.10 mg/L四环素孵育5 min后MC3T3-E1细胞内四环素含量与细胞蛋白质量的比值为(0.666±0.560)ng/μg.结论 HPDLF可跨膜转运四环素.转运与孵育时间及细胞外药物浓度相关.
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缺氧复氧损伤后小肠上皮细胞刷状缘二肽转运载体生物学功能的改变及生长激素的调控作用
目的探讨缺氧复氧损伤后小肠上皮细胞模型Caco-2细胞刷状缘二肽转运载体(PepT1)生物学功能的变化及重组人生长激素(rhGH)对PepT1的调控作用.方法建立Caco-2细胞单层培养模型和缺氧复氧损伤模型,比较常规培养的Caco-2细胞单层及缺氧复氧损伤后Caco-2细胞模型对底物头孢氨苄转运和摄取功能的变化;用rhGH对两种细胞模型进行干预,比较两者对底物的转运和摄取能力改变;同时分别比较各种情况下PepT1 mRNA的变化.结果缺氧复氧损伤后Caco-2细胞PepT1 mRNA水平明显下降,对底物的摄取能力明显低于对照组(P＜0.05);正常培养的Caco-2细胞经rhGH孵育后对底物的转运和摄取能力明显强于对照组(P＜0.05);缺氧复氧损伤后的Caco-2细胞用rhGH孵育后对底物的转运和摄取能力明显提高,与单纯损伤组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论缺氧复氧损伤后PepT1 mRNA下降,在基因水平下调了肠上皮细胞刷状缘PepT1对二肽的转运和摄取能力;rhGH对正常培养的Caco-2细胞和缺氧复氧损伤的Caco-2细胞的二肽载体转运和摄取功能均有上调作用;rhGH是在基因水平调节PepT1的生物学功能.
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水通道蛋白1在肾癌介入治疗前后的表达及其意义
目的探讨介入治疗对肾癌中水通道蛋白1(aquaporin 1, AQP1)表达的影响及意义.方法取术前行肾动脉化疗栓塞的肾癌标本15例,术前未行肾动脉化疗栓塞的肾癌标本12例及肾正常组织12例,分别应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法(western blot)及免疫组织化学(简称免疫组化)法检测AQP1在不同组织中的表达.结果 AQP1表达于正常肾的肾小球毛细血管内皮细胞及近曲小管的上皮细胞,肾癌组织的癌细胞及毛细血管内皮细胞.与肾正常组织相比,未行肾动脉化疗栓塞肾癌组织中AQP1阳性表达量明显减少,RT-PCR法 AQP1与β-肌动蛋白(β-actin)灰度比值中位数分别为0.935及0.855;免疫印迹法示AQP1阳性灰度值中位数分别为125.8及147.4;免疫组化示AQP1阳性指数分别为1.31及1.08,P值均<0.01,差异有统计学意义.行肾动脉化疗栓塞的肾癌组织同未行肾动脉化疗栓塞的肾癌标本相比,AQP1的表达明显减少,RT-PCR示 AQP1与β-actin阳性灰度比值中位数为0.810;免疫印迹法示AQP1阳性灰度值为159.7;免疫组化示AQP1阳性指数为0.82,P值均<0.05,差异有统计学意义.结论介入治疗可以降低AQP1在肾癌中的表达,抑制肾癌的生长和转移.
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异鼠李素和阿魏酸在大鼠原代肝细胞的肝摄取性质
目的 建立大鼠原代肝细胞摄取模型,评价异鼠李素和阿魏酸的肝细胞摄取性质.方法 应用RT-qPCR技术测定0,0.5,2和4h悬浮培养原代大鼠肝细胞上摄取转运体有机阴离子转运多肽(Oatp)1和Oatp2,有机阴离子转运体(Oat)2和有机阳离子转运体(Oct)1的mRNA表达.应用已知底物非索非那定、普伐他汀、甲氨蝶呤和阿昔洛韦评价转运体的功能.将已知底物或受试药物在4℃和37℃分别与肝细胞孵育不同时间,LC-MS/MS定量测定细胞摄取量,考察温度和时间对底物摄取的影响.由浓度依赖的摄取实验,计算得到Km、Vmax和主动摄取率等参数.在肝细胞模型上,将转运体的阳性抑制剂与异鼠李素10 μmol·L-1和阿魏酸50 μmol· L-1共孵育2 min,观察抑制剂对受试药转运的影响.结果 悬浮培养大鼠原代肝细胞上表达有转运体Oatp1,Oatp2,Oat2和Oct1,并能介导已知底物的主动摄取.转运体的mRNA表达水平随着时间的延长而快速下降,4h的表达水平约为0h的10％.转运体对已知底物摄取活性也随时间呈下降趋势,但程度显著低于表达水平,4h的活性约为0h的28.7％ ～71.4％.在经验证的肝细胞模型上,异鼠李素的4℃和37℃摄取无显著差异,主动转运率为14.6％.阿魏酸在37℃的摄取量显著高于4℃,主动转运率为84.1％；Oct阳性抑制剂奎尼丁100 μmol· L-1能显著抑制阿魏酸的肝摄取,抑制率为64.9％.结论 成功建立了大鼠原代肝细胞摄取模型,并用底物进行了验证.异鼠李素通过被动扩散进入肝细胞,阿魏酸的肝细胞摄取则以主动转运为主.
