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硒通过核内积累IKKα诱导Jurkat细胞自噬依赖的caspase 8激活
目的 重点探索超营养剂量的亚硒酸钠诱导白血病Jurkat细胞自噬和凋亡的分子机制.方法 Western blot实验,明确亚硒酸钠对IKK α、P73、UVRAG以及凋亡标志性蛋白天冬氨酸蛋白水解酶8(caspase 8)的表达及活性影响.用细胞转染技术,明确相关信号分子在Jurkat细胞死亡过程中发挥的作用.间接免疫荧光实验用于判断相关分子在细胞内的定位情况.结果 20 μmol/L亚硒酸钠可有效促进Jurkat细胞发生自噬和caspase 8相关的细胞凋亡(P＜0.05),且caspase 8的活化依赖于细胞内的自噬水平(P＜0.05).此外,IKK α在细胞核内发生积累(P＜0.05),进一步调节P73及自噬关键蛋白UVRAG的含量改变(P＜0.05).结论 超营养剂量的亚硒酸钠通过核内积累IKK α,诱导Jurkat细胞发生自噬依赖的caspase 8激活及凋亡.
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LPS耐受单核细胞中p50抑制IKKα结合于IL-1β启动子区
目的 研究LPS耐受细胞中IL-1β启动子区p50对IKKct的作用,揭示p50抑制IL-1β mRNA转录的机制.方法 运用人单核细胞系THP-1模拟LPS耐受,使用染色体免疫沉淀(CHIP)和real-time PCR技术定量IL-1β启动子区p50与IKKa的结合情况,并应用基因沉默技术研究p50和/或IKKα沉默后对IC-1βmRNA转录情况的影响.结果 耐受细胞IL-1β启动子区p50结合并不减少,而IKKα结合降低;p50沉默后,IKKα的结合增加,同时IL-1β mRNA转录增加;p50和IKKα双沉默后,IL-1β mRNA转录又降低.结论 在耐受的THP-1细胞中,IL-1β mRNA转录的降低至少部分原因是由于p50抑制了IKKα对IL-1β启动子区的结合而造成的.
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IKKα通过激活p38 K介导紫外线诱导的p53活化反应
目的：探讨IκB激酶（IκB kinase，IKK）催化亚基α（IKKα）在紫外线（ultraviolet radiation， UV）诱导的细胞反应中介导p53活化的信号转导机制。方法采用双荧光素酶报告基因分析系统检测在UVB诱导细胞反应中p53的转录激活活性。 Western印迹检测IKKα、p53、p38K蛋白表达水平和诱导活化状态。结果 UVB在野生型小鼠成纤维细胞中能显著诱导p53发生磷酸化修饰反应；同时转录激活活性显著提高，IKKα基因敲除后，以上活化反应受到显著抑制，而恢复IKKα表达水平后这种活化反应得以恢复。同样条件下IKKα也能调节p38K的诱导活化，抑制p38K活性显著下调p53的诱导活化水平。结论 IKKα能通过调控p38K活化进而介导UVB诱导p53磷酸化修饰反应。
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IKBα、IKKα、IKKβ与Tim-3在肿瘤患者中表达及相关性研究
核因子(NF)-κB是重要的转录调控因子,其广泛存在于各种细胞中,参与免疫应激、细胞增殖、生长分化及细胞凋亡.NF-κB通常与其抑制蛋白IκB相结合,以非活性状态储存于细胞质中,只有当激活IκB激酶(IKK),水解IκB,解除了IκB的抑制作用,NF-κB才能进入细胞核中并与相应靶基因上的DNA序列(κB位点)结合,发挥基因转录功能.T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域相关分子-3(Tim-3)蛋白特异性表达于Th1细胞表面并参与自身免疫疾病的发病,也参与肿瘤免疫[1].为进一步探讨IκBα、IKKα、IKKβ及Tim-3在肿瘤患者体内之间的关系,本研究检测了IκBα、IKKα、IKKβ及Tim-3mRNA水平,并分析这些指标之间的相关性,报告如下.
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IKKα影响小鼠缺血性肾损伤的修复
目的:研究IκB激酶α(IκB kinaseα,IKKα)对缺血再灌注(ischemia-repcrfusion,IR)肾损伤恢复期小鼠炎细胞浸润及炎症介质表达的影响.方法:将C57BL/6小鼠分为假手术组、IR组、干扰组、干扰对照组.干扰组及干扰对照组提前2周给予肾实质注射慢病毒,双侧肾蒂夹闭20 min后再灌注3d建立动物模型,假手术组仅分离肾蒂,不予夹闭.通过血肌酐、尿素氮水平和HE染色评价肾功能及组织形态学改变,免疫组织化学方法检测巨噬细胞浸润及细胞增殖情况,并通过Western blot检测IKKα、p-IKKα、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-18、IL-1β蛋白的表达.结果:与IR组和干扰对照组相比,IKKα干扰组血肌酐和尿素氮显著增高(P＜0.05),肾组织病理损害较重,细胞增殖明显降低(P＜0.05)；巨噬细胞浸润及炎症介质TNF-α、IL-18、IL-1β的表达增多(P＜0.05).结论:IKKα的表达影响并且促进了肾脏缺血再灌注损伤的修复.
