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骨髓间充质干细胞对前列腺癌细胞生物学行为的影响
背景：研究表明，骨髓间充质干细胞与肿瘤的发生和发展具有密切关系，不仅表现为对肿瘤有明显的募集作用，还表现在干预肿瘤细胞的生物学行为。
目的：探讨骨髓间充质干细胞对前列腺癌Du145细胞生物学行为的影响。
方法：采集健康成人骨髓间充质干细胞，实验组将前列腺癌Du145细胞和骨髓间充质干细胞分别接种于Transwel 小室的上下两室进行共培养，阳性对照组为人真皮成纤维细胞HDF-a细胞与人前列腺癌Du145细胞共培养，阴性对照组为野生型前列腺癌Du145细胞单独培养。培养3 d后，流式细胞仪检测前列腺癌Du145细胞的细胞周期，软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖活性，结晶紫染色观察Du145细胞迁移能力。
结果与结论：①与阳性对照组相比，实验组处于 G2/M+S 期的细胞比例、透过滤膜数量和克隆形成数明显减少；②结果表明，骨髓间充质干细胞通过缩短前列腺癌Du145细胞G2/M+S期，抑制前列腺癌Du145细胞的增殖和侵袭能力，为前列腺癌的治疗提供新的思路和方法。 -
冬凌草甲素通过抑制Akt通路诱导人雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145细胞凋亡
目的:观察冬凌草甲素对人雄激素非依赖性前歹列腺癌细胞DU145细胞增殖、凋亡的影响,并分析可能的作用机制.方法:体外培养的DU145细胞,用不同浓度冬凌草甲素(浓度0、10、20、40、80、100μmol/L)处理24、48、72 h,MTT法测定其对DU145细胞增殖的影响;冬凌草甲素(浓度分别为0、20、40、80μmol/L)处理DU145细胞48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Westem blot法检测Akt、p-Akt、p-GSK-3β、Bax及Bcl-2蛋白的表达情况.结果:冬凌草甲素对DU145细胞的增殖具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;DU145细胞经冬凌草甲素作用48 h后,细胞凋亡率显著增加;Bax表达上调,而Bcl-2表达下调;p-Akt及其下游蛋白p-GSK-3β的表达降低.结论:冬凌草甲素可通过抑制DU145细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Akt信号通路激活,继而上调Bax并下调Bcl-2有关.
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哺乳动物PUF家族蛋白PUMILIO1的伴侣蛋白研究
目的:探索NIH3T3和DU145细胞中PUM1蛋白的伴侣蛋白.方法:收集NIH3T3和DU145细胞进行免疫沉淀实验,实验组和对照组分别使用抗PUM1抗体和抗Goat-IgG抗体.通过银染实验观察实验组与对照组是否有差异性条带,通过质谱鉴定和Mascot软件对差异性条带所包含的蛋白进行分析,鉴定PUM1蛋白在细胞中发挥作用时的可能互动蛋白.结果:在NIH3T3和DU145细胞银染实验中,实验组凝胶泳道均在约37 KD处出现差异性条带.对NIH3T3细胞中差异性条带进行质谱分析,通过Mascot软件肽质量指纹谱搜索,将有真实差异的蛋白评分低阈值设为65,P＜0.05,结果显示肽段评分高的蛋白为NDFIP2蛋白.与NCBInr数据库比对,检测到针对NDFIP2的肽段的覆盖率为40％.结论:NDFIP2与哺乳动物PUM1蛋白在细胞内关联,可能是PUF家族蛋白的伴侣蛋白.
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吉非替尼对前列腺癌DU145细胞生长增殖及表皮生长因子受体蛋白表达的影响
目的:观察吉非替尼(Gefitinib)对前列腺癌DU145细胞的生长抑制作用及对细胞表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达水平变化的影响.方法:不同浓度的Gefitinib(0～20 μmol/L)分别作用于体外培养的前列腺癌DU145细胞24～120 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪测细胞周期分布,蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞EGFR蛋白表达水平.结果:Gefitinib可以显著抑制DU145细胞的生长,呈时间-剂量依赖效应,并且细胞生长多停滞于G0/G1期,细胞EGFR蛋白表达分别下降了10.92％(2.5 μmol/L)、43.71％(5 μmol/L)、53.53％(10 μmol/L)和85.98％(20 μmol/L),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:Gefitinib能显著抑制前列腺癌DU145细胞的生长,其机制可能与细胞生长在G0/G1期阻滞及EGFR蛋白表达水平下调等因素有关.
