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过表达LATS1降低食管癌Eca109细胞增殖
目的运用慢病毒转染技术在食管癌Eca109细胞中过表达LATS1基因,探究LATS1调控Eca109细胞增殖、凋亡及周期的作用及机制.方法构建LA TS1基因的慢病毒载体转染Eca109细胞系,RT-PCR检测细胞中LATS1mRNA的表达;Western blot检测LATS1、YAP、BAX/BCL-2的蛋白表达水平;MTS检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡及周期;hochest33258观察细胞凋亡染色.结果 LATS1慢病毒载体转染Eca109细胞后,目的基因组(Ad-LATS1)LATS1 mRNA及LATS1蛋白表达、BAX蛋白表达明显高于对照组(CON)及阴性对照组(Ad-GFP),而YAP、BCL-2的蛋白表达明显低于对照组及Ad-GFP组(P＜0.05);Ad-LATS1组Eca109细胞的增殖率从第5天开始明显低于对照组及Ad-GFP组(P＜0.05);Ad-LATS1组细胞较Ad-GFP及对照组G1期比例明显增高而S期比例明显缩短,凋亡率明显增高(P＜0.05),细胞荧光染色强度及范围也增高.结论 LATS1基因可上调BAX、下调YAP、BCL-2使Eca109凋亡,并诱导G1期延长、S期缩短来降低其增殖力.
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Hippo-YAP通路在心血管系统中的作用
Hippo-YAP通路在细胞增殖和凋亡过程中起重要调控作用，核心成员包括 YAP 等蛋白。YAP转位入核是该通路激活的核心过程，与细胞内众多激酶分子的活性以及蛋白酶体系统的激活等因素有关。在上游调控方面，研究发现细胞极性以及机械力学等因素都可以调控该通路活性，通过影响细胞增殖等过程，在肿瘤浸润和转移、干细胞分化以及心血管系统疾病等方面发挥重要作用。本综述简单总结了该通路的相关研究的新进展，并探讨了下一步可以深入研究的方向。
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MiR-132靶向YAP抑制肝癌Huh7细胞的生长
目的：研究miR-132靶向YAP后对肝癌Huh7细胞生长的抑制，为临床治疗肝癌的方法提供新的理论依据。方法实验分为三组：未转染miR-132的Huh7细胞组（control组），阴性对照组（miR NC组）以及转染miR-132的Huh7细胞组（miR-132组），通过RT-PCR检测YAP mRNA表达情况；通过流式细胞仪检测细胞凋亡改变；通过Edu检测细胞增殖能力；通过Transwell法检测细胞侵袭能力。结果 RT-PCR检测YAP mRNA发现miR-132可明显抑制YAP基因在肝癌细胞株Huh7中的表达，control组、miR NC组和miR-132组YAP mRNA的相对表达量为1.0000±0.0241、0.9426±0.0248和0.2573±0.0458（P＜0.05）；流式细胞仪检测发现转染miR-132后能明显促进肝癌Huh7细胞的凋亡，control组、miR NC组和miR-132组Huh7细胞总凋亡为4.03±0.35、4.53±0.26和13.62±0.49（P＜0.05）；EdU检测发现转染miR-132后肝癌Huh7细胞增殖能力明显受抑制，control组、miR NC组和miR-132组分别为（65.12±1.93）%、（64.02±0.87）%和（42.00±1.26）%（P＜0.05）；traswell检测结果发现转染miR-132后肝癌Huh7细胞侵袭能力明显受抑制，control组、miR NC组和miR-132组分别为3.35±0.13、0.72±0.06和0.48±0.03（P＜0.05）。结论 miR-132具有抑制肝癌细胞生长的作用，并有可能通过靶向YAP而下调其表达起作用。
