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硒通过核内积累IKKα诱导Jurkat细胞自噬依赖的caspase 8激活
目的 重点探索超营养剂量的亚硒酸钠诱导白血病Jurkat细胞自噬和凋亡的分子机制.方法 Western blot实验,明确亚硒酸钠对IKK α、P73、UVRAG以及凋亡标志性蛋白天冬氨酸蛋白水解酶8(caspase 8)的表达及活性影响.用细胞转染技术,明确相关信号分子在Jurkat细胞死亡过程中发挥的作用.间接免疫荧光实验用于判断相关分子在细胞内的定位情况.结果 20 μmol/L亚硒酸钠可有效促进Jurkat细胞发生自噬和caspase 8相关的细胞凋亡(P＜0.05),且caspase 8的活化依赖于细胞内的自噬水平(P＜0.05).此外,IKK α在细胞核内发生积累(P＜0.05),进一步调节P73及自噬关键蛋白UVRAG的含量改变(P＜0.05).结论 超营养剂量的亚硒酸钠通过核内积累IKK α,诱导Jurkat细胞发生自噬依赖的caspase 8激活及凋亡.
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重组腺病毒AdE-SH2-Caspase 8对耐伊马替尼的K562/G01细胞凋亡的影响
目的:研究表达融合蛋白SH2-Caspase 8的重组腺病毒AdE-SH2-Caspase 8-HA-GFP(SC)对BCR/ABL阳性的耐伊马替尼的K562/G01细胞凋亡的影响.方法:K562/G01细胞经重组的腺病毒SC感染后,分别设突变AdE-SH2m-Caspase 8-HA-GFP(SmC)组、病毒空载AdEGFP(CMV)组和PBS对照组.荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测病毒感染效率,Western blot检测融合蛋白SH2-Caspase 8-HA的表达水平,光学显微镜观察经瑞氏染色后的细胞形态,FCM和DNA梯度电泳检测细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase3和PARP的表达水平.结果:重组腺病毒在K562/G01细胞中的感染效率较高;Western blot能检测到目的蛋白SH2-Caspase 8-HA的表达;与对照组比较,瑞氏染色后SC组出现明显的凋亡形态改变,FCM检测结果表明SC组早前凋亡细胞明显增高(P＜0.05),DNA梯度电泳检测结果发现SC组出现明显细胞凋亡特异性的梯度条带,Western blot结果表明SC组凋亡相关蛋白Caspase 3、PARP活化片段的表达水平升高.结论:重组腺病毒SC表达的SH2-Caspase 8融合蛋白能明显诱导K562/G01细胞的凋亡.
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胃癌细胞SGC7901中STAT1,NF-κB p65和caspase 8的关系
目的:探讨信号转导子与转录活化因子1(STAT1)、核因子κB(NF-κB)p65和凋亡因子caspase 8在胃癌细胞SGC7901中的关系.方法:SGC7901细胞经IFN-γ及STAT1反义寡核苷酸(STAT1ASON)处理后,应用RT-PCR方法检测STAT1,NF-κB p65和caspase 8在mRNA水平的改变.结果:IFN-γ(1000 U)处理SGC7901细胞,在0.5,3和24 h,STAT1和NF-κB p65在mRNA水平出现先下降后上升的变化,二者呈正相关关系(r=0.403,P=0.009);使用不同浓度的STAT1ASON处理SGC7901细胞24 h,在mRNA水平,STAT1和NF-κB p65呈负相关关系(r=-0.556,P=0.015);IFN-γ和不同浓度的STAT1ASON联合作用处理SGC7901细胞24 h,在mRNA水平,STAT1和NF-κB p65呈负相关(r=-0.783,P=0.002),caspase 8呈上升趋势,与STAT1呈负相关关系(r=-0.667,P=0.002),与NF-κB p65呈正相关关系(r=0.594,P=0.021).结论:IFN-γ能促进STAT1,NF-κB和caspase 8的表达,STAT1和NF-κB p65在mRNA水平上呈负相关;caspase 8与STAT1呈负相关关系,与NF-κB p65呈正相关关系.