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有机阴离子转运蛋白在外源化学物毒性中的作用
机体接触各种潜在毒性有机阴离子,包括内源性物质如激素、神经递质和细胞代谢产物;外源性化学物质如多种药物、农药和动植物毒素等.快速有效地清除其中的毒性物质是机体好的防御方式.有机阴离子转运蛋白介导的跨上皮主动转运通常是其中的限速过程.因此,研究有机阴离子转运蛋白的种类、分布及其转运与表达调控机制具有重要的毒理学意义.
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量子点体内生物转运和转化特征及毒性研究进展
作为新型荧光纳米材料，量子点（QD）在生物医学领域具有广泛的应用前景。然而，QD暴露引发的潜在毒性问题也不容忽视。QD在体内的毒性作用与其在体内的生物转运和转化有紧密的联系，而QD在体内的生物转运和转化过程会受到暴露途径、暴露剂量、表面修饰材料以及粒径等因素的影响。其中，QD的暴露途径会影响QD在体内的吸收和分布；暴露剂量会影响QD在体内的代谢和排泄，进而影响量子点在体内的分布；表面修饰材料会影响QD在体内的分布、代谢和排泄；粒径则可影响QD在体内的吸收、分布以及排泄，粒径较大的QD更易在体内存留，且难以清除。QD进入体内后，可通过循环系统在肝和肾等组织器官中蓄积和降解，其降解产物可经肝、脾和肾等组织器官的代谢作用后，经粪便和尿液排出体外；此外，QD可与体内生物大分子相互作用，损伤遗传物质，影响基因的表达水平，影响肝、肾和神经等组织器官的功能，使组织器官出现病理和功能损伤。
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膜转运体在肾清除药物过程中的作用研究进展
膜转运体是调控细胞内外物质运输的一类功能蛋白，参与药物的吸收、分布和消除等体内过程，它也是维持机体内环境稳定的主要生物大分子，极易被各种化学物质所调控。本文对肾内26个已知转运体中研究较多的18种，如有机阴离子转运体、有机阳离子转运体和有机阴离子转运多肽等，从归属家族、分布、功能、底物及其选择性抑制剂等方面，对其在药物经肾清除过程中的核心作用以及由其引起的药物-药物相互作用的研究现状进行综述。
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人类胎盘药物透过性实验的研究进展
在日常生活中,孕妇因生活方式如烟尘、生活用品、乙醇等以及药物治疗或是职业和环境因素的不同,接触到各种各样的外界物质.胎盘在母体与胎儿之间建立起屏障,将营养物质和氧气运输给胎儿的同时还阻断了部分有害物质从母体输送给胎儿,但仍有一些有害物质可以在某种程度上透过胎盘屏障影响胎儿的生长发育.人胎盘绒毛叶体外灌注模型已成为评估有害物质胎盘透过性研究的重要方法,为胎儿生长发育的风险评估提供了重要信息.
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转铁蛋白作为主动靶向载体的研究进展
目的介绍国内外对转铁蛋白(Tf)在主动靶向中的应用研究的新进展.方法根据近年来的文献资料,对转铁蛋白在主动靶向中的应用研究方面进行综述.结果转铁蛋白可以与药物、生物活性物质、聚合物、脂质体等多种物质相连,不同程度地提高药物在肿瘤组织、脑组织中的分布量,降低毒性,延长药物血浆半衰期,提高药物主动靶向活性.结论转铁蛋白是一种新型的药物主动靶向载体,在肿瘤靶向及脑靶向领域中有广阔的应用前景.
