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葛根素通过调控活性氧对缺氧诱导的PASMCs增殖的影响
探讨葛根素(puerarin,Pue)对缺氧所引起的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响,并探讨其机制是否通过调控活性氧来实现的.原代培养大鼠PASMCs,选用2～5代用于实验.利用体外噻唑蓝比色法(MTT)、蛋白免疫印记法、流式细胞、DCFH-DA荧光观察Pue对PASMCs增殖能力的影响.利用蛋白免疫印记法检测ROS是否参与Pue抑制PASMCs增殖的过程.实验分组为:常氧组、缺氧组、缺氧+ Pue组、缺氧+Pue+ Rotenone组、缺氧+Rotenone组.其中Rotenone为ROS阻断剂.结果显示,Pue对常氧条件下的PASMCs增殖无影响,可抑制缺氧引起的PASMCs增殖.在常氧和缺氧状态下Pue对PASMCs的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达均无影响;可以使缺氧导致的细胞周期蛋白(Cyclin A)、细胞增殖核抗原(PCNA)表达下调;DCFH-DA探针证明Pue能逆转缺氧引起的ROS含量升高.Rotenone与Pue均可抑制因缺氧诱导的HIF-1α,Cyclin A,PCNA表达上调且存在协同作用.这些结果说明,Pue可抑制缺氧引起的PASMCs增殖,这一作用可能是通过调控ROS来完成的.
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牛磺酸抑制缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及信号转导机制
目的:探讨牛磺酸(taurine,Tau)对缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响,并且研究细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路是否参与了Tau抑制PASMCs增殖的过程及可能的分子机制.方法:原代培养大鼠PASMCs,选用第2～5代用于实验.Tau给药浓度为80 mmol·L-1,ERK1/2阻断剂(PD98059)浓度为50 μmol·L-1,给药时间24 h.①体外噻唑蓝比色法(MTT)、细胞免疫荧光和蛋白免疫印记法检测牛磺酸在不同条件下对大鼠PASMCs增殖能力的影响,将细胞分为4组:常氧组、常氧+ Tau组、缺氧组、缺氧+Tau组.②蛋白免疫印记法检测ERK1/2通路是否参与了Tau抑制缺氧诱导PASMCs增殖的进程中.实验分为5组:常氧组、缺氧组、缺氧+Tau组、缺氧+Tau+ PD98059组、缺氧+PD98059组.结果:①缺氧可诱导PASMCs增殖,常氧情况下Tau对PASMCs细胞增殖无影响,常氧及缺氧条件下Tau对PASMCs中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达无影响.Tau可以逆转缺氧诱导的细胞增殖核抗原(PCNA) (P ＜0.01)、细胞周期蛋白A(Cyclin A)表达上调(P＜0.05).②常氧情况下Tau对磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的表达没有影响,缺氧使p-ERK1/2的表达上调(P＜0.01),Tau逆转缺氧诱导的p-ERK1/2表达上调(P＜0.05).PD98059与Tau均可抑制缺氧诱导的PCNA,Cyclin A,p-ERK1/2表达上调,与缺氧单独加药Tau或缺氧单独加入PD98059对比,缺氧+Tau+ PD98059组PCNA,Cyclin A,p-ERK1/2表达下调更显著.结论:Tau可抑制缺氧诱导的PASMCs增殖,并且可能是通过ERK1/2通路调控的.
