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牛磺酸对肺动脉平滑肌中活性氧及ERK1/2通路的影响
目的：探讨牛磺酸(Taurine，Tau)对缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中活性氧(ROS)及ERK1/2通路的影响。方法：原代培养大鼠PASMCs，选用第2-5代用于实验。Tau给药浓度80 mmol·L-1，作用时间24 h。实验分组为：1、常氧组2、常氧+Tau组3、缺氧组4、缺氧+Tau组。DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS含量，Westernblot检测磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达。结果：与常氧组比较，常氧+Tau组中ROS含量没有显著性变化；缺氧组中ROS显著上升，Tau可逆转缺氧诱导的ROS上升。Tau可以逆转缺氧诱导的ERK1/2磷酸化。结论：Tau可维持正常的PASMCs中ROS水平，并且抑制缺氧诱导的ERK1/2磷酸化。
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葛根素通过调控活性氧对缺氧诱导的PASMCs增殖的影响
探讨葛根素(puerarin,Pue)对缺氧所引起的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响,并探讨其机制是否通过调控活性氧来实现的.原代培养大鼠PASMCs,选用2～5代用于实验.利用体外噻唑蓝比色法(MTT)、蛋白免疫印记法、流式细胞、DCFH-DA荧光观察Pue对PASMCs增殖能力的影响.利用蛋白免疫印记法检测ROS是否参与Pue抑制PASMCs增殖的过程.实验分组为:常氧组、缺氧组、缺氧+ Pue组、缺氧+Pue+ Rotenone组、缺氧+Rotenone组.其中Rotenone为ROS阻断剂.结果显示,Pue对常氧条件下的PASMCs增殖无影响,可抑制缺氧引起的PASMCs增殖.在常氧和缺氧状态下Pue对PASMCs的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达均无影响;可以使缺氧导致的细胞周期蛋白(Cyclin A)、细胞增殖核抗原(PCNA)表达下调;DCFH-DA探针证明Pue能逆转缺氧引起的ROS含量升高.Rotenone与Pue均可抑制因缺氧诱导的HIF-1α,Cyclin A,PCNA表达上调且存在协同作用.这些结果说明,Pue可抑制缺氧引起的PASMCs增殖,这一作用可能是通过调控ROS来完成的.
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葛根素对PI3K/AKT通路介导PASMCS凋亡的影响
探讨葛根素(puerarin,Pue)对缺氧抑制的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡的影响,并研究细胞外信号PI3K/AKT通路是否参与了Pue诱导PASMCs凋亡的过程.以血清饥饿组(SD组)为对照组,通过噻唑蓝比色法(MTT)、Annexin VFITC凋亡检测试剂盒和蛋白免疫印迹法检测Pue对大鼠PASMCs凋亡情况的影响.采用蛋白免疫印记法检测PI3 K/A KT通路是否参与了Pue诱导缺氧抑制的PASMCs凋亡的进程中.结果显示,①常氧条件下Pue对PASMCs细胞凋亡无影响,缺氧可抑制PASMCs凋亡,常氧及缺氧条件下Pue对TNF-α表达无影响.Pue可以逆转缺氧诱导的Bcl-2(P＜0.01)表达上调以及Bax(P ＜0.01)表达下调.②常氧情况下Pue对P-AKT的表达没有影响,LY294002与Pue均可抑制缺氧诱导的Bcl-2,P-AKT表达上调以及Bax表达下调,与缺氧单独加Pue或缺氧单独加入LY294002对比,缺氧+Pue+ LY294002组Bcl-2,Bax,P-AKT表达变化更显著.结果表明,Pue可诱导缺氧抑制的PASMCs凋亡,并且可能是通过PI3K/AKT通路调控的.