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Hippo-YAP信号通路活化参与二甲双胍抑制胰腺癌细胞生长的作用
目的 观察二甲双胍对人胰腺癌PANC1细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,探讨其与Hippo-YAP信号通路活化的关系.方法 应用5、10、20、40 mmol/L的二甲双胍分别处理人胰腺癌PANC1细胞24、48、60、72 h,以不加二甲双胍处理的细胞作为对照.采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,实时荧光定量PCR法检测细胞YAP mRNA表达,蛋白质印迹法检测细胞YAP1、磷酸化YAP1(p-YAP1)蛋白表达.结果 二甲双胍呈剂量依赖性抑制PANC1细胞的增殖,各组间差异均有统计学意义(P值均＜0.01).二甲双胍抑制PANC1细胞增殖的IC50值为20 mmol/L.用20 mmol/L二甲双胍处理细胞48 h后细胞的G1期、S期细胞百分比及YAP1 mRNA表达量、p-YAP1蛋白表达量分别为(77.12±1.22)％、(9.13±0.73)％、4.17±0.37、0.67±0.01;对照组分别为(60.75±1.53)％、(26.97±1.18)％、1.03 ±0.11、0.17±0.01,两组间的差异均有统计学意义(P值均＜0.01).对照组与二甲双胍处理组细胞的凋亡率分别为(5.65±1.19)％、(9.83±1.36)％,YAP1蛋白表达量分别为0.42±0.00、0.41±0.00,两组的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论 二甲双胍可显著抑制人胰腺癌PANC1细胞的增殖,使细胞周期阻滞在G0/G1期,其机制可能与Hippo-YAP信号通路活化有关.
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Hippo-YAP信号通路与卵巢癌的相关性研究
Hippo-YAP信号通路是近年来新发现的细胞信号转导通路,具有调控器官体积大小和平衡细胞增殖与凋亡的作用.卵巢癌是女性生殖系统常见的三大恶性肿瘤之一,早期常不易发现,晚期又缺乏有效的治疗手段,致死率居妇科恶性肿瘤首位.因此,开发卵巢癌有效的早期诊断标志物和治疗靶点尤为重要.本文就Hippo-YAP信号通路的构成、功能及其与卵巢癌的相关性进行综述,旨在为卵巢癌的早期诊断、提高卵巢癌治疗的特异性和靶向性、减少化疗药物对正常干细胞的损伤及在卵巢癌中的耐药机制提供有效依据,并对评估预后起到一定意义.
关键词： Hippo-YAP信号通路 YAP 卵巢癌 -
YAP表达与肝细胞癌临床特征及预后的关系
目的 检测Yes相关蛋白(YAP)在肝细胞癌(HCC)组织中表达的差异,探讨其与HCC患者临床特征及预后的关系.方法 选取具有完整临床及预后资料的98例肝切除术后HCC患者的石蜡组织标本,采用免疫组化技术检测癌组织与癌旁组织中的YAP表达差异,回顾性分析YAP表达的差异与患者临床特征及预后之间的关系.结果 肝癌组织中YAP阳性表达率为21.4%(21/98),YAP阴性表达率为78.6%(77/98),YAP高表达率为10.2%(10/98);单因素分析显示,本组HCC患者的中位无复发生存期和中位总生存期与术前甲胎蛋白(AFP)水平、大血管侵犯或存在瘤栓、YAP表达状态有关(P﹤0.05);多因素分析结果表明,AFP≥20 ng/ml、YAP表达阳性是影响HCC患者术后生存的独立危险因素;生存分析结果显示,YAP阳性组中位无复发生存率和中位总生存率低于YAP阴性组(P﹤0.05).结论 YAP与HCC的进展及预后有关,YAP可以作为HCC术后预测预后的一个新指标.
