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GFP-hTRAIL融合蛋白表达质粒的构建与卵巢癌细胞内表达
目的构建GFP-hTRAIL融合蛋白表达质粒,测定其在卵巢癌细胞中的表达.方法以GFP基因为报告基因,hTRAIL为目的基因,将hTRAIL基因插入GFP基因上游,构建成GFP-hTRAIL融合基因表达质粒,并通过酶切和测序对重组体进行鉴定.经脂质体法转染培养的卵巢癌细胞,用荧光显微镜观察GFP 的表达.流式细胞仪分析转染后卵巢癌细胞的凋亡率.结果测序结果证实构建的为GFP-hTRAIL融合基因表达载体.质粒经脂质体转染后,有大约20% 的卵巢癌细胞表达融合蛋白.流式细胞仪结果表明转染该质粒可诱导卵巢癌细胞凋亡.结论构建了1个可以表达GFP-hTRAIL融合蛋白的新质粒,该表达载体的构建成功为进一步开展卵巢癌的基因治疗奠定了基础.
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华蟾素对卵巢癌3AO细胞存活素表达的影响和意义
目的 探讨华蟾素对体外培养的卵巢痛3AO细胞存活素表达的影响和意义.方法 体外培养卵巢癌3AO细胞,采用不同浓度的华蟾素干预后,应用RT-PCR检测存活素的表达,流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果 卵巢癌3AO细胞对照组的存活素mRNA表达为1.01±0.13,细胞凋亡率为(2.31±0.98)%;0.25 g/L华蟾素对卵巢癌3AO细胞存活素mRNA和细胞凋亡率无影响(P＞0.05);2.5 g/L华蟾素干预后,卵巢癌3AO细胞存活素mRNA表达为0.67 ±0.16,癌细胞凋亡率为(28.69±4.16)%,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05);25 g/L华蟾素与2.5 g/L华蟾素对卵巢癌3AO细胞存活素mRNA和癌细胞凋亡率的影响差异无统计学意义(P＞0.05).结论 2.5 g/L华蟾素即可抑制卵巢癌3AO细胞存活素mRNA的表达,抑制癌细胞的增殖.
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依托泊苷对卵巢癌细胞3AO肿瘤转移抑制基因KAI1表达的影响
目的 研究依托泊苷(VP16)对人卵巢上皮性癌细胞3AO的生长抑制作用及其对细胞中肿瘤转移抑制基因KAI1表达的影响.方法 倒置显微镜下观察3AO细胞在不同浓度的药物作用下形态学变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对3AO细胞的生长抑制作用;运用RT-PCR、免疫细胞化学的方法 分别从转录和蛋白翻译水平检测不同药物浓度作用的3AO细胞中肿瘤转移抑制基因KAI1的表达情况.结果 药物作用下,3AO细胞体积缩小,核固缩、深染及凋亡小体出现;MTT法结果 显示药物对3AO细胞的生长抑制率呈明显的剂量依赖性;免疫细胞化学染色显示VP16能显著上调肿瘤转移抑制基因KAI1的表达;RT-PCR检测结果 显示VP16能同样增强KAI1mRNA的表达.结论 VP16不仅能抑制卵巢上皮性癌细胞的生长,而且能增强癌细胞中肿瘤转移抑制基因KAI1的表达,可能为临床上抑制肿瘤转移的药物治疗带来希望.
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低密度脂蛋白-阿克拉霉素复合物对卵巢癌靶向治疗的研究
目的:研究卵巢癌3AO细胞对阿克拉霉素-低密度脂蛋白复合物(ACM-LDL)及游离ACM的摄取及ACM-LDL对卵巢癌细胞的靶向杀伤作用.方法:采用保温交换法制备ACM-LDL复合物,观察在相同的作用时间下,卵巢癌3AO细胞对ACM-LDL复合物及游离ACM的摄取量,测定细胞蛋白合成量及MTT法观察ACM-LDL复合物对卵巢癌细胞的杀伤作用.结果:(1)相同的作用时间内,卵巢癌3AO细胞摄取ACM-LDL复合物的量显著高于游离ACM;(2)ACM-LDL复合物对卵巢癌细胞具有剂量依赖性的生长抑制作用,当药物浓度达到20μg/ml时,细胞生长停止;(3)ACM-LDL复合物对卵巢癌细胞的杀伤作用显著强于游离ACM,ACM-LDL复合物的半数抑制量(ID50)为5μg/ml,而游离ACM的ID50为20μg/ml.结论:通过LDL受体(LDLR)的转运作用,以LDL为载体,可有效地提高卵巢癌细胞内的化疗药物浓度而相应地提高对癌细胞的杀伤作用.