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德士康对前列腺癌激素非依赖型细胞株细胞周期的抑制作用
目的探讨中草药混合制剂德士康(暂定名)对雄激素非依赖型前列腺癌细胞株PC 3、DU145细胞周期的抑制作用和机制.方法MTT法检测用药后细胞增殖的改变,流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的改变,Western blot方法分析细胞周期相关蛋白表达的改变.结果德士康可抑制PC-3、DU145细胞的生长,PC-3、DU145分别主要受阻于G1期和G2/M期.用药组p16Ink4a蛋白表达增高,Rb磷酸化蛋白表达降低,伴有非磷酸化Rb蛋白的相应增多;而p21waf1、p27Kip1和细胞周期蛋白cyclin D1的表达均无明显改变.结论德士康可能是通过影响p16Ink4a蛋白的表达,改变细胞周期蛋白依赖蛋白激酶的活性,后作用于Rb,抑制其磷酸化而发挥作用,从而抑制PC-3、DU145细胞的生长,具有应用于临床治疗的前景.
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稳定表达miR-363-3p的重组慢病毒载体介导的前列腺癌细胞株DU145的构建及初步鉴定
目的 构建含有miR-363-3p的慢病毒表达载体,获得能够稳定表达miR-363-3p的DU145细胞株并初步进行细胞形态学实验.方法 利用PCR扩增miR-363-3p片段,插入慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-tRFP中构建重组慢病毒质粒pCDH-miR-363-3p.将慢病毒包装三质粒表达系统的重组慢病毒质粒pCDH-miR-363-3p,包装质粒psPAX以及包膜质粒pMD2.G共转染人胚肾上皮细胞(HEK293T)细胞中,同时以慢病毒空载体pCDH-vector作为阴性对照.收集含有病毒颗粒细胞的病毒上清液,测定Lentivirus-miR-363-3p和Lentivirus-vector的病毒滴度.再用重组慢病毒Lentivirus-miR-363-3p及阴性对照Lentivirus-vector以相同感染复数(MOI)的病毒量分别感染DU145细胞,72 h后,在荧光显微镜下通过观察红色荧光蛋白(RFP)的表达情况观察被感染细胞数.采用反转录实时定量PCR (RT-qPCR)方法检测两组细胞系中miR-363-3p表达情况.将获得的两组细胞进行平板划痕实验,初步观察其细胞生长行为的差异.结果 PCR成功扩增出miR-363-3p片段,插入慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-tRFP后,利用限制性内切酶酶切鉴定和核酸序列测定证实重组慢病毒质粒pCDH-miR-363-3p构建成功.通过慢病毒包装三质粒表达系统获得表达miR-363-3p的重组慢病毒,测得滴度约为1.5×107 efu/ml.以相同MOI的重组慢病毒Lentivirus-miR-363-3p以及Lentivirus-vector分别感染DU145细胞72 h后,在荧光显微镜下能够明显观察到红色荧光,且RT-qPCR检测结果显示,感染miR-363-3p DU145细胞中miR-363-3p表达水平显著高于感染miR-vector DU145细胞,差异有统计学意义(P＜0.01).平板划痕实验结果显示划痕后24 h时两组细胞生长具有明显差异(P＜O.01),但48 h时两组生长的细胞均已完全覆盖划痕.结论 成功构建了含miR-363-3p的慢病毒表达载体,获得的重组慢病毒能够有效地感染DU145细胞,为下一步实验奠定了坚实的基础.初步的细胞形态学实验-平板划痕显示划痕后24h两组细胞生长存在差异.