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巨噬细胞内IKKα在小鼠肾脏缺血再灌注损伤炎症反应中的作用
目的:研究巨噬细胞内IKKα在小鼠肾脏缺血再灌注损伤(ischemic reperfusion injury,IRI)炎症反应中的作用.方法:分别将20只8～10周龄健康雄性C57BL/6小鼠(WT小鼠)、20只8～10周龄健康雄性巨噬细胞内IKKα基因敲除即IKKαMKO小鼠(KO小鼠)随机分为假手术(Sham)组和肾脏缺血再灌注损伤(IRI)组,分别构建模型.苏木素-伊红(HE)染色法观察肾脏组织形态学改变及炎症细胞浸润情况,免疫组织化学法检测肾组织抑炎因子白介素-10(IL-10)、促炎因子白介素-6(IL-6)、增殖指标Ki67、巨噬细胞标记物CD68、M1型巨噬细胞标记物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、M2型巨噬细胞标记物精氨酸酶1(Arg-1)的表达,Western blot检测IL-10、IL-6的表达变化.结果:HE染色结果表明IRI组较Sham组肾组织结构损伤明显及炎症浸润增加.免疫组化结果表明肾脏IRI后IL-10和IL-6均呈高表达,IL-10表达随时间延长而递增,IL-6表达随时间延长而递减.与WT-RI组相比,KO-IRI组小鼠肾脏病理损伤加重(P＜0.01),IL-6、CD68、iNOS表达显著增加(P＜0.01),IL-10(P＜0.01)、Ki67(P＜0.05)表达显著降低.结论:巨噬细胞内IKKα基因敲除加重了小鼠肾脏缺血再灌注损伤的炎症反应且不利于肾脏修复,这可能与增加了肾脏早期巨噬细胞(M1型为主)浸润及促进了炎症反应有关.
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核因子κB抑制物激酶α在肾脏缺血再灌注损伤炎性反应中的作用及机制
目的 研究核因子κB抑制物激酶α(IKKα)在肾脏缺血再灌注(IR)诱导的炎性反应中的作用及相关机制.方法 用6～8周龄健康雄性C57BL/6小鼠构建肾脏IR模型,采用常规生化法检测Scr、BUN水平,HE染色法观察肾组织学改变,免疫组织化学法、Western印迹法检测肾组织IKKα、p52、RelB、IL-10、IL-18的表达.在肾实质内转入以慢病毒为载体的短发夹RNA (shRNA),抑制IKKα的表达,检测抑制后的肾功能与肾组织形态学改变以及IKKα、p52、RelB、IL-10、IL-18的表达变化.结果 IR损伤组1d、3d、7d血清Scr[(29.80±2.10) μmol/L、(27.00±3.40)μmol/L、(23.00±3.70) μmol/L]和BUN[(9.47±3.50) mmol/L、(11.68±4.30) mmol/L、(13.12±2.10) mmol/L]高于假手术组Scr[(7.30±0.13)μmol/L]和BUN[(8.39±0.30) mmol/L].HE染色显示,IR损伤组存在肾组织病理损害.免疫组化结果显示,Sham组小鼠肾组织抗炎因子IL-10、促炎因子IL-18均呈弱阳性表达,IR损伤后IL-10、IL-18均呈高表达,且IL-10表达呈时间依赖性上调,IL-18表达呈时间依赖性下调.IR损伤后7d内,IKKα、p52、RelB表达均上调,以第3天时为明显.与IR损伤组相比,慢病毒载体shRNA组肾组织IR损伤第3天的IKKα、p52、RelB表达下调,IL-18表达上调,IL-10表达下调.结论 肾脏IR损伤炎性反应消退过程中,NF-κB信号通路被激活,IKKα表达上调.抑制IKKα可能通过下调NF-κB旁路途径家族成员p52、RelB的活性,阻碍肾脏IR损伤炎性反应的消退.
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下调 IKKα表达能够抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力
目的：研究降低 IKKα的表达对人胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法：利用 Western blot 检测胃癌细胞系中 IKKα蛋白的表达水平，选择 IKKα表达较高的细胞系 MKN28，转染下调 IKKα的慢病毒，建立稳定转染细胞株（标记为 MKN28- LV - shcontrol 和 MKN28- LV - shIKKα），并利用 Western blot、RT - PCR 验证病毒转染效果。采用 Transwell 实验和划痕实验检测低表达 IKKα对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果：Western blot 结果显示胃癌细胞系中 MKN28细胞 IKKα蛋白表达水平相对较高，转染慢病毒干扰载体成功后利用 Western blot 及 RT - PCR 实验证实实验组 MKN28- LV - shIKKα较对照组 MKN28- LV - shcontrol 中IKKα蛋白及 mRNA 水平明显降低。利用 Transwell 及划痕实验证实实验组 MKN28- LV - shIKKα较对照组MKN28- LV - shcontrol 细胞迁移及侵袭能力明显降低。结论：IKKα与胃癌的迁移及侵袭密切相关，降低IKKα的表达水平能显著抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力，提示 IKKα在胃癌的转移中可能发挥着重要作用。
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补肾化瘀方对PCOS血清IKK表达的影响
目的:观察补肾化瘀方治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的临床疗效及可能的作用机制.方法:将120例患者随机分为观察组、对照组各60例,2组均采用克罗米芬治疗,观察组同时给予补肾化瘀方,1剂/d,经期停服.2组均于连续治疗4个月经周期后观察临床疗效及治疗前后IKKα、IKKβ 水平的变化情况.结果:总有效率观察组为83.3%,对照组为61.7%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05).IKKα、IKKβ 水平治疗前2组比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后组间比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前后2组组内比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:补肾化瘀方治疗PCOS临床疗效显著,其可能通过抑制血清中IKKα、IKKβ 的表达而起到治疗作用.