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IFNγ对TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的调节作用
目的:探讨IFNγ(γ-干扰素)对TRAIL(肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)诱导神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y凋亡的影响及其发生机制.方法:应用RT-PCR方法检测IFNγ作用前后SY5Y细胞Caspase 8的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测IFNγ、TRAIL、IFNγ+TRAIL及IFNγ+Caspase 8抑制剂+TRAIL对SY5Y细胞生长及凋亡的影响;应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察.结果:SY5Y细胞不表达Caspase 8,IFNγ作用48h后的SY5Y细胞Caspase 8表达明显增加;SY5Y细胞对TRAIL不敏感,经IFNγ诱导表达Caspase 8的SY5Y细胞对TRAIL敏感,且与TRAIL浓度有关,Caspase 8抑制剂可明显降低TRAIL对表达Caspase 8的SY5Y细胞的杀伤作用;透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征.结论:IFNγ可逆转SY5Y细胞对TRAIL诱导凋亡的耐受,其发生机制可能是IFNγ通过上调SY5Y细胞Caspase 8表达而实现的.
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四物汤对血虚证小鼠肝细胞凋亡相关分子Caspase 8 mRNA表达的影响
目的:观察四物汤对血虚证小鼠肝细胞凋亡执行分子Caspase 8 mRNA表达的影响.方法:24只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、给药组.以腹腔注射环磷酰胺建立血虚证模型,采用全自动血液分析仪检测外周血象,TUNEL法检测肝细胞凋亡百分率,荧光定量PCR法检测Caspase 8 mRNA表达.结果:与模型组相比,给药组小鼠外周血红细胞数及血红蛋白含量升高(P<0.05),肝细胞凋亡百分率下降(P<0.05),Caspase 8 mRNA表达水平下降(P<0.05).结论:四物汤可改善血虚证模型小鼠外周血象,下调凋亡执行分子Caspase 8 mRNA表达,减少肝细胞凋亡.提示四物汤减少血虚证模型肝细胞凋亡的作用机制可能与其抑制Caspase 8激活有关.
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虎纹捕鸟蛛毒素对脑缺血模型大鼠海马肿瘤坏死因子凋亡通路的影响
背景：虎纹捕鸟蛛毒素经离子通道分析技术证明是一种作用于突触前膜的N型钙离子通道阻断剂。目的：观察新型钙通道拮抗剂虎纹捕鸟蛛毒素对全脑缺血再灌注损伤模型大鼠海马组织肿瘤坏死因子凋亡通路中肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子受体Ⅰ、肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域、Fas相关死亡结构域蛋白、Caspase 8表达的影响。方法：采用Pulsinel i“四血管阻断法”构建全脑缺血结合蛛网膜下腔置管大鼠模型，通过留置的PE10管注入虎纹捕鸟蛛毒素或生理盐水。应用电镜、RT-PCR实验技术检测全脑缺血再灌注损伤大鼠海马CA1区锥体细胞超微结构和胞内线粒体形态变化及对海马组织中肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子受体Ⅰ、肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域、Fas相关死亡结构域蛋白、Caspase 8等肿瘤坏死因子凋亡通路相关因子基因表达。结果与结论：虎纹捕鸟蛛毒素能维持全脑缺血再灌注脑损伤大鼠线粒体基本形态且能不同程度降低肿瘤坏死因子凋亡通路中促凋亡因子肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子受体Ⅰ、肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域、Fas相关死亡结构域蛋白、Caspase 8 mRNA表达。提示天然活性多肽虎纹捕鸟蛛毒素作为一种新型N-型电压依赖性钙通道阻断剂，能有效阻断胞外Ca2+的大量内流，使细胞内游离钙降低，减少由于细胞内钙超载而引起的一系列病理损害，从而保护神经细胞，减轻缺血缺氧海马神经细胞的损伤。