关键词： 前列腺癌 激素非依赖性 miR-363-3p 重组慢病毒载体 Du145细胞 -
环巴胺对DU145细胞增殖和细胞周期的影响
目的:研究Hedgehog信号通路阻断剂(环巴胺)对DU145细胞增殖的抑制作用. 方法:不同浓度(1、10、50、100μmol/L)环巴胺干预DU145细胞,分别在24、48、72 h后采用噻唑蓝比色法检测其对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测环巴胺对细胞周期的影响;RT-PCR检测50 μmol/L环巴胺作用48 h后实验组和对照组细胞周期蛋白E(cyclin E)mRNA表达水平的差异. 结果:环巴胺对DU145细胞的抑制作用呈时效和量效依赖关系,当浓度>10 μmol/L作用24 h后会显著抑制细胞增殖,10、50、100 μmol/L浓度组对细胞的抑制率分别为7.42%、12.70%和59.15%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞术检测发现,当环巴胺浓度达10 μmol/L以上,干预48 h后G1期细胞比例明显升高.对照组、10、50 μmol/L浓度组的GJ期细胞百分比分别为:(52.17±2.21)%、(60.13±2.75)%和(74.30±3.52)%,差异有统计学意义(P<0.01);凋亡峰也随环巴胺浓度增加而逐渐增高.50 μmol/L环巴胺作用48 h后DU145细胞cyclin E mRNA表达显著降低,与空白对照组相比降{氐61.90%(P<0.01). 结论:环巴胺可以抑制DU145细胞的增殖能力,其机制可能与下调DU145细胞cyclin E mRNA表达水平,从而将DU145细胞阻滞于G1期有关.环巴胺亦可以诱导DU145细胞凋亡.
关键词： 环巴胺 前列腺癌 Du145细胞 Hedgehog信号通路 细胞周期 -
隐丹参酮对前列腺癌DU145细胞中异黏蛋白表达的影响
目的:探讨隐丹参酮对前列腺癌DU145细胞增殖及细胞凋亡的作用,并初步探讨隐丹参酮对DU145细胞中异黏蛋白(MTDH)表达及下游PI3 K/AKT信号通路的影响. 方法:四氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度隐丹参酮分别作用DU145细胞24、48、72 h后对细胞的生长抑制作用;原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡情况;Western印迹检测不同浓度隐丹参酮及作用不同时间对DU145细胞中MTDH蛋白的表达影响;RT-PCR技术检测隐丹参酮分别作用DU145细胞12、24、48 h后细胞中MTDH mRNA的表达情况;Western印迹检测隐丹参酮作用DU145细胞48 h后细胞中MTDH、AKT、p-AKT、Bcl-2蛋白的表达情况. 结果:隐丹参酮能够明显抑制DU145细胞增殖,且抑制效应呈剂量和时间依赖性(P＜0.05);以10 μmol/L隐丹参酮作用DU145细胞24、48、72 h后细胞凋亡率分别为(29.42±4.51)％、(55.07±5.67)％和(70.84±4.66)％,明显高于对照组(3.1±2.48)％(P＜0.05).Western印迹和RT-PCR结果显示,隐丹参酮可在转录和翻译水平下调MTDH的表达(P＜0.05),抑制AKT信号通路和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P＜0.05). 结论:隐丹参酮可抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能是通过下调MTDH表达,抑制其下游PI3K/AKT信号通路.