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米非司酮对人卵巢癌3AO细胞体外增殖和性激素受体ER、PR的影响
目的:研究米非司酮对人卵巢上皮癌细胞株3AO体外增殖和性激素受体ER、PR表达的影响.方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测人卵巢上皮癌细胞株3AO体外增殖活性,以流式细胞间接荧光技术检测肿瘤细胞ER、PR蛋白表达率.结果:米非司酮以剂量和时间依赖方式抑制3AO细胞体外增殖活性,3AO细胞在不同浓度米非司酮(5、10、20、40、80μmol/L)和不同时间(24、48、72、96、120h)培养下,生长抑制率从1.7%增加至85.2%(P＜0.05),米非司酮和地塞米松联合应用与相同浓度的米非司酮单独应用比较,细胞增殖抑制率差异无统计学意义(P＞0.05).米非司酮浓度为10μmol/L,培养48 h,3AO细胞PR表达率为(12.7±1.4)%,明显低于对照组(44.9±1.4)%,(P＞0.01);3AO细胞ER表达率为(55.1±1.7)%,与米非司酮组ER表达率(52.3±0.8)%比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:米非司酮以剂量-时间依赖方式抑制人卵巢上皮癌3AO细胞体外增殖活性,其对3AO细胞的抑制作用与PR变化相关.
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热处理与顺铂、5-FU联用对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用
目的:探讨不同温度热处理对顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)及其各种联用方式对人卵巢癌细胞株3A0生长的抑制作用.方法:采用细胞培养及MTT方法检测在41、43及45℃温度条件下全量、半量DDP和5-FU及各种联用方式对3A0细胞株的生长抑制作用.结果:温度升高可显著抑制3A0细胞生长,且呈明显的温度依赖性;热处理可显著增强DDP及以DDP为主的联合化疗药物组的细胞生长抑制效果;43℃热处理对5-FU有一定的增强效应.热处理后DDP和5-FU的各种全量和半量联用方式均可达到同温度下全量DDP的细胞抑制效果.结论:DDP和5-FU联合应用及各种联用方式对人卵巢癌3AO细胞均有明显的杀伤作用,热处理可显著增强其杀伤作用.
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双酚A对激素相关肿瘤细胞增殖活性的影响
目的 研究环境雌激素双酚A(BPA)对人卵巢癌3AO细胞、子宫内膜癌HHUA细胞及前列腺癌DU145细胞株增殖活性的影响,探讨BPA的致瘤性.方法 将不同浓度的BPA以及17β-雌二醇(17β-E2)作用于3AO、HHUA及DU145细胞,并设溶剂对照,采用MTT法测定药物作用48 h的细胞增殖情况,并以浓度为10-9 mol/L的BPA、10-7mol/L的E2作用于三种细胞,检测药物作用0、24、48、72 h的细胞增殖活性.结果 与溶剂对照相比,BPA分别在10-5、10-9 mol/L的浓度促进3AO、HHUA及DU145细胞增殖(P<0.05);10-9 mol/L BPA作用48、72 h对HHUA及DU145细胞均有促增殖效应,与溶剂对照相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 BPA可促进激素相关肿瘤细胞3AO、HHUA及DU145的增殖,且其促进肿瘤细胞的增殖效应与剂量、时间相关.提示BPA的污染可能与激素相关性肿瘤的发生发展有关.
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乌苯美司对JAR,SKOV3和3AO细胞体外生长的抑制作用
目的:观察乌苯美司对人绒毛膜癌和卵巢癌细胞体外生长的抑制作用.方法:应用MTT比色法观察不同浓度的乌苯美司(0.5 g/L、1g/L、5 g/L、10 g/L、15 g/L、20g/L)对人绒毛膜癌JAR细胞、卵巢癌3AO细胞和SKOV3细胞的生长抑制作用,溴乙啶和丫啶橙荧光染色荧光显微镜观察凋亡细胞DNA结构改变.结果:乌苯美司能抑制JAR细胞、3AO细胞和SKOV3细胞的生长,且对JAR和SKOV3细胞的抑制作用呈时效(r=0.412,r=0.339,P均=0.000)和量效(r=0.704,r=0.753,P均=0.000)关系.5g/L乌苯美司作用48 h后荧光显微镜下见细胞染色质边聚,细胞核碎裂等凋亡改变.结论:乌苯美司通过细胞凋亡途径可抑制绒毛膜癌和卵巢癌细胞的生长.
