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葡萄胎病理相关新基因F10与绒癌细胞系JAR成瘤性的关系研究
目的 探讨葡萄胎病理相关新基因F10与绒癌细胞系JAR裸鼠皮下成瘤的关系.方法 通过细胞转染技术及RNA干扰技术,分别建立和筛选出F10基因稳定过表达及沉默的绒癌细胞系JAR.将30只4～5周龄SPF级裸鼠随机均分为JAR F10过表达组、JAR F10沉默组、JAR未处理组(n=10),分别于颈背部皮下接种5×107个F10基因过表达的JAR细胞、F10基因沉默的JAR细胞及未处理的JAR细胞.接种后每3～4d称重并观察,记录肿瘤发生时间,观察皮下肿瘤的生长情况.绘制在体肿瘤生长曲线,计算各组裸鼠的成瘤率.细胞接种5周后处死小鼠,取瘤组织称重,比较各组的瘤体重量.结果 3组的成瘤率均为100％(10/10).JAR F10过表达组、JAR F10沉默组、JAR未处理组的成瘤时间分别为4.4±1.1、4.4±1.1、4.6±1.3d.组间比较差异无统计学意义(F=0.097,P=0.908).与JAR未处理组相比,JAR F10过表达组肿瘤的在体生长速度明显增快,JAR F10沉默组则明显减慢,差异均有统计学意义(P＜0.05).JAR F10过表达组、JARF10沉默组、JAR未处理组肿瘤重量分别为607.49±216.19、270.73±81.53、423.87±74.75mg,组间比较差异有统计学意义(F=14.462、P=0.000).结论 F10基因与绒癌细胞系JAR的增殖调节有关,可增强JAR细胞系在裸鼠体内的致瘤性.
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低分子肝素对抗心磷脂抗体阳性血清中JAR细胞增殖能力的影响
目的 研究子痫前期孕妇抗心磷脂抗体(ACA)阳性血清对JAR细胞生长周期和增殖能力的影响,以及低分子肝素对该细胞生长的调节.方法 JAR细胞按如下3组培养:对照组添加健康妊娠妇女血清；处理1组添加ACA阳性的子痫前期孕妇血清；处理2组添加抗ACA阳性的子痫前期孕妇血清及低分子肝素.采用MTT法检测细胞的增殖能力,以490 nm处的平均吸光度(OD值)表示；采用流式细胞仪检测细胞生长周期.结果 正常对照组的OD值为0.460±0.069,处理1组的OD值为0.310±0.058,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01)；处理2组的OD值为0.410±0.076,与对照组比较,差异无统计学意义(P＞ 0.05).流式检测结果显示,正常对照组S期细胞占(27.27±3.73)％,处理1组的S期细胞比例[(18.12±3.75)％]下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；而处理2组的S期细胞为(24.67±4.66)％,与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 体外实验表明,ACA对可以调节JAR细胞的生长周期,抑制其增殖能力,而低分子肝素能逆转抗体的这种作用.
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4'-甲醚-黄芩素诱导绒毛膜癌JAR细胞凋亡的实验研究
目的 探讨4'-甲醚-黄芩素(4-MS)对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡的相关机制.方法 应用MTT法、激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞术和实时定量PCR法,体外观察4-MS对JAR细胞的影响.结果 不同质量浓度(10、20、40 mg/L)的4-MS对JAR细胞均有增殖抑制作用,呈剂量依赖,作用72 h后其增殖抑制率分别为(14.14±0.75)%、(34.34±2.99)%、(61.11±2.99)%(P＜0.01);4-MS作用72 h后细胞内Ca2+浓度分别为81.3±6.7、103.3±5.9、120.7±11.0,与对照组相比差异有显著性(P＜0.05).40 mg/L 4-MS作用12、24、36 h后其早期凋亡率分别为(2.36±0.19)%、(4.22±2.44)%、(7.34±0.56)%,明显高于对照组(P＜0.01).20、40 mg/L 4-MS作用48 h后hTERT mRNA的表达量为0.05±0.01和0.02±0.01,明显低于对照组(P＜0.01).结论 4-MS能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖,诱导凋亡,其机制与提高细胞内Ca2+浓度、降低hTERT mRNA的表达有关.