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硼替佐米增强前列腺癌细胞对NK细胞介导细胞杀伤作用的敏感性
目的:探讨硼替佐米是否能够增强前列腺癌细胞对NK细胞介导杀伤作用的敏感性,以及是否在不同类型的人前列腺癌细胞系中有相似的作用. 方法:以激素依赖性的前列腺癌细胞株LNCaP和激素非依赖性的前列腺癌细胞株DU145为模型,不同浓度(0、5、10、15、20、25 nmol/L)硼替佐米处理细胞后,CCK-8法检测肿瘤细胞的增殖,Annexin V/PI法检测细胞凋亡率. 结果:15、20、25 nmol/L硼替佐米处理DU145细胞48、72 h后,各处理组细胞的增殖率分别为(82.79±2.04)％、(73.59±2.95)％、(74.16±6.16)％和(71.24±5.30)％、(51.20±2.91)％、(38.02±2.67)％,同样处理LNCaP细胞后,各处理组细胞的增殖率分别为(77.04±7.74)％、(42.61±6.62)％、(23.85±6.04)％和(36.45±7.02)％、(14.94±5.76)％、(11.65±5.87)％.与对照组相比,硼替佐米强烈抑制两种细胞系的增殖(P＜0.05).15、20、25 nmol/L硼替佐米处理DU145细胞24h后,DU145细胞的凋亡率分别为(14.41±1.32)％、(16.13±1.55)％、(14.48±1.42)％,而在lNCaP细胞,20、25 nmol/L硼替佐米处理24h后,凋亡率为(12.77±1.28)％和(14.84±1.65)％,与对照组相比有统计学差异(P＜0.05),DU145细胞对硼替佐米诱导的凋亡作用较LNCaP细胞更加敏感.但是,在短期分析中硼替佐米不能致敏两种细胞系对NK细胞介导的杀伤作用.在长效分析中,用硼替佐米处理肿瘤细胞后,20 nmol/L硼替佐米±NK组诱导的DU145细胞和LNCaP细胞凋亡率分别为(41.83±5.06)％和(30.31±3.62)％,较单独应用硼替佐米或者NK细胞更高(P＜0.05).结论:硼替佐米能够应用于致敏前列腺癌细胞对NK细胞介导的杀伤作用的敏感性,提高当前前列腺癌的治疗水平.而且此治疗策略对雄激素非依赖性的前列腺癌患者更有效.
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前列腺癌中netrin-1/UNC5B的表达及临床意义
目的:通过比较不同侵袭能力的前列腺癌细胞netrin-1/UNC5B表达量的差异,为前列腺癌寻找新的生物标志物及治疗手段. 方法:选取前列腺癌细胞系DU145、22RV1、PC3、PC3M、RWPE-1,通过RT-PCR、Western 印迹检测netrin-1/UNC5B的表达及其差异,并通过免疫荧光检测配体netrin-1及其受体UNC5B在前列腺癌细胞中的定位. 结果:netrin-1/UNC5B在前列腺癌细胞中均表达,侵袭能力强的前列腺癌细胞中netrin-1表达量明显增多(P＜0.05),而UNC5B在RWPE-1(正常细胞)中表达量明显增多(P＜0.05). 结论:netrin-1/UNC5B表达量与前列腺癌的浸润及进展程度紧密关联,有望作为一种潜在的生物标志物来预测前列腺癌的恶性程度.
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CMVE-PEG3启动子在前列腺癌DU145细胞中的活性鉴定
[目的]比较CMVE-PEG3p、PEG-3启动子在DU145细胞中的启动活性,为前列腺癌靶向性基因治疗提供依据.[方法]用PCR法扩增CMV增强子、PEG-3启动子；在真核表达质粒pShuttle-EGFP基础上分别构建2种启动子调控的、以绿色荧光蛋白为目的基因的真核表达质粒pShuttle-CMVE-PEG3p-EGFP、pShuttle-PEG3p-EGFP.将重组质粒用脂质体分别转染前列腺癌DU145细胞和人正常前列腺上皮细胞RWPE-1,72h后用Imagepro-Plus6.0分析2种启动子在相同时间内启动绿色荧光蛋白的表达水平.[结果]重组质粒在DU145细胞中观察到了绿色荧光,在RWPE-1细胞中无绿色荧光.pShuttle-CMVE-PEG3p-EGFP质粒在DU145细胞中表达强于pShuttle-PEG3p-EGFP.2种质粒在DU145细胞中的荧光强度(IOD)分别为246.22、130.93.[结论]所克隆的CMVE-PEG3p启动子和PEG-3启动子在前列腺癌DU145细胞中均表现出肿瘤特异性,其中CMVE-PEG3p启动子具有更强的启动效应,有望开发成为前列腺癌靶向性基因治疗的工具.