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YAP与胃肠道恶性肿瘤发生发展相关性研究进展
胃肠道恶性肿瘤的传统治疗方法包括手术及放化疗，但这些方法往往带来非常严重的不良反应。近年来，随着肿瘤分子生物学研究的不断深入，分子靶向治疗在恶性肿瘤（包括胃肠道恶性肿瘤）的治疗中彰显优势，相关的靶基因也备受关注。Yes相关蛋白（Yes-associated protein，YAP）为近年发现的一个高度保守的候选癌基因。YAP对胃肠道恶性肿瘤的发生发展起着重要的促进作用，为其个体化治疗、靶向治疗提供了新思路。
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Hippo-YAP信号通路及其与肝癌关系的研究进展
Yes相关蛋白(YAP)是Hippo信号通路的核心效应因子,是此信号通路中高度保守的成分.YAP异常表达与肿瘤的发生和发展密切相关,可引起肝癌细胞增殖、侵袭、转移及凋亡逃逸等一系列生物学行为,并对肝癌患者的诊断、治疗及预后具有潜在的临床应用价值.本文综述了Hippo-YAP信号通路的组成、作用机制及其与肝癌的关系,为肝癌的早期发现、诊断与治疗提供了新的思路.
关键词： YAP Hippo-YAP信号通路 肝癌 -
YAP的生物学功能及其与卵巢癌相关性研究进展
Hippo-YAP信号通路是一个调控细胞增殖和凋亡的信号传导通路.YAP是该通路的主要效应分子,在保证胚胎正常生长发育、控制器官体积、维持内环境稳态中起到重要作用.同时,YAP基因也被认为是一种原癌基因,YAP表达异常与肿瘤的发生、发展密切相关.本文主要综述了YAP的生物学功能及其与卵巢癌的相关性研究.
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卵巢癌组织Hippo-Yes相关蛋白表达与临床病理参数及增殖凋亡相关性研究
目的 探讨卵巢癌组织中Hippo-Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)的表达与临床病理参数的关系,及其对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 免疫组化染色技术检测湖南省肿瘤医院病理科2010-01-01-2013-12-31保存的68例卵巢癌及38例良性卵巢组织中YAP蛋白表达,分析YAP表达与卵巢癌临床病理参数的相关性;逆转录病毒介导的YAP shRNA干扰人卵巢癌EFO-21细胞中YAP表达,蛋白质印迹法检测干扰效率,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-2-deoxy Uridine,BrdU)细胞增殖分析和流式细胞术检测肿瘤细胞增殖和凋亡变化.结果 卵巢癌组织YAP蛋白阳性表达率为61.8％(42/68),良性卵巢组织为10.5％(4/38),差异有统计学意义,x2=26.054,P＜0.001.卵巢癌组织中YAP蛋白阳性表达率在高临床分期(x2=8.600,P=0.003)和高病理分级(x2=5.688,P=0.017)中显著升高.YAP shRNA显著降低卵巢癌EFO-21细胞中YAP蛋白表达,对照组YAP蛋白表达为0.96±0.16,实验组为0.14±0.04,P＜0.001.YAP shRNA导致肿瘤细胞增殖能力显著减弱,对照组细胞增殖水平为121.00±3.19,实验组为55.83±3.56,P＜0.001.YAP shRNA并诱导细胞凋亡,对照组凋亡率为(8.75±0.15)％,实验组为(32.75±4.76)％,P＜0.001.结论 YAP蛋白在卵巢癌组织中表达异常升高并核内蓄积,其阳性表达与高病理分级和高临床分期显著有关,干扰YAP表达导致肿瘤细胞增殖减弱和凋亡增加,提示YAP通过促进肿瘤细胞生长发挥促癌作用,其可能成为卵巢癌靶向治疗的潜在靶点.
