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过表达LATS1降低食管癌Eca109细胞增殖
目的运用慢病毒转染技术在食管癌Eca109细胞中过表达LATS1基因,探究LATS1调控Eca109细胞增殖、凋亡及周期的作用及机制.方法构建LA TS1基因的慢病毒载体转染Eca109细胞系,RT-PCR检测细胞中LATS1mRNA的表达;Western blot检测LATS1、YAP、BAX/BCL-2的蛋白表达水平;MTS检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡及周期;hochest33258观察细胞凋亡染色.结果 LATS1慢病毒载体转染Eca109细胞后,目的基因组(Ad-LATS1)LATS1 mRNA及LATS1蛋白表达、BAX蛋白表达明显高于对照组(CON)及阴性对照组(Ad-GFP),而YAP、BCL-2的蛋白表达明显低于对照组及Ad-GFP组(P＜0.05);Ad-LATS1组Eca109细胞的增殖率从第5天开始明显低于对照组及Ad-GFP组(P＜0.05);Ad-LATS1组细胞较Ad-GFP及对照组G1期比例明显增高而S期比例明显缩短,凋亡率明显增高(P＜0.05),细胞荧光染色强度及范围也增高.结论 LATS1基因可上调BAX、下调YAP、BCL-2使Eca109凋亡,并诱导G1期延长、S期缩短来降低其增殖力.
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LATS1在宫颈癌中的表达及其生物学特性的实验研究
目的:探讨LATS1在宫颈癌中表达的临床意义及生物学特性.方法:免疫组化法检测80例宫颈癌组织中LATS1蛋白表达;分别以SiHa及Caski细胞系为媒介,进行LATS1转染及干扰实验;MTT及基质胶侵袭实验检测细胞增殖和侵袭能力.结果:80例宫颈癌组织中LATS1低表达的比例约为45%(36/80);LATS1过表达抑制了宫颈癌细胞的增殖和侵袭,LATS1过表达上调p27表达量的同时下调cyclin E及MMP-9的表达量.LATS1过表达刺激了YAP的磷酸化过程.敲除LATS1的Caski细胞系中则呈现相反的结果.结论:在宫颈癌中,LATS1发挥肿瘤抑制剂的功能,在肿瘤细胞增殖和侵袭过程中发挥重要作用.
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SYBR Green实时定量PCR检测人脑原发胶质瘤中LATS1和LATS2基因的表达
目的:运用实时定量PCR检测肿瘤抑制基因LATS1和LATS2的mRNA在人脑原发胶质瘤组织中的表达情况,并进一步分析其表达变化与临床资料之间的关系.方法:建立SYBR Green实时定量PCR的检测方法;通过标准曲线法对肿瘤抑制基因LATS1和LATS2的mRNA在30例原发胶质瘤(WHO分级:Ⅱ级10例,Ⅲ级10例,Ⅳ级10例)和10例正常脑组织中的表达进行定量检测;统计学分析不同级别胶质瘤及正常脑组织间的表达差异,并进一步结合临床资料分析不同性别和不同年龄组的表达差异.结果:与正常脑组织相比,在各病理级别胶质瘤中LATS1和LATS2的mRNA表达均下调(P＜0.05),但胶质瘤不同级别组之间的差异均无统计学意义(P＞0.05).LATS1和LATS2在不同性别组和年龄组胶质瘤中的表达差异也无统计学意义(P＞0.05).结论:①成功地建立了SYBR Green实时定量PCR检测LATS1和LATS2基因表达的方法;②胶质瘤中LATS1和LATS2的mRNA表达水平均低于正常脑组织,但不同病理分级间的表达无明显差异.