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适宜组织工程化骨构建的流体剪切力和物质转运速度的研究
目的 探讨适宜组织工程化骨构建的流体剪切力和物质转运速度.方法 对接种人骨髓间质干细胞的多孔β-磷酸三钙支架进行灌注培养.灌流量相同时,对支架上的细胞分别施加1×、2×及3×的流体剪切力;流体剪切力相同时,分别给予3ml/min、6 ml/min和9 ml/min的灌注.细胞增殖采用MTT法,通过检测碱性磷酸酶(alkalilinphosphatase,AKP)活性、骨桥蛋白(osteopontin,OP)、骨钙素(osteocalcin,OC)分泌及细胞外基质的矿化评价组织工程化骨的构建.通过计算流体动力学得出流体剪切力和物质转运速度.结果 灌流量相同时,剪切力2×组细胞增殖活性高;2×和3×组AKP活性及OC分泌高于1×组;第28天时,3×组矿化基质多.流体剪切力相同时,6 ml/min组AKP活性高;第28天时,3 ml/min组OC分泌高,矿化基质多.灌流量相同时,流体剪切力分别为0.004～0.007 Pa、0.009～0.013 Pa和0.013～0.018 Pa;流体剪切力相同时,物质转运速度分别为0.267～0.384 mm/s、0.521～0.765mm/s和0.765～1.177 mm/s.结论 利用接种人骨髓间质干细胞的β-磷酸三钙支架构建组织工程化骨时,0.013～0.018 Pa的流体剪切力及0.267～0.384 mm/s的物质转运速度是适宜的.
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人牙周膜成纤维细胞对诺氟沙星的跨膜转运
目的 研究人牙周膜成纤雏细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLF)对诺氟沙星的跨膜转运,为根管全身给药假说提供实验依据.方法 诺氟沙星溶液孵育HPDLF和MC3T3-E1细胞.超声破碎细胞后,高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定胞内药物含量,考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量.结果 10μg/mL诺氟沙星孵育1、5、lO分钟时HPDLF胞内药物含量分别是0.095±0.032ng/μg0.096±0.052ng/μg、0.104±O.078ng/μg;1Oμg/mL诺氟沙星孵育l、5、10分钟时MC3T3-El胞内药物含量分别是0.033±0.018ng/μg、0.034±0.013ng/μg、O.082±0.029ng/μg,10分钟组数据显著性高于前两组数据,20μg/mL诺氟沙星孵育5分钟时MC313-El细胞内药物含量是0.070±0.057ng/μg.结论 HPLC可用于胞内诺氟沙星的测定.HPDLF对诺氟沙星存在跨膜转运,这种转运与细胞外药物浓度及孵育时间有关,还存在着细胞差异.
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白花前胡丁素在人结肠腺癌细胞系细胞模型上的吸收转运特征研究
目的 研究白花前胡丁素在人结肠腺癌细胞系(Caco-2)细胞模型上的转运特征.方法 利用Caco-2单层细胞模型研究白花前胡丁素的双向转运,采用高效液相色谱(HPLC)法测定药物的转运量,计算其表观渗透系数(Papp),并考察时间和药物质量浓度对其转运的影响.结果 白花前胡丁素在Caco-2细胞模型上的双向转运量在120 min内均随时间与浓度的增加而增大,其从肠腔侧(AP)向基底侧(BL)和从BL向AP的Papp介于2.0×10-6 cm/s～5.0×10-6 cm/s,Papp(BL-AP)/Papp(AP-BL)＜1.5.结论 白花前胡丁素为吸收较差的药物,主要以被动扩散方式经肠道吸收.
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三价砷进入小鼠胃肠道生物转运途径分析
目的 探索三价砷进入小鼠胃肠道的生物转运途径.方法 雄性小鼠分为对照组、砷染毒组(As3+10mg/kg)、汞+砷染毒组(Hg2+As3+各10 mg/kg)、甘油+砷染毒组(体积比1:1),进行灌胃染毒和原位小肠灌流实验.石墨炉原子吸收法测定各组小鼠胃肠中段组织中砷浓度,反转录-聚合酶链式反应法对胃肠组织中水-甘油通道蛋白(AQGP3、7、9)基因mRNA表达水平进行半定量检测.结果 小鼠砷灌胃染毒后胃和小肠组织中砷浓度分别为(108.62±6.72)和(13.47±2.48)μg/g,胃组织中砷浓度明显高于小肠组织(P＜0.01).给予水-甘油通道蛋白抑制剂汞或甘油后再给予砷,胃组织中砷浓度分别为(72.05±7.98)、(88.57±9.34)μg/g,肠组织中砷浓度分别为(8.88±0.95)、(8.06±1.20)μg/g,均比单独染砷时明显下降(P＜0.01);原位小肠灌流后汞+砷处理组及甘油+砷处理组小肠组织中砷浓度[(10.37±0.29)、(10.21±0.44)μg/g]比砷处理组(13.94±0.78)μg/g明显降低(P＜0.01);胃肠组织中广泛表达水-甘油通道蛋白基因,胃体部AQP3表达水平与空肠比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 水-甘油通道蛋白可能参与三价砷在小鼠胃肠道的生物转运.
