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虎纹捕鸟蛛毒素对脑缺血模型大鼠海马肿瘤坏死因子凋亡通路的影响
背景：虎纹捕鸟蛛毒素经离子通道分析技术证明是一种作用于突触前膜的N型钙离子通道阻断剂。目的：观察新型钙通道拮抗剂虎纹捕鸟蛛毒素对全脑缺血再灌注损伤模型大鼠海马组织肿瘤坏死因子凋亡通路中肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子受体Ⅰ、肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域、Fas相关死亡结构域蛋白、Caspase 8表达的影响。方法：采用Pulsinel i“四血管阻断法”构建全脑缺血结合蛛网膜下腔置管大鼠模型，通过留置的PE10管注入虎纹捕鸟蛛毒素或生理盐水。应用电镜、RT-PCR实验技术检测全脑缺血再灌注损伤大鼠海马CA1区锥体细胞超微结构和胞内线粒体形态变化及对海马组织中肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子受体Ⅰ、肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域、Fas相关死亡结构域蛋白、Caspase 8等肿瘤坏死因子凋亡通路相关因子基因表达。结果与结论：虎纹捕鸟蛛毒素能维持全脑缺血再灌注脑损伤大鼠线粒体基本形态且能不同程度降低肿瘤坏死因子凋亡通路中促凋亡因子肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子受体Ⅰ、肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域、Fas相关死亡结构域蛋白、Caspase 8 mRNA表达。提示天然活性多肽虎纹捕鸟蛛毒素作为一种新型N-型电压依赖性钙通道阻断剂，能有效阻断胞外Ca2+的大量内流，使细胞内游离钙降低，减少由于细胞内钙超载而引起的一系列病理损害，从而保护神经细胞，减轻缺血缺氧海马神经细胞的损伤。
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人类可溶性TNFR Ⅰ-GFP融合蛋白重组体的构建、表达和特性分析
目的构建并表达hsTNFR Ⅰ(human solubletumor necrosisfactor receptor Ⅰ)-GFP(green fluorescence protein)-pET28a融合蛋白,用以检测跨膜型TNF-α(mTNF-α).方法用PCR从GFP-pKEN重组质粒中扩增GFP的cD-NA,将其插入hsTNFR Ⅰ-pET28a重组质粒中hsTNFR Ⅰ基因片段的下游,获得hsTNFR Ⅰ-GFP-pET28a重组体.转化大肠杆菌BL-21,用IPTG诱导重组蛋白表达,经镍金属螯合层析柱纯化.用MTT法检测重组融合蛋白对sTNF-α细胞毒效应的抑制活性,并用重组融合蛋白直接对转染TNF基因细胞表面的mTNF-α进行定性检测.结果hsTNFR Ⅰ-GFP重组融合蛋白可明显抑制sTNF-α细胞毒效应,且呈剂量依赖性;该融合蛋白不但可与NIH3T3细胞膜上鼠源性mTNF-α结合,而且也可与转基因NIH3T3细胞表面人mTNF-α结合.结论hsTNFR Ⅰ-GFP重组融合蛋白具有TN-FR的生物学活性,同时保留GFP的发光特性,可用来检测细胞表达mTNF-α的水平.
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TNF-α及其受体Ⅰ在胆管癌和先天性胆总管囊性扩张症中的表达及其意义
为探讨胆管癌和先天性胆总管囊性扩张症中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及肿瘤坏死因子受体Ⅰ(TNFR-Ⅰ)表达的差异.笔者选取经外科手术切除的胆管癌患者48例,先天性胆总管囊性扩张症19例,用免疫组化SP法检测TNF-α和TNFR-Ⅰ的表达.结果示,TNF-α在胆管癌和先天性胆总管囊性扩张症中表达阳性率分别为25.0%(12/48)和5.3%(1/19),两者差异有显著性(P＜0.05).TNFR-Ⅰ在胆管癌和先天性胆总管囊性扩张症中表达阳性率分别为75.0%(36/48)和42.1%(8/19),两者差异有非常显著性(P＜0.01).提示胆管癌和先天性胆总管囊性扩张症组织中均可表达TNF-α和TNFR-Ⅰ,但胆管癌中的表达明显增强.TNF-α和TNFR-Ⅰ可能参与先天性胆总管囊性扩张症的恶变过程,其表达情况有可能可作为监测胆管良恶性病变的参考指标之一.