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bFGF促进人大肠癌LoVo细胞增殖的信号转导机制
目的:通过改变碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作用于LoVo细胞的时间,检测PKB活性和Cyclin A的表达情况,进一步研究bFGF通过PI3-K/PKB通路调控大肠癌细胞生长的信号转导机制.方法:MTT法分析bFGF对LoVo细胞增殖程度的影响;(γ-32P)ATP掺入法检测大肠癌LoVo细胞株中PKB的活性;RT-PCR法检测大肠癌LoVo细胞株中Cyclin A的表达;Western blot法检测bFGF作用LoVo细胞后Cyclin A的表达.结果:bFGF以不同时间作用于LoVo细胞时,通过(γ-32P)ATP掺入法检测发现其可提高细胞PKB活性,PI3-K的抑制剂LY294002预处理后再施加bFGF,可显著降低PKB的活性,两者相比差异显著[704.32±12.35 pmol/(mg·min)vs 1352.79±19.85 pmol/(mg·min),P＜0.05].bFGF刺激LoVo细胞时Cyclin A蛋白和CyclinA mRNA表达均高于其他各施加因素组,而PI3-K的抑制剂LY294002组的Cyclin A蛋白和Cyclin A mRNA明显降低.结论:bFGF刺激大肠LoVo细胞后可通过依赖PI3-K/PKB途径调节Cyclin A的转录活性,促进其表达,进而促进细胞增殖.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 蛋白激酶B Cyclin A 大肠癌 -
冬凌草甲素诱导胃癌BGC-823细胞凋亡及G2/M细胞周期阻滞作用研究
目的 研究冬凌草甲素体外诱导胃癌BGC-823细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用,阐明其作用机理,为临床应用提供科学依据.方法 用MTT方法测定冬凌草甲素体外抑制BGC-823细胞生长的作用.用共聚焦荧光显微镜和流式细胞仪分别观察诱导凋亡的情况.线粒体膜电位和细胞内钙离子浓度分别用荧光探针标记后流式细胞仪测定.凋亡和细胞周期相关蛋白的表达用Westem blotting进行测定.结果 冬凌草甲素对BGC-823细胞的半数生长抑制浓度IC50值为22.21μmol·L-1,并诱导细胞凋亡,呈现浓度依赖性.此外,能够降低线粒体膜电位,升高细胞内钙离子浓度,激活caspase-3前体.同时,冬凌草甲素能够使得BGC-823细胞阻滞在细胞周期的G2/M期,伴随有cyclin A 蛋白的表达下降.在发生凋亡和细胞阻滞之前,观察到p53蛋白的表达增加.结论 冬凌草甲素能够诱导BGC-823细胞产生凋亡,并使细胞周期阻滞在G2/M期.其凋亡机理与caspase-3的激活,p53蛋白表达上调及cyclin A表达下调相关.
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他克莫司在体外对肝癌细胞HepG2和HepG2.2.15增殖的影响
目的：研究他克莫司（tacrolimus ，FK506）在体外对肝癌肿瘤株HepG2和乙肝相关肝癌株HepG2.2.15增殖的影响。方法：体外培养肝癌细胞HepG2和HepG2.2.15，采用MTT法、流式细胞技术，分别检测细胞增殖、细胞周期、CyclinA。结果：FK506可以显著抑制HepG2和HepG2.2.15细胞增殖，其抑制增殖作用随剂量增加而增强；FK506诱导细胞产生G0/G1期阻滞，这种抑制作用有浓度依赖性；FK506对周期蛋白CyclinA表达的影响呈浓度负相关性，FK506浓度越高，周期蛋白CyclinA表达越少。结论：FK506可以抑制肝癌细胞HepG2和乙肝相关肝癌细胞HepG2.2.15的增殖，这种作用可能与诱导细胞周期阻滞有关。
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Cyclin A与P21蛋白在子宫腺肌病中的表达及临床意义
目的 探讨Cyclin A与P21蛋白在子宫腺肌病中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学的方法(S-P)检测Cyclin A与P21蛋白在子宫腺肌病(40例)及正常子宫内膜组织(30例)中的表达.结果 Cyclin A在子宫腺肌病中的表达明显高于正常子宫内膜组织,P21蛋白在子宫腺肌病中的表达明显低于正常子宫内膜组织,差异均有统计学意义(P＜0.05).在子宫腺肌病中,Cyclin A高表达及P21蛋白低表达与异位内膜浸润肌层深度及腺肌瘤的大小有关,而与痛经、月经过多无明显关系.结论 Cyclin A及P21蛋白与子宫腺肌病的发生、发展关系密切.