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TiO2粉体对小鼠主要脏器中微量元素影响
随着纳米科技和制备技术的发展,纳米材料被广泛应用于材料、化妆品、医药和化工等众多领域[1,2],而纳米材料的超微性,使之理化性质与普通颗粒污染物相比发生了根本性改变,有可能导致生物效应性质和强度的改变.同样质量浓度下,纳米粒子将比微米粒子的数量多且活性高,纳米粒子能够进入生物体内微米级颗粒材料所不能抵达的区域,与细胞发生反应的机会更大,纳米粒子将对机体产生比普通颗粒污染物更大的影响[3,4].而迄今为止世界各国尚未制定出针对纳米材料特性的安全评价标准和劳动保护条例.目前,国内外已经进行了部分纳米粒子在动物体内的吸收、分布和排泄的研究,但关于纳米粒子在人体内的生物转运及其机制的研究较少.本文旨在比较纳米和微米TiO2粉体对染尘小鼠主要脏器中微量元素含量的影响.为进一步评价纳米材料对脏器损伤积累毒性毒理学资料,为探讨其毒作用机制提供科学依据.
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中药化学成分肠吸收研究中Caco-2细胞模型和标准操作规程的建立
目的:建立人结肠腺癌细胞系(human colon adenocarcinoma cell line,Caco-2)细胞模型和标准操作规程,用于研究和评价中药化学成分的肠吸收.方法:通过电镜扫描和倒置显微镜观察Caco-2细胞单层细胞形态学特点,并通过测定跨Caco-2细胞单层细胞膜电阻、碱性磷酸酶活性以及易吸收阳性对照药普萘洛尔和难吸收阳性对照药阿替洛尔的转运特性等指标对Caco-2细胞模型进行评价.结果:建立的Caco-2细胞模型完整性、紧密性和通透性等良好,各项指标的测定值与文献值一致.结论:建立的Caco-2细胞单层模型符合各项指标的要求,可用于研究口服中药化学成分的肠吸收及其转运的吸收机制.
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马丁达比犬肾上皮细胞模型研究广藿香醇跨膜转运机制
目的 采用马丁达比犬肾上皮(MDCK)细胞模型研究广藿香醇跨膜转运机制.方法 采用Agilent气相色谱质谱联用仪测定广藿香醇浓度,色谱柱为Agilent HP-5ms(5％苯基甲基硅氧烷,30 m×0.25 mm,0.25 μm),载气为氦气;质谱采用电子碰撞离子源,电子倍增电压模式,检测离子为m/z 222.2(广藿香醇)和m/z 190.1(内标异土木香内酯).建立MDCK细胞模型,通过改变广藿香醇浓度、转运方向考察广藿香醇的跨膜转运机制;分别加入外排蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)抑制剂,考察外排转运体对广藿香醇跨膜的影响.结果广藿香醇浓度40、20和10 μg· mL-1的双向转运表观渗透系数(Papp)值均大于10×10-5 cm·s-1,各剂量组不同转运方向的Papp比值均小于1.5.抑制转运试验中,加入P-gp抑制剂后,双向Papp值变化显著;加入BCRP抑制剂后,双向Papp值变化不显著;加入MRP抑制剂后,广藿香醇肠内壁侧到肠腔侧的Papp值显著降低.结论 广藿香醇具有高透膜性,其跨膜转运机制以被动转运为主,同时可能有转运载体参与.P-gp和MRP可能参与到广藿香醇跨膜过程,BCRP不参与广藿香醇的转运过程.
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培高利特、司来吉兰和左旋多巴-苄丝肼治疗帕金森病疗效比较
目的:比较培高利特、司来吉兰、左旋多巴-苄丝肼治疗帕金森病(PD)的疗效并观察其神经保护作用,筛选安全、有效、适合早期PD治疗的药物.方法:44例早期PD病人(HY分级Ⅰ～Ⅱ级)随机分为4组(均n=11),平行地接受左旋多巴-苄丝肼、培高利特、司来吉兰和苯海索治疗13 mo,观察治疗前后纹状体多巴胺运载体99mTc-TRODAT-1特异性/非特异性摄取、校正帕金森评分量表(UP-DRS)分值的变化.结果:(1)起病肢体对侧、同侧纹状体99mTc-TRODAT-1特异性摄取下降值,各组之间未见显著差异(均P＞0.05).(2)UPDRS量表评分减少:左旋多巴-苄丝肼治疗组明显,培高利特组、司来吉兰组次之.结论:3种药物均不增加纹状体多巴胺能神经元的凋亡.培高利特、司来吉兰适合作为早期PD的治疗选择.