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汉防己甲素联合阿霉素体外逆转前列腺癌细胞耐药机制研究
目的 探讨汉防己甲素(Tet)联合阿霉素(DOX)体外逆转耐药型前列腺癌(DU145/DOX)细胞耐药的可行性及潜在机制.方法 采用经典的DOX浓度梯度诱导法制备DU145/DOX细胞,然后采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法测定Tet干预对DU 145/DOX细胞生长抑制的作用,凋亡试剂盒测定联合用药对耐药细胞凋亡诱导的影响,流式细胞仪和荧光分光光度计分别测定Tet对DOX和荧光探针罗丹明123(R123)被DU 145/DOX细胞摄取行为,Pgp-GloTM分析系统测定Tet对p-糖蛋白(P-gp)ATP酶活性的影响,Western blot法测定Tet对耐药细胞膜上P-gp蛋白表达的影响,RT-PCR法测定Tet对DU145/DOX细胞MDR1 mRNA表达的影响.结果 Tet组、DOX组、DOX+Tet(1/5)组对DU145/DOX细胞的半数抑制浓度(IC50,以COX浓度计算)分别为(7.16±0.54)、(1.62±0.09)、(0.37±0.03)μM,Tet能明显增强DOX的抗肿瘤作用.DOX+Tet(1/5)组诱导DU145/DOX细胞凋亡率是DOX组的2.1倍.Tet的参与能明显提高DU145/DOX细胞内DOX和R123的累积量,其机制可能与Tet刺激细胞内P-gp ATP酶活性、降低细胞膜上P-gp蛋白表达有关.Tet可能通过降低耐药基因表达的机制,联合DOX提高对DU 145/DOX细胞杀伤作用.结论 Tet与DOX体外联合使用具有逆转DU 145/DOX细胞耐药的潜力,作用机制可能涉及刺激耐药泵酶活性、降低耐药蛋白表达量、下调MDR1 mRNA表达等.
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阿司匹林对基质金属蛋白酶9启动子活性的影响
目的:通过研究基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)启动子片段的活性以及阿司匹林(aspirin)对启动子活性的调控,了解阿司匹林在前列腺癌的防治方面的机制.方法:DU145细胞体外培养,分别在24、48、72 h采用MTT法检测不同浓度的阿司匹林对DU145的毒性.构建含人MMP-9基因5侧翼序列-1.28、-0.67、0.54、0.52 kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体,用Lipofetamine 2 000转染试剂瞬时转染DU145细胞,CAT-ELISA测定各重组体的CAT值,及在乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)和/或阿司匹林作用下各重组体的CAT值.结果:低浓度的阿司匹林(≤1 mmol·L-1)对DU145细胞毒性无明显差别.在无乙酸肉豆蔻佛波酯刺激的作用下,pCAT 1.28 和pCAT 0.65 的CAT表达量分别为对照组的2倍和 1.6 倍,而在乙酸肉豆蔻佛波酯的刺激下,pCAT 1.28、pCAT 0.65 和pCAT 0.54 的CAT表达量分别为对照组的 2.5、2.2 和 1.3 倍.阿司匹林对pCAT 1.28、pCAT 0.65 活性具有抑制作用且这种抑制作用可以被乙酸肉豆蔻佛波酯所抵消.结论:MMP9启动子的活性区域主要集中于-1285～-523之间的区域;阿司匹林可以在转录水平上下调MMP-9的表达,从而可能抑制前列腺癌的发生发展.
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全人源抗前列腺癌ScFv抗体的筛选及生物学特性研究
目的 从已成功建立的前列腺癌噬菌体抗体库中筛选抗人前列腺癌单链抗体(ScFv),并分析其生物学特性.方法 以良性前列腺增生(BPH)细胞与噬菌体抗体库共孵育,去除抗体库中能够与BPH细胞结合的噬菌体抗体,再以前列腺癌细胞系DU145与去除非特异性结合后的噬菌体抗体库共孵育,通过“吸附-洗脱-扩增”对前列腺癌的噬菌体抗体库进行3轮的富集.采用流式细胞术筛选出对人前列腺癌细胞系DU145高亲合力的阳性克隆.阳性噬菌体克隆经亚克隆并转染大肠杆菌TG1,表达出可溶性ScFv抗体.采用流式细胞术、免疫荧光法分析其生物学特性.结果 以前列腺癌细胞系DU145为抗原,筛选出19个噬菌体抗体,经测定C11与DU145细胞亲合力高,亚克隆至原核表达载体表达纯化为C11 ScFv抗体.流式细胞术和免疫荧光法检测结果均显示,C11ScFv抗体与前列腺癌细胞DU145和PC3结合,与BPH细胞不结合.结论 通过噬菌体展示技术筛选到前列腺癌细胞系高亲合力的可溶性ScFv抗体,为进一步研究抗体的靶向性治疗奠定了基础.