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miR-874抑制剂调控caspase-8的表达和心肌细胞的增殖
目的:探讨miR-874抑制剂对大鼠心肌细胞caspase-8表达和细胞增殖的影响.方法:H9C2心肌细胞铺96孔板,24 h后用RNAiMAX对细胞进行转染,分为miR-874抑制剂转染组和对照组,16h后用CellTiter-FluorTM细胞活力检测试剂盒检测细胞活力确定活细胞的数目,进而测定miR-874抑制剂对心肌细胞增殖的影响.用Caspase-Glo@试剂盒来检测细胞半胱氨酸蛋白酶8 (caspase-8)的活性.结果:miR-874抑制剂组的心肌细胞数目显著高于对照组;miR-874抑制剂组的心肌细胞caspase-8的活性显著高于对照组;miR-874抑制剂转染组心肌细胞caspase-8的活性归一化到细胞数目后显著高于对照组.结论:miR-874抑制剂促进大鼠心肌细胞增殖;miR-874抑制剂启动了促进caspase-8表达从而抑制大鼠心肌细胞坏死的途径.miR-874抑制剂有潜力应用于心衰治疗以减少心肌细胞的死亡.
关键词： 心肌细胞 miR-874抑制剂 caspase 8 细胞增殖 -
Caspase 8 未参与白藜芦醇诱导的CNE-2Z细胞凋亡
Caspase(半胱天冬酶)家族是一类与细胞凋亡密切相关的蛋白酶.近年来对白藜芦醇(resveratrol,Res)诱导的一些肿瘤细胞凋亡中是否有Caspase 8的活化有不同报道[1,2].为探讨Res诱导人鼻咽癌低分化上皮细胞株CNE-2Z凋亡过程中是否有Caspase 8的参与,本文对此进行了分析.
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姜黄素对人脑胶质瘤细胞凋亡作用及其对Bcl-2与Caspase 8诱导表达的影响
背景与目的:人脑胶质瘤是主要的颅内恶性肿瘤,其死亡率高且暂无有效的治疗和预防手段.姜黄素是从姜黄属植物根茎中提取的一种多酚类物质,前期研究发现其具有抗氧化、抗突变等药效.本研究中药姜黄素对人脑胶质瘤细胞SHG44中Bcl-2与Caspase 8差异性表达和促进其凋亡的分子机制.方法:体外培养人脑胶质瘤细胞SHG44:利用MTT比色法检测姜黄素对于SHG44的增殖抑制影响;利用流式细胞术(flowcytometry,FCM)分析药物处理前后SHG44的细胞周期变化;利用吖啶橙染色法鉴定药物处理前后SHG44形态学上的差异及凋亡程度;提取药物处理前后SHG44细胞总蛋白,利用Western印迹法检测Bcl-2与Caspase 8蛋白的表达情况.结果:姜黄素对SHG44细胞体外增殖抑制呈明显的剂量依赖性[IC50为(13.6±2.2)nmol/L,P<0.01];FCM分析SHG44细胞在姜黄素处理前后细胞周期均呈现明显的差异,并且药物组细胞表现为G0/G1期阻滞,其中药物组G0/G1>期比例为(57.2±0.8)%,空白对照组为(64.6+0.6)%,sub-G0峰明显(25.9±0.2)%(P<0.01).A0染色表明药物组细胞有明显凋亡迹象,并伴少量细胞坏死现象,而在阴性对照组中细胞形态完好.Western印迹法检测发现(13.6±2.2)nmol/L(IC50剂量)的姜黄素处理SHG44细胞前后,Caspase 8的表达量为(96±23)%明显高于对照组(P=0.001 3),而Bcl-2的表达量为(33±8)%,则低于对照组(P=0.001 4),提示药物组细胞有进入凋亡途径的现象.结论:中药姜黄素可以调控体外培养的人脑胶质瘤细胞SHG44的周期进程,诱导Bcl-2及Caspase 8的差异性表达,并且具有显著抑制肿瘤细胞增殖及促凋亡的作用.
