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miR-363-3p在胃癌组织中的表达及其对细胞系HGC-27增殖、迁移与侵袭功能的影响
目的 探讨miR-363-3p在胃癌及癌旁样本中的表达差异,并分析其在胃癌细胞系中的功能.方法 使用realtime PCR检测59例胃癌组织及对应癌旁组织中miR-363-3p的表达差异;使用miR-363-3p模拟物(miR-363-3p-mimic)实现miRNA在胃癌细胞系HGC-27中的过表达,经增殖实验、划痕实验和Transwell实验,检测miR-363-3p对HGC-27细胞功能的影响.结果 miR-363-3p抑制胃癌细胞系HGC-27细胞增殖(P＜0.05,P＜0.01),抑制胃癌细胞系HGC-27细胞迁移(P＜0.001),miR-363-3p对抑制胃癌细胞系细胞的侵袭(P＜0.05).结论 miR-363-3p在胃癌发生中可能起到抑癌作用,并有可能成为对胃癌治疗的一个新靶点.
关键词： 胃癌 HGC-27 miR-363-3p -
miR-363-3p促进人浆细胞样树突细胞干扰素α分泌的机制研究
目的:观察miR-363-3p对人浆细胞样树突细胞(plasmacytoid dendritic cells,pDCs)分泌干扰素α(interferon,IFN-α)的影响,探讨其在Ⅰ型IFN通路中的调控作用及其可能的作用机制.方法:通过磁珠分选获得高纯度的人外周血pDCs,予TLR7刺激剂活化.采用体外脂质体转染使pDCs高表达miR-363-3p,检测其活化后分泌的IFN-α.采用生物信息学预测miR-363-3p可能作用的靶蛋白,并用双荧光报告基因系统证实其与靶蛋白间的相互作用.结果:磁珠分选获得的pDCs纯度大于95％,其活化后分泌高浓度的IFN-α.体外过表达miR-363-3p可促进pDCs分泌IFN-α.生物信息学预测miR-363-3p作用的靶蛋白可能为信号调节蛋白α(signal-regulatory protein alpha,SIRPα);双荧光报告实验结果提示,miR-363-3p过表达能显著抑制重组SIRPα 3'UTR荧光素酶表达载体的荧光素酶活性.结论:miR-363-3p可能通过作用于其靶基因SIRPα,进而促进pDCs分泌IFN-α.本研究进一步阐明了Ⅰ型IFN通路的调控机制,为Ⅰ型IFN相关自身免疫病的诊断、治疗提供了新的生物学靶点.
关键词： miR-363-3p 浆细胞样树突细胞 系统性红斑狼疮 干扰素α 信号调节蛋白α -
稳定表达miR-363-3p的重组慢病毒载体介导的前列腺癌细胞株DU145的构建及初步鉴定
目的 构建含有miR-363-3p的慢病毒表达载体,获得能够稳定表达miR-363-3p的DU145细胞株并初步进行细胞形态学实验.方法 利用PCR扩增miR-363-3p片段,插入慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-tRFP中构建重组慢病毒质粒pCDH-miR-363-3p.将慢病毒包装三质粒表达系统的重组慢病毒质粒pCDH-miR-363-3p,包装质粒psPAX以及包膜质粒pMD2.G共转染人胚肾上皮细胞(HEK293T)细胞中,同时以慢病毒空载体pCDH-vector作为阴性对照.收集含有病毒颗粒细胞的病毒上清液,测定Lentivirus-miR-363-3p和Lentivirus-vector的病毒滴度.再用重组慢病毒Lentivirus-miR-363-3p及阴性对照Lentivirus-vector以相同感染复数(MOI)的病毒量分别感染DU145细胞,72 h后,在荧光显微镜下通过观察红色荧光蛋白(RFP)的表达情况观察被感染细胞数.采用反转录实时定量PCR (RT-qPCR)方法检测两组细胞系中miR-363-3p表达情况.将获得的两组细胞进行平板划痕实验,初步观察其细胞生长行为的差异.结果 PCR成功扩增出miR-363-3p片段,插入慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-tRFP后,利用限制性内切酶酶切鉴定和核酸序列测定证实重组慢病毒质粒pCDH-miR-363-3p构建成功.通过慢病毒包装三质粒表达系统获得表达miR-363-3p的重组慢病毒,测得滴度约为1.5×107 efu/ml.以相同MOI的重组慢病毒Lentivirus-miR-363-3p以及Lentivirus-vector分别感染DU145细胞72 h后,在荧光显微镜下能够明显观察到红色荧光,且RT-qPCR检测结果显示,感染miR-363-3p DU145细胞中miR-363-3p表达水平显著高于感染miR-vector DU145细胞,差异有统计学意义(P＜0.01).平板划痕实验结果显示划痕后24 h时两组细胞生长具有明显差异(P＜O.01),但48 h时两组生长的细胞均已完全覆盖划痕.结论 成功构建了含miR-363-3p的慢病毒表达载体,获得的重组慢病毒能够有效地感染DU145细胞,为下一步实验奠定了坚实的基础.初步的细胞形态学实验-平板划痕显示划痕后24h两组细胞生长存在差异.
关键词： 前列腺癌 激素非依赖性 miR-363-3p 重组慢病毒载体 Du145细胞 -
miR-363-3p在胃癌中的表达及其临床意义
目的 探讨miR-363-3p在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系.方法 应用Real-time PCR方法检测7种不同分化程度胃癌细胞株和56例胃癌组织及其对应非癌胃黏膜组织中miR-363-3p的表达,并结合临床资料分析其与胃癌临床病理特征的关系.结果 miR-363-3p的表达除AGS高分化胃癌细胞株外,在其余6种胃癌细胞株中均显著低于正常胃黏膜细胞株GES-1 (P ＜0.05),且胃癌细胞的分化程度越差,其表达量越低;miR-363-3p在胃癌组织中的表达量显著低于非癌胃黏膜组织(P＜0.01);miR-363-3p在高/中分化胃癌组织中的表达显著高于低分化胃癌组织(P=0.035),不同TNM分期患者miR-363-3p的表达量在Ⅰ/Ⅱ期显著高于Ⅲ/Ⅳ期(P=0.046),miR-363-3p的表达量在有淋巴结转移的患者中显著低于无淋巴结转移的患者(P=0.021).结论 miR-363-3p在胃癌细胞和组织中表达明显下调,且与胃癌的分化程度、病理分期及淋巴结转移等密切相关.
关键词： 胃肿瘤 miR-363-3p 临床病理学 -
miR-363-3p和miR-5100在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
目的:探讨小分子RNA(microRNA)miR-363-3p 和miR-5100在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义.方法:利用荧光定量PCR的方法,检测肿瘤组织、癌旁组织及远离肿瘤的正常组织中致癌基因Myc的mRNA 和miR-363-3p、miR-5100的表达,然后分析miR-363-3p 和miR-5100与临床病理特征之间的相关性.结果:Myc在肿瘤组织中表达明显升高;miR-363-3p在肺癌组织中的表达明显低于正常组织(P<0.001),而在癌旁组织中的表达却远远高于正常组织(P<0.05);miR-5100在肺癌组织中的表达显著地高于正常组织(P<0.001),并且癌旁组织中的表达也高于正常组织(P<0.05).临床相关性分析显示,miR-363-3p的表达与淋巴结转移呈正相关(P<0.001),miR-5100的表达与临床分期也呈正相关性(P<0.05).结论:miR-363-3p 和miR-5100可能参与了非小细胞肺癌早期的发生和转移,并可能作为早期诊断和预后的分子标志物.
关键词： miR-363-3p miR-5100 非小细胞肺癌