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牛磺酸抑制缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及信号转导机制
目的:探讨牛磺酸(taurine,Tau)对缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响,并且研究细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路是否参与了Tau抑制PASMCs增殖的过程及可能的分子机制.方法:原代培养大鼠PASMCs,选用第2～5代用于实验.Tau给药浓度为80 mmol·L-1,ERK1/2阻断剂(PD98059)浓度为50 μmol·L-1,给药时间24 h.①体外噻唑蓝比色法(MTT)、细胞免疫荧光和蛋白免疫印记法检测牛磺酸在不同条件下对大鼠PASMCs增殖能力的影响,将细胞分为4组:常氧组、常氧+ Tau组、缺氧组、缺氧+Tau组.②蛋白免疫印记法检测ERK1/2通路是否参与了Tau抑制缺氧诱导PASMCs增殖的进程中.实验分为5组:常氧组、缺氧组、缺氧+Tau组、缺氧+Tau+ PD98059组、缺氧+PD98059组.结果:①缺氧可诱导PASMCs增殖,常氧情况下Tau对PASMCs细胞增殖无影响,常氧及缺氧条件下Tau对PASMCs中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达无影响.Tau可以逆转缺氧诱导的细胞增殖核抗原(PCNA) (P ＜0.01)、细胞周期蛋白A(Cyclin A)表达上调(P＜0.05).②常氧情况下Tau对磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的表达没有影响,缺氧使p-ERK1/2的表达上调(P＜0.01),Tau逆转缺氧诱导的p-ERK1/2表达上调(P＜0.05).PD98059与Tau均可抑制缺氧诱导的PCNA,Cyclin A,p-ERK1/2表达上调,与缺氧单独加药Tau或缺氧单独加入PD98059对比,缺氧+Tau+ PD98059组PCNA,Cyclin A,p-ERK1/2表达下调更显著.结论:Tau可抑制缺氧诱导的PASMCs增殖,并且可能是通过ERK1/2通路调控的.
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ERK1/2通路在低氧上调大鼠PASMCs钙激活性氯离子通道表达的作用
目的:探讨钙激活性氯离子通道(CLCA2)在大鼠低氧性肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中mRNA和蛋白表达的变化及其与ERK1/2信号通路的关系.方法:PASMCs随机分为:常氧组(N组),低氧组(H组),DMSO对照组(D组),U0126干预组(U组),Staurosporine aglycone干预组(SA组),采用免疫印迹法检测CLCA2蛋白的表达;选用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定CLCA2 mRNA水平的表达.结果:PASMCs中CLCA2 mRNA和蛋白的表达量,H组较N组明显上调(P＜0.01);U组较D组明显上调(P＜0.01);SA组较D组mRNA的表达显著下调(P＜0.01),蛋白的表达轻微下调.结论:低氧可上调CLCA2中mRNA和蛋白在PASMCs的表达;ERK1/2通路激活剂-Staurosporine aglycone能下调CLCA2在PASMCs中mRNA和蛋白的表达量;ERK1/2通路抑制剂-U0126可上调CLCA2在PASMCs中mRNA和蛋白的表达量.
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骨桥蛋白与低氧性肺动脉高压血管重塑
低氧性肺动脉高压(Hypoxia-induced Pulmonary Hypertension,HPH)是多种慢病高原病发病的中心环节,严重影响疾病的病程和预后,其主要特点是在低氧刺激下引起肺血管收缩和肺血管结构重建,这种改变在很大程度上是不可逆的.而在肺血管结构重建过程中,肺血管平滑肌细胞的增殖和凋亡失衡有着至关重要的作用.骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)作为一种多功能的糖基化蛋白,可在多种细胞中表达.作为一种新的细胞因子,骨桥蛋白参与组织代谢、细胞生长转移、免疫调节、伤口愈合、肿瘤进展等多种生命过程.虽然OPN在血管重塑中作用研究甚多,但OPN和血管平滑肌细胞增殖之间的联系在低氧引起血管重塑中的作用研究甚少.本文就OPN和肺动脉平滑肌细胞(Pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖在HPH形成中的作用作一综述.