关键词： LATS1 LATS2 神经胶质瘤 实时定量聚合酶链反应 SYBR Green -
高表达蛋白LATS1对乳腺癌MCF-7细胞增殖能力的影响
目的 观察高表达蛋白LATS1(Large tumor suppressor,homolog 1)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响.方法 构建含有绿色荧光蛋白GFP的LATS1质粒GFP-C1-LATS1;将构建好的GFP-C1-LATS1质粒转染MCF-7细胞,36 h后荧光显微镜下观察质粒转染效率;然后通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测转染后1~4 d细胞增殖率;通过细胞克隆形成实验检测在乳腺癌MCF-7中高表达LATS1后对细胞克隆形成的影响;后通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测高表达LATS1对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响.结果 质粒GFP-C1-LATS1构建成功,GFP-C1-LATS1质粒转染效率为80%左右;Western blot检测结果 表明,与空质粒对照GFP-C1相比,转染GFP-C1-LATS1后蛋白LATS1明显高表达;MTT结果 表明高表达蛋白LATS1明显抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖;细胞克隆形成实验表明高表达蛋白LATS1后明显抑制细胞克隆的形成,对照组和高表达LATS1组的克隆数分别为(136±30)和(53±12)个(P＜0.05);BrdU掺入结果 显示,在MCF-7细胞中,阴性对照组的细胞增殖率为(24±2)%,而高表达蛋白LATS1后细胞增殖率为(13±1)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 高表达蛋白LATS1可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖.
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Hippo通路在常染色体显性多囊肾病中的作用
目的 探讨Hippo通路分子在常染色体显性多囊肾病(ADPKD)发病机制中的作用,寻找可能的药物治疗靶点.方法 采用免疫荧光染色、Western印迹和实时定量PCR技术检测Han:SPRD大鼠杂合型和ADPKD患者肾组织Hippo通路分子分布、表达量以及磷酸化水平的差异.小干扰RNA特异性抑制囊肿衬里上皮细胞(WT9-12) YAP (Yes kinaseassociated protein)、TAZ(transcriptional coactivator with PDZ binding motif)和LATS1(large tumor suppressor kinase1)的表达后观察对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.结果 与野生型大鼠相比,Han:SPRD杂合型大鼠囊肿衬里上皮细胞LATS1表达降低;YAP表达量及去磷酸化活化水平增加;TAZ表达与分布无明显改变.ADPKD患者肾组织中,Hippo通路分子MST1/2(macrophage stimulating1/2)、LATS1 mRNA表达显著低于正常对照(P＜0.05),而YAP mRNA表达水平显著高于正常对照(P＜0.05).抑制WT9-12细胞LATS1表达,能促进细胞增殖和分裂;下调YAP表达阻滞细胞于分裂间期,抑制增殖;下调TAZ表达对细胞增殖和周期无显著影响.结论 ADPKD中Hippo通路效应因子YAP去磷酸化活性增强可能是导致疾病发生、发展的重要原因之一.体外实验证实下调YAP表达可抑制肾囊肿衬里上皮细胞分裂增殖,提示YAP的表达和活性是潜在的多囊肾病治疗靶点.
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慢病毒介导LATS1过表达对人肾癌细胞系786-0增殖、凋亡及下游癌基因YAP的影响
目的 探讨慢病毒介导LATS1过表达对人肾癌细胞786-0增殖、凋亡及下游癌基因YAP的影响.方法 采用携带LATS1基因的慢病毒载体感染人透明细胞肾癌细胞系786-0,利用RT-PCR检测感染后786-0细胞中Hippo-YAP信号通路大肿瘤抑制基因-1(large tumor suppressor gene 1,LATS1)mRNA和下游癌基因Yes-相关蛋白(Yes-associated protein,YAP) mRNA的表达水平,Western blot检测LATS1和YAP的蛋白表达水平,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡和周期,细胞增殖/毒性试剂(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖抑制情况.结果 慢病毒介导LATS1感染肾癌786-0细胞系后,LATS1 mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及空病毒组(P＜0.05),YAP mRNA及蛋白表达水平显著低于对照组及空病毒组(P＜0.05),细胞周期停滞在G1期(P＜0.05)、细胞增殖受到明显抑制(P＜0.05)、细胞凋亡显著增加(P＜0.05).结论 慢病毒介导LATS1过表达下调YAP基因表达,抑制786-0细胞增殖、促进其凋亡并阻滞细胞周期于G1期.肾癌的发生、发展可能与LATS1和YAP表达失调有关.