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细胞周期蛋白在食管癌中的表达及意义
目的 探讨食管癌组织中细胞周期蛋白(CyclinD1、CyclinA、CyclinB1、CyclinE)的表达规律,其与食管癌临床病理参数的关系.方法 采用免疫组化技术检测CyclinD1、CyclinA、CyclinB1、CyclinE在58例食管癌组织和45例正常食管黏膜组织中的表达情况.结果 CyclinD1、CyclinA、CyclinB1、CyclinE在正常食管黏膜组织中低表达.随着食管癌分化程度的降低,CyclinD1、CyclinA、CyclinB1、CyclinE表达的阳性率明显升高,高分化组、中分化组与低分化组间有显著差异(P＜0.05).结论 可通过免疫组织化学法分析细胞周期的数据,这有利于肿瘤分级,并与预后相关.
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杏仁核注射Aβ 25-35后大鼠脑内细胞周期蛋白、tau蛋白和Bax蛋白的异常表达
近年来研究发现, 阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)病人脑内神经元细胞周期相关蛋白的异常表达与AD相关病理改变存在关联.为探讨β-淀粉样蛋白(β-amyloid, Aβ)的毒性作用能否导致成年脑神经元表达细胞周期相关蛋白, 以及细胞周期相关蛋白表达与神经损伤之间的关系, 我们运用免疫组化、积分光密度分析等方法对Aβ 25-35多肽片段单侧杏仁核注射的大鼠脑进行了研究.结果显示, Aβ 25-35注射的大鼠脑内除了有与神经纤维缠结相关的磷酸化tau 蛋白和凋亡相关蛋白Bax蛋白水平增加外, 术后7 d细胞周期相关蛋白cyclin A和cyclin B1蛋白在神经元内异常表达, 但术后21 d时cyclin A的表达有所降低, 而cyclin B1在脑内神经元中已检测不到; 免疫荧光双标结果显示Aβ 25-35注射后7 d的大鼠脑内有较多的cyclin B1和Bax、 cyclin B1和磷酸化tau蛋白共存的神经元, 而Bax与磷酸化tau蛋白阳性信号很少共存在同一细胞上.以上结果提示, Aβ可导致成年脑神经元表达细胞周期相关蛋白, 这些神经元可能会通过与Bax相关的凋亡途径死亡, 或首先导致与AD神经纤维缠结相关的tau蛋白磷酸化.
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Livin阳性乳腺癌中细胞周期调控相关蛋白的变化
目的 探讨Livin阳性乳腺癌中细胞周期调控相关蛋白的变化,以初步明确Livin对细胞周期调控相关蛋白的影响.方法 采用免疫组化SP法检测Livin在45例乳腺癌中的表达,利用Western blot法检测45例乳腺癌中Cyclin D、Cyclin A、CyclinE的表达.结果 45例乳腺癌中Livin阳性率为75.56％ (34/45).Livin阳性乳腺癌中,Cyclin A的阳性率为88.23％(30/34),而在Livin阴性乳腺癌中,Cyclin A的阳性率为54.55％ (6/11),差异有统计学意义(P＜0.05);Livin阳性乳腺癌中,CyclinD的阳性率为61.76％ (21/34),而Livin阴性乳腺癌中,Cyclin D的阳性率为81.82％ (9/11),差异无统计学意义(P＞0.05);在Livin阳性乳腺癌中,Cyclin E的阳性率为82.35％ (28/34),而在Livin阴性乳腺癌中,Cyclin E的阳性率为45.46％ (5/11),差异有统计学意义(P＜0.05).乳腺癌组织中Livin与Cyclin A、Cyclin E蛋白表达显著相关(P＜0.05).结论 Livin蛋白在乳腺癌中表达上调,提示其可能在促进乳腺癌发生、发展中起重要作用.Livin表达可导致Cyclin A和Cyclin E表达上调,而对Cyclin D表达作用不明显,提示Livin除了抗细胞凋亡作用外,还可能通过引起细胞周期调控紊乱促进乳腺癌的发生、发展.