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NS398逆转溶血磷脂酸拮抗顺铂抑制卵巢癌细胞增殖作用的研究
目的:观察环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂NS398对溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)拮抗顺铂抑制卵巢癌细胞细胞增殖作用的影响,并探讨其可能机制.方法:体外培养人卵巢癌细胞3AO,MTY法检测NS398对LPA拮抗顺铂抑制3AO细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化;RT-PCR检测LPA单独或合用NS398对3AO细胞表达COX-2的影响.结果:LPA对顺铂抑制卵巢癌细胞增殖有拮抗作用,并降低G_0/G_1期的细胞比率;联合用NS398后,卵巢癌细胞的生长显著受抑制,同时G_0/G_1期细胞比率上升;RT-PCR结果显示40μmol/L LPA能促进COX-2的表达,而合用NS398后COX-2表达降低.结论:NS398可能通过抑制COX-2表达,实现逆转LPA拮抗顺铂抑制卵巢癌细胞细胞增殖的作用.
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青蒿琥酯逆转人卵巢癌3AO细胞所致T淋巴细胞的免疫抑制研究
目的 研究新型抗瘤中药制剂青蒿琥酯(ART)对T淋巴细胞表面免疫因子的影响.方法 噻唑蓝(MTT)法筛选对卵巢癌3AO细胞增殖无明显影响的高ART浓度.收集经ART预处理后的3AO细胞培养上清液(ART-S组)及连续两次再培养上清液(ART-S1组和ART-S2组),以不经ART作用的相应同步培养的3AO细胞培养上清液作对照(Con-S组、Con-S1组、Con-S2组),以完全培养基代替3AO细胞培养上清液组为正常对照组(Con组),流式细胞计数法分析各组上清液对T细胞表面CD3ε+、CD3ε+r、IL-2Rα+免疫功能指标的影响.结果 对3AO细胞增殖无明显影响的高ART浓度为12.50 mg/L.Con组的CD3ε+、CD3ε+ζ+、IL-2Rα+细胞表达阳性率分别为(86.07±10.05)％、(25.09±5.84)％、(39.11±5.83)％.Con-S组3项免疫指标明显受抑制,抑制率分别为(50.17±8.02)％、(87.51±9.17)％、(64.84±9.74)％.ART直接作用后可明显下调单纯的3AO肿瘤细胞所致的3项T细胞免疫功能抑制.结论 青蒿琥酯对人卵巢癌3AO细胞所致T淋巴细胞免疫功能有一定的逆转作用.
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抑制卵巢癌3AO细胞增殖并促进细胞凋亡
目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导卵巢癌3AO细胞凋亡的分子机制.方法 用(12.5、25.0、50.0) ng/mL的重组人TRAIL蛋白与卵巢癌3AO细胞共孵育72 h,观察细胞的形态变化,在不同时间段收集细胞,MTT法检测细胞生长增殖,计算细胞的生长抑制率,annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,原位末端标记法(TUNEL)观察凋亡形态特征,Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3蛋白表达.结果 各浓度组的TRAIL都可以引起3AO细胞形态学改变,对细胞增殖均有抑制作用(P＜0.05),25 ng/mL和50 ng/mL TRAIL处理的3AO细胞出现明显的细胞凋亡和周期阻滞,随着药物作用时间的延长,G1期细胞比例逐渐增多,而S期和G2/M期细胞比例减少,caspase-3蛋白呈高表达,但两组之间的凋亡率和凋亡蛋白的表达无显著性差异(P＞0.05).结论 TRAIL是通过抑制细胞周期、阻滞DNA合成、活化caspase-3诱导卵巢癌3AO细胞凋亡.
关键词： TRAIL 3AO细胞 细胞凋亡 细胞周期 Caspase-3蛋白