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胃癌及其癌前病变组织Yes相关蛋白和Survivin的表达及其意义
目的:检测YAP和Survivin的表达水平,探讨YAP及Survivin表达与胃癌发生的关系和意义.方法:采用PV9000免疫组化方法分别检测98例胃癌及配对正常胃黏膜,58例肠上皮化生,32例不典型增生组织中YAP和Survivin的表达水平.结果:YAP在不典型增生(37.5%)、胃癌组织(48.0%)中的阳性表达率显著高于正常胃黏膜组织(13.3%),P＜0.01;Survivin在肠上皮化生(53.4%)、不典型增生(59.4%)及胃癌(65.3%)组织中的阳性表达率显著高于正常胃黏膜组织(11.2%),P＜0.01;弥漫型胃癌组(74.6%)Survivin阳性表达率显著高于肠型胃癌组(51.3%),P＜0.05.伴淋巴结转移胃癌组Survivin阳性表达率(76.9%)显著高于无淋巴结转移组(41.2%),P＜0.01.在98例胃癌组织中YAP与Survivin表达呈正相关,等级相关系数rk=0.246,P＜0.01.结论:YAP可能诱导凋亡抑制因子Survivin的表达,Survivin可能通过抑制胃癌中细胞凋亡及调节细胞有丝分裂的发生进而参与胃癌的发生、发展及转移.将两指标联合检测,有助于胃癌的早期诊断及对预后的评估.
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YAP调控肝癌细胞增殖活性及对索拉非尼敏感性的影响
目的 检测YAP在肝癌细胞中的表达水平,并探讨其对肝癌细胞增殖活性以及对索拉非尼敏感性的影响.方法 采用Western blot方法 检测人肝癌细胞株SMMC-7721、SK-Hep-1、HepG-2、Huh7和正常人肝细胞株L-O2中YAP的蛋白表达水平.以YAP的小干扰RNA或过表达质粒分别转染SK-Hep-1和Huh7细胞,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期.将SK-Hep-1和SK-Hep-1 si-YAP细胞接种于裸鼠皮下,并以索拉非尼灌胃,观察移植瘤与对照组的差异.结果 YAP蛋白在肝癌细胞株中表达升高.下调SK-Hep-1细胞的YAP 表达后,细胞存活率为(78.5±0.3)%,与对照组[(92.3±0.2)%]比较明显下降,差异有统计学意义(P＝0.025);G0／G1期细胞占(65.4±3.3)%,与对照组[(55.7±3.4)%]比较明显升高,差异有统计学意义(P＝0.039).上调Hun7细胞的YAP表达后,细胞存活率为(81.2±1.3)%,与对照组[(62.5±1.1)%]比较明显升高,差异有统计学意义(P＝0.013); G0／G1期细胞占(38.2±3.8)%,与对照组[(48.8± 2.9)%]比较明显下降,差异有统计学意义(P＝0.019). si-YAP+索拉非尼组SK-Hep-1细胞的存活率为(31.13±1.79)%,低于索拉非尼组[(48.87±0.58)%],差异有统计学意义(P＜0.0001). PC3.1-YAP+索拉非尼组的细胞存活率为(69.98±2.94)%,高于索拉非尼组[(53.53±1.93)%],差异有统计学意义(P＜0.0001).裸鼠移植瘤模型实验显示,SK-Hep-1组、SK-Hep-1+索拉非尼组、SK-Hep-1 si-YAP组和SK-Hep-1 si-YAP+索拉非尼组瘤重分别为(0.96±0.08)g、(0.62±0.08)g、(0.70±0.06)g和(0.27±0.02) g. SK-Hep-1+索拉非尼组和 SK-Hep-1 si-YAP 组瘤重均低于 SK-Hep-1 组( P 值分别为 0.012 和0.031),SK-Hep-1 si-YAP+索拉非尼组瘤重低于SK-Hep-1 si-YAP组( P＝0.001).结论 YAP在肝癌细胞系中表达上调,其表达变化影响细胞增殖能力和细胞周期进程,并影响肝癌对索拉非尼的敏感性. YAP是肝癌治疗的一个潜在分子靶点.