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双酚A对激素相关肿瘤细胞增殖活性的影响
目的 研究环境雌激素双酚A(BPA)对人卵巢癌3AO细胞、子宫内膜癌HHUA细胞及前列腺癌DU145细胞株增殖活性的影响,探讨BPA的致瘤性.方法 将不同浓度的BPA以及17β-雌二醇(17β-E2)作用于3AO、HHUA及DU145细胞,并设溶剂对照,采用MTT法测定药物作用48 h的细胞增殖情况,并以浓度为10-9 mol/L的BPA、10-7mol/L的E2作用于三种细胞,检测药物作用0、24、48、72 h的细胞增殖活性.结果 与溶剂对照相比,BPA分别在10-5、10-9 mol/L的浓度促进3AO、HHUA及DU145细胞增殖(P<0.05);10-9 mol/L BPA作用48、72 h对HHUA及DU145细胞均有促增殖效应,与溶剂对照相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 BPA可促进激素相关肿瘤细胞3AO、HHUA及DU145的增殖,且其促进肿瘤细胞的增殖效应与剂量、时间相关.提示BPA的污染可能与激素相关性肿瘤的发生发展有关.
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白花蛇舌草对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响
目的:观察白花蛇舌草提取物对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:不同浓度(0.25 g·L-1、0.5g·L-1、1g·L-1)白花蛇舌草提取物作用人前列腺癌DU145细胞24 h、48 h、72 h后,使用CCK-8法检测白花蛇舌草提取物对DU145细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡的改变;实时定量PCR检测COX-2 mRNA和PCNA mRNA的表达;Western bloting法检测Bcl-2、Bax、Caspase3、CyclinD1蛋白表达.结果:随着作用时间的延长和剂量的增加,白花蛇舌草提取物对DU145细胞增殖抑制率明显提高,呈时效和量效依赖效应.白花蛇舌草提取物作用48 h后,可明显提高细胞凋亡率,下调DU145细胞COX-2 mRNA、PCNA mRNA及Bcl-2、CyclinD1蛋白表达,上调Bax、Caspase3蛋白表达,呈量效依赖效应.结论:白花蛇舌草提取物能降低人前列腺癌DU145细胞增殖能力,并诱导其凋亡,其机制可能与改变细胞周期和影响凋亡相关基因表达有关.
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重楼提取物抑制DU145细胞增殖作用及其机制研究
目的:研究重楼提取物对前列腺癌细胞DU145的增殖抑制作用及其可能机制.方法:采用MTT法检测重楼不同提取物对DU145细胞增殖的影响,同时运用克隆形成抑制实验观察正丁醇提取物对DU145细胞的增殖抑制作用,荧光倒置显微镜下观察加药前后细胞形态的变化,运用RT-PCR检测重楼正丁醇提取物对DU145细胞中Caspase-3、Survivin、BAX、BCL-2 mRNA表达的影响.结果:MTT结果显示,重楼不同提取物对DU145细胞的增殖均有一定的抑制作用,其中以正丁醇提取物的抑制作用强;RT-PCR结果显示,重楼正丁醇提取物能促进DU145细胞Caspase-3、BAX mRNA表达并抑制Survivin、BCL-2 mRNA表达.结论:重楼提取物抑制DU145细胞增殖作用的机制可能与其促进Caspase-3、BAX mRNA表达及抑制Survivin、BCL-2 mRNA表达有关.