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TGF-β1对人早孕细胞滋养层细胞和绒毛膜癌JAR细胞明胶酶mRNA表达的影响和意义
目的:探讨TGF-β1和明胶酶在妊娠滋养细胞疾病(GTD)发病机制中的作用.方法:RT-PCR法检测TGF-β1诱导的人正常早孕细胞滋养细胞(CTB)和绒毛膜癌JAR细胞中明胶酶CMMP2和MMP97及其抑制剂(TIMP1和TIMP2)mRNA的表达.结果:TGF-β1上调CTB细胞MMP2的表达,但对MMP9的mRNA表达无明显作用(P＞0.05).TGF-β1能显著上调JAR细胞MMP2和MMP9的mRNA表达(P＜0.01).随着TGF-β1浓度的增加,TGF-β1能明显诱导CTB细胞TIMP1和TIMP2的mRNA表达水平上调(P＜0.01);然而这种转录水平在TGF-β1处理或未处理的绒毛膜癌细胞中均为极低表达甚至无表达.结论:TGF-β1与明胶酶在GTD的发生、发展中起了协同促进其侵袭、浸润和恶化进展的作用.
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4'-甲醚-黄芩素对绒毛膜癌JAR细胞内Ca2+浓度的影响
目的:探讨4'-甲醚-黄芩素对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及细胞内Ca2+浓度的影响.方法:应用MTT法、流式细胞术和激光共聚焦扫描显微镜技术,体外观察该化合物对JAR细胞的影响.结果:4'-甲醚-黄芩素对JAR细胞的生长具有抑制作用.随着药物浓度与作用时间的增加,Annexin V-FITC+/PI-细胞、细胞内Ca2+浓度逐渐增加,与对照组相比差异有显著性.结论:4'-甲醚-黄芩素能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖,诱导凋亡,其机制与提高细胞内Ca2+浓度有关.
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F10基因过表达及沉默对绒癌细胞系 JAR 侵袭相关蛋白酶表达的影响
目的： F10基因是本研究前期发现在葡萄胎中高表达的新基因，本文为明确F10过表达和沉默对绒癌细胞系JAR侵袭性的影响，探讨F10基因与部分侵袭相关蛋白的关系。方法通过细胞转染技术及RNA干扰技术，分别建立和筛选出F10基因稳定过表达及沉默的绒癌细胞系JAR。取SPF级裸鼠30只，随机均分为F10过表达组、未处理组、F10沉默组，每组10只，依次接种F10基因过表达的JAR细胞、未处理的JAR细胞和F10基因沉默的JAR细胞株，于接种5周后处死裸鼠收获皮下肿瘤，采用免疫组织化学及Western blot检测方法，比较不同组瘤体组织中基质金属蛋白酶（ matrix metalloproteinase， MMPs）及金属蛋白酶组织抑制物-1（ tissue inhibitors of metalloproteinases-1， TIMP-1），血浆纤溶酶原激活物抑制因子（ plasmino-gen activator inhibitor-1， PAI-1）等侵袭相关蛋白酶的表达差异。结果免疫组化法检测结果显示：F10、MMP-2、8、11、16、19在F10过表达组、未处理组、F10沉默组中间的表达依次递减，差异有统计学意义（ P＜0．05），TIMP-1、PAI-1在F10过表达组中分别为0．118±0．029、0．174±0．005，在未处理组中分别为0．214±0．028、0．289±0．009，在F10沉默组中分别为0．430±0．017、0．517±0．074，3组间的表达差异有统计学意义（ P＜0．05）。 Western blot结果显示，F10、MMP-2、8、11、16、19蛋白在F10沉默组、未处理组、F10过表达组依次递增（ P＜0．001），而TIMP-1及PAI-1蛋白表达水平依次递减（ P＜0．001）。结论 F10通过上调MMP-2、8、11、16、19的表达，下调TIMP-1、PAI-1表达，参与调节绒癌细胞的增殖，从而可能参与调节绒癌的侵袭和转移。
关键词： 绒癌 F10基因 基质金属蛋白酶 血浆纤溶酶原激活物抑制因子 JAR细胞 -
γ-氨基丁酸信号在JAR细胞中的表达及对细胞侵袭能力的影响
目的:本文通过研究γ-氨基丁酸(GABA)及其受体GABRP、GABAB1R在滋养层细胞株JAR中的表达,采用Transwell模型,给予GABA受体的激动剂和拮抗剂干预,探讨其对JAR细胞侵袭能力的影响.方法:免疫细胞化学,RTPCR,Western blot方法检测GABA、GABRP、GABAB1R滋养层细胞株JAR中的表达；Matrigel细胞侵袭模型检测GABA、GABAAR,GABABR激动剂和拮抗剂对JAR细胞侵袭能力的影响.结果:GABA、GABRP、GABAB1R在细胞株JAR均有表达；GABAA受体激动剂促进JAR细胞的侵袭,而GABAB受体激动剂抑制JAR细胞的侵袭.结论:在滋养层细胞株JAR中,GABA信号可能调节细胞的侵袭能力,从而参与滋养细胞相关妊娠疾病的发生发展.