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皮肤瘢痕及瘢痕癌组织中cyclin A、p21WAF1的表达及意义
目的 探讨cyclin A、p21WAF1在皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌组织中的表达及意义.方法 以病理性皮肤瘢痕、皮肤瘢痕癌组织为研究对象,以正常皮肤组织为对照.采用免疫组化SP法分别检测cyclin A、p21WAF1蛋白的表达,采用核酸分子原位杂交法检测cyclin A mRNA、p21WAF1 mRNA的表达,结合图像分析,分别观测3组被检组织中所检各项指标的表达(平均光密度和阳性面积);所有数据输入计算机后运用SPSS 16.0软件包进行统计学分析.结果 (1)cyclin A、cyclin A mRNA在正常皮肤表皮和病理性皮肤瘢痕上皮中的表达呈阴性或弱阳性,在瘢痕癌组织中呈强阳性.瘢痕癌组的表达(平均光密度和阳性面积)与正常皮肤组及皮肤瘢痕组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),但正常皮肤组与瘢痕组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)p21WAF1蛋白、p21WAF1 mRNA在正常皮肤表皮和病理性皮肤瘢痕上皮中的表达呈阴性或弱阳性,在瘢痕癌组织中呈强阳性.瘢痕癌组的表达(平均光密度和阳性面积)与正常皮肤组及皮肤瘢痕组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),但正常皮肤组与瘢痕组比较,差异无统计学意义(P>0.05).(3)相关分析显示,在皮肤瘢痕癌中,cyclin A 与cyclin A mRNA(r=0.766,P<0.01)、p21WAF1与p21WAF1 mRNA(r=0.791,P<0.01)的表达呈正相关;cyclin A与p21WAF1蛋白(r=0.656,P<0.01)的表达呈正相关;cyclin A mRNA与p21WAF1 mRNA的表达呈正相关(r=0.475,P<0.05).结论 (1)cyclin A及其mRNA的高表达,可能与皮肤瘢痕癌的发生有关;(2)在瘢痕癌中,cyclin A、p21WAF1同时存在蛋白水平和基因水平的异常表达;(3)p21WAF1及其mRNA在瘢痕癌中的高表达可能与细胞周期调控的反馈机制有关.
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p57KiP2和Cyclin A在喉癌中的表达及其临床意义
目的 研究细胞周期素依赖性激酶抑制因子p57KiP2和细胞周期素A(Cyclin A)在喉癌组织中的表达及其临床意义.方法 40例喉癌.20例声带不典型增生、20例正常喉组织切缘标本,免疫组化S-P法检测p57KiP2和Cyclin A的表达活性,比较分析其临床意义.结果 在喉癌组织中,p57KiP2阳性表达率42.5%,显著低于癌旁正常喉黏膜与不典犁增牛喉黏膜(P＜0.05),并与喉癌组织的分化程度和淋巴结转移特性相关(P＜0.05);Cyclin A阳性表达率55.0%,明显高于癌旁正常喉黏膜与不典型增生喉黏膜(P＜0.05),并与喉癌组织的分化程度和淋巴结转移特性相关(P＜0.05).p57KiP2与Cyclin A的表达活性呈负相关(P＜0.01).结论 p57KiP2的低表达及Cyclin A高表达在喉癌的发生、发展过程中可能发挥重要作用,其表达水平与喉癌的分化程度、淋巴结转移与否及预后密切相关,是判断喉癌恶性程度与淋巴结转移特性的重要参考指标.