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抑制Hedgehog信号通路对前列腺癌DU125细胞增殖及凋亡的影响
目的 研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对前列腺癌Du145细胞增殖及凋亡的影响.方法 体外培养DU145细胞,以10、50、100 μmol/L的环王巴明作用24 h,MTT法检测环王巴明对DU145细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对DU 145细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对DU145细胞Gli-1 mRNA表达的变化,Westernblot检测环王巴明对DU145细胞Gli-1蛋白表达的变化.结果 MTT检测结果表明10 μmol/L环王巴明组(85.01±2.61)％、50μmol/L环王巴明组(76.71±3.13)％和100 μmol/L环王巴明组(69.10±4.11)％细胞活性较空白对照组(99.97±0.21)％降低(P＜0.05);流氏细胞技术检测结果表明10 μmol/L环王巴明组(15.12±0.21)％、50μmol/L环王巴明组(24.97±0.24)％和100 μmol/L环王巴明组(31.26±0.26)％细胞总凋亡率较空白对照组(2.56±0.28)％升高(P＜0.05);RT-PCR检测结果表明10 μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)％、50 μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)％和100 μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)％Gli-1mRNA表达水平较空白对照组(0.92±0.11)％降低(P＜0.05);Western blot检测结果表明10 μmol/L环王巴明组(0.79±0.06)％、50 μmol/L环王巴明组(0.59±0.05)％和100 μmol/L环王巴明组(0.41±0.04)％ Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.94±0.11)％降低(P＜0.05).结论 Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制DU145细胞增殖、诱导DU145细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关.
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前列腺癌DU145细胞相关蛋白在构建体内三维空间模型中的表达研究
目的 探讨前列腺癌相关蛋白在胶原、琼脂糖、基质胶、海藻酸钠加明胶4种支架材料培养的前列腺癌 D U 145细胞中的表达水平.方法 将前列腺癌DU145细胞按照一定比例接种至胶原、琼脂糖、基质胶、海藻酸钠加明胶4种支架材料中 ,分别分组进行移植瘤模型的三维培养 ,然后采用免疫组化方法检测 M M P9、FN1、Laminin等3个前列腺癌相关蛋白在3 种支架材料中培养的DU145细胞构建移植瘤模型后培养的组织中表达情况.结果 MMP9 在有支架材料培养的前列腺癌 DU145 中蛋白表达高于无支架材料培养的组织 ;FN1在海藻酸钠加明胶组中蛋白表达阴性 ,在琼脂糖与胶原组中蛋白表达阳性且明显强于空白组 ;Lamininm在空白组与海藻酸钠加明胶组中均表达阳性 ,但明显低于胶原、琼脂糖、基质胶组的强阳性.结论 采用支架材料的三维培养体系优于无支架材料的二维培养体系.胶原为体内前列腺癌DU145细胞三维培养的优支架材料.
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低频低功率超声联合微泡对DU145细胞及PC3细胞早期凋亡的影响
目的 比较低频低功率超声联合微泡造影剂对人前列腺癌DU145细胞与PC3细胞早期凋亡率的不同影响.方法 使用低频低功率超声连续波辐照人前列腺癌DU145细胞和PC3细胞悬液60 s,实验中两种细胞系各分为4组:空白对照组(A组)、单纯微泡组(B组)、单纯超声组(C组)和超声联合微泡组(D组),辐照后细胞继续培养24 h,流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,透射电镜观察细胞形态改变.结果 两种细胞D组的早期细胞凋亡率明显高于其余各组(P＜0.01),C组亦均高于A组(P＜0.05),A、B组之间差异无统计学意义；两种细胞经相同处理后,C、D组PC3细胞的早期细胞凋亡率均高于DU145细胞(P＜0.01).透射电镜下两种细胞D组可见癌细胞体积变小变圆,空泡增多,有明显的凋亡小体形成,PC3细胞内还可见大量的自噬体出现.结论 低频低功率超声联合微泡造影剂能明显诱导人前列腺癌细胞的早期凋亡,且对PC3细胞早期细胞凋亡作用强于DU145细胞.