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1α,25-二羟基维生素D3对绒毛膜癌细胞株JAR的影响及其机制
目的:研究生物制剂1α,25-二羟基维生素D3（calcitriol）对绒毛膜癌细胞株JAR的影响,探讨其作用机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度（10-8、10-7、10-6 mol/L）calcitriol在不同的时间点（1天、3天、6天）对JAR细胞增殖的影响；流式细胞仪检测calcitriol对JAR细胞周期的影响；RT-PCR检测维生素D受体(VDR)mRNA水平的表达；Western blot检测VDR蛋白表达.结果:MTT比色法检测10-6 mol/Lcalcitriol作用JAR细胞3天,10-7、10-6 mol/L calcitriol作用6天抑制率分别为(22.74±12.08)％(P＜0.05),(29.64±8.66)％ (P＜0.01),(49.74±17.42)％ (P＜0.01),呈明显的时间-剂量效应关系.calcitriol作用JAR细胞的半数抑制浓度(IC50)组与对照组比较,细胞周期G1期细胞比例从39.78％增至59.81％ (P＜0.01),S期细胞数百分比从54.6％减至33.08％（P＜0.01）.calcitriol上调JAR细胞的VDR mRNA及蛋白表达水平.结论:calcitriol能明显抑制绒毛膜癌细胞株JAR增殖,并诱导JAR分化,其作用机制与calcitriol上调VDR mRNA,进而增加VDR蛋白的表达有关.
关键词： 绒毛膜癌 1α 25-二羟基维生素D3 JAR细胞 -
MiR-34a对JAR细胞自噬影响的机制
目的 探讨miR-34a对人胎盘绒毛癌细胞JAR细胞自噬影响的机制.方法 选取JAR细胞,随机分为miR-34a模拟物组(转染miR-34a模拟物)、NC组(转染模拟物阴性对照)、miR-34a抑制物组(转染miR-34a抑制物)、INC组(转染抑制物阴性对照)、空白对照组(只加Lipofectamine 2000)、缺氧组(300 μmol/L氯化钻处理)和正常组(未经氯化钴处理).采用Real time PCR法检测各组miR-34a及HMGB1 mRNA表达,Western blotting法检测各组HMGB1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达,透射电镜检测各组细胞中自噬小体形成情况.结果 miR-34a模拟物组中HMGB1 mRNA和蛋白表达水平较NC组降低(P＜0.05),miR-34a抑制物组中HMGB1 mRNA和蛋白表达较INC组高(P＜0.05).缺氧组中HMGB1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达较正常组升高.缺氧处理后miR-34a模拟物组中HMGB1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的相对表达量较INC组降低(P＜0.05),miR-34a抑制物组中HMGB1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的相对表达量较INC组升高(P＜0.05).透射电镜结果显示,缺氧组自噬小体的数量较正常组明显增加(P＜0.05),缺氧处理后miR-34a模拟物组细胞中自噬小泡数量较NC组减少(P＜0.05),miR-34a抑制物组细胞中自噬小泡数量较INC组增加(P＜0.05).结论 miR-34a可能通过抑制HMGB1表达影响滋养细胞的自噬.