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关于YES相关蛋白调控PTEN表达量的研究
目的 探明YES相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)如何通过调控miR-29a的表达来调节PTEN表达量.方法①以N2a细胞为研究对象,高表达及抑制YAP,测量其miR-29家族的表达量,并筛选出改变明显的一个miR-NA,并检测PTEN蛋白的表达;②通过改变miR-29a及YAP的蛋白水平,来检测YAP是通过何途径来调控PTEN蛋白的表达.结果 ①通过转染了过表达YAP质粒后,RT-PCR的结果显示miR-29家族中的3个成员miR-29a,miR-29b,miR-29c都明显上调了.其中miR-29a上调了明显.而同时抑制了YAP的细胞中,miR-29的表达量都明显下降.说明YAP与miR-29的表达量之间是一种正相关的联系.另外一方面,PTEN的表达量则正好与miR-29及YAP相反,在抑制了YAP后,PTEN的表达量呈现的上升趋势,而过表达了YAP后,PTEN则明显下降.这说明YAP与PTEN之间是一种负相关的联系.②无论YAP的量改变如何,起到决定性作用的仍然还是miR-29a.下游的PTEN受YAP及miR-29a调控,而其中miR-29a作为作用中枢又受到上游YAP的调控.这些证据都揭示了YAP对PTEN的调节作用是通过对miR-29a的调节来实现的.结论该研究初步证实YAP能够通过对miR-29a的调控来实现对PTEN的表达,从而为治疗神经脊髓损伤提供研究基础.
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Hippo-YAP信号通路与多种疾病的研究进展
Hippo 信号通路是一个能够调控细胞分裂增殖分化和凋亡的信号通路，YAP 是该通路的一个效应因子，有着启动 Hippo 通路基因转录翻译的能力。实验证实 Hippo 信号通路和 YAP 对多种疾病都具有重要影响，特别是癌症和慢性心血管疾病。本研究主要对 Hippo-YAP信号通路与多种疾病的研究进展作如下综述。
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多巴酚丁胺联合顺铂对胃癌移植瘤YAP和p-YAP蛋白表达的影响
目的:通过建立胃癌移植瘤模型,观察多巴酚丁胺联合顺铂对胃癌移植瘤的生长抑制作用及对瘤体组织中YAP、p-YAP表达的影响.方法:采用人胃癌SGC-7901细胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为5组:空白对照(CK)组、阴性对照(NS)组、多巴酚丁胺(DOB)组、顺铂(DDP)组、联合用药(DOB+DDP)组.治疗结束后摘除移植瘤组织,测量并称重,计算抑瘤率.通过Western Blot检测YAP和p-YAP蛋白的表达.结果:治疗结束后CK、NS、DOB、DDP、DOB+DDP组瘤体终体积依次为(472.09±9.44)、(451.94±16.32)、(410.14±15.39)、(246.69±15.54)和(263.42±19.55)mm3.各组瘤质量分别为(0.84±0.02)、(0.82±0.04)、(0.65±0.03)、(0.35±0.01)和(0.35±0.02)g,其中实验组(DOB、DDP、DOB+DDP)抑瘤率分别为22.67%、58.71%和58.47%,与对照组(CK、NS)相比,差异均有统计学意义(P<0.05).DOB组和DDP组YAP表达量均低于对照组(P<0.05),p-YAP表达量高于对照组(CK、NS)(P<0.05),DOB+DDP组与对照组(CK、NS)相比差异均无统计学意义(P>0.05).结论:多巴酚丁胺可能通过下调YAP,同时上调p-YAP的表达抑制胃癌移植瘤生长,与顺铂联合抑制作用不明显.
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一项关于Zika病毒疾病流行特征的研究
2007年,内科医生报道了在密克罗尼西亚群岛的Yap岛发生的一种疾病,以皮疹、结膜炎和关节痛为特征,尽管在一些病人血浆中发现了抗登革热病毒的IgM抗体,但在临床上不同于以往的登革热,随后的实验运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)在病人血浆中发现了Zika病毒RNA,而不是登革热或其他病毒的RNA.