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黄芪甲苷对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤的保护作用
目的 探讨黄芪甲苷对H2O2引起PC12细胞氧化应激损伤的保护作用与分子机制.方法 用H2O2作用PC12细胞建立氧化应激损伤模型,通过MTT法检测细胞活力;Hoechst 33258染色观察细胞内核酸形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡、胞内活性氧的产生及细胞周期变化情况;Western blot 检测细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin A、磷酸化p38及T-p38的表达.结果 成功建立了H2O2致PC12细胞氧化应激损伤模型;黄芪甲苷能够提高H2O2损伤的PC12细胞的活力,提升因H2O2导致的细胞凋亡率的下降,降低H2O2所致的胞内ROS升高的状况.机制研究表明:黄芪甲苷通过恢复H2O2诱导细胞周期蛋白Cyclin D1表达下调的情况,调控各细胞周期的百分比,恢复细胞的正常增殖;进一步研究发现黄芪甲苷是通过抑制H2O2对p38的激活发挥作用的.结论 黄芪甲苷对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过调控细胞周期蛋白Cyclin D1的表达来实现的,调控过程与p38/MAPK通路密切相关.该发现为临床上抗氧化治疗策略提供有益的实验依据.
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姜黄素对人绒毛膜癌JAR细胞增殖和细胞周期的影响
目的 研究姜黄素对人绒毛膜癌JAR细胞增殖抑制及细胞周期的影响,并探讨cyclin A及CDK2蛋白表达水平的变化.方法 用不同浓度的药物作用于JAR细胞,采用MTT检测药物对细胞的增殖抑制能力的影响,采用流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响,Western - blot检测cyclin A、CDK2的蛋白表达水平变化.结果 姜黄素能明显抑制JAR细胞增殖,且具有明显的剂量和时间依赖性,流式细胞术检测显示一定浓度药物作用细胞,可将细胞周期阻滞于S期,Western blot检测发现药物能下调cyclin A及CDK2蛋白的表达.结论 姜黄素能显著抑制JAR细胞增殖,使细胞周期阻滞于S期,其机制可能是通过下调cyclin A及CDK2蛋白表达水平所致.
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高温对HeLa细胞周期及周期因子Cyclin E和Cyclin A的影响
目的探讨高温时HeLa细胞周期进程受阻与细胞周期因子Cyclin E和Cyclin A表达的关系. 方法将人子宫颈癌细胞株(HeLa细胞)分为37℃、40℃和43℃ 3个温度组,每组均以相应的温度作用1 h.采用流式细胞仪检测各组HeLa细胞的细胞周期、免疫细胞化学方法测定其Cyclin E和Cyclin A的表达,并以图像分析仪测定免疫组织化学反应物的光密度(OD). 结果 40℃和43℃时,细胞周期受阻,大量细胞滞留于G1期,S期和G2/M期的细胞明显减少.Cyclin E和Cyclin A免疫反应阳性细胞明显减少、反应强度明显减弱.随着温度的升高,Cyclin E和Cyclin A免疫反应产物的平均OD值逐渐减小. 结论高温抑制了Cyclin E和Cyclin A的活性,阻滞了细胞周期的进程,使HeLa细胞滞留于G1期.
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周期蛋白A在大肠癌中的表达及其意义
目的探讨细胞周期蛋白(cyclin)A在大肠癌中的表达及临床意义.方法采用免疫组织化学方法检测不同年龄和分期患者的癌组织、癌旁黏膜及正常黏膜中cyclin A的表达.结果 (1)79例标本癌组织中cycli以表达的阳性率为70.9%;癌旁黏膜阳性率为5.1%;正常黏膜中均未见表达,癌旁黏膜及正常黏膜中cyclin A的表达均与癌组织比较差异有显著性(P＜0.01).(2)cyclinA的表达在患者不同年龄、肿瘤大小、组织学类型、浸润深度之间差异有显著性(P＜0.05).结论 cyclin A的过表达是大肠癌发生的早期事件,是影响大肠黏膜细胞正常细胞周期的重要途径之一.
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IFN-α1b对人子宫内膜腺癌细胞系JEC增殖的影响及机制
目的研究IFN-α1b对子宫内膜腺癌细胞系JEC增殖及细胞周期的影响.方法不同浓度的IFN-α1b作用24h后,通过细胞计数观察对JEC的抗增殖效应,应用流式细胞技术分析细胞周期改变和细胞周期调控因子p21,cyclin A和cyclin E的表达.结果不同浓度的IFN-α1b对JEC均有抗增殖作用,其中500U/ml抗增殖作用强.流式细胞仪(FCM)检测显示S期细胞积累,p21的表达增加和cyclin A表达减少,而cyclin E的表达增加.结论IFN-α1b能够抑制子宫内膜腺癌细胞系JEC的增殖,其机理可能与p21的表达增加和cyclin A表达减少,导致S期细胞积累有关.