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冬凌草甲素诱导人多发性骨髓瘤ARH-77细胞凋亡及其可能机制
目的:探讨冬凌草甲素(oridonin,Ori)对人多发性骨髓瘤ARH-77细胞的致凋亡作用及其可能的机制.方法:不同浓度Ori(2.5、5、10 μmol/L)作用于ARH-77细胞,MTT法检测ARH-77细胞的增殖,相差显微镜和Hoechst 33258染色观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞术检测ARH-77细胞的早期凋亡及线粒体膜电位(Δψm)的变化,caspase 8凋亡试剂盒检测ARH-77细胞caspase 8的活化.结果:Ori对ARH-77细胞的生长有明显的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性.10 μmol/L Ori作用于ARH-77细胞24 h后可见细胞变小、胞质中出现空泡,并可见凋亡小体.流式细胞术结果显示,经不同浓度Ori(2.5、5、10 μmol/L)处理后,细胞早期凋亡率分别为(15.07±0.78)%、(21.00±1.49)%和(27.45±2.47)%,均高于对照组的(5.27±1.46)%(P<0.01).不同浓度Ori(2.5、5、10 μmol/L)处理后,反映Δψm的绿色荧光细胞百分率分别为(26.80±0.75)%、(36.81±2.27)%和(49.48±1.10)%,均高于对照组的(16.96±0.50)%(P<0.01),提示ARH-77细胞凋亡有显著增加.同时,Ori处理可上调ARH-77细胞caspase 8的活性(P<0.01).结论:冬凌草甲素能明显诱导多发性骨髓瘤ARH-77细胞的凋亡,其机制可能与激活内、外源凋亡通路有关.
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Caspase 8与肿瘤的发生
肿瘤发生与细胞凋亡异常密切相关,Caspase 8是细胞凋亡途径中的重要分子.研究发现,在肿瘤细胞中存在caspase 8基因突变、甲基化引起的表达降低等异常,导致细胞对凋亡刺激的敏感性降低,可能与肿瘤的发生,发展及治疗有关.
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基底动脉中Caspase3、8的表达与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的关系
目的 探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3、8(Caspase 3、8)在蛛网膜下腔出血(SAH)后在基底动脉中的表达及其与脑血管痉挛的关系.方法 新西兰大白兔36只,随机分成对照组(n=6)和实验组(n=30),后者杆随机分为SAH后1、3、5、7、10 d等5个亚组,每亚组各6只.采用枕大池二次注血法建立SAH模型,应用免疫组化和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记法分别检测基底动脉内皮细胞Caspase 3、8表达和凋亡.结果 凋亡细胞在实验组SAH后第1天出现,第7天凋亡水平达到高.实验组Caspase 3、8表达水平明显高于与对照组(P<0.05).Caspase3、8的表达在SAH后第1天就可观察致到,第5天和第7天出现强烈表达,第10天表达明显减弱.结论本结果提示在兔脑血管痉挛的基底动脉中存在细胞凋亡;Caspase 3、8可能参与了SAH后脑血管痉挛的发生和发展.
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Caspase 8在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用
目的 探讨Caspase 8在TRAIL(肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)诱导神经母细胞瘤细胞株CHP 212细胞凋亡中的作用及机制.方法 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测TRAIL、Caspase 8抑制剂(zIETD-FMK)+TRAIL对CHP 212细胞生长及凋亡的影响;应用比色法测定Caspase 8相对活性;应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察.结果 CHP 212细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感,存在时间和剂量依赖性;随TRAIL作用时间的延长,Caspase 8活性逐步升高,于作用16 h达高峰.zI-ETD-FMK能阻断Caspase 8的活化而抑制TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用.透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征.结论 TRAIL通过Caspase 8信号传导通路诱导CHP212细胞凋亡并伴随Caspase 8活性增高.