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YAP与肿瘤干细胞相关性研究进展
YAP是一种多功能蛋白，可以与不同的转录因子相互作用激活基因的表达。YAP作为活化Hippo途径的关键转录调节蛋白在调节器官大小、细胞自我更新、干细胞和组织特异性祖细胞扩增等方面发挥重要作用，在Hippo途径中MST1/2激酶和其结合蛋白SAV共同磷酸化激酶LATS1/2，激活的LATS1/2磷酸化YAP从而抑制YAP蛋白的活性。近年来，大量的研究已经在胚胎干细胞、神经干细胞、造血干细胞中发现YAP的高表达能够维持干细胞干性并且已经成为维持干性的标志物，随后的研究发现信号通路可能与肿瘤干细胞（CSC）分化密切相关。本文主要讨论YAP在维持干细胞及肿瘤干细胞干性方面的作用。
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Hippo-YAP信号通路为靶点的肿瘤治疗研究进展
Hippo通路是一个可调控细胞增殖和凋亡的信号转导通路，YAP（Yes-associated protein）为其主要效应分子。YAP为一个候选致癌因子，Hippo-YAP通路的异常与多种肿瘤的发生、发展密切相关。因此，以Hippo-YAP通路为靶点的治疗策略可能为肿瘤治疗提供新思路。一些可调控Hippo-YAP通路活性的药物/化合物如维替泊芬，可抑制肿瘤的发生或生长。本文主要对Hippo-YAP信号通路为靶点的肿瘤治疗研究进展进行综述。
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HPV E6/E7 mRNA与YAP在宫颈癌中的表达与相关性研究
目的:研究宫颈病变中HPV E6/E7 mRNA与Yes相关蛋白(YAP)的表达情况及临床意义,探讨两者之间的相关性.方法:应用支链DNA(b-DNA)技术检测36例正常宫颈组织(正常组)、45例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ-Ⅲ级(CIN组)、43例宫颈癌(宫颈癌组)的宫颈脱落细胞标本中HPV E6/E7 mRNA的表达情况,免疫组化方法(IHC)检测上述各组患者宫颈组织石蜡包埋标本中YAP的表达情况.结果:HPV E6/E7 mRNA及YAP阳性表达率在正常组分别为16.67％、11.11％,在CIN组分别为82.22％、84.44％,在宫颈癌组分别为88.37％、90.70％,3组HPV E6/E7 mRNA及YAP阳性表达率均逐渐升高,且差异均具有统计学意义(P＜0.05).YAP在宫颈癌有淋巴结转移组中的表达明显高于无淋巴结转移组(P＜0.05),而与宫颈癌的临床分期、组织学分级及组织学类型无关(P＞0.05).HPV E6/E7 mRNA与YAP的表达呈正相关(r=0.383,P＜0.05).结论:HPV E6/E7 mRNA与YAP的检出率随病理级别的升高呈增强趋势,且两者具有相关性.因此,HPV E6/E7 mRNA与YAP的联合检查,可以提高宫颈病变的诊断率并能够预测癌前病变的进展.
关键词： 宫颈癌 HPV E6/E7 mRNA YAP 免疫组化 支链DNA技术 -
YAP生物学功能的研究进展
YAP（Yes－associated protein，YAP）是 Hippo 信号通路下游的主要效应分子。1995年，Sudol等鉴定并克隆了一个与非受体酪氨酸激酶 YES 的 Src homolog domain3（SH3）区结合的新蛋白。该蛋白分子量为65 kD，富含脯氨酸，因该蛋白通过与原癌基因Yes结合，因而被命名为Yes-associated protein （YAP65）。人类YAP基因位于染色体11q22区， YAP存在2种变位剪切形式，即YAP1和YAP2， YAP1具有一个WW结构域，而YAP2具有2个WW结构域。YAP蛋白广泛表达于除外周血白细胞外的各种组织中。YAP存在多个结构域或特异氨基酸序列，包括N端富含脯氨酸的结构域，转录因子TEADs结合区，2个WW结构域，1个SH3结合基序，C端的转录激活域以及PDZ结合基序。通过这些结构域或氨基酸序列，YAP与多种蛋白相互作用，参与细胞内多条信号通路的调控，行使多种生物学功能。 YAP主要定位于细胞核中，由于缺乏明显的DNA结合结构域，YAP被认为是转录共激活因子，需与转录因子结合，起始下游基因的转录。