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地塞米松对体外培养星形胶质细胞周期素 Cyclin E和Cyclin A表达的影响
目的:探讨地塞米松引起星形胶质细胞周期进程受阻与Cyclin E和Cyclin A表达的关系.方法:不同浓度的地塞米松(浓度为0、10-5、10-4、10-3mol/L)与纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞共同孵育24小时后,用免疫细胞化学方法检测Cyclin E和Cyclin A在星形胶质细胞内的表达情况,表达的强弱用平均光密度表示.结果:Cyclin A的表达随着地塞米松浓度的升高而减弱,各浓度组之间存在显著性差异(P<0.05),Cyclin E的表达在0、10-5、10-4 mol/L浓度组随着地塞米松浓度的升高而减弱,但在10-3mol/L浓度组反而表达增强,各浓度组之间存在显著性差异(P<0.05).结论:10-5、10-4mol/L浓度组星形胶质细胞周期进程受阻与Cyclin E和Cyclin A表达降低有关,而10-3mol/L浓度组星形胶质细胞周期进程受阻主要与Cyclin A表达降低有关.
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p27、Cyclin A在肝细胞癌中的表达及其意义
细胞周期调节因子p27及Cyclin A蛋白水平升高或基因改变与多种肿瘤的发生有关.用免疫组织化学SABC法,联合检测45例肝细胞癌(HCC)组织及30例癌旁肝组织中p27及CyclinA的表达,以探讨其与HCC发生、发展及侵袭转移的关系.
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EGFR、Cyclin A在胃癌中的表达及临床意义
目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)及细胞周期素A(Cyclin A)在胃癌组织中的表达及意义.方法:应用免疫组化法检测10例正常胃上皮组织和58例初治胃癌组织中EGFR、Cyclin A的表达情况.结果:10例正常胃组织未见EGFR及Cyclin A的阳性染色,EGFR与Cyclin A在胃癌组织中的阳性表达率分别为46.6％、48.3％.正常组织EGFR和Cyclin A表达与胃癌组织比较有显著性差异(P均＜0.05).EGFR、Cyc-lin A均与血管累犯正相关,此外,EGFR还与性别、肿瘤浸润深度、淋巴结转移相关,Cyclin A还与肿瘤细胞分化程度相关;EGFR与Cyclin A的表达呈正相关(P=0.001).结论:EGFR和Cyclin A在胃癌中的高表达可能与其发生发展过程有重要作用,并有可能成为靶向治疗的靶点.
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细胞周期蛋白D1,E,A在血管瘤及血管畸形中的表达及意义
目的 研究细胞周期蛋白D1,E,A在小儿及成人血管瘤和血管畸形中的表达以及在血管瘤增生、消退中的作用.方法 采用免疫组化SP法检测41例小儿血管瘤(增生期27例,消退期14例)、6例成人血管瘤、10例血管畸形中Cyclin D1,CyclinE,CyclinA的表达.结果 Cyclin D1与CyclinA阳性细胞指数在婴幼儿血管瘤增生组与消退组、增生组与畸形组、增生组与成人组之间差异有显著性(P＜0.05),而消退组、成人组与畸形组三者之间差异无显著性(P＞0.05).CyclinE在婴幼儿血管瘤增生组、消退组、畸形组、成人血管瘤阳性表达率分别为96%,57%,0%,0%,婴幼儿增生组与消退组、增生组与畸形组、增生组与成人组之间差异有显著性(P＜0.05),而消退组、成人组与畸形组三者之间差异无显著性(P＞0.05).结论 Cyclin D1,CyclinE,CyclinA可能通过促进细胞分裂、增殖作用而在血管瘤的发生、发展及退化过程中起重要作用.