关键词： 神经母细胞瘤 凋亡 caspase 8 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 -
不育症患者精液中Caspase 3和Caspase 8检测的临床意义
目的 探讨不育症患者精子和精浆中Caspase 3和Caspase 8与精液常规参数的关系,并推测其可能的临床意义.方法 收集来该院门诊和海南医学院生殖中心就诊的患者标本76份,其中生育组20份,弱精组19份,少弱精组20份,无精组17份.所有标本均进行精子计算机辅助精子分析(CASA),然后分离精子精浆,采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测精子和精浆中Caspase 3和Caspase 8的含量.结果 ①所有被检测样本的精子和精浆中都检测到了Caspase 3和Caspase 8.②精浆中Caspase 3的平均含量和Caspase 8的平均含量均高于精子,且有统计学意义[(Caspase 3:(9.00±9.20)pmol/L vs(6.36±5.81)pmol/L,P＜0.05；Caspase 8:(17.32±11.23)pmol/L vs(12.72±7.42)pmol/L,P＜0.05].③精子中Caspase 8的平均含量都分别与精子密度、活动性和A级呈负相关；精浆中Caspase 8的平均含量分别与精子的A级呈负相关；精浆中Caspase 8的平均含量与精子密度呈负相关,均有统计学意义.④与生育组相比,仅少弱精组精子中Caspase 8含量较高,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 精浆中也存在Caspase,精子和精浆中Caspase 8含量可以反映精子的质量,主要与精子活动性相关.
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和厚朴酚诱导人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞凋亡及其可能机制
目的 探讨和厚朴酚(HNK)诱导人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞凋亡及其可能机制.方法 MTT法检测不同浓度HNK对Raji细胞的增殖抑制作用.流式检测不同浓度HNK(0、7.5、15μg/ml)作用Raji细胞后细胞周期及凋亡率变化.Caspase8试剂盒检测Raji细胞内Caspase8的活化.RT-PCR法检测Raji细胞Bcl-2、Bad、Bax凋亡相关基因的表达.结果 HNK对Raji细胞的生长有明显抑制作用,且呈时间和剂量依赖关系,其中12、24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为17.53、12.61、7.4 μg/ml.流式显示经HNK处理后,细胞周期被阻滞在G0/G1期.经7.5、15μg/ml HNK作用24 h后,细胞早期凋亡率分别为(18.24±2.53)％、(28.44±2.48)％,显著高于对照组的早期凋亡率(4.84±1.15)％(P＜0.01).HNK可显著上调Raji细胞内Caspase8的活性(P＜0.05).RT-PCR显示,HNK处理后Raji细胞内促凋亡基因Bad表达显著上调,Bcl-2、Bax无明显变化(P＜0.01).结论 HNK可诱导人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞凋亡,其机制可能与上调细胞内Caspase8的活性及诱导促凋亡基因Bad的表达有关.
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反式白藜芦醇对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病大鼠的海马神经元的保护作用
目的 观察反式白藜芦醇(TR)对Aβ25-35诱导AD大鼠海马神经元的保护作用.方法 将45只大鼠随机均分为假手术组、阳性对照组(多奈哌齐1 mg·kg-1)、模型组(Aβ25-35)及TR低、高剂量组(TR 10、40 mg·kg-1);Aβ25-35注射海马内后,各组ig给药,qd,连续15 d,假手术组和模型组给予同体积的生理盐水.Morris水迷宫检测大鼠学习和记忆能力;HE染色观察海马神经元损伤情况;实时PCR法定量检测海马中APP mRNA的表达;用免疫组化及Western Blot检测caspase8蛋白表达.结果 与模型组比较,TR低、高剂量组在定向航行实验中,大鼠逃避潜伏期明显缩短(P＜0.05),在空间搜索实验中校正潜伏期明显延长(P ＜0.05);TR能明显减轻海马神经元损伤;显著降低大鼠海马中APP mRNA和caspase 8蛋白的表达(P＜0.05).结论 TRes对Aβ25-35致AD大鼠海马神经元有保护作用,可能与抑制APP mRNA和caspase 8蛋白的表达有关.