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乌苯美司对JAR,SKOV3和3AO细胞体外生长的抑制作用
目的:观察乌苯美司对人绒毛膜癌和卵巢癌细胞体外生长的抑制作用.方法:应用MTT比色法观察不同浓度的乌苯美司(0.5 g/L、1g/L、5 g/L、10 g/L、15 g/L、20g/L)对人绒毛膜癌JAR细胞、卵巢癌3AO细胞和SKOV3细胞的生长抑制作用,溴乙啶和丫啶橙荧光染色荧光显微镜观察凋亡细胞DNA结构改变.结果:乌苯美司能抑制JAR细胞、3AO细胞和SKOV3细胞的生长,且对JAR和SKOV3细胞的抑制作用呈时效(r=0.412,r=0.339,P均=0.000)和量效(r=0.704,r=0.753,P均=0.000)关系.5g/L乌苯美司作用48 h后荧光显微镜下见细胞染色质边聚,细胞核碎裂等凋亡改变.结论:乌苯美司通过细胞凋亡途径可抑制绒毛膜癌和卵巢癌细胞的生长.
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姜黄素对人绒毛膜癌JAR细胞增殖和细胞周期的影响
目的 研究姜黄素对人绒毛膜癌JAR细胞增殖抑制及细胞周期的影响,并探讨cyclin A及CDK2蛋白表达水平的变化.方法 用不同浓度的药物作用于JAR细胞,采用MTT检测药物对细胞的增殖抑制能力的影响,采用流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响,Western - blot检测cyclin A、CDK2的蛋白表达水平变化.结果 姜黄素能明显抑制JAR细胞增殖,且具有明显的剂量和时间依赖性,流式细胞术检测显示一定浓度药物作用细胞,可将细胞周期阻滞于S期,Western blot检测发现药物能下调cyclin A及CDK2蛋白的表达.结论 姜黄素能显著抑制JAR细胞增殖,使细胞周期阻滞于S期,其机制可能是通过下调cyclin A及CDK2蛋白表达水平所致.
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应用JAR细胞株建立SCID beige小鼠绒毛膜癌移植瘤病理模型
目的 建立稳定有效的绒毛膜癌SCID beige小鼠移植瘤模型,观察模型的病程特点和生物学行为.方法 将3～5周龄SCID beige雌性小鼠随机分为实验组和对照组;实验组12只小鼠分为A(皮下移植瘤模型)/B(肺转移瘤模型)两组,分别皮下注射或尾静脉注射JAR细胞5×106/只,应用形态学、放射性免疫分析法测定β-HCG、小动物活体成像系统(IVIS)和组织学HE染色方法明确JAR细胞皮下移植瘤及肺转移瘤形成等情况.结果 实验组接种28 d后,A组小鼠皮下形成质硬肿瘤结节,HE染色符合绒毛膜癌细胞形态学表现;B组小鼠应用IVIS检测显示体内出现单个或多个肿瘤实体包块,HE染色表明肺组织均有不同程度的瘤细胞浸润.接种第14天,实验组β-HCG水平显著高于对照组(P＜0.05);其中B组β-HCG水平明显高于A组(P＜0.05).结论 SCID beige小鼠皮下/尾静脉注射JAR细胞可成功构建人绒毛膜癌移植瘤病理模型,该模型能模拟临床绒毛膜癌上皮性实体瘤特性及肺转移特点,是研究人类绒毛膜癌发病机理及实验治疗的良好模型.
关键词： 绒毛膜癌 SCID beige小鼠 JAR细胞 移植瘤模型 活体成像系统 -
马鞭草诱导人绒毛膜癌JAR细胞凋亡作用观察
[目的]探讨马鞭草C部位对人绒癌JAR细胞抑制作用机理. [方法]通过相差显微镜观察活细胞贴壁程度、细胞形态改变;荧光显微镜观察细胞形态学变化;透射电镜观察细胞超微结构变化;琼脂糖凝胶电泳观察用药后细胞DNA断裂情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况. [结果]马鞭草C部位可引起细胞数目减少并萎缩;荧光显微镜下观察到典型凋亡细胞的形态学特征;电镜下见到明显的凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳出现"阶梯状条带";流式细胞仪检测发现用药后出现明显的凋亡峰. [结论]马鞭草C部位对人绒癌JAR细胞抑制作用机理是诱导其凋亡.