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热疗降低胶质瘤侵袭性作用过程中caspase 8改变的实验研究
目的:探讨caspase8在热疗降低胶质瘤侵袭性过程中的作用.方法:利用Transwell构建胶质瘤侵袭模型,随机分为热疗对照组以及热疗30、60、120、180 min和240 min组.采用流式细胞术检测胶质瘤细胞凋亡水平,免疫印迹法检测胶质瘤细胞caspase8的表达水平.结晶紫染色法测定胶质瘤侵袭性变化.结果:(1)热疗各组胶质瘤细胞凋亡率均明显高于热疗对照组(P＜0.05);(2)各热疗组胶质瘤细胞的caspase8表达均高于热疗对照组,有统计学差异(P＜0.05);(3)各热疗组胶质瘤细胞的侵袭性均较对照组降低(P＜0.05).结论:热疗后胶质瘤细胞侵袭性降低,这可能与caspase8表达增加导致胶质瘤细胞凋亡有关.
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IFN-γ增强细胞毒类药物对神经母细胞瘤的诱导凋亡作用
目的 探讨细胞毒类药物对神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y(SY5Y)细胞的作用及γ-干扰素(IFN-γ)对其抗瘤活性的影响.方法 应用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测IFN-γ作用前后半胱-天冬氨酸蛋白酶8(Caspase 8) mRNA的表达;应用流式细胞仪检测细胞毒类药物[阿霉素、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)]及IFN-γ联合细胞毒类药物对SY5Y细胞的诱导凋亡作用;应用比色法测定Caspase 8相对活性.结果 SY5Y细胞不表达Caspase 8,经IFN-γ作用后 Caspase 8 mRNA表达明显增加.SY5Y细胞对阿霉素相对敏感,对TNF-α和TRAIL不敏感;经IFN-γ预处理后,表达Caspase 8的SY5Y细胞对三种细胞毒类药物的诱导凋亡作用敏感并伴随Caspase 8活性增高,此作用可被Caspase 8抑制剂所阻断.结论 IFN-γ通过上调Caspase 8表达而增强细胞毒类药物对神经母细胞瘤细胞的诱导凋亡作用.
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尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡Caspase信号途径的影响
目的 探讨尼莫地平(NMDP)对阿糖胞苷(Ara-c)诱导HL-60细胞凋亡机制的影响.方法 取对数生长期HL-60细胞,分为未加任何药物的HL-60细胞组(对照组)、NMDP(0.001～0.100 g/L)组、Ara-c(0.005～0.500 g/L)组、NMDP+ Ara-c组,各组HL-60细胞均处理24 h.采用ATP化学发光法检测细胞增殖抑制率,AO/EB荧光染色法观察细胞凋亡,化学发光法检测各组细胞Caspase 8活性.结果 与对照组比较,不同浓度NMDP组及Ara-c组细胞增殖抑制率差异均有显著性(F=12 231.563、6 404.210,P＜0.01)；当Ara-c浓度为0.010 g/L、NMDP浓度为0.050 g/L时,细胞增殖抑制率高,差异有显著性(F=916.836,P＜0.01).当Ara-c浓度为0.010 g/L、NMDP浓度为0.050 g/L时,Ara-c组及NMDP+ Ara-c组细胞凋亡率明显高于对照组、NMDP组,以NMDP+Ara-c组凋亡率为高(F=148.02,P＜0.01).与对照组及NMDP组相比,Ara-c组与NMDP+ Ara-c组Caspase 8活性均明显升高,以NMDP+Ara-c组增高显著(F=732.84,P＜0.01).结论 NMDP能增强Ara-c 诱导的HL-60细胞凋亡,其机制可能与增强Caspase 8活性有关.
